28
3.9 Pengujian Kemampuan Antioksidan Dengan Spektrofotometer Visibel 3.9.1 Prinsip metode penangkapan radikal bebas DPPH
Kemampuan sampel uji dalam meredam proses oksidasi DPPH 1,1- diphenyl-2-picryl-hidrazyl
sebagai radikal bebas dalam larutan metanol sehingga terjadi peredaman warna ungu DPPH dengan nilai IC
50
konsentrasi sampel uji yang mampu meredam radikal bebas sebesar 50 digunakan sebagai parameter
untuk menentukan aktivitas antioksidan sampel uji tersebut.
3.9.2 Pembuatan larutan blanko
Larutan DPPH 0,5 mM konsentrasi 200 mcgml dipipet sebanyak 5 ml, kemudian dimasukkan ke dalam labu tentukur 25 ml, dicukupkan volumenya
dengan metanol sampai garis tanda konsentrasi 40 mcgml.
3.9.3 Penentuan panjang gelombang serapan maksimum
Larutan DPPH konsentrasi 40 mcgml dihomogenkan dan diukur serapannya pada panjang gelombang 400-800 nm.
3.9.4 Pembuatan larutan induk
Sebanyak 25 mg sampel uji ditimbang kemudian dilarutkan dalam labu tentukur 25 ml dengan metanol lalu volumenya dicukupkan dengan metanol
sampai garis tanda konsentrasi 1000 mcgml.
3.9.5 Pembuatan larutan uji
Konsentrasi ditetapkan setelah dilakukan beberapa orientasi. Larutan induk dipipet sebanyak 1 ml; 1,5 ml; 2 ml; 2,5 ml kemudian dimasukkan ke dalam labu
tentukur 25 ml untuk mendapatkan konsentrasi 40 mcgml, 60 mcgml, 80 mcgml, 100 mcgml, kemudian dalam masing-masing labu tentukur
ditambahkan 5 ml larutan DPPH 0,5 mM konsentrasi 40 mcgml lalu volume dicukupkan dengan metanol sampai garis tanda, didiamkan ditempat gelap, lalu
Universitas Sumatera Utara
29 diukur serapannya pada spektrofotometer uv-visibel pada panjang gelombang 516
nm. Gambar spektrofotometer UVVis dapat dilihat pada Lampiran 8, halaman 55.
3.9.6 Penentuan persen peredaman
Kemampuan antioksidan diukur sebagai penurunan absorbansi larutan DPPH peredaman warna ungu DPPH akibatnya adanya penambahan larutan uji.
Nilai absorbansi larutan DPPH sebelum dan sesudah penambahan larutan uji tersebut dihitung sebagai persen peredaman.
Peredaman = 100
x kontrol
A sampel
A -
kontrol A
Keterangan : A
kontrol
= Absorbansi tidak mengandung sampel A
sampel
= Absorbansi mengandung sampel Hasil perhitungan persen perdaman radikal bebas DPPH dapat dilihat pada
Lampiran 9, halaman 56-61.
3.9.7 Penentuan nilai IC
