31
HASIL DAN PEMBAHASAN
A. PENGUJIAN BAKTERI TRANSFORMAN
Pengujian bakteri hasil transformasi dilakukan untuk memastikan bahwa gen
pengkode enzim
arabinosa isomerase
AI dari
Geobacillus stearothermophilus lokal yaitu gen araA benar-benar masuk ke vektor ekspresi
dan kemudian dapat terekspresi dengan sistem induksi IPTG. Bakteri atau inang E.coli BL21 pLysS dan E. coli BL21 DE3 pLysS pET21b digunakan sebagai
pembanding. Protein target yang diharapkan terekspresi kemudian dianalisis dengan Sodium Dedocyl Sulfate Polyacrilamide Gel Electrophoresis SDS-
PAGE berdasarkan berat molekul. Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa protein atau enzim target telah
terekspresi dengan sistem induksi IPTG pada bakteri transfroman E. coli BL21 pET21b+ araA. Sedangkan pada inang E. coli BL21 tanpa plasmid ataupun
E.coli BL21 dengan plasmid pET21b, protein atau enzim target tidak ada data tidak ditampilkan. Enzim arabinosa isomerase AI dari Geobacillus
stearothermophilus lokal memiliki berat molekul 56 kDa Fitriani Saksono 2010. Penelitian-penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa enzim AI yang
dikodekan oleh gen araA dari G. stearothermophilus T6, G. thermodenitrificans, B. stearothemophilus US100 dan B. stearothermophilus IAM 11001 setelah
terekspresi menggunakan inang E. coli memiliki berat molekul 56 kDa Lee et al 2005a; Kim Oh 2005; Rhimi Bejar 2006; Cheng et al 2009.
Terekspresinya enzim AI pada bakteri transforman disebabkan adanya gen araA yang mengkodenya. E. coli BL21 dan E. coli BL21 pET21b tidak memiliki
gen araA asal Geobacillus stearothermophilus lokal. Gen araA ini telah disisipkan pada vektor ekpresi yaitu pET21b+ tepatnya pada bagian hilir T7
promoter dan bagian hulu terminator. Gen araA akan diekpresikan menjadi protein atau enzim AI setelah ditambahkan senyawa penginduksi isopropyl-ß-D-
thiogalactopyranoside IPTG. IPTG menyebabkan represor terlepas dari operator. Sehingga terjadi sintesis atau pembentukan proteinenzim target dengan
melibatkan T7 RNA polimerase asal bakteri BL21 DE3 Sorensen Mortensen 2005.
32
116 kDa
B. PRODUKSI ENZIM ARABINOSA ISOMERASE
Kategori