Kloramfenikol Jenis Penelitian Tempat dan Waktu Penelitian Alat Bahan Pengambilan Sampel

60 Lampiran 6. Spektrum Serapan Derivat Pertama Baku Kloramfenikol dan Baku Prednisolon

a. Kloramfenikol

nm. 200.00 250.00 300.00 350.00 400.00 Ab s. 0.0500 0.0000 -0.0480 Universitas Sumatera Utara 61 Lampiran 6. Lanjutan nm. 200.00 250.00 300.00 350.00 400.00 A bs. 0.0500 0.0000 -0.0480 Universitas Sumatera Utara 62 Lampiran 6. Lanjutan b. Prednisolon n m. 2 0 0 .0 0 2 5 0 .0 0 3 0 0 .0 0 3 5 0 .0 0 4 0 0 .0 0 Ab s. 0 .0 2 0 0 0 .0 1 0 0 0 .0 0 0 0 -0 .0 1 0 0 -0 .0 2 0 0 -0 .0 2 4 2 Universitas Sumatera Utara 63 Lampiran 6. Lanjutan n m. 2 0 0 .0 0 2 5 0 .0 0 3 0 0 .0 0 3 5 0 .0 0 4 0 0 .0 0 Ab s. 0 .0 2 0 0 0 .0 1 0 0 0 .0 0 0 0 -0 .0 1 0 0 -0 .0 2 0 0 -0 .0 2 4 2 Universitas Sumatera Utara 64 Lampiran 7. Spektrum Serapan Derivat Kedua Baku Kloramfenikol dan Baku Prednisolon

a. Kloramfenikol

nm. 200.00 250.00 300.00 350.00 400.00 Ab s. 0.0100 0.0050 0.0000 -0.0050 -0.0100 Universitas Sumatera Utara 65 Lampiran 7. Lanjutan n m. 2 0 0 .0 0 2 5 0 .0 0 3 0 0 .0 0 3 5 0 .0 0 4 0 0 .0 0 Ab s. 0 .0 1 0 0 0 .0 0 5 0 0 .0 0 0 0 -0 .0 0 5 0 -0 .0 1 0 0 Universitas Sumatera Utara 66 Lampiran 7. Lanjutan b. Prednisolon nm. 200.00 250.00 300.00 350.00 400.00 A bs. 0.0050 0.0000 -0.0030 Universitas Sumatera Utara 67 Lampiran 7. Lanjutan nm. 200.00 250.00 300.00 350.00 400.00 A bs. 0.0050 0.0000 -0.0030 Universitas Sumatera Utara 68 Lampiran 8. Spektrum Serapan Panjang Gelombang Analisis Kloramfenikol dan Prednisolon nm. 200.00 250.00 300.00 350.00 400.00 A bs. 0.0100 0.0000 -0.0100 -0.0200 Universitas Sumatera Utara 69 Lampiran 9. Data Kalibrasi Kloramfenikol BPFI, Persamaan Regresi dan Koefisien Korelasi Kalibrasi serapan derivat kedua kloramfenikol pada panjang gelombang 227,60nm No. Konsentrasi μgmL X Absorbansi Y 1. 0,0000 0,00000 2. 12,0000 0,00240 3. 14,0000 0,00285 4. 16,0000 0,00311 5. 18,0000 0,00346 6. 20,0000 0,00390 Perhitungan persamaan garis regresi No. X Y XY X 2` Y 2 1. 0,00000 0,00000 0,00000 0,00000 0,0000000000 2. 12,00000 0,00240 0,02880 144,00000 0,00000576 3. 14,00000 0,00285 0,03990 196,00000 0,00000812 4. 16,00000 0,00311 0,04976 256,00000 0,00000967 5. 18,00000 0,00346 0,06228 324,00000 0,00001197 6. 20,00000 0,00390 0,07800 400,00000 0,00001521 ΣX = 80 =13,33 ΣY = 0,01572 = 0,00262 ΣXY = 0,25874 ΣY 2 = 1320 Σ Y 2 = 0,00005074 Maka, persamaan garis regresinya adalah Universitas Sumatera Utara 70 Lampiran 9 . Lanjutan Perhitungan Koefisien Korelasi = 0,9990 Maka, koefisien korelasi dari data kalibrasi serapan derivat kedua kloramfenikol pada panjang gelombang 227,60 nm adalah 0,9990. Universitas Sumatera Utara 71 Lampiran 10. Data Kalibrasi Prednisolon BPFI, Persamaan Regresi dan Koefisien Korelasi Kalibrasi serapan derivat kedua prednisolon pada panjang gelombang 292,80 nm No. Konsentrasi μgmL X Absorbansi Y 1. 