Karakterisasi Simplisia dan Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Serta Fraksi n-Heksan dan Etilasetat Teripang Holothuria atra Jaeger

Lampiran 2. Bagan alur penelitian

dicuci hingga bersih

ditiriskan hingga tidak ada lagi air

ditimbang

dikeringkan di lemari pengering

dihaluskan dan ditimbang beratnya

Teripang segar Teripang bersih Simplisia Serbuk simplisia Meliputi pemeriksaan: a. Makroskopik b. Mikroskopik Meliputi penetapan a. Kadar air

b. Kadar sari larut air c. Kadar sari larut etanol d. Kadar abu total

e. Kadar abu tidak larut asam Karakterisasi

simplisia

Pemeriksaan senyawa

Meliputi pemeriksaan : a. Saponin

b. Glikosida

c. Steroid/ triterpenoida

Pembuatan ekstrak etanol secara perkolasi

Ekstraksi Cair-cair

Uji aktivitas antioksidan dari ekstrak etanol dan

fraksi teripang

Lampiran 3. Gambar teripang, simplisia dan serbuk simplisia teripang

Holothuria atra Jaeger.

Teripang segar Holothuria atra Jaeger

Lampiran 3 (lanjutan)

Simplisia hewan teripang Holothuria atra Jaeger

Lampiran 4. Gambar mikroskopik teripang Holothuria atra Jaeger

Keterangan perbesaran 10x40: 1. Spikula tipe rosettes 2. Spikula tipe rod

3. Spikula tipe pseudo-button

1

3 2

Lampiran 5. Perhitungan pemeriksaan karakteristik serbuk simplisia hewan teripang Holothuria atra Jaeger

1. Perhitungan kadar air serbuk simplisia hewan teripang

% Kadar air simplisia = x100%

(g) sampel berat (ml) air volume

No. Berat sampel (g) Volume awal (ml) Volume akhir (ml)

1. 5.021 1.85 2.3

2. 5.022 2.35 2.85

3. 5.029 2.80 3.25

1. Kadar air = – = 8,96% 2. Kadar air = – = 9,98 % 3. Kadar air = – = 8,97% % Rata-rata kadar air = = 9,3%

2. Perhitungan kadar sari larut dalam air

% Kadar sari larut dalam air = 100%

20 100 x (g) sampel Berat (g) sari Berat

No. Berat sampel (g) Berat sari (g)

1. 5,021 0,410

2. 5,006 0,388

Lampiran 5 (lanjutan)

1. Kadar sari larut dalam air =

= 40.83% 2. Kadar sari larut dalam air =

= 38.75% 3. Kadar sari larut dalam air =

= 37.29%

% Rata-rata kadar sari larut air = = 38.96%

3. Perhitungan kadar sari simplisia larut dalam etanol

% Kadar sari larut dalam etanol = x 100% 20 100 x (g) simplisia Berat (g) sari Berat

No. Berat sampel (g) Berat sari (g)

1. 5,051 0,318

2. 5,091 0,274

3. 5,021 0,297

1. Kadar sari larut dalam etanol =

= 31.48% 2. Kadar sari larut dalam etanol =

= 26.91% 3. Kadar sari larut dalam etanol =

= 29.63%

Lampiran 5 (lanjutan)

4. Perhitungan kadar abu total simplisia

% Kadar abu total = x 100%

(g) simplisia Berat (g) abu Berat

No. Berat sampel (g) Berat abu (g)

1. 2,011 0,521

2. 2,195 0,611

3. 2,035 0,601

1. Kadar abu total =

= 25,90% 2. Kadar abu total =

= 27,83% 3. Kadar abu total =

= 29,53%

% Rata-rata kadar abu total = = 27,75 % 5. Perhitungan kadar abu simplisia tidak larut dalam asam

% Kadar abu tidak larut dalam asam = x 100% (g) simplisia Berat (g) abu Berat

No. Berat sampel (g) Berat abu (g)

1. 2,011 0,081

2. 2,195 0,092

Lampiran 5 (lanjutan)

1. Kadar abu tidak larut dalam asam

=

= 4,02% 2. Kadar abu tidak larut dalam asam =

= 4,21% 3. Kadar abu tidak larut dalam asam =

= 3,93 % % Rata-rata kadar abu tidak larut asam = = 4,05%

Lampiran 6. Bagan pembuatan ekstrak etanol simplisia hewan teripang.

dimasukkan ke dalam bejana tertutup

dimaserasi dengan etanol 96% selama 3 jam, sambil sesekali diaduk

dimasukkan ke dalam perkolator

ditambahkan pelarut etanol 96% secukupnya sampai terdapat selapis peyari diatas simplisia

didiamkan selama 24 jam

dijalankan perkolator dengan kecepatan 1 mL/menit

dipekatkan dengan rotary evaporator pada suhu 40 - 60° C

ditimbang Ekstrak kental

(40,21 g) Serbuk simplisia

(350 g)

Lampiran 7. Bagan pembuatan fraksi n-heksan dan fraksi etilasetat teripang.

Ditambahkan 20 ml etanol dan 100 ml akuades

Dihomogenkan

Dimasukkan dalam corong pisah Diekstraksi dengan 50 ml n-heksan sebanyak 3 kali

Dikocok dan didiamkan sampai terbentuk dua lapisan dan dipisahkan

Diekstraksi dengan 50 ml Dikumpulkan Etilasetat sebanyak 3 kali Dipekatkan dengan

rotary evaporator

Dikocok dan didiamkan sampai terbentuk dua lapisan dan dipisahkan

Fraksi n-heksan pekat (0,458 g) Ekstrak etanol teripang (10 g)

Fraksi n-heksan Fraksi air

Fraksi etilasetat Fraksi air

Fraksi etilasetat pekat (0,232 g)

Dikumpulkan

Lampiran 9. Hasil uji aktivitas antioksidan ekstrak etanol dan fraksi teripang 1. Ekstrak etanol teripang Holothuria atra Jaeger

Tabel pengukuran absorbansi ekstrak etanol teripang Holothuria atra Jaeger

Keterangan : A kontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel

A sampel = Absorbansi mengandung sampel

Perhitungan % peredaman ekstrak etanol teripang Holothuria atra Jaeger - Konsentrasi 40 mcg/ml

= 15,09% - Konsentrasi 60 mcg/ml

= 18,89 %

Konsentrasi Larutan Uji (mcg/ml)

Pengukuran Rata-rata

Absorbansi Persen Peredaman(%)

1 2 3

0 (blanko) 1.2573 1.2696 1.2669 1.2646 -

40 1.0766 1.0759 1.0699 1.0738 15.09

60 1.0269 1.0265 1.0237 1.0257 18.89 80 1.0206 1.0101 1.0143 1.0150 19.74 100 1.0125 1.0003 1.0102 1.0008 20.86

Lampiran 9 (lanjutan) - Konsentrasi 80 mcg/ml

= 19,74 % - Konsentrasi 100 mcg/ml

= 20,86 %

2. Fraksi n-heksan teripang Holothuria atra Jaeger

Tabel pengukuran absorbansi fraksi n-heksan teripang Holothuria atra Jaeger Konsentrasi

Larutan Uji (mcg/ml)

Pengukuran Rata-rata

Absorbansi Persen Peredaman(%)

1 2 3

0 (blanko) 1.0615 1.0620 1.0696 1.0643 -

40 1.0474 1.0498 1.0404 1.0459 1.73

60 1.0392 1.0414 1.0373 1.0393 2.35

80 1.0371 1.0364 1.0341 1.0358 2.68

100 1.0183 1.0106 1.0166 1.0152 4.61

Keterangan : A kontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel

Lampiran 9 (lanjutan)

Perhitungan % peredaman ekstrak etanol teripang Holothuria atra Jaeger - Konsentrasi 40 mcg/ml

= 1,73 % - Konsentrasi 60 mcg/ml

= 2,35 % - Konsentrasi 80 mcg/ml

= 2,68 % - Konsentrasi 100 mcg/ml

Lampiran 9 (lanjutan)

3. Fraksi etilasetat teripang Holothuria atra Jaeger

Tabel pengukuran absorbansi fraksi etilasetat teripang Holothuria atra Jaeger Konsentrasi

Larutan Uji (mcg/ml)

Pengukuran

Rata-rata Absorbansi

Persen Peredaman (%)

1 2 3

0 (blanko) 1.2553 1.2596 1.2569 1.2573 - 40 0.9360 0.9435 0.9399 0.9398 25.25 60 0.8943 0.8962 0.8948 0.8951 28.81 80 0.8765 0.8750 0.8746 0.8754 30.37 100 0.8134 0.8131 0.8118 0.8128 35.35

Keterangan : A kontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel

A sampel = Absorbansi mengandung sampel

Perhitungan % peredaman ekstrak etanol teripang Holothuria atra Jaeger - Konsentrasi 40 mcg/ml

= 25,25 % - Konsentrasi 60 mcg/ml

Lampiran 9 (lanjutan) - Konsentrasi 80 mcg/ml

= 30,37 % - Konsentrasi 100 mcg/ml

= 35,35 %

4. Fraksi Air (sisa) Teripang Holothuria atra Jaeger

Tabel pengukuran absorbansi fraksi n-heksan teripang Holothuria atra Jaeger Konsentrasi

Larutan Uji (mcg/ml)

Pengukuran

Rata-rata Absorbansi

Persen Peredaman (%)

1 2 3

0 (blanko) 1.1767 1.1942 1.1959 1.1889 - 40 0.7979 0.8018 0.8004 0.8004 32.68 60 0.7840 0.7791 0.7848 0.7826 34.17 80 0.7122 0.7150 0.7156 0.7143 39.92 100 0.6501 0.6498 0.6499 0.6499 45.34

Keterangan : A kontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel

Lampiran 9 (lanjutan)

Perhitungan % peredaman ekstrak etanol teripang Holothuria atra Jaeger - Konsentrasi 40 mcg/ml

= 32,68 % - Konsentrasi 60 mcg/ml

= 34,17 % - Konsentrasi 80 mcg/ml

= 39,92 % - Konsentrasi 100 mcg/ml

Lampiran 10. Perhitungan nilai IC50 .

