direndam dalam larutan bayclin 5 selama 7 menit, lalu dibilas air steril empat kali.
7. Daun direndam dalam larutan HgCl
2
0.01 selama 10 menit, lalu dibilas dengan air steril empat kali.
8. Daun direndam dalam larutan HgCl
2
0.01 selama 5 menit, lalu dibilas dengan air steril satu kali. Kemudian daun direndam dalam larutan bayclin
10 selama 10 menit, lalu dibilas dengan air steril satu kali. Terakhir, daun direndam dalam larutan bayclin 10 selama 5 menit, lalu dibilas air
steril empat kali. 9. Daun direndam dalam larutan HgCl
2
0.01 selama 5 menit, lalu dibilas dengan air steril satu kali. Kemudian daun direndam dalam larutan bayclin
10 selama 7 menit, lalu dibilas dengan air steril satu kali. Terakhir, daun direndam dalam larutan bayclin 10 selama 5 menit, lalu dibilas air steril
empat kali. 10. Daun direndam dalam larutan HgCl
2
0.01 selama 1 menit, lalu dibilas dengan air steril satu kali. Kemudian daun direndam dalam larutan bayclin
10 selama 7 menit, lalu dibilas dengan air steril satu kali. Terakhir, daun direndam dalam larutan bayclin 10 selama 2 menit, lalu dibilas air steril
empat kali. 11. Daun direndam dalam larutan HgCl
2
0.01 selama 1 menit, lalu dibilas dengan air steril tiga kali. Kemudian daun direndam dalam larutan bayclin
10 selama 7 menit, lalu dibilas dengan air steril tiga kali. Terakhir, daun direndam dalam larutan bayclin 10 selama 5 menit, lalu dibilas air steril
tiga kali. Dari ke sebelas perlakuan sterilisasi tersebut, beberapa perlakuan
sterilisasi dilakukan dalam waktu yang tidak serentak atau terpisah. Hal ini berkaitan dengan proses penanaman yang tidak mungkin dilakukan semuanya
dalam satu waktu.
3.4.2 Pembuatan Media
Media yang digunakan dalam penelitian ini adalah media MS lengkap dan 12MS Murashige dan Skoog dengan ZPT dan tanpa ZPT. Langkah awal adalah
dengan pembuatan larutan induk stok yang terdiri dari larutan induk makro,
larutan induk mikro, larutan vitamin dan larutan induk Fe-EDTA lampiran 2. Pembuatan larutan induk stok bertujuan untuk efisiensi waktu dan kemudahan
pekerjan. Adapun tahapan dalam pembuatan media MS lengkap dalam satu liter air
adalah sebagai berikut : 1. Menyiapkan air 500 ml dalam gelas piala volume 1000 ml.
2. Menambahkan larutan stock yang sudah disiapkan ke dalam gelas piala. Terdiri dari larutan A sebanyak 20 ml, larutan B sebanyak 20 ml, larutan
C sebanyak 5 ml, larutan D sebanyak 5 ml, larutan E sebanyak 5 ml, larutan F sebanyak 5 ml, vitamin sebanyak 5 ml, dan Myo-inositol
sebanyak 10 ml. Sedangkan untuk media 12MS, terdiri dari larutan A sebanyak 10 ml,
larutan B sebanyak 10 ml, larutan C sebanyak 2.5 ml, larutan D sebanyak 2.5 ml, larutan E sebanyak 2.5 ml, larutan F sebanyak 2.5 ml, vitamin
sebanyak 2.5 ml, dan Myo-inositol sebanyak 5 ml. Media 12MS hanya berbeda dalam jumlah larutan stock yang dimasukan.
3. Menimbang dan memasukkan 30 gram gula pasir. 4. Menambahkan volume larutan mendekati 1000 ml. Kemudian mengukur
pH pada kisaran 5.8-6.0, bila terlalu asam ditambah NaOH dan bila terlalu basa ditambah HCl.
5. Menimbang dan memasukankan agar-agar sebanyak 7 gram, lalu dipanaskan sambil diaduk dengan stirer.
6. Menuangkan media ke dalam botol sebanyak ± 20 ml, kemudian tutup dengan tutup botol plastik.
7. Tahapan terakhir adalah mensterilkan media dalam autoklaf dengan suhu 121
C, tekanan 17.5-20.0 psi selama 20 menit. Lalu, media didinginkan dan disimpan dalam ruangan inkubasi. Media baru bisa dipakai minimal
setelah 3 hari untuk mengetahui ada tidaknya kontaminansi. Skema pembuatan media MS dapat dilihat di lampiran 3.
8. Untuk media yang menggunakan zat pengatur tumbuh sebelum dituangkan ke dalam botol, media ditambahkan 2.4-D sebanyak 2 mgl
dan NAA sebanyak 0.5 mgl.
3.4.3 Penanaman