0,00000 0,00000 2. 8,00000 0,00023 3. 10,00000 0,00027 4. 12,00000 0,00032 5. 14,00000 0,00038 6. 16,00000 0,00044 Perhitungan Persamaan Garis Regresi No. X Y XY ` X 2 Y 2 1. 0,00000 0,00000 0,00000 0,00000 0,00000 2. 8,00000 0,00023 0,00184 64,00000 5,0.10 -8 3. 10,00000 0,00027 0,00270 100,00000 7,0.10 -8 4. 12,00000 0,00032 0,00384 144,00000 10.10 -8 5. 14,00000 0,00038 0,00532 196,00000 14.10 -8 6. 16,00000 0,00044 0,00704 256,00000 19.10 -8 ΣX = 60 =10,00 ΣY = 0,00164 = 0,00027 ΣXY = 0,02074 ΣX 2 = 760 ΣY 2 = 57.10 -8 Maka persamaan garis regresinya adalah Universitas Sumatera Utara 72 Lampiran 10. Lanjutan Perhitungan Koefisien Korelasi Maka, koefisien korelasi dari data kalibrasi serapan derivat kedua Prednisolon pada panjang gelombang 292,80 nm adalah 0,9977. Universitas Sumatera Utara 73 Lampiran 11. Perhitungan Batas Deteksi Limit of Detection, LOD dan Batas Kuantitasi Limit of Quantitation, LOQ Kloramfenikol Persamaan garis regresi kloramfenikol adalah No. X Y Yi Y-Yi 10 -5 Y-Yi 2 10 -10 1 0,00000 0,00000 0,00009 -9 81 2 12,00000 0,00240 0,00237 3 9 3 14,00000 0,00285 0,00275 10 100 4 16,00000 0,00311 0,00313 -2 4 5 18,00000 0,00346 0,00351 -5 25 6 20,00000 0,00390 0,00389 1 1 ΣY-Yi 2 220 7,416.10 -5 1,1709 μgmL 3,9032 μgmL Universitas Sumatera Utara 74 Lampiran 12. Perhitungan Batas Deteksi Limit of Detection, LOD dan Batas Kuantitasi Limit of Quantitation, LOQ Prednisolon Persamaan garis regresi prednisolon adalah Y = 0,00003X - 0,00003 No. X Y Yi Y-Yi 10 -5 Y-Yi 2 10 -10 1 0,00000 0,00000 -0,00003 3 9 2 8,00000 0,00023 0,00021 2 4 3 10,00000 0,00027 0,00027 4 12,00000 0,00032 0,00033 -1 1 5 14,00000 0,00038 0.00039 -1 1 6 16,00000 0,00044 0,00045 -1 1 Σ Y-Yi 2 16 2,0.10 -5 2 μgmL 6,6667 μgmL Universitas Sumatera Utara 75 Lampiran 13. Spektrum Serapan Derivat Kedua Krim nm. 200.00 250.00 300.00 350.00 400.00 A b s. 0.0100 0.0000 -0.0100 -0.0200 Universitas Sumatera Utara 76 Lampiran 13. Lanjutan nm. 200.00 250.00 300.00 350.00 400.00 A b s. 0.0100 0.0000 -0.0100 -0.0200 Universitas Sumatera Utara 77 Lampiran 14. Hasil Analisis Kadar Kloramfenikol dan Prednisolon dalam sediaan Krim 1. Kadar kloramfenikol dalam sediaan krim Tiap gram mengandung 20 mg kloramfenikol dalam satu tube Nama Sediaan Penimba- ngan g Setara mg Absorbansi pa da λ = 227,6 nm Konsentra- si teoritis μgmL Konsentra- si kloramfeni kol μgmL Kadar Kadar mg KRIM X 0,9982 19,964 0,00313 15,971 16,000 100,17 20,03 1,0253 20,506 0,00319 16,405 16,316 99,45 