a. Perhitungan nilai IC50 ekstrak etanol teripang Holothuria atra Jaeger

X Y XY X2

0 0 0 0

40 15.09 603.6 1600

60 18.89 1133.4 3600

80 19.74 1579.2 6400

100 20.86 2086 10000

ΣX= 280

X = 56

ΣY= 74.58

Y= 14.916

ΣXY= 5402.2 ΣX2

= 21600

X = Konsentrasi (mcg/ml) Y = % Peredaman

Y _{= a}X+ b b = Y- aX

= (14,916) - (0,2070)(56) = 3,324

Jadi, persamaan garis regresi Y = 0,2070X + 3,324

Nilai IC50 : Y = 0,2070X + 3,324

50 = 0,2070X + 3,324 X = 225,49

Lampiran 10 (lanjutan)

b. Perhitungan nilai IC50 fraksi n-heksan teripang Holothuria atra Jaeger

X Y XY X2

0 0 0 0

40 1.73 69.2 1600

60 2.35 141 3600

80 2.68 214.4 6400

100 4.61 461 10000

ΣX= 280

X = 56

ΣY= 11.37

Y= 2.274

ΣXY= 885.6 ΣX2

= 21600

X = Konsentrasi (mcg/ml) Y = % Peredaman

Y _{= a}X+ b b = Y- aX

= (2,274) - (0,042)(56) = -0,078

Jadi, persamaan garis regresi Y = 0,042X – 0,078 Nilai IC50 : Y = 0,042X – 0,078

50 = 0,042X – 0,078 X = 1192,33

Lampiran 10 (lanjutan)

c. Perhitungan nilai IC50 fraksi etilasetat teripang Holothuria atra Jaeger

X Y XY X2

0 0 0 0

40 25.25 1010 1600

60 28.81 1728.6 3600

80 30.37 2429.6 6400

100 35.35 3535 10000

ΣX= 280

X = 56

ΣY= 119.78

Y= 25.956

ΣXY= 8702.2 ΣX2

= 21600

X = Konsentrasi (mcg/ml) Y = % Peredaman

Y = aX+ b b = Y- aX

= (26,956) - (0,3371)(56) = 7,0784

Jadi, persamaan garis regresi Y = 0,3371X + 7,0784

Nilai IC50 : Y = 0,3371X + 7,0784

50 = 0,3371X + 7,0784 X = 127,33

Lampiran 10 (lanjutan)

d. Perhitungan nilai IC50 fraksi air teripang Holothuria atra Jaeger

X Y XY X2

0 0 0 0

40 32.68 1307.2 1600

60 34.17 2050.2 3600

80 39.92 3193.6 6400

100 45.34 4534 10000

ΣX= 280

X = 56

ΣY= 152.08

Y= 30.416

ΣXY= 11085 ΣX2

= 21600

X = Konsentrasi (mcg/ml) Y = % Peredaman

Y = aX+ b b = Y- aX

= (30,416) - (0,4339)(56) = 6,1176

Jadi, persamaan garis regresi Y = 0,4339X + 6,1176

Nilai IC50 : Y = 0,4339X + 6,1176

50 = 0,4339X + 6,1176 X = 101,13

BAB III

METODE PENELITIAN

Metode penelitian dilakukan secara eksperimental. Penelitian meliputi pengumpulan hewan, identifikasi hewan, karakterisasi simplisia, pembuatan ekstrak etanol, fraksinasi dan uji aktivitas antioksidan dengan metode peredaman DPPH menggunakan alat spektrofotometer visibel Penelitian dilakukan di Laboratorium Farmakognosi dan Laboratotium Penelitian Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara.

3.1 Alat

Alat–alat yang digunakan terdiri dari alat-alat gelas laboratorium (Erlenmeyer, gelas beaker, gelas ukur, labu tentukur, tabung reaksi, corong pisah, gelas arloji, matt pipet, corong, seperangkat alat penetapan kadar air, botol bersumbat, cawan berdasar rata), desikator, kaca objek, kaca penutup, krus porselen, lemari pengering, mikroskop (Olympus), neraca kasar, neraca analitis (Boeco Germany), oven (Memmert), penangas air, penjepit tabung, pipet tetes,

rotary evaporator (Stuart), spektrofotometer UV/Vis (Shimadzu UV-1800) dan tanur (Nabertherm).

3.2 Bahan

Bahan yang digunakan pada penelitian adalah teripang Holothuria atra

Jaeger dan air suling. Bahan bahan kimia lainnya adalah berkualitas pro analisis produksi Sigma: 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH), asam klorida pekat, asam sulfat pekat, asam asetat anhidrida, kloroform, kloralhidrat dan toluena. Bahan kimia berkualitas teknis: etanol 96%, n-heksan dan etilasetat.

3.3 Penyiapan Hewan 3.3.1 Pengumpulan hewan

Pengumpulan hewan dilakukan secara purposif, yaitu tanpa membanding kan dengan daerah lain. Hewan yang digunakan adalah teripang yang masih segar dari Pulo Kapuk (Pantai Cemara) Lhoknga, Aceh Besar.

3.3.2 Identifikasi hewan

Identifikasi hewan dilakukan di Lembaga Ilmu Penelitian Indonesia Pusat Penelitian Oseanografi Jakarta. Teripang yang digunakan sama dengan teripang yang diidentifikasi atas nama Ulwan Purnama Sari. Hasil identifikasi dapat dilihat pada Lampiran 1, halaman 44.

3.3.3 Pengolahan hewan

Teripang dibersihkan dari kotoran dengan cara mencuci di bawah air mengalir hingga bersih, kemudian dikeluarkan isi perut dan dicuci kembali. Teripang dipotong dengan ukuran 3 x 3 cm selanjutnya ditiriskan dan ditimbang. Teripang dikeringkan di lemari pengering hinga diperoleh simplisia kering yang dapat dipatahkan. Teripang yang sudah kering ini disebut simplisia hewan. Simplisia dihaluskan sampai menjadi serbuk, kemudian ditimbang beratnya dan disimpan dalam wadah tertutup. Bagan penelitian dapat dilihat pada Lampiran 2, halaman 45.

3.4Pembuatan Pereaksi

3.4.1 Pereaksi Liebermann-Burchard

Sebanyak 5 bagian volume asam sulfat pekat dicampurkan dengan 50 bagian volume etanol 95%, lalu ditambahkan dengan hati-hati 5 bagian volume

asam asetat anhidrida ke dalam campuran tersebut dan didinginkan (Depkes RI, 1995).

3.4.2 Pereaksi timbal (II) asetat 0,4 M

Sebanyak 15,17 g timbal (II) asetat ditimbang, kemudian dilarutkan dalam air suling bebas karbon dioksida sebanyak 100 ml (Depkes RI, 1995).

3.4.3 Pereaksi asam klorida 2 N

Sebanyak 17 ml larutan asam klorida pekat ditambahkan air suling hingga diperoleh larutan 100 ml (Depkes RI, 1995).

3.4.4 Larutan asam sulfat 2 N

Sebanyak 5,5 ml larutan asam sulfat pekat ditambahkan air suling sampai 100 ml (Depkes RI, 1995).

3.4.5 Pereaksi kloralhidrat

Sebanyak 50 g kristal kloralhidrat ditimbang lalu dilarutkan dalam 20 ml air suling (Depkes RI, 1995).

3.4.6 Pereaksi Molish

Sebanyak 3 g α-naftol ditimbang, dilarutkan dalam asam nitrat 0,5 N hingga diperoleh larutan 100 ml (Depkes RI,1995).

3.4.7 Larutan pereaksi DPPH 0,5 mM (konsentrasi 200 ppm)

Sebanyak 19,7 mg DPPH ditimbang, kemudian dilarutkan dalam metanol hingga volume 100 ml.

3.5 Pemeriksaan Karakteristik Simplisia Hewan

Pemeriksaan karakteristik simplisia meliputi pemeriksaan makroskopik dan mikroskopik, penetapan kadar air, penetapan kadar sari larut air, penetapan

kadar sari larut etanol, penetapan kadar abu total dan penetapan kadar abu tidak larut asam.

3.5.1 Pemeriksaan makroskopik

Pemeriksaan makroskopik dilakukan dengan mengamati bentuk luar, ukuran permukaan, diameter dan organoleptis teripang. Gambar teripang segar, simplisia dan serbuk simplisia dapat dilihat pada Lampiran 3, halaman 46-47. 3.5.2 Pemeriksaan mikroskopik

Pemeriksaan mikroskopik dilakukan terhadap serbuk simplisia hewan teripang ditaburkan di atas kaca objek yang telah ditetesi dengan larutan kloralhidrat dan ditutup dengan kaca penutup (deck glass), kemudian diamati di bawah mikroskop. Gambar mikroskopik teripang dapat dilihat pada Lampiran 4, halaman 48.

3.5.3 Penetapan kadar air

Penetapan kadar air dilakukan dengan metode Azeotropi (destilasi toluen) (WHO, 1998). Alat terdiri dari labu alas bulat 500 ml, alat penampung, pendingin, tabung penyambung dan tabung penerima.

a. Penjenuhan toluen

Sebanyak 200 ml toluen dan 2 ml air suling dimasukkan ke dalam labu alas bulat, dipasang alat penampung dan pendingin, kemudian didestilasi selama 2 jam. Destilasi dihentikan dan dibiarkan dingin selama 30 menit, kemudian volume air dalam tabung penerima dibaca dengan ketelitian 0,05 ml.

b. Penetapan kadar air simplisia

Sebanyak 5 g serbuk simplisia yang telah ditimbang seksama dimasukkan ke dalam labu yang berisi toluen yang telah dijenuhkan, kemudian labu

2 tetes untuk tiap detik sampai sebagian besar air terdestilasi, kemudian kecepatan destilasi dinaikkan sampai 4 tetes tiap detik. Bagian dalam pendingin dibilas dengan toluen setelah semua air terdestilasi,. Destilasi dilanjutkan selama 5 menit, kemudian tabung penerima dibiarkan mendingin pada suhu kamar. Volume air dibaca dengan ketelitian 0,05 ml setelah air dan toluen memisah sempurna. Selisih kedua volume air yang dibaca sesuai dengan kandungan air yang terdapat dalam bahan yang diperiksa. Kadar air dihitung dalam persen.

3.5.4 Penetapan kadar sari larut air

Penetapan kadar sari larut air dilakukan dengan metode gravimetri menurut Depkes RI (1995). Prosedurnya adalah sebanyak 5 g serbuk simplisia dimaserasi selama 24 jam dalam 100 ml air-kloroform (2,5 ml kloroform dalam air suling sampai 1 liter) dalam labu bersumbat sambil dikocok sesekali selama 6 jam pertama, kemudian dibiarkan selama 18 jam, kemudian disaring. Sejumlah 20 ml filtrat pertama diuapkan sampai kering dalam cawan penguap yang berdasar rata yang telah dipanaskan dan ditara. Sisa dipanaskan pada suhu 105ºC sampai bobot tetap. Kadar sari larut air dihitung dalam persen.

3.5.5 Penetapan kadar sari larut etanol

Penetapan kadar sari larut etanol dilakukan dengan metode gravimetri menurut Depkes (1995). Prosedurnya adalah sebanyak 5 g serbuk simplisia dimaserasi selama 24 jam dalam 100 ml etanol 96% dalam labu bersumbat sambil dikocok sesekali selama 6 jam pertama, kemudian dibiarkan selama 18 jam. Kemudian disaring cepat untuk menghindari penguapan etanol. Sejumlah 20 ml filtrat diuapkan sampai kering dalam cawan penguap yang berdasar rata yang telah dipanaskan dan ditara. Sisa dipanaskan pada suhu 105ºC sampai bobot tetap. Kadar sari larut etanol dihitung dalam persen.

3.5.6 Penetapan kadar abu total

Penetapan kadar abu total dilakukan dengan metode gravimetri menurut Depkes (1995). Prosedurnya adalah sebanyak 2 g serbuk yang telah digerus dan ditimbang seksama dimasukan dalam krus porselin yang telah dipijar dan ditara, kemudian diratakan. Krus dipijar perlahan-lahan sampai arang habis, pemijaran dilakukan pada suhu 600ºC selama 3 jam kemudian didinginkan dan ditimbang sampai diperoleh bobot tetap. Kadar abu total dihitung dalam persen.

3.5.7 Penetapan kadar abu tidak larut asam

Penetapan kadar abu tidak larut asam dilakukan dengan metode gravimetri menurut Depkes RI (1995). Prosedurnya adalah abu yang diperoleh dalam penetapan kadar abu total dididihkan dalam 25 ml asam klorida encer selama 5 menit, bagian yang tidak larut dalam asam dikumpulkan, disaring melalui kertas saring bebas abu lalu dipijar sampai bobot tetap, kemudian didinginkan dan ditimbang. Kadar abu tidak larut dalam asam dihitung dalam persen. Hasil perhitungan karakteristik dapat dilihat pada Lampiran 5, halaman 49-52.

