10
Tabel 2. Manfaat kesehatan dan aplikasi tagatosa pada produk pangan Oh 2007
Manfaat kesehatan Jenis produk pangan
Rendah kalori Makanan rendah karbohidrat, sereal,
minuman ringan dan health bars No glycemic effect
Diabetic food tipe 2 Anti halistosis
Supplemen Prebiotik
Cokelat, candies, chewing gum Flavor enhancement
Yogurt, bakery, minuman susu dan confectionary
C. KONSEP DNA REKOMBINAN
Prinsip teknologi rekombinasi DNA yaitu menggabungkan molekul fragmen DNA atau gen dari organisme yang berbeda sehingga menghasilkan kombinasi
baru yang sebenarnya tidak terdapat secara alami Glick Pasternak 2003. DNA dari manusia, hewan, tumbuhan dan mikroorganisme dapat direkombinasi. DNA
rekombinan buatan sangat berguna dalam penelitian genetika. Teknologi DNA rekombinan terus mengembangkan metode untuk isolasi dan menyatukan gen
menjadi kombinasi baru. Tahap awal dari rekombinasi adalah isolasi gen target. Isolasi gen dapat
dilakukan dengan 2 cara yakni pemotongan secara langsung dan isolasi mRNA untuk persiapan cDNA.
Enzim endonuklease restriksi digunakan untuk memotong untai DNA. Sedangkan DNA ligase berguna untuk menggabungkan
fragmen-fragmen DNA. Apabila menggunakan metode isolasi mRNA, maka harus berdasarkan prinsip reverse transcription dan memerlukan penyusunan
DNA primer. Gen yang telah diperoleh kemudian disisipkan pada vektor pembawa yang akan membawa gen ke dalam sel inang host. Sel inang yang
telah ditransformasi kemudian diseleksi dan digunakan ataupun dikembangkan sebagai organisme penghasil DNA rekombinan Lehninger 2004.
1. Plasmid
Cara insersi gen asing ke dalam sel inang pada teknik rekombinasi DNA dapat dilakukan dengan plasmid, bakteriophage, cosmid dan kromosom buatan
Prescott 2002. Plasmid dan bakteriophage merupakan vektor yang paling banyak digunakan. Plasmid adalah DNA berbentuk lingkaran yang ditemukan
dalam sitoplasma spesies bakteri. Plasmid mengandung gen yang melakukan
11 replikasi, transkripsi dan translasi secara terpisah, tetapi dalam waktu yang
bersamaan dengan kromosom. Plasmid memiliki sifat istimewa, sehingga sangat bermanfaat dalam teknik rekayasa genetika. Plasmid dapat melewati sel, pindah
dari sel yang satu ke sel lainnya atau dari satu spesies bakteri ke spesies lainnya. Penggabungan gen asing ke dalam plasmid dapat dilakukan dengan mudah. Selain
itu, plasmid dapat disisipi atau terkadang telah memiliki penanda seleksi Tortora et al 2010.
Plasmid juga bisa digunakan sebagai vektor ekspresi. Ekpresi adalah perubahan fragmen DNA atau gen menjadi protein spesifik melalui tahap
transkripsi dan translasi. Untuk ekspresi, plasmid harus memiliki signal pemulai tahapan transkripsi dan translasi yang diperlukan. Tingkat ekspresi gen yang
dikloning dikendalikan oleh sekuen promoter dan regulator yang terdapat pada vektor ekpresi tersebut. Promoter dan regulator memberikan isyarat tempat
dimana RNA polimerase berikatan dan mulai melakukan proses transkripsi Lehninger 2004.
Pemakaian teknologi rekombinasi DNA dibidang produksi enzim secara lebih spesifik dapat dilakukan dengan beberapa cara, salah satunya aplikasi gen
terpilih melalui plasmid. Pemindahan gen penyandi enzim suatu mikroba atau organisme yang bersifat unggul ke dalam mikroba lain dapat dilakukan dengan
cara mengisolasi gen yang diinginkan. Kemudian memindahkan dan mengintegrasikannya ke dalam plasmid tertentu. Selanjutnya dilakukan
amplifikasi gen yang diinginkan sehingga dapat meningkatkan produksi protein fungsional yang diturunkan dari gen tersebut Suhartono 1989.
Gambar 7. Plasmid sebagai vektor ekspresi Koolman Roehm 2005
12
2. Plasmid pET-21b+ dan Inang E. coli BL21 DE3 pLysS