19,89 0,9980 19,960 0,00304 15,968 15,526 97,22 19,44 0,9981 19,962 0,00307 15,970 15,684 98,20 19,64 1,0350 20,700 0,00319 16,560 16,316 98,52 19,70 0,9983 19,966 0,00313 15,973 16,000 100,16 20,03 KRIM Y 1,0253 20,506 0,00320 16,405 16,368 99,77 19,95 1,0253 20,506 0,00314 16,405 16,053 97,84 19,57 0,9980 19,960 0,00307 15,968 15,684 98,21 19,64 0,9981 19,962 0,00320 15,970 16,368 102,48 20,50 0,9740 19,480 0,00309 15,584 15,789 101,31 20,26 1,0560 21,120 0,00320 16,896 16,368 96,87 19,37 Universitas Sumatera Utara 78 Lampiran 14. Lanjutan 2. Kadar prednisolon dalam sediaan krim Tiap gram mengandung 2,5 mg prednisolon dalam satu tube Nama Sediaan Penimba- ngan g Setara mg Absorbansi pa da λ = 292,8 nm Konsentra- si teoritis μgmL Konsentrasi Prednisolon μgmL Kadar Kadar mg KRIM X 0,9982 2,496 0,00021 7,996 8,000 99,67 2,49 1,0253 2,563 0,00022 8,051 8,333 103,13 2,58 0,9980 2,495 0,00022 7,996 8,333 103,83 2,60 0,9981 2,495 0,00021 7,996 8,000 99,68 2,49 1,0350 2,588 0,00022 8,070 8,333 102,88 2,57 0,9983 2,496 0,00021 7,997 8,000 99,67 2,49 KRIM Y 1,0253 2,563 0,00022 8,051 8,333 103,13 2,58 1,0253 2,563 0,00022 8,051 8,333 103,13 2,58 0,9980 2,495 0,00021 7,996 8,000 99,68 2,49 0,9981 2,495 0,00022 7,996 8,333 103,83 2,60 0,9740 2,435 0,00022 7,948 7,667 96,10 2,40 1,0560 2,640 0,00020 8,112 8,667 106,44 2,66 Universitas Sumatera Utara 79 Lampiran 15. Contoh Perhitungan Kadar Kloramfenikol dan Prednisolon dalam Sediaan Krim i. Data penimbangan tube krim X dan krim Y Berat 10 tube krim X = 122,395 g Berat 10 tube kosong = 21,539 g Berat krim X = 122,395 g – 21,539 g = 100,855 g Berat 10 tube krim Y = 127,325 g Berat 10 tube kosong = 27,368 g Berat krim Y = 127,325 g – 27,368 g = 99,958 g ii. Contoh perhitungan kadar untuk kloramfenikol dan prednisolon iia. Perhitungan kadar untuk kloramfenikol Sediaan krim yang digunakan krim X dan krim Y yang tiap gram mengandung kloramfenikol 20 mg dan prednisolon 2,5 mg Ditimbang krim setara dengan 20 mg kloramfenikol, maka jumlah krim yang ditimbang adalah; x 1 x 1 g = 1 g Dilarutkan 1 g krim dalam etanol absolut dalam labu tentukur 50 mL sampai garis tanda. Larutan kemudian dihomogenkan, disaring, lebih kurang 10 mL filtrat pertama dibuang. Filtrat selanjutnya ditampung larutan A. Konsentrasi kloramfenikol larutan A x 1000 μg = 400 μgmL Kemudian dari larutan A, dipipet 2,0 mL dan dimasukkan kedalam labu tentukur 50 mL dan diencerkan dengan etanol absolut hingga garis tanda larutan B. Universitas Sumatera Utara 80 Lampiran 15. Lanjutan Konsentrasi kloramfenikol larutan B = = 16 μgmL iib. Perhitungan kadar untuk prednisolon Dihitung kesetaraan prednisolon yang terkandung dalam 1g krim. x 