3.6 Pemeriksaaan Golongan Senyawa Kimia 3.6.1 Pemeriksaan glikosida

Sampel uji ditimbang sebanyak 3 g, lalu disari dengan 30 ml campuran etanol 95% dengan air (7:3) dan 10 ml asam sulfat 2 N, direfluks selama 2 jam, didinginkan dan disaring. Sebanyak 20 ml filtrat ditambahkan, ditambahkan 25 ml air suling dan 25 ml timbal (II) asetat 0,4 M, dikocok, didiamkan 5 menit lalu disaring. Filtrat disari dengan 20 ml campuran isopropanol dan kloroform (2:1), dilakukan berulang sebanyak 3 kali. Sari air dikumpulkan dan diuapkan pada

sisa digunakan untuk percobaan berikut : 0,1 ml larutan percobaan dimasukkan dalam tabung reaksi dan diuapkan di atas penangas air. Sebanyak 2 ml air dan 5 tetes pereaksi Molish ditambahkan pada sisa penguapan. Secara perlahan lahan ditambahkan 2 ml asam sulfat pekat melalui dinding tabung, terbentuknya cincin berwarna ungu pada batas kedua cairan menunjukkan ikatan gula (Depkes RI, 1995).

3.6.2 Pemeriksaan saponin

Sebanyak 0,5 g serbuk simplisia dimasukkan dalam tabung reaksi ditambahkan 10 ml air panas, didinginkan kemudian dikocok kuat-kuat selama10 detik, jika terbentuk buih yang mantap setinggi 1 sampai 10 cm yang stabil tidak kurang dari 10 menit dan tidak hilang dengan penambahan 1 tetes asam klorida 2N menunjukkan adanya saponin (Depkes RI, 1995).

3.6.3 Pemeriksaan steroida/triterpenoida

Sebanyak 1 g serbuk simplisia dimaserasi dengan 20 ml eter selama 2 jam, disaring, filtrat diuapkan dalam cawan penguap, dan pada sisanya ditambahkan 1 tetes asam asetat anhidrat dan 1 tetes asam sulfat pekat (pereaksi Liebermann-Burchard). Apabila terbentuk warna ungu atau merah atau biru hijau menunjukkan adanya steroida/triterpenoida (Harbone, 1987).

3.7 Pembuatan Ekstrak Etanol Teripang

Pembuatan ekstrak teripang dengan metode perkolasi menggunakan pelarut etanol.

Sebanyak 350 g serbuk teripang dimasukkan kedalam bejana tertutup, lalu direndam dengan cairan penyari selama 3 jam. Kemudian massa dimasukkan ke dalam perkolator, lalu pelarut etanol dituang secukupnya sampai terdapat selapis

larutan penyari di atas serbuk simplisia, mulut perkolator ditutup dengan plastik dan aluminium foil dan dibiarkan selama 24 jam. Setelah 24 jam kran perkolator dibuka dan cairan perkolat dibiarkan menetes dengan kecepatan 1ml/menit dan ditampung kedalam botol Perkolasi dihentikan setelah tetesan terakhir perkolat tidak berwarna lagi atau apabila sebanyak 500 mg cairan perkolat diuapkan di atas penangas air tidak meninggalkan sisa atau apabila tidak bereaksi dengan pereaksi Liebermann-Burchard. Perkolat dipekatkan dengan bantuan alat penguap rotary evaporator pada suhu 40-60°C hingga diperoleh ekstrak kental teripang. Bagan pembuatan ekstrak etanol dapat dilihat pada Lampiran 6, halaman 53.

3.8 Fraksinasi Teripang

Fraksinasi dilakukan secara ekstraksi cair-cair (ECC) menggunakan pelarut n-heksan dan etilasetat.

a. Fraksinasi dengan n-heksan

Sebanyak 10 g ekstrak etanol pekat teripang ditambahkan 20 ml etanol dan 100 ml air suling, kemudian diektraksi dengan n-heksan sebanyak 50 ml menggunakan corong pisah dilakukan sebanyak 3 kali. Lapisan n-heksan dipisahkan dan kemudian diuapkan hingga diperoleh fraksi n-heksan pekat.

b. Fraksinasi dengan etilasetat

Lapisan air dari pemisahan n-heksana diekstraksi dengan 50 ml etilasetat menggunakan corong pisah dilakukan sebanyak 3 kali. Lapisan etilasetat dipisahkan dan ditampung kemudian diuapkan hingga diperoleh fraksi etilasetat pekat dan ditimbang. Fraksi air yang diperoleh juga diuapkan dan ditimbang. Bagan pembuatan fraksi n-heksan dan etilasetat dapat dilihat pada Lampiran 7,

3.9 Pengujian Kemampuan Antioksidan Dengan Spektrofotometer Visibel 3.9.1 Prinsip metode penangkapan radikal bebas DPPH

Kemampuan sampel uji dalam meredam proses oksidasi DPPH ( 1,1-diphenyl-2-picryl-hidrazyl) sebagai radikal bebas dalam larutan metanol (sehingga terjadi peredaman warna ungu DPPH) dengan nilai IC50 (konsentrasi sampel uji

yang mampu meredam radikal bebas sebesar 50%) digunakan sebagai parameter untuk menentukan aktivitas antioksidan sampel uji tersebut.

3.9.2 Pembuatan larutan blanko

Larutan DPPH 0,5 mM (konsentrasi 200 mcg/ml) dipipet sebanyak 5 ml, kemudian dimasukkan ke dalam labu tentukur 25 ml, dicukupkan volumenya dengan metanol sampai garis tanda (konsentrasi 40 mcg/ml).

3.9.3 Penentuan panjang gelombang serapan maksimum

Larutan DPPH konsentrasi 40 mcg/ml dihomogenkan dan diukur serapannya pada panjang gelombang 400-800 nm.

3.9.4 Pembuatan larutan induk

Sebanyak 25 mg sampel uji ditimbang kemudian dilarutkan dalam labu tentukur 25 ml dengan metanol lalu volumenya dicukupkan dengan metanol sampai garis tanda (konsentrasi 1000 mcg/ml).

3.9.5 Pembuatan larutan uji

Konsentrasi ditetapkan setelah dilakukan beberapa orientasi. Larutan induk dipipet sebanyak 1 ml; 1,5 ml; 2 ml; 2,5 ml kemudian dimasukkan ke dalam labu tentukur 25 ml (untuk mendapatkan konsentrasi 40 mcg/ml, 60 mcg/ml, 80 mcg/ml, 100 mcg/ml), kemudian dalam masing-masing labu tentukur ditambahkan 5 ml larutan DPPH 0,5 mM (konsentrasi 40 mcg/ml) lalu volume dicukupkan dengan metanol sampai garis tanda, didiamkan ditempat gelap, lalu

diukur serapannya pada spektrofotometer uv-visibel pada panjang gelombang 516 nm. Gambar spektrofotometer UV/Vis dapat dilihat pada Lampiran 8, halaman 55. 3.9.6 Penentuan persen peredaman

Kemampuan antioksidan diukur sebagai penurunan absorbansi larutan DPPH (peredaman warna ungu DPPH) akibatnya adanya penambahan larutan uji. Nilai absorbansi larutan DPPH sebelum dan sesudah penambahan larutan uji tersebut dihitung sebagai persen peredaman.

% Peredaman = x 100%

kontrol A

sampel A -kontrol A

Keterangan : Akontrol = Absorbansi tidak mengandung sampel

Asampel = Absorbansi mengandung sampel

Hasil perhitungan persen perdaman radikal bebas DPPH dapat dilihat pada Lampiran 9, halaman 56-61.

3.9.7 Penentuan nilai IC50

Nilai IC50 merupakan bilangan yang menunjukkan konsentrasi sampel uji

(mcg/ml) yang memberikan peredaman DPPH sebesar 50% (mampu menghambat/ meredam proses oksidasi sebesar 50%). Nilai 0% berarti tidak mempunyai aktivitas antioksidan, sedangkan nilai 100% berarti peredaman total dan pengujian perlu dilanjutkan dengan pengenceran larutan uji untuk melihat batas konsentrasi aktivitasnya. Hasil perhitungan dimasukkan ke dalam persamaan regresi dengan konsentrasi ekstrak (mcg/ml) sebagai absis (sumbu X) dan nilai % peredaman (antioksidan) sebagai ordinatnya (sumbu Y). Secara spesifik, suatu senyawa dikatakan sebagai antioksidan sangat kuat jika nilai IC50 kurang dari 50

100-150 mcg/ml, dan lemah jika IC50 bernilai 151-200 mcg/ml (Mardawati, 2008).

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil Identifikasi Hewan

Hasil identifikasi hewan yang dilteliti dilakukan oleh Pusat Penelitian Oseanografi LIPI hasilnya adalah hewan teripang jenis Holothuria atra Jaeger, marga Holothuria, suku Holothuroiidae, bangsa Aspidochirotida, kelas Holothuroidea dan filum Echinodermata.

4.2 Hasil Karakteristik Hewan

4.2.1 Hasil pemeriksaan makroskopik

Hasil pemeriksaan teripang segar secara makroskopik yaitu berukuran panjang 28 cm, lebar 7,80 cm dan berat 810 g. Terdapat tonjolan-tonjolan pada permukaan tubuh, berlendir, berwarna hitam dan berbau khas. Hasil pemeriksaan makroskopik serbuk simplisia yaitu berwarna coklat kehitaman, rasa asin dan berbau khas.

4.2.2 Hasil pemeriksaan mikroskopik

Pemeriksaan dilakukan terhadap serbuk siimplisia hewan teripang

Holothuria atra Jaeger. Hasil pemeriksaan mikroskopik serbuk simplisia hewan menunjukkan adanya tiga jenis spikula yang berbeda tipe yaitu tipe rosettes,tipe

rod dan tipe pseudo-button.

4.2.3 Hasil pemeriksaan karakteristik

Hasil pemeriksaan karakteristik meliputi penetapan kadar air, penetapan kadar sari larut air, penetapan kadar sari larut etanol, penetapan kadar abu total

Tabel 4.1 Hasil pemeriksaan karakteristik simplisia hewan teripang Holothuria atra Jaeger.

No. Karakteristik _{Hasil Pemeriksaan (%)} Keputusan Menteri Pertanian

1 Kadar air 9,33 20

2 Kadar sari larut air 38,96 -

3 Kadar sari larut etanol 29,34 -

4 Kadar abu total 27,75 -

5 Kadar abu tidak larut asam

4,05 7

Hasil penetapan kadar air dan penetapan kadar abu tidak larut asam memenuhi standar mutu teripang kering (SPI-kan/02/29/1987) sesuai dengan Keputusan Menteri Pertanian No.701/Kpts/TP>830/10/1987 tentang penetapan standar mutu hasil perikanan yang saat ini telah ditetapkan menjadi standar Indonesia oleh Dewan Standarisasi Nasional yang berlaku secara nasional. Standar ini merupakan standar minimum untuk teripang kering (Martoyo, dkk., 1994).

Penetapan kadar abu total dilakukan untuk mengetahui kadar senyawa anorganik dalam simplisia teripang, seperti mineral kalsium, natrium, zat besi, kalium, kromium, stronsium, mangan, fosfor, Zn dan vanadium (Widodo, 2013) sedangkan tujuan penetapan kadar abu tidak larut asam untuk mengetahui kadar zat anorganik yang tidak larut dalam asam, misalnya silikat.

