1. Persiapkan segala sesuatu untuk pengambilan sampel seperti keperluan
alat tulis, catatan pada formulir pemeriksaan tentang lokasi pengambilan sampel dan tanggal pengambilan.
2. Mendapatkan sampel air dari rumah makan di sekitar Jalan dr. Mansyur.
3. Kemudian air yang diambil diberi tanda dan tanggal pengambilan.
Seterusnya, sampel air yang sudah diberi tanda dibawa ke Laboratorium 4.
Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Sumatera Utara.
4.5.3. Cara Pelaksanaan Pemeriksaan
Pemeriksaan Most Probable Number MPN. Pemeriksaan MPN dilakukan terhadap bahan pemeriksaan yang telah disiapkan dengan
menggunakan metode tabung ganda: 5 x 10 ml ; 1 x 1 ml ; 1 x 0,1 ml
1. Pemeriksaan tabung ganda terdiri dari:
a. Uji Pendugaan Presumptive Test
b. Uji Penegasan Confirmative Test
2. Pemeriksaan menggunakan medium agar terdiri dari:
a. Uji Pelengkap Completed Test
1. Uji Pendugaan Presumptive Test
Media yang digunakan: Lactose Broth LB Cara pemeriksaan:
a. Siapkan 7 tabung reaksi yang masing-masing berisi media LB
sebanyak 10 ml. Tabung disusun pada rak tabung reaksi, masing- masing tabung diberi tanda sebagai berikut:
a Nomor urut
b Tanggal pemeriksaan
c Volume
b. Dengan pipet steril ambil bahan pemeriksaan yang telah disiapkan.
Masukkan ke dalam: a
Tabung 1 sehingga 5 masing-masing sebanyak 10 ml
b Tabung ke-6 sebanyak 1 ml
c Tabung ke-7 sebanyak 0,1ml
Masing-masing tabung tersebut digoyang-goyang agar spesimen dan media tercampur.
c. Inkubasikan pada suhu 37
o
C selama 24–48 jam. Setelah 24 jam diperiksa ada tidaknya pembentukan gas pada tabung durham. Catat
semua tabung yang menunjukkan peragian laktosa pembentukan gas. Pembentukan gas pada tabung durham pada uji pendugaan dinyatakan
positif +, dan dilanjutkan dengan uji penegasan. Apabila uji dalam waktu 24 jam tidak membentuk gas dimasukkan ke
inkubator kembali pada suhu 37
o
C selama 24 jam. Bila berbentuk gas pada tabung durham, hasil menunjukkan positif + dan uji dilanjutkan
dengan tes penegasan. 2.
Uji Penegasan Confirmative Test Media yang digunakan: Brilliant Green lactose Bile Broth BGLB 2.
Cara pemeriksaan: a.
Dari tiap-tiap tabung dugaan yang positif +, dipindahkan 1-2 ml ke dalam tabung penegasan yang berisi 10 ml BGLB 2. Dari masing-
masing tabung dugaan diindikasikan ke dalam 2 tabung BGLB 2. b.
Satu seri tabung BGLB 2 diinkubasikan pada suhu 35-37
o
C selama 24–48 jam untuk memastikan adanya bakteri Coliform dan satu seri
yang lain diinkubasikan pada suhu 44
o
C selama 24–48 jam untuk memastikan adanya bakteri Coliform tinja.
c. Pembacaan dilakukan setelah 24–48 jam dengan melihat jumlah
tabung BGLB 2 yang menunjukkan positif + gas. 3.
Uji Pelengkap Completed test Media yang digunakan : Agar Eosin Methylene Blue EMB.
Cara pemeriksaan: a.
Uji ini juga dilakukan dengan inokulasi bakteri yang ada dalam media ke media agar berupa EMB. Dari tabung yang positif terbentuk asam
dan gas terutama pada masa inkubasi pada suhu 37
o
C selama 1 x 24