2 x 2,5 mg = 2,5 mg Konsentrasi prednisolon larutan A = x 1000 μg = 50 μgmL Kemudian dari larutan A, dipipet 2,0 mL dan dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 mL dan diencerkan dengan etanol absolut hingga garis tanda larutan B. Konsentrasi prednisolon larutan B = = 2 μgmL Konsentrasi analisis untuk prednisolon 8 μgmL, sedangkan konsentrasi dalam larutan B adalah 2,0 μgmL. Maka untuk mendapatkan konsentrasi analisis dilakukan penambahan baku prednisolon untuk metode adisi. Penambahan baku dilakukan dengan pembuatan LIB konsentrasi 50 μgmL. Konsentrasi yang dibutuhkan dari adisi = 8 μgmL - 2 μgmL = 6,0 μgmL Volume prednisolon dari LIB = = 6 mL Maka volume analisis untuk prednisolon adalah = Volume prednisolon larutan B + Volume prednisolon dari LIB = 2 mL+ 6 mL = 8 mL Universitas Sumatera Utara 81 Lampiran 15. Lanjutan Jadi konsentrasi Prednisolon = = 8 μgmL iii. Contoh perhitungan kadar kloramfenikol dan prednisolon dari krim X: iiia. Perhitungan kadar untuk kloramfenikol Berat krim salep yang ditimbang adalah 0,9982 g, maka terlebih dahulu dihitung kesetaraan kloramfenikol. Kesetaraan kloramfenikol = x 20 mg = 19,964 mg Konsentrasi kloramfenikol = x 1000 μg = 399,28 μgmL Konsentrasi teoritis kloramfenikol = x 2 mL = 15,971 μgmL Absorbansi kloramfenikol pada derivat kedua pada panjang gelombang 227,60 nm adalah 0,00313 Kadar kloramfenikol dihitung dari persamaan regresi pada panjang gelombang analisis kloramfenikol Y = 0,00019X + 0,00009 Konsentrasi kloramfenikol: Y = 0,00019X + 0,00009 0,00313 = 0,00019X + 0,00009 0,00313 - 0,00009 = 0,00019X X = X = 16,0 μgmL Kadar kloramfenikol = x 99,99 = 100,17 Universitas Sumatera Utara 82 Lampiran 15. Lanjutan iiib. Perhitungan kadar untuk prednisolon Untuk prednisolon, berat krim salep yang ditimbang adalah 0,9982 g, maka terlebih dahulu dihitung kesetaraan prednisolon. Kesetaraan prednisolon = x 2,5 mg = 2,495 mg Konsentrasi prednisolon = x 1000 μg = 49,91 μgmL Konsentrasi teoritis prednisolon = x 8 mL= 7,996 μgmL Absorbansi prednisolon pada derivat kedua pada panjang gelombang 292,80 nm adalah 0,00021. Kadar prednisolon dihitung dari persamaan regresi pada panjang gelombang analisis prednisolon Y = 0,00003X - 0,00003 Konsentrasi prednisolon : Y = 0,00003X - 0,00003 0,00021 = 0,00003X - 0,00003 0,00021+0,00003 = 0,00003X X = X = 8,0 μgmL Kadar prednisolon = x 99,63 = 99,67 Universitas Sumatera Utara 83 Lampiran 16. Perhitungan Statistik Kloramfenikol pada krim X SD = = = = 1,1784 Pada interval kepercayaan 95 dengan nilai α = 0,05, dk = n-1= 5, maka t α2,dk = 2,5706 Data diterima jika t hitung t tabel t hitung 1 = = 2,5289 t hitung 2 = = 1,0324 t hitung 3 = = 3,6029 