Alat dan Bahan .1 Alat Hewan Percobaan Pengumpulan dan Pengolahan Sampel .1 Pengumpulan Bahan

21

BAB III METODE PENELITIAN

Penelitian ini menggunakan metode eksperimental dengan tahapan penelitian meliputi pengumpulan dan pengolahan tumbuhan, pembuatan ekstrak akar tuba, skrining fitokimia dari simplisia akar tuba, karakteristik simplisia, penyiapan hewan percobaan, pengamatan gejala toksisitas, kematian dan penentuan LC 50 .Data dianalisis dengan uji One Sample T-test untuk melihat perbedaan nyata antar perlakuan. Analisis statistik ini menggunakan program SPSS Statistical Product and Service Solution versi 17 dengan taraf kepercayaan 95. Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Fitokimia dan Laboratorium Farmakologi Fakultas Farmasi, Universitas Sumatera Utara. 3.1 Alat dan Bahan 3.1.1 Alat Alat alat yang digunakan dalam penelitian ini meliputi alat-alat gelas laboratorium, perkolator, blender miyako, rotary evaporator, akuarium yang terbuat dari kaca berukuran 50 cm x 20 cm x 30 cm sebanyak 3 buah, dan ukuran 35 cm x 20 cm x 25 cm sebanyak 4 buah, aerator amara sebanyak 4 buah, selang,spot plat, gelas ukurpyrex, spuit 1 cc terumo, spuit 1 ml terumo,tabung reaksi pyrex,spatula, kertas perkamen, kertas saring, kaki tiga, infus set GEA, pipet tetes, penjepit tabung, cawan penguap pyrex, spatula, aluminium foil, kain flannel dan neraca digital. Universitas Sumatera Utara 22

3.1.2 Bahan

Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini meliputi akar tuba[Derris ellipticaRoxb.], etanol 96, akuades, asam klorida 2 N, pereaksi Mayer raksa II klorida dan kalium iodida, pereaksi Dragendrof bismuth,asam nitrat dan kalium iodida, pereaksi Bourchardat iodium dan kalium iodida, serbuk Zn, asam klorida pekat, amil alkohol, asam sulfat pekat, pereaksi Molish ∝- naftol dan asam nitrat, pereaksi besi III klorida, n-heksana, pereaksi Liebermann Burchat asam asetat anhidrat dan asam sulfat pekat dan kloralhidrat.

3.2 Hewan Percobaan

Hewan percobaan yang digunakan dalam penelitian adalah Ikan Nila sebanyak 330 ekor, mempunyaiukuran panjang tubuh p= 7,2 cm; l= 2,5 cmdengan umursekitar1-1,5 bulan. Sebelum pengujian, hewan percobaan diaklimatisasi terlebih dahulu selama 14 hari dengan tujuan menyeragamkan makanan dan hidupnya dengan kondisi yang serba sama serta menghilangkan stress akibat transportasi sehingga dianggap memenuhi syarat penelitian. 3.3 Pengumpulan dan Pengolahan Sampel 3.3.1 Pengumpulan Bahan Pengambilan bahan tumbuhan akar dilakukan secara purposive yaitu tanpa membandingkan tumbuhan yang sama dari daerah lain. Sampel yang diambil yaitu akar tuba yang masih segar dari daerah Binjai, Sumatera Utara. 3.3.2 Identifikasi Tumbuhan Identifikasi tumbuhan dilakukan diHerbarium Medanense Universitas Sumatera Utara. Universitas Sumatera Utara 23

3.3.3 Pembuatan Simplisia Akar Tuba

Akar tuba yang telah dikumpulkan dibersihkan dari pengotoran, dicuci dibawah air mengalir beberapa kali hingga bersih, kemudian ditiriskan lalu disebarkan diatas perkamen sampai merata hingga airnya terserap, setelah itu ditimbang sebagai berat basah.Kemudian dikeringkan selama beberapa haridan terlindung dari sinar matahari langsung.Setelah itu ditimbang berat keringnya.Kemudian sampel yang sudah kering dihaluskan dengan menggunakan blender,lalu timbang lagi beratnya, selanjutnya dimasukkan dalam wadah plastik tertutup, sebelum dipakai disimpan ditempat kering yang terlindung dari cahaya.

3.4 Pemeriksaan Karakteristik Simplisia