Pengujian efek mutagenik meliputi penyiapan hewan penelitian, penyiapan makanan hewan, penyiapan larutan siklofosfamid LS, penyiapan serum darah
sapi SDS, pengujian pada mencit, pembuatan preparat apusan sumsum tulang femur dan pengamatan apusan pada mikroskop.
3.4.1 Penyiapan hewan percobaan
Hewan yang digunakan adalah mencit dengan berat 18-30 g sebanyak 30 ekor dibagi 5 kelompok, setiap kelompok terdiri dari 6 ekor mencit.
Sebelum digunakan sebagai hewan percobaan, semua mencit dipelihara terlebih dahulu selama kurang lebih satu minggu untuk menyesuaikan lingkungan,
mengontrol kesehatan dan berat badan serta menyeragamkan makanannya.
3.4.2 Penentuan dosis MSG yang digunakan
LD
50
MSG = 16.600 mg = 16.6 g
Untuk dosis yang digunakan pada mencit adalah 16 dari LD
50
, yaitu: 16 x 16,6 g = 2,76 g
≈ 3 g Setelah didapat 16 dari LD
50
yaitu 3 g, kemudian di beri dosis kelipatan menjadi 3 g, 6 g, dan 9 g Wikipedia, 2012.
3.4.3 Pembuatan amylum 5
Amylum sebanyak 5 g dicampurkan pada lumpang yang berisi air panas, aduk homogen sampai terbentuk massa yang jernih, kemudian tambahkan
aquadest sampai dengan 100 ml.
Universitas Sumatera Utara
3.4.4 Penyiapan makanan hewan
Formula pembuatan makanan mencit: MSG
3 g 6 g
9 g Amylum
0,1 0,1
0,1 Nipagin
0,1 g 0,1 g
0,1 g Pelet
ad 10 g ad 10 g
ad 10 g
Pembuatan makanan hewan dilakukan dengan cara sebagai berikut: MSG digerus ke dalam lumpang, ditambahkan nipagin 0,1 g dan amylum.
Amylum yang diambil adalah 0,1 yaitu sebanyak 2 ml dari pembuatan amylum 5, lalu digerus sampai homogen, kemudian ditambahkan pelet sampai dengan
10 g, gerus sampai homogen, lalu cetak menjadi pelet baru yang mengandung
MSG. 3.4.5 Penyiapan larutan siklofosfamid LS 0,5 bv
Pembuatan LSdilakukan dengan cara sebagai berikut: ditimbang sebanyak 25 mg siklofosfamid serbuk kemudian dimasukkan ke dalam labu tentukur 5 ml,
ditambahkan larutan fisiologis [NaCl 0,9 bv] sampai batas tanda.
3.4.6 Pembuatan serum darah sapi SDS
Serum diperoleh dari darah sapi segar. Darah ditampung langsung menggunakan vakum tube saat penyembelihan hewan. Vakum tube ditutup dan
didiamkan lebih kurang 30 menit, kemudian disentrifuge dengan kecepatan 2000 rpm selama 15 menit. Diambil cairan yang berwarna bening kekuning-kuningan
bagian atas yang merupakan serumnya.
3.4.7 Pengujian efek mutagenik pada mencit penelitian