ditolak No. X Kadar 2 1 100,17 1,22 1,4884 2 99,45 0,50 0,2401 3 97,22 -1,73 2,9929 4 98,20 -0,75 0,5625 5 98,52 -0,43 0,1849 6 100,16 1,21 1,4641 98,95 Σ 2 = 6,9329 Universitas Sumatera Utara 84 Lampiran 16. Lanjutan t hitung 4 = = 1,5659 t hitung 5 = = 0,9007 t hitung 6 = = 2,5081 Karena data ke-3 ditolak maka dilakukan perhitungan tanpa menyertakan data ke-3. Universitas Sumatera Utara 85 Lampiran 16. Lanjutan SD = = = = 0,9134 Pada interval kepercayaan 95 dengan nilai α = 0,05, dk = n-1= 4, maka t α2,dk = 2,7764 Data diterima jika t hitung t tabel t hitung 1 = = 2,1299 t hitung 2 = = 0,3672 t hitung 3 = = 2,6929 t hitung 4 = = 1,9095 t hitung 5 = = 2,1054 No. X Kadar 2 1 100,17 0,87 0,7569 2 99,45 0,15 0,0225 3 98,20 -1,10 1,2100 4 98,52 -0,78 0,6084 5 100,16 0,86 0,7396 99,30 Σ 2 = 3,3374 Universitas Sumatera Utara 86 Lampiran 16. Lanjutan Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa semua t hitung t tabel, maka semua data tersebut diterima. Kadar kloramfenikol dalam krim X Tiap gram: μ = ± t α2, dk x SD √n = 99,30 ± 2,7764 x 0,9134 √5 = 99,30 ± 1,13 = 99,30 + 1,13 = 99,30 – 1,13 Kandungan kloramfenikol dalam krim X tiap gram: = 99,30 ± 1,13 x 20 mg = x 20 mg = 19,63 mg = x 20 mg = 20,09 mg Universitas Sumatera Utara 87 Lampiran 17. Perhitungan Statistik Prednisolon pada Krim X SD = = = = 1,9998 Pada interval kepercayaan 95 dengan nilai α = 0,05, dk = n-1= 5, maka t α2,dk = 2,5706 Data diterima jika t hitung t tabel t hitung 1 = = t hitung 2 = = 2,0206 t hitung 3 = = 2,8778 ditolak No. X Kadar 2 1 99,67 -1,81 3,2761 2 103,13 1,65 2,7225 3 103,83 2,35 5,5225 4 99,68 -1,80 3,2400 5 102,88 1,40 1,960 6 99,67 -1,81 3,2761 101,48 Σ 2 = 19,9972 Universitas Sumatera Utara 88 Lampiran 17. Lanjutan t hitung 4 = = 2,2043 t hitung 5 = = 1,7144 t hitung 6 = = 2,2165 Karena data ke-3 ditolak maka dilakukan perhitungan tanpa menyertakan data ke-3 Universitas Sumatera Utara 89 Lampiran 17. Lanjutan SD = = = = 1,8269 Pada interval kepercayaan 95 dengan nilai α = 0,05, dk = n-1= 4, maka t α2,dk = 2,7764 Data diterima jika t hitung t tabel t hitung 1 = = 1,6352 t hitung 2 = = 2,5997 t hitung 3 = = 1,6230 t hitung 4 = = 2,2937 t hitung 5 = = 1,6352 No. X Kadar 2 1 99,67 1,34 1,7956 2 103,13 2,12 4,4494 3 99,68 -1,33 1,7689 4 102,88 1,87 3,497 5 99,67 -1,34 1,7956 101,01 Σ 2 = 13,3514 Universitas Sumatera Utara 90 Lampiran 17. Lanjutan Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa semua t hitung t tabel, maka semua data tersebut diterima. Kadar prednisolon dalam krim X tiap gram : μ = ± t α2, dk x SD √n = 101,01 ± 2,7764 x 1,8269 √5 = 101,01 ± 2,27 = 101,01 + 2,27 = 101,01 – 2,27 Kandungan prednisolon dalam krim X tiap