UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
3.8.3 Pembuatan Larutan p-
nitrofenol α-D-glukopiranosida
Sejumlah 15,1 mg p-nitrofen ol α-D-glukopiranosida Mr = 301,25
dilarutkan dalam 25 mL dapar fosfat pH 7,0.
3.8.4 Pembuatan Larutan Enzim
Sejumlah 1 mg enzim α-glukosidase dilarutkan dalam 100 mL dapar fosfat pH 7,0 yang mengandung 200 mg bovine serum albumin,
kemudian 1 mL larutan dipipet dan dilarutkan dalam buffer fosfat 1 M dengan pH 7,0 hingga 10 mL.
3.8.5 Pembuatan Larutan Uji
1 Larutan uji induk
Sampel ekstrak ditimbang sebanyak 500 mg dan dilarutkan dalam dimetil sulfoksida DMSO hingga 5 mL.
2 Larutan uji seri
Seri larutan uji dibuat dalam lima konsentrasi berbeda. Dari larutan induk uji dipipet sebanyak 10 µL, 30 µL, 50 µL, dan 70µL dan 90 µL,
kemudian ditambah dengan DMSO sebanyak 1000 µL. Sehingga didapat konsentrasi seri larutan 1000 ppm, 3000 ppm, 5000 ppm, 7000
ppm dan 9000 ppm.
3 Larutan uji
a Larutan uji dengan enzim
Masing-masing seri larutan uji dipipet 60 µL ditambahkan dengan 440 µL dapar fosfat pH 7,0 dan ditambahkan 250 µL p-
nitrofenol α-D-glukopiranosida, lalu campuran reaksi dipra- inkubasi selama 5 menit pada suhu ruangan. Kemudian
ditambahkan 250 µL larutan enzim, lalu diinkubasi selama 15 menit pada suhu ruangan. Reaksi dihentikan dengan penambahan
1000 µL larutan natrium karbonat 2 M. Jumlah p-nitrofenol yang
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
dibebaskan diukur dengan spektrofotometer UV-Vis dengan panjang gelombang 400 nm.
b Larutan uji tanpa enzim
Masing-masing seri larutan uji dipipet 60 µL ditambahkan dengan 440 µL dapar fosfat pH 7,0 dan ditambahkan 250 µL p-
nitrofenol α-D-glukopiranosida, lalu campuran reaksi dipra- inkubasi selama 5 menit pada suhu ruangan. Kemudian
ditambahkan 250 µL dapar fosfat pH 7,0. Selanjutnya diinkubasi selama 15 menit pada suhu ruangan. Reaksi dihentikan dengan
penambahan 1000 µL larutan natrium karbonat 2 M. Jumlah p- nitrofenol yang dibebaskan diukur dengan spektrofotometer UV-
Vis dengan panjang gelombang 400 nm.
3.8.6 Pembuatan Larutan Standar
1 Larutan induk standar
Akarbose ditimbang sebanyak 500 mg dan dilarutkan dalam DMSO hingga 5 mL.
2 Larutan standar seri
Seri larutan standar dibuat dalam empat konsentrasi berbeda. Dari larutan induk standar dipipet sebanyak 10 µL, 30 µL, 50 µL, dan
70µL dan 90 µL, kemudian ditambah dengan DMSO sebanyak 1000 µL. Sehingga didapat konsentrasi seri larutan 10 ppm, 30 ppm, 50
ppm, 70 ppm dan 90 ppm.
3 Larutan standar
a Larutan standar dengan enzim
Masing-masing seri larutan uji dipipet sebanyak 60 µL ditambahkan dengan 440 µL dapar fosfat pH 7,0 dan ditambahkan
p- nitrofenol α-D-glukopiranosida, lalu campuran tersebut dipra-
inkubasi selama 5 menit pada suhu ruangan. Kemudian
Kategori