Pembuatan Preparat Jaringan Pewarnaan Jaringan Dengan Hematoksilin-Eosin

masih dalam keadaan terbius. Hewan di bedah dan di ambil organ uterus dan ovarium.

3.3.2. Pembuatan Preparat Jaringan

Jaringan yang digunakan pada penelitian ini adalah uterus dan ovarium. Penelitian ini menggunakan uji imunohistokimia. Uji imunohistokimia dilakukan untuk mendeteksi ekspresi protein c-myc di irisan jaringan uterus dan ovarium. Pada jaringan-jaringan tersebut diduga terdapat protein c-myc. Preparat irisan dibuat mengikuti metode parafin. Jaringan uterus dan ovarium diisolasi dari tubuh mencit selanjutnya difiksasi di dalam formalin 10 selama 3 hari. Setelah itu jaringan dicuci berkali-kali dalam alkohol 70 . Dehidrasi dengan cara direndam berturut-turut di dalam alkohol 80, 90, 96 dan alkohol absolut masing-masing selama 60 menit. Selanjutnya alkohol dilepas dari jaringan dengan cara merendam jaringan di dalam toluol selama 24 jam. Infiltrasi parafin dilakukan pada jaringan di dalam oven dengan cara memindahkan organ berturut-turut dari campuran xilol dan parafin dengan perbandingan 3:1 parafin I, 1:1 parafin II, dan 1:3 parafin III, selama 30-60 menit. kemudian dimasukkan kedalam parafin murni. Pengirisan dilakukan dengan menggunakan mikrotom, irisan dibuat dengan ketebalan 6 µm. Sayatan dimasukkan kedalam air hangat agar pita sayatan mengembang. Kemudian pita sayatan ditempelkan pada object glass yang telah dilapisi poly-L-lysin, kelebihan air dibuang dan sayatan pada object glass dipanaskan. Setelah pita sayatan menempel dengan baik, preparat disimpan di tempat tertutup dan siap digunakan untuk proses selanjutnya Suntoro, 1983.

3.3.3 Pewarnaan Jaringan Dengan Hematoksilin-Eosin

Preparat jaringan yang akan diwarnai terlebih dahulu dilakukan deparafinasi dengan xilol sebanyak 3 x masing-masing selama 5 menit, kelebihan xilol diisap dengan kertas filter melalui tepi-tepi objek glas, kemudian preparat didehidrasi di dalam larutan-larutan alkohol bertingkat dengan konsentrasi menurun 100, 95, 80, 70, 50, 30 selama 1 menit dan dibilas dengan aquades 2x1 menit. Jaringan diwarnai dengan memasukkan ke dalam larutan hematoksilin selama 3-7 detik kemudian preparat jaringan dialiri air mengalir air ledeng selama 10 menit dan dicuci aquades sebentar. Pewarnaan hematoksilin telah selesai dan akan dilanjutkan ke pewarnaan eosin 0,5 dalam alkohol 70, selanjutnya setelah jaringan dicuci aquadest, dimasukkan di dalam larutan-larutan alkohol bertingkat dengan konsentrasi meningkat 30, 50, 80, 70, 80, 95, 100 selama 1 menit kemudian dimasukkan ke dalam larutan eosin 0,5 dalam alkohol 70 selama 1-3 menit. Preparat jaringan selanjutnya dimasukkan ke dalam larutan-larutan alkohol bertingkat dengan konsentrasi meningkat 70, 80, 96, 100, selama 1 menit selanjutnya dimasukkan ke dalam xilol sebanyak 3 x masing- masing selama 5 menit, lalu ditutup dengan cover glass menggunakan media mounting kanada balsam, jaringan diamati di bawah mikroskop Suntoro, 1983.

3.3.4 Metode Imunohistokimia