Kadar sari menunjukkan kandungan kimia terendah yang terdapat dalam simplisia. Hasil penetapan kadar sari larut air lebih tinggi daripada kadar sari larut etanol karena diduga dalam air terkandung senyawa kimia metabolit primer yaitu karbohidrat dan protein, senyawa metabolit sekunder terutama glikosida dan saponin, vitamin B1,B2,B3, garam dan mineral (Widodo, 2013). Senyawa yang

4.3 Hasil Pemeriksaan Golongan Senyawa

Hasil pemeriksaan golongan senyawa terhadap simplisia hewan, ekstrak etanol, fraksi n-heksan, fraksi etilasetat, dan fraksi air, menunjukkan, bahwa teripang Holothuria atra Jaeger mengandung golongan senyawa-senyawa kimia seperti yang terlihat pada Tabel 4.2 berikut ini.

Tabel 4.2 Hasil pemeriksaan senyawa kimia simplisia hewan, ekstrak etanol dan fraksi teripang.

No Pemeriksaan Simplisia Ekstrak etanol Fraksi n-heksan Fraksi etilasetat Fraksi air

1. Glikosida + + - + +

2. Saponin + + - + +

3. Steroid/ Triterpenoid

+ + + - -

Keterangan: (+) positif : mengandung golongan senyawa (-) negatif : tidak mengandung golongan senyawa

Tabel di atas menunjukkan bahwa simplisia memiliki kandungan glikosida, saponin dan steroid/triterpenoid. Holothuria atra Jaeger memiliki potensi sebagai antioksidan, yaitu dengan adanya saponin, glikosida dan steroid/triterpenoid. Senyawa tersebut diduga mampu menetralisir radikal bebas dengan memberikan elektron kepadanya sehingga atom dengan elektron yang tidak berpasangan mendapat pasangan elektron dan tidak lagi menjadi radikal bebas.

4.4 Hasil Analisis Aktivitas Antioksidan Sampel Uji

Aktivitas antioksidan dari ekstrak etanol, fraksi n-heksan, fraksi etilasetat dan fraksi air dari teripang Holothuria atra Jeager diperoleh dari hasil pengukuran absorbansi DPPH dengan adanya penambahan larutan uji ekstrak etanol, fraksi n

-4.4.1 Hasil penentuan panjang gelombang serapan maksimum

Hasil pengukuran serapan maksimum larutan DPPH 40 mcg/ml dalam metanol dengan menggunakan spektrofotometer UV-Vis. Hasil pengukuran menunjukkan bahwa larutan DPPH dalam metanol menghasilkan serapan maksimum sebesar 1,289 pada panjang gelombang 516 nm dan termasuk dalam kisaran panjang gelombang sinar tampak (400 nm-800 nm) (Rohman, 2007) dan termasuk dalam rentang panjang gelombang DPPH yang berkisar antara 515 – 520 nm (Molyneux, 2004). Data hasil pengukuran dapat dilihat pada Gambar 4.1.

Gambar 4.1.Kurva serapan maksimum larutan DPPH 40 mcg/ml dalam metanol secara spektrofotometri visible.

4.4.2 Hasil analisis aktivitas antioksidan sampel uji

Hasil diperoleh dari pengukuran absorbansi DPPH pada menit ke-60 dengan adanya penambahan larutan uji dengan konsentrasi 40 mcg/ml, 60 mcg/ml, 80 mcg/ml dan 100 mcg/ml yang dibandingkan dengan kontrol DPPH (tanpa penambahan larutan uji).

Penurunan absorbansi DPPH dan persen peredaman ekstrak etanol dan fraksi teripang Holothuria atra Jaeger dapat dilihat pada Tabel 4.3 berikut ini.

Tabel 4.3 Data persen pemerangkapan DPPH oleh ekstrak etanol dan fraksi teripang.

Larutan Uji Konsentrasi

(mcg/ml) Absorbansi

Persen Peredaman(%) Ekstrak Etanol

Teripang

0 1.2646 -

40 1.0738 15.09

60 1.0257 18.89

80 1.0150 19.74

100 1.0008 20.86

Fraksi n-heksan Teripang

0 1.0643 -

40 1.0459 1.73

60 1.0393 2.35

80 1.0358 2.68

100 1.0152 4.61

Fraksi Etilasetat Teripang

0 1.2573 -

40 0.9398 25.25

60 0.8951 28.81

80 0.8754 30.37

100 0.8128 35.35

Fraksi Air Teripang

0 1.1889 -

40 0.8004 32.68

60 0.7826 34.17

80 0.7143 39.92

100 0.6499 45.34

Data tabel diatas menunjukkan adanya penurunan absorbansi DPPH oleh ekstrak etanol, fraksi n-heksan, fraksi etilasetat dan fraksi air teripang Holothuria atra Jaeger dalam metanol sebagai larutan uji pada berbagai konsentrasi, hal ini menunjukkan adanya aktivitas antioksidan dalam meredam radikal bebas DPPH pada larutan uji.

Penurunan nilai absorbansi terjadi karena adanya peredaman radikal bebas DPPH oleh larutan uji sehingga menunjukkan adanya aktivitas antioksidan. Peredaman terjadi karena adanya hubungan antioksidan dengan DPPH secara transfer elektron atom hidrogen antioksidan kepada radikal bebas DPPH. Jika

larutan berubah dari ungu tua menjadi kuning terang dan absorbansi pada panjang gelombang maksimumnya akan hilang (Molyneux, 2004).

Hubungan perbedan konsentrasi dan hubungan perbedaan kepolaran pelarut dengan persen peredaman dengan menganalisis aktivitas antioksidannya dapat dilihat pada Gambar 4.2 berikut ini :

Gambar 4.2 Grafik hasil uji aktivitas antioksidan ekstrak etanol dan fraksi teripang.

Gambar grafik diatas menunjukkan bahwa adanya perbedaan konsentrasi di setiap sampel uji menghasilkan aktivitas antioksidan yang berbeda juga. Semakin tinggi konsentrasi sampel uji maka semakin besar kemampuannya meredam radikal bebas DPPH.

Perbedaan kepolaran pelarut juga mempengaruhi kemampuan sampel uji dalam meredam radikal bebas DPPH. Dalam hal ini fraksi air memiliki kemampuan meredam DPPH paling besar diantara larutan uji yapng lainnya, sedangkan fraksi n-heksan memiliki kemampuan meredam radikal bebas paling lemah.

4.5 Analisis Nilai IC50 (Inhibitory Concentration) Sampel Uji

Nilai IC50 diperoleh berdasarkan persamaan regresi linier yang didapatkan

dengan cara memplot konsentrasi larutan uji dan persen peredaman DPPH sebagai parameter aktivitas antioksidan, dimana konsentrasi larutan uji (mcg/ml) sebagai absis (sumbu X) dan nilai % peredaman sebagai ordinat (sumbu Y). Hasil persamaan regresi yang diperoleh untuk ekstrak etanol, fraksi n-heksan, fraksi etilasetat dan fraksi air teripangdapat dilihat pada Tabel 4.4 berikut ini.

Tabel 4.4..Hasil persamaan regresi linier yang diperoleh untuk ekstrak etanol dan fraksi teripang.

Larutan uji Persamaan Regresi

Ekstrak etanol Y = 0,2070X + 3,324

Fraksi n-heksan Y = 0,042X – 0,078 Fraksi etilasetat Y = 0,3371X + 7,0784

Fraksi air Y = 0,4339X + 6,1176

Kemampuan sampel uji dalam meredam DPPH (1,1-Diphenyl-2 -Picrylhidrazyl) sebagai radikal bebas dalam larutan metanol dengan nilai IC50

(konsentrasi sampel uji yang mampu meredam radikal bebas sebesar 50%) digunakan sebagai parameter untuk menentukan aktivitas antioksidan sampel uji tersebut (Prakash, 2001). Hasil analisis nilai IC50 (Inhibitory Concentration) yang

diperoleh berdasarkan perhitungan persamaan regresi dapat dilihat pada Tabel 4.5 berikut ini.

Tabel 4.5 Nilai IC50 ekstrak etanol dan fraksi teripang.

Sampel IC50 (mcg/ml)

Ekstrak etanol 225,49

Fraksi n-heksan 1192,33

Hasil di atas menunjukkan bahwa ekstrak etanol, fraksi n-heksan, etilasetat dan air dari teripang (Holothuria atra Jaeger) memiliki aktivitas antioksidan. Ekstrak etanol dan fraksi n-heksan memiliki aktivitas antioksidan sangat lemah sedangkan fraksi etilasetat dan fraksi air memiliki aktivitas antioksidan kategori sedang. Perbedaan nilai IC50 pada masing-masing fraksi diduga disebabkan oleh

adanya perbedaan distribusi golongan senyawa metabolit sekunder yang bersifat sebagai antioksidan (saponin, dan steroid/triterpenoid) berdasarkan kepolaran pelarut yang digunakan(Francis, dkk., 2002; Rasyid,2008).

Fraksi air dengan nilai IC50 terendah yaitu 101,13 mcg/ml memiliki

aktivitas antioksidan terkuat diduga karena adanya senyawa saponin. Saponin dalam fraksi air menghasilkan aktivitas yang cukup kuat dalam menangkap radikal bebas. Beberapa senyawa saponin memerangkap superoksida dalam bentuk hidroperoksida antara sehingga dapat mencegah kerusakan biomolekuler oleh radikal bebas (Francis, dkk., 2002). Menurut Althunibat potensi antioksidan teripang lebih tinggi dalam ekstrak air dibandingkan dengan ekstrak organik, ini menunjukkan bahwa sebagian besar molekul antioksidan yang diekstrak merupakan senyawa hidrofilik di alam.

Fraksi n-heksan dengann nilai IC50 tertinggi yaitu 1192,33 mcg/ml

memiliki aktivitas antioksidan paling lemah dikarenakan senyawa metabolit sekunder yang memiliki aktivitas antioksidan pada fraksi ini hanya steroid/triterpenoid. Aktivitas antioksidan teripang ditentukan oleh adanya senyawa triterpenoid saponin dan SOD (Super Oxide dismutase) (Kordi dan Gufron, 2010). Akan tetapi, dalam pengujian ini diduga yang lebih mempengaruhi aktivitas antioksidan teripang adalah senyawa metabolit sekunder yang terkandung dalam teripang dikarenakan enzim SOD yang kurang stabil dalam

suhu ruangan kemungkinan mengalami penurunan aktivitas selama proses preparasi dan pengujian sampel.

Stabilitas SOD yang rendah pada suhu ruangan (25°C) menyebabkan kerja SOD harus pada suhu yang rendah. Preparasi uji aktivitas SOD biasanya dilakukan pada suhu maksimal 4°C. Penurunan aktivitas enzim SOD lebih dari 47% terjadi pada suhu di atas 50°C. Hal ini menunjukkan bakwa ekstrak enzim SOD hanya dapat dipergunakan pada suhu dingin untuk menjaga stabilitas SOD yang terkandung di dalamnya (Panji, dkk., 2009).

BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan

Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan maka dapat disimpulkan bahwa:

a. hasil pemeriksaan golongan senyawa teripang menunjukkan adanya senyawa kimia golongan glikosida, steroid/triterpenoid dan saponin.

b. hasil karakteristik serbuk simplisia teripang Holothuria atra Jaeger diperoleh kadar air 9,33 %, kadar sari larut air 38,96%, kadar sari larut etanol 29,34%, kadar abu total sebesar 27,75% dan kadar abu tidak larut asam 4,05%.

c. hasil pengujian aktivitas antioksidan menunjukkan bahwa ekstrak etanol dan fraksi n-heksan memiliki aktivitas antioksidan sangat lemah, sedangkan fraksi

etilasetat dan fraksi air memiliki aktivitas antioksidan sedang, dengan nilai IC50

dari masing-masing ekstrak etanol, fraksi n-heksan, fraksi etilasetat dan fraksi air

sebesar 225,49, 1192,33, 127,33 dan 101,13 mcg/ml.