gram: = 101,01 ± 2,27 x 2,5 mg = x 2,5 mg = 2,47 mg = x 2,5 mg = 2,58 mg Universitas Sumatera Utara 91 Lampiran 18. Perhitungan Statistik Kloramfenikol pada krim Y SD = = = = 2,1735 Pada interval kepercayaan 95 dengan nilai α = 0,05, dk = n-1= 5, maka t α2,dk = 2,5706 Data diterima jika t hitung t tabel t hitung 1 = = 0,3944 t hitung 2 = = 1,769 t hitung 3 = = 1,3521 t hitung 4 = = 3,4591ditolak No. X Kadar 2 1 99,77 0,35 0,1225 2 97,84 -1,58 2,4964 3 98,21 -1,21 1,4400 4 102,49 3,07 9,4249 5 101,31 1,89 3,5721 6 96,87 -2,55 6,5025 99,42 Σ 2 = 23,6204 Universitas Sumatera Utara 92 Lampiran 18. Lanjutan t hitung 5 = = 2,1296 t hitung 6 = = 2,8732 ditolak Karena data ke-4 dan data ke-6 ditolak maka dilakukan perhitungan tanpa menyertakan data ke-4 dan data ke-6 Universitas Sumatera Utara 93 Lampiran 18. Lanjutan SD = = = = 1,589 Pada interval kepercayaan 95 dengan nilai α = 0,05, dk = n-1= 3, maka t α2,dk = 3,1824 Data diterima jika t hitung t tabel t hitung 1 = = 0,6136 t hitung 2 = = 1,8156 t hitung 3 = = 1,3499 t hitung 4 = = 2,5519 Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa semua t hitung t tabel, maka semua data tersebut diterima. No. X Kadar 2 1 99,77 0,49 0,2401 2 97,84 -1,44 2,0736 3 98,21 -1,07 1,1449 4 101,31 2,03 4,1209 99,28 Σ 2 = 7,5795 Universitas Sumatera Utara 94 Lampiran 18. Lanjutan Kadar kloramfenikol dalam krim Y tiap gram : μ = ± t α2, dk x SD √n = 99,28 ± 3,1824 x 1,589 √4 = 99,28 ± 2,06 = 99,28 + 2,06 = 99,28 – 2,06 Kandungan kloramfenikol dalam krim Y tiap gram: = 99,28 ± 2,06 x 20 mg = x 20 mg = 19,44 mg = x 20 mg = 20,27 mg Universitas Sumatera Utara 95 Lampiran 19. Perhitungan Statistik Prednisolon pada krim Y SD = = = = 3,6275 Pada interval kepercayaan 95 dengan nilai α = 0,05, dk = n-1= 5, maka t α2,dk = 2,5706 Data diterima jika t hitung t tabel t hitung 1 = = 0,7291 t hitung 2 = = 0,7291 t hitung 3 = = 1,6000 No. X Kadar 1 103,13 1,08 1,1664 2 103,13 1,08 1,1664 3 99,68 -2,37 5,6169 4 103,83 1,78 3,1684 5 96,10 -5,95 35,4025 6 106,44 4,39 19,2721 102,05 Σ = 65,7927 Universitas Sumatera Utara 96 Lampiran 19. Lanjutan t hitung 4 = = 1,2017 t hitung 5 = = 4,0170 ditolak t hitung 6 = = 2,9638 ditolak Karena data ke-5 dan data ke-6 ditolak maka dilakukan perhitungan tanpa menyertakan data ke-5 dan data ke-6 Universitas Sumatera Utara 97 Lampiran 19. Lanjutan SD = = = = 1,8709 Pada interval kepercayaan 95 dengan nilai α = 0,05, dk = n-1= 3, maka t α2,dk = 3,1824 Data diterima jika t hitung t tabel t hitung 1 = = 0,7349 t hitung 2 = = 0,7349 t hitung 3 = = 2,9531 t hitung 4 = = 1,4832 Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa semua t hitung t tabel, maka semua data tersebut