lemak berantai sedang pada posisi sn-1. Lipase lingual pada tikus dapat menghidrolisis triasilgliserol dengan asam lemak berantai sedang pada posisi sn-3.
Berdasarkan kemampuannya dalam mensintesis ikatan ester, lipase diklasifikasikan ke dalam 3 golongan menurut kekhasannya Deman, 1997, yaitu:
1. Golongan pertama adalah lipase yang tidak khas. Enzim ini tidak menunjukkan kekhasan dari segi posisi ikatan ester dalam molekul gliserol atau sifat asam lemak.
Contoh enzim golongan ini ialah lipase dari Candida cylindracae, Corynebacterium acnes, dan Staphylococcus aureus.
2. Golongan kedua mencakup lipase yang mempunyai kekhasan posisi untuk posisi-1 dan -3 gliserida. Hal ini umum untuk lipase mikroba dan merupakan akibat dari
ketidakmampuan ikatan ester posisi-2 untuk memasuki pusat aktif enzim active center karena hambatan ruang. Lipase ini diperoleh dari Aspergillus niger, Mucor
javanicus, dan Rhizopus arrhizus. 3. Golongan lipase ketiga menunjukkan kekhasan untuk asam lemak tertentu.
Contohnya lipase dari Geothricum candidum, yang mempunyai kekhasan menonjol untuk asam lemak rantai panjang yang mengandung ikatan rangkap dua cis pada
posisi ke 2.
2.9. Kromatografi Lapis Tipis KLT
Pemisahan KLT dikembangkan oleh Ismailoff dan Schraiber pada tahun 1938. Tekniknya menggunakan penyokong fase diam berupa lapisan tipis seprti lempeng
kaca, aluminium atau pelat inert. Adsorben yang digunakan biasanya terdiri dari silika gel atau alumina dapat langsung
atau dicampur dengan bahan perekat misalnya kalsium sulfat untuk disalutkan dilapiskan pada pelat. Pada pemisahannya, fase bergerak akan membawa komponen
Universitas Sumatera Utara
campuran sepanjang fase diam pada pelat sehingga terbentuk kromatogram. Pemisahan yang terjadi berdasarkan adsorpsi dan partisi. Kelebihan KLT
dibandingkan kromatografi jenis lain adalah : 1. Waktu pemisahan lebih cepat
2. Sensitif, artinya meskipun jumlah cuplikan sedikit masih dapat dideteksi 3. Daya resolusi tinggi, sehingga pemisahan lebih sempurna
Penentuan harga Rf pada KLT sama dengan pada kromatografi kertas. Harga Rf dapat digunakan untuk identifikasi kualitatif. Untuk tujuan penentuan kadar, bercak
komponen dapat dikerok lalu dilarutkan dalam pelarut yang sesuai untuk dianalisa dengan metode lain yang tepat.
Gambar 2.8. Kromatografi Lapis Tipis
Aplikasi KLT sangat luas, termasuk dalam bidang organik dan anorganik. Kebanyakan senyawa yang dapat dipisahkan bersifat hidrofob seperti lipida-lipida dan
hidrokarbon di mana sukar bila dikerjakan dengan kromatografi kertas. KLT juga penting untuk pemeriksaan identitas dan kemurnian senyawa obat, kosmetika, tinta,
formulasi pewarna dan bahan pewarna Yazid, 2005.
2.10. Kromatografi Gas
Universitas Sumatera Utara
Kromatografi gas adalah proses pemisahan campuran menjadi komponen- komponennya dengan menggunakan gas sebagai fase bergerak yang melewati suatu
lapisan serapan sorben yang diam. Fase diam yang berupa zat padat yang dikenal dengan kromatografi gas-padat GSC dan zat cair sebagai kromatografi gas-cair
GLC. Keduanya hampir sama kecuali dibedakan dalam hal cara kerjanya. Pada GSC pemisahan berdasarkan adsorpsi sedangkan GLC berdasarkan partisi. Dalam
pembicaraan kromatografi gas biasanya yang dimaksud adalag GLC. Kromatografi gas digunakan untuk analisa kualitatif dan kuantitatif terhadap cupikan
yang komponen-komponennya dapat menguap pada suhu percobaan. Keuntungan kromatografi gas adalah waktu analisa yang singkat dan ketajaman pemisahan yang
tinggi. Gas pembawa biasanya digunakan helium, argon atau nitrogen dengan tekanan
tertentu dialirkan seacara konstan melalui kolom yang berisi fase diam. Selanjutnya sampel diinjeksikan ke dalam injektor injector port yang suhunya dapat diatur.
Komponen-komponen dalam sampel akan segera menjadi uap dan akan dibawa oleh aliran gas pembawa menuju kolom. Komponen-komponen akan teradsorpsi oleh fase
diam pada kolom kemudian akan merambat dengan kecepatan berbeda sesuai dengan nilai Kd masing-masing komponen sehingga terjadi pemisahan. Komponen yang
terpisah menuju detektor dan akan terbakar menghasilkan sinyal listrik yang besarnya proporsional dengan komponen tersebut. Sinyal lalu diperkuat oleh amplifier dan
selanjutnya oleh pencatat recorder dituliskan sebagai kromatogram berupa puncak peak. Puncak konsentrasi yang diperoeh menggambarkan arus detector terhadap
waktu.
Universitas Sumatera Utara
Gambar 2.9. Kromatografi Gas
Untuk tujuan identifikasi dan penetapan kadar dibuat kromatogram komponen zat uji dan larutan baku standar lalu keduanya dibandingkan. Salah satu cara pada analisa
kualitatif adalah dengan membandingkanwaktu retensi antara kromatogram komponen zat uji dengan larutan baku pembanding. Waktu retensi yang dihasilkan oleh masing-
masing senyawa diukur mulai saat disuntikkan atau dimasukkan ke dalam alat sampai terjadinya respon detektor. Waktu retensi karakyteristik untuk tiap komponen dan
sebanding dengan jumlah komponen yang dikandung. Bila waktu retensi zat uji dan baku pembanding sama berarti kedua senyawa identik. Pada analisa kuantitatif saah
satu caranya dapat dilakukan dengan membandingkan luas area puncak komponen zat uji dengan luas area baku pembanding Yazid, 2005.
BAB 3 METODE PENELITIAN
3.1. Bahan-Bahan
- Minyak inti sawit PT. SMART
- Gliserol p.a E’merck
- Kloroform p.a E’merck
- Silika Gel 60 G p.a E’merck
- N-heksan p.a E’merck
- Dietil eter p.a E’merck
Universitas Sumatera Utara
