produksi gas CO
2
dari glukosa Kacem et al., 2005. Pengujian lebih lanjut dilakukan berdasarkan Holt et al. 1994.
3.4.1 Pewarnaan Gram
Preparat ulas dibuat pada gelas benda, difiksasi di atas api bunsen. Preparat ditetesi dengan larutan kristal ungu, didiamkan selama 60 detik dan dicuci dengan air
mengalir dan dikeringkan. Preparat ditetesi dengan larutan iodin dan didiamkan selama 2 menit, dicuci dengan air mengalir dan dikeringkan. Preparat ditetesi dengan
aseton alkohol dan kemudian dengan cepat dicuci dengan air mengalir. Tahap akhir preparat ditetesi dengan safranin dan didiamkan selama 30 detik, dicuci dengan air
mengalir dan dikeringkan. Preparat kemudian diamati dengan mikroskop. Uji gram positif jika sel berwarna ungu dan negatif jika sel berwarna merah Hadioetomo,
1985.
3.4.2 Uji Katalase
Isolat dari agar miring diambil 1 ose, kemudian dioleskan pada gelas benda yang telah diberi alkohol. Gelas benda ditetesi dengan 2-3 tetes larutan H
2
O
2
3 dan diamati terbentuknya gelembung gas pada preparat. Jika terdapat gelembung gas,
berarti uji katalase positif Lay, 1994.
Universitas Sumatera Utara
3.4.3 Uji Motilitas
Isolat dari agar miring diambil 1 ose kemudian diinokulasikan pada media SIM semisolid dengan cara menusukkannya hingga setengah media pada tabung
reaksi. Media SIM yang berisi isolat BAL kemudian diinkubasi selama 48 jam pada suhu 30°C
untuk kemudian diamati jejak pergerakan bakteri. Uji motilitas positif jika pertumbuhan koloni menyebar luas pada agar Cappuccino dan Sherman, 1996.
3.4.4 Uji Produksi Gas CO
2
Jarum ose yang berisi inokulum kultur BAL murni diinokulasikan pada tabung reaksi yang berisi media glukosa broth dengan merah fenol pada tabung
reaksi diberi tabung durham. Media yang berisi kultur BAL kemudian diinkubasikan selama 48 jam dengan suhu 37°C
dan diamati terjadinya perubahan warna serta ada tidaknya gelembung pada tabung durham. Merah fenol merupakan indikator pH. Pada
pH netral 7.0 akan berwarna merah dan berubah menjadi kuning pada pH sedikit asam yang mengindikasikan bahwa asam menyebabkan terjadinya perubahan warna.
Uji positif jika terjadi perubahan warna merah fenol menjadi kuning, kadang diikuti dengan pembentukan gas Cappuccino dan Sherman, 1996.
3.5 Analisis Gula Reduksi