5.2 Saran

Disarankan kepada peneliti selanjutnya untuk melakukan pengujian toksisitas terhadap teripang Holothuria atra Jaeger dengan metode Brine Shrimp Letality Test (BSLT).

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Uraian Hewan

Teripang atau timun laut termasuk dalam filum Echinodermata merupakan salah satu biota laut yang banyak ditemukan di perairan Indonesia, sebab secara geografis perairan Indonesia terletak di antara Samudera Pasifik dan Samudera Hindia merupakan habitat terbaik untuk hewan teripang. (Conand dan Byrne, 1993). Uraian hewan meliputi sistematika hewan, sinonim hewan, habitat hewan, morfologi hewan, reproduksi hewan, kandungan dan manfaat dan uraian kimia. 2.1.1 Sistematika hewan

Identifikasi sampel teripang di Pusat Penelitian Oseanografi LIPI. Dengan hasil sebagai berikut:

Filum : Echinodermata Kelas : Holothuroidea

Ordo : Aspidochirotida Grube, 1840 Famili : Holothuriidae Ludwig, 1894 Genus : Holothuria Linnaeus, 1767 Spesies : Holothuria atra Jaeger, 1833 2.1.2 Sinonim

Di seluruh dunia, teripang laut juga dikenali dengan nama-nama lain, misalnya: lolly fish (FAO), Stylo noir (Madagascar), Kuchii attai (India), Sherman (Mesir), Black beauty and Mani (Philippines), Black lollyfish (Africa), hoi-sum (Hongkong), Kichupa (Tanzania) Loliloli (Fiji) (Purcell, dkk., 2012) dan kulong

2.1.3 Habitat

Teripang laut hampir ditemui pada semua habitat dalam lingkungan laut tetapi lebih tersebar dan mempunyai distribusi yang besar pada kawasan terumbu karang yang dangkal dengan kedalaman kira-kira 5 meter. Teripang laut bisa dijumpai pada kawasan pasang surut hingga dasar lautan yang dalam (20 meter) (Kwang, 2013).

2.1.4 Morfologi hewan

Teripang Holothuria atra mempunyai tubuh yang berbentuk langsing memanjang. Warna tubuh hitam, dengan tentakel kekuning-kuningan sepanjang 15-20 cm. Jenis ini hidup di perairan atau diantara karang yang tertutup pasir. Badannya tertutup pasir sehingga hanya nelayan yang biasa menangkapnya yang tahu persis tempat persembunyiannya (Ghufran dan Kordi, 2010).

Bagian oral teripang laut dikenali dengan adanya tentakel di bagian tersebut sedangkan bagian anus atau aboral teripang laut terdapat saluran kloaka. Kebanyakan teripang laut merupakan pemakan endapan yang akan menelan sedimen dan mengekstrak komponen organik dalam sedimen (Kwang, 2013).

Jenis kelamin teripang laut tidak dapat dibedakan secara morfologi luar dan hanya dapat diidentifikasi dengan memperhatikan warna gonad di bawah mikroskop dan secara histologi. Gonad jantan pada Holothuria atra berwarna kuning sedangkan betina berwarna merah jambu (Kwang, 2013).

2.1.4 Reproduksi hewan

Teripang bersifat gonochoristic, yaitu ada hewan jantan dan hewan betina, meskipun tidak terlihat adanya perbedaan bentuk luar secara jelas. Kebiasaan berkembang biak pada setiap jenis teripang berbeda-beda. Teripang memijah pada musim kemarau, dimana suhu air diperairan cukup tinggi dan stabil. Seekor induk

betina berukuran 600 g dapat mengeluarkan telur 4-5 juta butir dengan ukuran bervariasi antara 160-180 mikron (Ghufran dan Kordi, 2010).

Proses pembuahan terjadi diluar tubuh. Teripang betina biasanya mengeluarkan telur-telurnya terlebih dahulu, kemudian langsung dibuahi oleh sperma jantan. Beberapa jenis teripang di laut dalam, setelah telur dibuahi, telur tersebut akan ditangkap kembali oleh betina dengan tentakelnya, kemudian ditransfer kedalam kantung pengeraman. Telur tersebut akan berkembang dan menetas 32 jam setelah pembuahan (Ghufran dan Kordi, 2010).

2.1.6 Kandungan dan manfaat

Teripang telah dimanfaatkan cukup lama di Indonesia terutama oleh masyarakan sekitar pantai sebagai bahan makanan. Sebagai bahan pangan, teripang mempunyai nilai gizi yang cukup tinggi. Manfaat teripang untuk kesehatan juga sangat banyak, teripang memiliki kandungan Cell Growth factor

yang mampu merangsang regenerasi sel dan jaringan yang rusak. Teripang kering mempunyai kadar protein tinggi, yaitu 82% dan mengandung asam lemak tidak jenuh yang penting untuk kesehatan jantung dan mujarab memperkuat sel hati untuk mengeluarkan antibodi. Teripang juga mengandung lebih dari 80% kolagen menyebabkan teripang disebut imunomodulator (Widodo, 2013).

Kandungan lain teripang adalah saponin dan SOD (Super Oxide dismutase). Saponin mempunyai struktur yang mirip dengan seyawa aktif dalam gingseng, ganoderma, dan tumbuhan herbal terkenal lainnya. Senyawa ini diketahui berfungsi sebagai anti kanker anti inflamasi. SOD adalah senyawa yang bersifat antioksidan, yang diharapkan menjadi alternatif sumber antioksidan alami bagi manusia dimasa mendatang yang mampu menangkal radikal bebas (Ghufran

2.1.7 Uraian Kimia a. Saponin

Saponin mula-mula diberi nama demikian karena sifatnya yang khas menyerupai sabun (bahasa latin sapo = sabun) (Robinson, 1995). Saponin adalah glikosida yang aglikonnya disebut sapogenin. Keberadaan saponin sangat mudah ditandai dengan pembentukan larutan koloidal dengan air yang apabila dikocok menimbulkan buih yang stabil. Saponin juga bersifat menghancurkan butir darah merah lewat reaksi hemolisis darah (Farnsworth, 1966; Gunawan dan Mulyani, 2004).

Berdasarkan struktur dari aglikonnya, saponin dapat dibedakan menjadi dua macam, yaitu saponin steroid dan saponin triterpenoid. Saponin steroid/triterpenoid mudah larut dalam air dan alkohol, tetapi tidak larut dalam eter. Saponin steroid/triterpenoid tersusun dari suatu aglikon steroid/triterpenoid (sapogenin) yang terikat pada suatu oligosakarida yang biasanya heksosa dan pentosa (Farnsworth, 1966). Hasil hidrolisisnya, yaitu sapogenin mudah larut dalam pelarut organik (seperti kloroform, eter, n-heksan) dan tidak larut dalam air (Trease dan Evans, 1983).

Manfaat saponin dalam bidang kesehatan pada saponin tertentu dan turunannya memiliki fungsi sistem kekebalan tubuh spesifik pada 598 G. Francis, dkk,. telah melakukan uji hewan . Saponin juga menunjukkan efek luas sitostatik terhadap sel kanker. Kemampuan saponin untuk menurunkan tingkat kolesterol serum hewan juga telah diteliti. Efek menguntungkan yang ditunjukkan saponin, yang terdapat dalam makanan dan sebagai obat terhadap dua dari bahaya kesehatan utama di banyak negara; obesitas dan kanker. Saponin juga memiliki efek antiprotozoal sterol-dimediasi dan efek antijamur, dan efek molluscicidal dan

antivirus, juga menawarkan potensi yang cukup besar dalam mengelola berbagai penyakit (Francis, dkk., 2002).

b. Steroid/Triterpenoid

Steroid adalah triterpena yang kerangka dasarnya sistem cincin siklopentana perhidrofenantrena. Steroida dianggap sebagai senyawa satwa tetapi makin banyak senyawa steroida yang ditemukan dalam jaringan tumbuhan (fitosterol). Tiga senyawa yang biasa disebut fitosterol terdapat pada hampir setiap tumbuhan tinggi yaitu: sitosterol, stigmasterol dan kampesterol (Harborne, 1987). Beberapa senyawa steroid barangkali mempunyai peran dalam struktur membrane, sebagai hormon kelamin dan feromon, pada tumbuhan steroid berperan sebagai pelindung dari serangga (Robinson, 1995).

Triterpenoid adalah senyawa yang kerangka karbonnya berasal dari enam satuan isoprene dan secara biosintesis diturunkan dari hidrokarbon C-30 asiklik yaitu skualena. Triterpenoid dapat dibagi atas empat golongan yaitu triterpenoid sebenarnya, steroid, saponin dan glikosida jantung. Triterpena atau steroid yang terutama terdapat sebagai glikosida. Triterpenoid merupakan senyawa yang berbentuk kristal, bertitik leleh tinggi dan optik aktif, yang umumnya sukar dicirikan karena tidak mempunyai kereaktifan kimia. Sebagian besar senyawa ini memberikan warna hijau-biru dengan pereaksi Liebermann-Burchard (asam asetat anhidrida-asam sulfat pekat (Harborne, 1987).

Berbagai macam aktivitas fisiologis yang menarik ditunjukkan oleh beberapa triterpenoid, dan senyawa ini merupakan komponen aktif dalam tumbuhan yang telah digunakan untuk penyakit tertentu termasuk diabetes, gangguan menstruasi, gangguan kulit, kerusakan hati, malaria, antifungi,

2.2 Ekstraksi

Ekstraksi adalah suatu proses pemisahan kandungan senyawa kimia dari jaringan tumbuhan maupun hewan. Sebelum ekstraksi dilakukan biasanya bahan-bahan dikeringkan terlebih dahulu kemudian dihaluskan pada derajat kehalusan tertentu (Harborne, 1987).

Menurut Depkes RI (2000), beberapa metode ekstraksi yang sering digunakan dalam berbagai penelitian antara lain yaitu:

a. Cara Dingin 1. Maserasi

Maserasi adalah proses penyarian simplisia dengan cara perendaman menggunakan pelarut dengan sesekali pengadukan pada temperatur kamar. Maserasi yang dilakukan pengadukan secara terus-menerus disebut maserasi kinetik sedangkan yang dilakukan pengulangan penambahan pelarut setelah penyaringan terhadap maserat pertama dan seterusnya disebut remaserasi. 2. Perkolasi

Perkolasi adalah proses penyarian simplisia dengan pelarut yang selalu baru sampai terjadi penyarian sempurna yang umumnya dilakukan pada temperatur kamar. Proses perkolasi terdiri dari tahap pelembaban bahan, tahap perendaman antara dan tahap perkolasi sebenarnya (penetesan/ penampungan ekstrak).

b. Cara Panas 1. Refluks

Refluks adalah proses penyarian simplisia dengan pemanasan menggunakan alat pada temperatur titik didihnya, selama waktu tertentu dan jumlah pelarut terbatas yang relatif konstan dengan adanya pendingin balik.

2. Digesti

Digesti adalah proses penyarian dengan pengadukan kontinu pda temperatur lebih tinggi daripada temperatur ruangan, yaitu secara umum dilakukan pada temperatur 40-50ºC.

3. Sokletasi

Sokletasi adalah proses penyarian berulang-ulang dengan pelarut tertentu yang mudah menguap, dilakukan dengan menggunakan soklet sehingga menjadi ekstraksi kontinu dengan pelarut relatif konstan dengan adanya pendingin balik.

4. Infundasi

Infundasi adalah proses penyarian dengan pemanasan menggunakan pelarut air pada temperatur 90ºC selama 15 menit.

5. Dekoktasi

Dekoktasi adalah proses penyarian dengan pemanasan menggunakan pelarut air pada temperatur 90ºC selama 30 menit.

2.2.1 Ekstraksi cair-cair

Ekstraksi cair-cair merupakan suatu teknik yang mana suatu larutan (biasanya dalam air) dibuat bersentuhan dengan pelarut kedua (biasanya pelarut organik), yang pada hakikatnya tidak tercampurkan, pada proses ini terjadi pemindahan satu atau lebih zat terlarut (solute) kedalam pelarut yang kedua. Pemisahan yang dilakukan bersifat sederhana, bersih, cepat, dan mudah, yang dapat dilakukan dengan cara mengocok-ngocok dalam sebuah corong pisah selama beberapa menit (Bassett, dkk., 1994).

mudah mengalami ionisasi dan senyawa polar lainnya akan tertahan dalam fase air Pelarut organik yang dipilih untuk ekstraksi pelarut ialah pelarut yang mempunyai kelarutan yang rendah dalam air (>10%), dapat menguap sehingga memudahkan penghilangan pelarut organik setelah dilakukan ekstraksi, dan mempunyai kemurnian yang tinggi untuk meminimalkan adanya kontaminasi sampel (Rohman, 2007)

2.3 Radikal Bebas

Radikal bebas adalah setiap molekul yang mengandung satu atau lebih elektron yang tidak berpasangan. Radikal bebas memiliki reaktivitas yang sangat tinggi, hal ini ditunjukkan dengan sifatnya yang segera menarik electron yang disekelilingnya (Kosasih, dkk., 2004).

Senyawa ini sangat reaktif dan dengan mudah menjurus ke reaksi yang tidak terkontrol menghasilkan ikatan silang (cross-link) pada DNA, protein, lipida atau kerusakan oksidatif pada gugus fungsional yang penting pada biomolekul.. Radikal bebas juga terlibat dan berperan dalam patologi dari berbagai penyakit degeneratif, yakni kanker, aterosklerosis, rematik, jantung koroner, katarak dan penyakit degenerasi saraf seperti parkinson (Silalahi, 2006).

Golongan senyawa oksigen reaktif antara lain adalah hidroksil (OH-), superoksida (O2-), peroksidal (RO2-), asam hipoklorit (HOCl) dan hidrogen

peroksida (H2O2) (Ionita, 2005).

Menurut Kumalaningsih (2006), pembentukan radikal bebas melalui 3 tahapan reaksi, yaitu:

a. tahap inisiasi: tahap awal terbentuknya radikal bebas.

b. tahap propagasi: tahap perpanjangan radikal berantai, dimana terjadi reaksi antara suatu radikal dengan senyawa lain dan menghasilkan radikal baru.

c. tahap terminasi: terjadinya pengikatan suatu radikal bebas dengan radikal bebas yang lain sehingga membentuk senyawa non-radikal yang biasanya kurang reaktif dari radikal induknya.

2.4 Antioksidan

Antioksidan atau reduktor berfungsi untuk mencegah terjadinya oksidasi atau menetralkan senyawa yang telah teroksidasi dengan cara menyumbangkan hidrogen dan atau elektron (Silalahi, 2006).

Atas dasar fungsinya antioksidan dapat dibedakan menjadi 5 (lima) sebagai berikut.

a. Antioksidan primer

Antioksidan ini berfungsi untuk mencegah terbentuknya radikal bebas yang baru karena dapat merubah radikal bebas yang ada menjadi molekul yang berkurang dampak negatifnya. Seperti SOD, glutation peroksidase dan katalase. Antioksidan primer sering disebut antioksidan enzimatis.

b. Antioksidan sekunder

Antioksidan sekunder merupakan senyawa yang berfungsi menangkap radikal bebas serta mencegah terjadinya reaksi berantai sehingga tidak terjadi kerusakan yang lebih besar. Contoh yang populer, antioksidan sekunder adalah vitamin E, vitamin C dan β-karoten yang dapat diperoleh dari buah-buahan. c. Antioksidan tersier

Antioksidan tersier merupakan senyawa yang memperbaiki sel-sel dan jaringan yang rusak karena serangan radikal bebas, biasanya yang termasuk kelompok ini adalah jenis enzim misalnya metionin sulfoksidan reduktase yang dapat

d. Oxygen scavenger

Antioksidan yang termasuk oxygen scavenger mengikat oksigen sehingga tidak mendukung reaksi oksidasi, misalnya vitamin C.

e. Chelators atau sequesstrants

Mengikat logam yang mampu mengkatalisis reaksi oksidasi misalnya asam sitrat dan asam amino (Kumalaningsih, 2006).

2.4.1 Antioksidan alami

Sayur-sayuran dan buah-buahan kaya akan zat gizi (vitamin, mineral, serat pangan) serta berbagai kelompok zat bioaktif lain yang disebut zat fitokimia. Zat bioaktif ini bekerja secara sinergis, meliputi mekanisme enzim detoksifikasi, peningkatan sistem kekebalan, pengurangan agregasi platelet, pengaturan sintesis kolesterol dan metabolisme hormon, penurunan tekanan darah, antioksidan, antibakteri serta efek antivirus (Silalahi, 2006).

2.4.2 SOD (Superoxide dismutase)

Superoksida dismutase (SOD) merupakan salah satu enzim antioksidan penting yang berasal dari tubuh sendiri, berefek sangat kuat dan merupakan pertahanan tubuh garis pertama dalam mengatasi stres oksidatif (Rajkumar, dkk., 2008). SOD merupakan antioksidan pencegah yang dapat menghambat, sebelum anion superoksida menyebabkan kerusakan. Cara kerja SOD adalah dengan mengkonversi anion superoksida (O2-) menjadi komponen lain yang kurang

berbahaya, yaitu hidrogen peroksida (H2O2) yang selanjutnya dengan bantuan

katalase diubah menjadi air (H2O) (Behndig, dkk., 1998).

Terdapat beberapa jenis enzim SOD (Superoxide Dismutase), seperti Copper-Zinc-SOD (Cu-Zn-SOD) yang terdapat di dalam sitosol terutama di lisosom dan nukleus, manganese-SOD (Mn-SOD) yang terdapat di dalam

mitokondria, ekstraseluler SOD (EC-SOD) dan besi-SOD (Fe-SOD) yang hanya ditemukan pada tumbuhan (Putra, 2014).

Enzim SOD terdapat dalam semua organisme aerob dan sebagian besar berada dalam tingkat subseluler (intraseluler). Organisme aerob selalu membutuhkan oksigen untuk hidupnya, namun dalam setiap aktivitasnya dapat menimbulkan senyawa oksigen reaktif atau ROS. SOD merupakan enzim antioksidan pencegah, yang merupakan suatu antioksidan metalloenzim. SOD berefek sangat kuat dan merupakan pertahanan tubuh pertama dalam menghadapi serangan radikal bebas. SOD adalah enzim antioksidan intraseluler utama yang dapat digunakan untuk menetralisir aktivitas O2- (Putra, 2014).

2.5 Penentuan Aktivitas Antioksidan Dengan Metode DPPH

Pada tahun 1922, Goldschmidt dan Renn menemukan senyawa berwarna ungu radikal bebas stabil DPPH, yang sekarang digunakan sebagai reagen kolorimetri untuk proses redoks. DPPH sangat berguna dalam berbagai penyelidikan seperti inhibisi atau radikal polimerisasi kimia, penentuan sifat antioksidan amina, fenol atau senyawa alami (vitamin, ekstrak tumbuh-tumbuhan, obat obat-obatan) dan untuk menghambat reaksi homolitik. DPPH berwarna sangat ungu seperti KMnO4 dan bentuk tereduksinya yaitu 1,1-difenil-2-picrylhydrazine (DPPH-H) yang berwarna oranye-kuning. DPPH tidak larut dalam air (Ionita, 2005).

2.5.1 DPPH

DPPH merupakan singkatan umum untuk senyawa kimia organik yaitu

dengan rumus molekul C18H12N5O6, larut dalam air. Penyimpanan dalam wadah

tertutup baik pada suhu -20°C (Molyneux, 2004).

Gambar 2.1 Rumus Bangun DPPH (Molyneux, 2004)

DPPH merupakan radikal bebas yang stabil pada suhu kamar. Prinsip metode pemerangkapan radikal bebas DPPH, yaitu elektron ganjil pada molekul DPPH memberikan serapan maksimum pada panjang gelombang 516 nm. Interaksi antioksidan dengan DPPH baik secara transfer elektron atau radikal hidrogen pada DPPH akan menetralkan karakter radikal bebas dari DPPH (Molyneux, 2004). Warna ungu larutan DPPH akan berubah menjadi kuning lemah apabila elektron ganjil tersebut berpasangan dengan atom hidrogen yang dari senyawa antioksidan (Prakash, 2001). Reaksi radikal bebas DPPH dengan antioksidan dapat dilihat pada gambar 2.2 berikut:

2.5.2 Pelarut

Metode DPPH akan bekerja dengan baik menggunakan pelarut metanol atau etanol karena kedua pelarut ini tidak mempengaruhi dalam reaksi antara sampel uji sebagai antioksidan dengan DPPH sebagai radikal bebas (Molyneux, 2004).

2.5.3 Pengukuran panjang gelombang

Panjang gelombang yang digunakan untuk analisis kuantitatif adalah panjang gelombang yang mempunyai absorbansi maksimal (Gandjar dan Abdul, 2007). Panjang gelombang maksimum (λmaks) yang digunakan dalam pengukuran

sampel uji pada metode pemerangkapan radikal bebas DPPH sangat bervariasi. Menurut beberapa literatur, panjang gelombang maksimum untuk DPPH antara lain 515-520 nm (Molyneux, 2004).

2.5.4 Waktu pengukuran

Waktu pengukuran atau waktu kerja (operating time) bertujuan untuk mengetahui waktu yang tepat untuk melakukan pengukuran yakni saat sampel dalam kondisi yang stabil. Waktu pengukuran yang digunakan dalam beberapa penelitian sangatlah bervariasi, yaitu 1-240 menit. Waktu pengukuran yang paling banyak direkomendasikan menurut literatur adalah 60 menit (Rosidah, dkk., 2008; Molyneux, 2004; Marinova dan Batchvarov, 2011).

2.6 Spektrofotometri UV-Visibel

Ahli kimia telah lama menggunakan warna sebagai bantuan dalam mengenali zat-zat kimia. Spektrofotometri dapat dianggap sebagai perluasan pemeriksaan visual, yaitu dengan menggunakan alat untuk mengukur absorpsi

pengukuran kualitatif dari suatu zat dengan ketelitian yang lebih besar (Day dan Underwood, 1986).

Spektrofotometer pada dasarnya terdiri atas sumber sinar monokromator, tempat sel untuk zat yang diperiksa, detektor, penguat arus dan alat ukur atau pencatat (Depkes RI, 1979). Spektrofotometer yang sering digunakan dalam dunia industri farmasi salah satu adalah spektrofotometer ultraviolet dengan panjang gelombang 200 - 400 nm dan visibel (cahaya tampak) dengan panjang gelombang 400-800 nm (Rohman, 2007).

BAB I PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Indonesia sebagai negara kepulauan yang sebagian besar wilayahnya merupakan perairan laut, memiliki keanekaragaman jenis biota laut yang sangat tinggi. Pemanfaatan biota laut saat ini, bukan hanya sekadar untuk konsumtif, tetapi mengarah kepada penelitian penemuan obat-obatan berbahan dasar biota laut. Salah satu biota laut yang berpotensi sebagai bahan baku obat-obatan adalah teripang. Teripang termasuk dalam filum Echinodermata merupakan salah satu biota laut yang banyak ditemukan di perairan Indonesia (Conand dan Byrne, 1993).

Ekstrak teripang laut sejak dahulu digunakan secara tradisional oleh masyarakat Melayu untuk mengobati luka. Berbagai penelitian berkenaan khasiat dari ekstrak teripang laut menyebabkan penggunaannya semakin meluas untuk mengatasi penyakit-penyakit lain, seperti artritis, ekzema dan hipertensi. Cairan selom pada teripang laut mengandung senyawa yang berfungsi sebagai anti-inflamasi dan antioksidan (Ain, 2010).

Teripang memiliki kandungan Cell Growth factor yang mampu merangsang regenerasi sel dan jaringan yang rusak. Kandungan protein dan asam lemak esensial yang sangat tinggi dapat memperkuat sel untuk mengeluarkan antibodi. Kandungan kolagen yang tinggi menjadikan teripang sebagai imunomodulator (Widodo, 2013).

gingseng, ganoderma, dan tumbuhan herbal terkenal lainnya. Senyawa ini diketahui berfungsi sebagai anti kanker dan anti inflamasi. SOD adalah senyawa yang bersifat antioksidan, yang diharapkan menjadi alternatif sumber antioksidan alami bagi manusia dimasa mendatang (Ghufran dan Kordi, 2010).

Teknologi pengolahan teripang saat ini telah menghasilkan produk ekstrak Teripang (Gold-G Sea Cucumber Jelly) yang berasal dari jenis teripang Golden Stichopus variegates. Beberapa penelitian mengenai teripang yang menyebutkan bahwa teripang dapat meningkatkan daya tahan tubuh, mengurangi rasa sakit dan gatal pada permukaan kulit, menurunkan kadar gula, menurunkan kolesterol, menurunkan tekanan darah, melancarkan peredaran darah, menyembuhkan maag, serta dapat menyembuhkan asma kronis. Teripang juga dapat digunakan sebagai bahan perawatan kecantikan dan penyembuhan luka bagi para ibu bersalin, karena mengandung protein dan kolagen teripang yang tinggi (Anonim, 2014).

Penelitian lain juga dilakukan Rasyid (2012) terhadap teripang Stichopus hermanii, melaporkan bahwa teripang mengandung golongan senyawa steroid dan saponin yang memiliki aktivitas antioksidan kuat dengan nilai IC50 65,08 mcg/ml

serta memiliki aktivitas antibakteri terhadap Staphylococcus aureus, Vibrio eltor

dan Bacillus subtilis.

Antioksidan merupakan senyawa yang dapat menghambat reaksi oksidasi dengan mengikat radikal bebas dan molekul yang sangat reaktif sehingga kerusakan sel dapat dihambat. Antioksidan dapat berupa enzim (misalnya superoksida dismutase atau SOD, katalase dan glutation peroksidase), vitamin

(misalnya vitamin E, C, A dan β-karoten), dan senyawa lain (misalnya flavonoid,

Radikal bebas adalah atom atau senyawa yang kehilangan pasangan elektronnya. Sebagai contoh, molekul O2 yang bila terjadi reaksi dalam tubuh

yang berlebihan maka akan terbentuk oksigen yang tidak berpasangan dan menjadi radikal bebas (Kumalaningsih, 2006).

Penelitian ini menggunakan metode pemerangkapan radikal bebas DPPH untuk pengujian antioksidan karena metode ini dikenal lebih cepat, praktis, akurat dan murah. Metode ini umum digunakan untuk mengukur kemampuan senyawa yang berperan sebagai peredam radikal bebas atau pendonor hidrogen, dan mengevaluasi aktivitas antioksidan dari makanan. Metode DPPH juga dapat digunakan untuk sampel berwujud padat dan cair serta tidak spesifik terhadap komponen antioksidan tertentu (Prakash, 2001).

Salah satu jenis teripang yang terdapat di Pulo Kapuk (Pantai Cemara) Lhoknga, Aceh Besar adalah teripang Holothuria atra Jaeger yang ditemukan dikawasan terumbu karang dengan kedalaman 5-10 m dari permukaan laut. Berdasarkan uraian di atas, penulis melakukan penelitian meliputi karakterisasi simplisia, pemeriksaan golongan senyawa dan pengujian aktivitas antioksidan dari ekstrak etanol, fraksi n-heksan, fraksi etilasetat, dan fraksi air teripang Holothuria atra Jaeger yang diperoleh dari perairan Pulo Kapuk (Pantai Cemara), Lhoknga, Aceh Besar.

1.2 Perumusan Masalah

Berdasarkan uraian diatas, maka permasalahan dalam penelitian ini dapat dirumuskan sebagai berikut :

b. apakah karakteristik simplisia teripang Holothuria atra Jaeger memenuhi persyaratan standar mutu teripang kering menurut Keputusan Menteri Pertanian No. 701/Kpts/TP>830/10/1987 ?

c. apakah ekstrak etanol, fraksi n-heksan, fraksi etilasetat, dan fraksi air teripang

Holothuria atra Jaeger memiliki aktivitas antioksidan?

1.3 Hipotesis

Berdasarkan rumusan masalah di atas, maka hipotesis dari penelitian ini sebagai berikut:

a. golongan senyawa kimia yang terdapat dalam teripang Holothuria atra Jaeger adalah glikosida, saponin dan steroid/triterpenoid.

b. karakteristik simplisia hewan teripang Holothuria atra Jaeger memenuhi persyaratan standar mutu teripang kering menurut Keputusan Menteri Pertanian No. 701/Kpts/TP>830/10/1987.

c. ekstrak etanol, fraksi n-heksan, fraksi etil asetat, dan fraksi air teripang

Holothuria atra Jaeger memiliki aktivitas antioksidan.

1.4 Tujuan

Adapun tujuan dari penelitian ini adalah:

1. untuk mengetahui golongan senyawa kimia yang terdapat teripang Holothuria atra Jaeger.

2. untuk mengetahui karakteristik dariserbuk simplisia teripang Holothuria atra

Jaeger.

3. untuk mengetahui aktivitas antioksidan ekstrak etanol, fraksi n-heksan, fraksi etilasetat, dan fraksi air teripang Holothuria atra Jaeger.

1.5 Manfaat

Manfaat dari penelitian ini adalah dapat memberikan informasi golongan senyawa kimia yang terkandung dalam teripang Holothuria atra Jaeger dan informasi aktivitas antioksidan ekstrak etanol, fraksi n-heksan, fraksi etilasetat, dan fraksi air dari teripang Holothuria atra Jaeger.

KARAKTERISASI SIMPLISIA DAN UJI AKTIVITAS

ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL SERTA

FRAKSI n-HEKSAN DAN ETILASETAT

TERIPANG Holothuria atra Jaeger

SKRIPSI

OLEH:

MELVA MARTUA HUTAHURUK

NIM 111501045

PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SUMATERA UTARA

MEDAN

KARAKTERISASI SIMPLISIA DAN UJI AKTIVITAS

ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL SERTA

FRAKSI n-HEKSAN DAN ETILASETAT

TERIPANG Holothuria atra Jaeger

SKRIPSI

Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi

Universitas Sumatera Utara

OLEH:

MELVA MARTUA HUTAHURUK

NIM 111501045

PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI

FAKULTAS FARMASI

PENGESAHAN SKRIPSI

KARAKTERISASI SIMPLISIA DAN UJI AKTIVITAS

ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL SERTA

FRAKSI n-HEKSAN DAN ETILASETAT

TERIPANG Holothuria atra Jaeger

OLEH:

MELVA MARTUA HUTAHURUK NIM 111501045

Dipertahankan dihadapan Panitia Penguji Skripsi Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara

Pada Tanggal: 24 November 2015 Disetujui Oleh:

Pembimbing I, Panitia Penguji,

Dra. Suwarti Aris, M.Si., Apt. Dr. Marline Nainggolan, M.Si., Apt. NIP 195107231982032001 NIP 195709091985112001

Dra. Suwarti Aris, M.Si., Apt.

Pembimbing II, NIP 195107231982032001

Dra. Aswita Hafni Lubis, M.Si., Apt Dr. Poppy Anjelisa Z. Hasibuan, M.Si., Apt

NIP 195304031983032001 NIP 197506102005012003

Dra. Herawaty Ginting, M.Si., Apt NIP 195112231980032002 Medan, 18 Januari 2016

Fakultas Farmasi

Universitas Sumatera Utara Pejabat Dekan,

Dr. Masfria, M.S., Apt NIP 195707231986012001

KATA PENGANTAR

Puji syukur penulis ucapkan kepada Tuhan Yang Maha Esa yang telah memberikan karunia yang berlimpah sehingga penulis dapat menyelesaikan

skripsi ini dengan judul “Karakterisasi Simplisia Dan Uji Aktivitas Antioksidan

Ekstrak Etanol Serta Fraksi n-Heksan Dan Etilasetat Teripang Holothuria atra

Jaeger”. Skripsi ini diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar

Sarjana Farmasi di Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara.

Pada kesempatan ini dengan segala kerendahan hati penulis mengucapkan terima kasih kepada Ibu Dr. Masfria, M.S., Apt., selaku Pejabat Dekan Fakultas Farmasi USU Medan, Pembantu Dekan I Fakultas Farmasi USU Medan serta jajarannya, yang telah menyediakan fasilitas kepada penulis selama perkuliahan di Fakultas Farmasi. Penulis juga mengucapkan terima kasih kepada Ibu Dra. Suwarti Aris, M.Si., Apt., dan Alm. Ibu Dra. Aswita Hafni Lubis, M.Si., Apt., serta Ibu Prof. Dr. Julia Reveny M.Si., Apt., selaku pembimbing. Ibu Dr. Marline Nainggolan, M.Si., Apt., Ibu Dr. Poppy Anjelisa Z. Hasibuan, M.Si., Apt., dan Ibu Dra. Herawaty Ginting, M.Si., Apt., selaku dosen penguji yang telah memberikan kritik, saran dan arahan kepada penulis dalam menyempurnakan skripsi ini. Ibu Dr. Anayanti Arianto, M.Si., Apt., selaku penasehat akademik yang selalu memberikan bimbingan kepada penulis selama masa perkuliahan serta Bapak dan Ibu staf pengajar Fakultas Farmasi USU Medan yang telah mendidik selama perkuliahan.

Penulis juga mempersembahkan rasa terima kasih yang tiada terhingga kepada orangtua tercinta, Drs. Gapa Kantor Hutauruk dan Rumiati Sijabat, S.Pd.,

Hutauruk, atas limpahan kasih sayang, doa dan dukungan yang tidak ternilai apapun. Penulis tak lupa mengucapkan terimakasih kepada teman-teman yang telah banyak membantu selama penulisan skripsi ini.

Penulis telah berusaha semaksimal mungkin untuk menyelesaikan penulisan skripsi ini, namun demikian penulis menyadari sepenuhnya bahwa skripsi ini masih jauh dari kesempurnaan, oleh karena itu penulis menerima kritik dan saran demi kesempurnaan skripsi ini. Penulis berharap semoga skripsi ini dapat memberikan manfaat bagi kita semua.

Medan, 24 November 2015 Penulis

Melva Martua Hutahuruk NIM 111501045

KARAKTERISASI SIMPLISIA DAN UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL SERTA FRAKSI n- HEKSAN DAN ETILASETAT

TERIPANG Holothuria atra Jaeger Abstrak

Teripang atau timun laut termasuk dalam filum Echinodermata merupakan salah satu biota laut yang banyak ditemukan di perairan Indonesia. Teripang mengandung protein dan kolagen yang sangat tinggi serta mengandung saponin dan SOD (Super Oxide dismutase) sehingga sangat berpotensi untuk dikembangkan dalam bidang pengobatan. Tujuan penelitian ini adalah untuk menentukan karakteristik simplisia, golongan senyawa dan aktivitas antioksidan dari ekstrak etanol, fraksi n-heksan, etilasetat dan air teripang Holothuria atra

Jaeger.

Ekstraksi dilakukan secara perkolasi menggunakan pelarut etanol, fraksinasi dilakukan dengan metode ekstraksi cair-cair dengan pelarut n-heksan dan etilasetat. Pengujian aktivitas antioksidan dari ekstrak etanol dan fraksi teripang menggunakan metode pemerangkapan radikal bebas DPPH ( 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazil) diukur pada panjang gelombang 516 nm setelah 60 menit pada suhu kamar. Pemeriksaan karakteristik simplisia meliputi penetapan kadar air, penetapan kadar sari larut air, penetapan kadar sari larut etanol, penetapan kadar abu total, dan penetapan kadar abu tidak larut asam. Pemeriksaan golongan senyawa terhadap serbuk simplisia hewan meliputi pemeriksaan senyawa glikosida, saponin dan steroid/triterpenoid.

Hasil pemeriksaan karakteristik serbuk simplisia hewan teripang diperoleh kadar air 9,30% kadar sari larut air 38,96% kadar sari larut etanol 29,34%, kadar abu total 27,75%, kadar abu yang tidak larut dalam asam 4,05%. Hasil pemeriksaan golongan senyawa menunjukkan serbuk simplisia mengandung senyawa saponin, glikosida dan steroid/triterpenoid. Hasil uji aktivitas antioksidan teripang dalam memerangkap radikal bebas DPPH diperoleh nilai Inhibitory Concentration (IC50) ekstrak etanol,fraksi n-heksan, fraksi etilasetat dan fraksi air

secara berturut-turut sebesar 225,49 mcg/ml; 1192,33 mcg/ml; 127,33 mcg/ml; dan 101,13 mcg/ml. Hasil menunjukkan aktivitas antioksidan ekstrak etanol dan fraksi n-heksan tergolong dalam kategori sangat lemah, sedangkan fraksi etilasetat dan fraksi air tergolong dalam kategori sedang.

SIMPLEX CHARACTERIZATION AND ANTIOXIDANT ACTIVITY ASSAY OF ETHANOL EXTRACTS WITH n-HEXANE AND

ETHYLACETAT FRACTIONS OF SEA CUCUMBER Holothuria atra Jaeger

Absract

Sea cucumbers are marine invertebrates of the phylum of Echinodermata

that much found in Indonesian. Sea cucumber’s contain are high protein and

collagen, and mineral, mucopolysacarides, glucasaninoglycans, amino acid and chondroitin. Sea cucumber also contain saponin glycosides and Super oxide dismutase activity thus has great potential to developed in the field of medicine. The purpose of this observed is to establish simplex characterization and antioxidant activity assay of ethanol extracts with n-hexane and ethylacetat fractions of sea cucumber (Holothuria atra Jaeger)

Extraction was accomplished by percolation method with ethanol as solvent, fractionated Solvent Extraction Method with n-hexane and ethylacetat. The activity antioxidant assay of ethanol extracts ethanol and the fractions of sea cucumber used DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazil) free radical scavenging method at wave lenght 516 nm after 60 minutes at room temperature. Simplex characterization including water content, water-soluble extract content, ethanol-soluble extract content, total ash content, and acid-inethanol-soluble ash content. Compound screening of simplex powder including determination glycoside, saponin, and steroid/triterpenoid.

The result obtained from simplex characterization of sea cucumber respectively are water content 9.30 %, water-soluble extract content ethanol-soluble extract content, total ash content, and acid-inethanol-soluble ash content 4.05%. The result of compound screening, it contain glycoside, saponin and steroid/triterpenoid. The result of antioxidant activity scavenging DPPH free radical obtained Inhibitory Concentration (IC50) value of ethanol extract, n

-hexane, ethylacetat and water fraction respectively 225.49 mcg/ml; 1192.33 mcg/ml; 127.33 mcg/ml; dan 101.13 mcg/ml. The result indicated antoxidan activity of ethanol extract and n-hexane is very low, meanwhile ethylacetat and water fractions is intermediate.

DAFTAR ISI

Halaman

JUDUL ... i

HALAMAN JUDUL ... ii

PENGESAHAN SKRIPSI ... iii

KATA PENGANTAR ... iv

ABSTRAK ... vi

ABSTRACT ... vii

DAFTAR ISI ... viii

DAFTAR TABEL ... xii

DAFTAR GAMBAR ... xiii

DAFTAR LAMPIRAN ... xiv

BAB I PENDAHULUAN ... 1

1.1 Latar belakang ... 1

1.2 Perumusan masalah ... 3

1.3 Hipotesis ... 4

1.4 Tujuan penelitian ... 4

1.5 Manfaat penelitian ... 5

BAB II TINJAUAN PUSTAKA ... 6

2.1 Uraian hewan ... 6

2.1.1 Sistematika hewan ... 6

2.1.2 Sinonim ... 6

2.1.5 Reproduksi ... 7

2.1.6 Kandungan dan manfaat ... 8

2.1.7 Uraian kimia ... 9

2.2 Ekstraksi ... 11

2.2.1 Ekstraksi cair-cair ... 12

2.3 Radikal Bebas ... 13

2.4 Antioksidan ... 14

2.4.1 Antioksidan alami ... 15

2.4.2 SOD (Superoxide dismutase) ... 16

2.5 Penentuan Aktivitas Antioksidan Dengan Metode DPPH 16

2.5.1 DPPH ... 17

2.5.2 Pelarut ... 18

2.5.3 Pengukuran panjang gelombang ... 18

2.5.4 Waktu pengukuran ... 19

2.6 Spektrofotometri UV-Visibel ... 19

BAB III METODE PENELITIAN ... 20

3.1 Alat ... 20

3.2 Bahan ... 20

3.3 Penyiapan Hewan ... 21

3.3.1 Pengumpulan hewan ... 21

3.3.2 Identifikasi hewan ... 21

3.3.3 Pengolahan hewan ... 21

3.4 Pembuatan Pereaksi ... 21

3.4.1 Pereaksi Liebermann-Burchard ... 21

2.1.5 Reproduksi ... 7

2.1.6 Kandungan dan manfaat ... 8

2.1.7 Uraian kimia ... 9

2.2 Ekstraksi ... 11

2.2.1 Ekstraksi cair-cair ... 12

2.3 Radikal Bebas ... 13

2.4 Antioksidan ... 14

2.4.1 Antioksidan alami ... 15

2.4.2 SOD (Superoxide dismutase) ... 16

2.5 Penentuan Aktivitas Antioksidan Dengan Metode DPPH 16

2.5.1 DPPH ... 17

2.5.2 Pelarut ... 18

2.5.3 Pengukuran panjang gelombang ... 18

2.5.4 Waktu pengukuran ... 19

2.6 Spektrofotometri UV-Visibel ... 19

BAB III METODE PENELITIAN ... 20

3.1 Alat ... 20

3.2 Bahan ... 20

3.3 Penyiapan Hewan ... 21

3.3.1 Pengumpulan hewan ... 21

3.3.2 Identifikasi hewan ... 21

3.3.3 Pengolahan hewan ... 21

3.4 Pembuatan Pereaksi ... 21

3.4.1 Pereaksi Liebermann-Burchard ... 21

x

3.4.3 Pereaksi asam klorida 2 N ... 22

3.4.4 Pereaksi asam sulfat 2 N... 22

3.4.5 Pereaksi kloralhidrat ... 22

3.4.6 Pereaksi molish ... 22

3.4.7 Larutan pereaksi DPPH 0,5mM ... 22

3.5 Pemeriksaan Karakterisasi Simplisia Hewan ... 22

3.5.1 Pemeriksaan makroskopik ... 23

3.5.2 Pemeriksaan mikroskopik ... 23

3.5.3 Penetapan kadar air ... 23

3.5.4 Penetapan kadar sari air ... 24

3.5.5 Penetapan kadar sari larut etanol ... 24

3.5.6 Penetapan kadar abu total ... 25

3.5.7 Penetapan kadar abu tidak larut asam ... 25

3.6 Pemeriksaan Golongan Senyawa Kimia ... 25

3.6.1 Pemeriksaan glikosida ... 26

3.6.2 Pemeriksaan saponin ... 26

3.6.3 Pemeriksaan steroida/triterpenoida ... 26

3.7 Pembuatan Ekstrak Etanol Teripang ... 26

3.8 Pembuatan Fraksi Teripang ... 27

3.9 Pengujian Kemampuan Antioksidan dengan Spektrofotometer Visibel ... 28

3.9.1 Prinsip metode pemerangkapan radikal bebas DPPH 28

3.9.2 Pembuatan larutan blanko ... 28

3.9.3 Penentuan panjang gelombang serapan maksimum 28

3.9.4 Pembuatan larutan induk ... 28

3.9.5 Pembuatan larutan uji ... 29

3.9.6 Penentuan persen peredaman ... 29

3.9.7 Penentuan nilai IC50 ... 29

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ... 31

4.1 Hasil Identifikasi Hewan ... 31

4.2 Hasil Karakterisasi Hewan ... 31

4.2.1 Hasil pemeriksaan makroskopik ... 31

4.2.2 Hasil pemeriksaan mikroskopik ... 31

4.2.3 Hasil pemeriksaan karakteristik ... 31

4.3 Hasil Pemeriksaan Golongan Senyawa ... 33

4.4 Hasil Analisis Aktivitas Antioksidan ... 33

4.4.1 Hasil penentuan panjang gelombang serapan maksimum DPPH ... 34

4.4.2 Hasil analisis aktivitas antioksidan sampel uji ... 34

4.4.3 Hasil analisis nilai IC50 ... 37

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ... 40

5.1 Kesimpulan ... 40

5.2 Saran ... ... 40

DAFTAR PUSTAKA ... 41

xii

DAFTAR TABEL

Tabel Halaman

4.1 Hasil pemeriksaan karakteristik simplisia hewan teripang ... 32 4.2 Hasil pemeriksaan senyawa simplisia, ekstrak etanol dan fraksi

teripang ... 33 4.3 Data persen pemerangkapan DPPH oleh ekstrak etanol dan

fraksi hewan teripang ... 35 4.4 Hasil persamaan regresi linier IC50 dari ekstrak etanol dan

fraksi hewan teripang ... 37 4.5 Nilai IC50 dari ekstrak etanol dan fraksi hewan teripang ... 38

DAFTAR GAMBAR

Gambar Halaman

2.1 Rumus Bangun DPPH ... 17 2.2 Reaksi radikal bebas DPPH dengan antioksidan ... 18

4.1 Kurva serapan maksimum DPPH 40 ppm dalam

metanolmenggunakan spektrofotometer UV/Vis ... 34 4.2 Grafik hasil uji aktivitas antioksidan ekstrak etanol, fraksi

xiv

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran Halaman

1 Hasil identifikasi teripang ... 44

2 Bagan penelitian ... 45

3 Gambar teripang dan serbuk simplisia hewan teripang ... 46

4 Gambar mikroskopik teripang ... 48

5 Perhitungan pemeriksaan karakteristik serbuk simplisia hewan teripang ... 49

6 Bagan pembuatan ekstrak etanol hewan teripang ... 53

7 Bagan pembuatan fraksi n-heksan dan fraksi etilasetat teripang ... 54

8 Gambar Spektrofotometer Visible (Shimadzu UV-1800)... 55

9 Hasil uji aktivitas antioksidan ekstrak etanol dan fraksi teripang ... 56

10 Perhitungan nilai IC50 ... 62