diterima. No. X Kadar 1 103,13 0,69 0,4761 2 103,13 0,69 0,4761 3 99,68 -2,76 7,6176 4 103,83 1,39 1,9321 102,44 Σ = 10,5019 Universitas Sumatera Utara 98 Lampiran 19. Lanjutan Kadar prednisolon dalam krim Y tiap gram: μ = ± t α2, dk x SD √n = 102,44 ± 3,1824 x 1,8709 √4 = 102,44 ± 2,43 = 102,44 + 2,43 = 102,44 – 2,43 Kandungan prednisolon dalam krim Y tiap gram: = 102,44 ± 2,43 x 2,5 mg = x 2,5 mg = 2,50 mg = x 2,5 mg = 2,62 mg Universitas Sumatera Utara 99 Lampiran 20. Spektrum Serapan Krim X pada Uji Perolehan Kembali nm. 200.00 250.00 300.00 350.00 400.00 A b s. 0.0100 0.0000 -0.0100 -0.0200 Universitas Sumatera Utara 100 Lampiran 20. Lanjutan nm. 200.00 250.00 300.00 350.00 400.00 A b s. 0.0100 0.0000 -0.0100 -0.0200 Universitas Sumatera Utara 101 Lampiran 20. Lanjutan nm. 200.00 250.00 300.00 350.00 400.00 A b s. 0.0100 0.0000 -0.0100 -0.0200 Universitas Sumatera Utara 102 Lampiran 21. Data Hasil Perolehan Kembali Kloramfenikol pada krim X dengan Metode Penambahan Baku Standard Addition Method No. Kon- sen- trasi Penim- bangan g Absor- bansi pada λ= 227,60 nm Konsentrasi Baku yang ditambahka n mg perole- han kembali Setelah penambahan baku mg Sebelum penambahan baku mg 1. 80 0,585 0,00259 16,4474 11,6181 4,7995 100,62 2. 0,631 0,00273 17,3684 12,5317 4,7995 100,78 3. 0,585 0,00259 16,4474 11,6181 4,7995 100,62 4. 100 0,765 0,00328 20,9868 15,1929 5,9994 96,58 5. 0,765 0,00329 21,0526 15,1929 5,9994 97,67 6. 0,738 0,00324 20,7237 14,6567 5,9994 101,13 7. 120 0,840 0,00369 23,6842 16,6824 7,1993 97,26 8. 0,877 0,00382 24,5395 17,4172 7,1993 98,93 9. 0,876 0,00382 24,5395 17,3974 7,1993 99,21 Rata-rata 99,20 SD 1,71 RSD 1,72 Universitas Sumatera Utara 103 Lampiran 22. Data Hasil Persen Perolehan Kembali Prednisolon pada krim X dengan Metode Penambahan Baku Standard AdditionMethod No. Kon- sen- trasi Penim- bangan g Absor- bansi pada λ= 292,80 nm Konsentrasi Baku yang ditambahkan mg perole- han kembali Setelah penambaha n baku mg Sebelum penambahan baku mg 1. 80 0,585 0,00017 2,0833 1,4773 0,5978 101,39 2. 0,631 0,00018 2,1875 1,5934 0,5978 99,38 3. 0,585 0,00017 2,0833 1,4773 0,5978 101,39 4. 100 0,765 0,00023 2,7083 1,9318 0,7472 103,92 5. 0,765 0,00023 2,7083 1,9318 0,7472 103,92 6. 0,738 0,00022 2,6042 1,8636 0,7472 99,10 7. 120 0,840 0,00026 3,0208 2,1212 0,8967 100,33 8. 0,877 0,00027 3,1250 2,2146 0,8967 101,53 9. 0,876 0,00027 3,1250 2,2121 0,8967 101,81 Rata-rata 101,42 SD 1,71 RSD 1,69 Universitas Sumatera Utara 104 Lampiran 23.Contoh Perhitungan Persentase Perolehan Kembali recovery Sampel yang digunakan adalah krim X Tiap gram mengandung kloramfenikol 20 mg dan prednisolon 2,5 mg Berat kesetaraan penimbangan sampel pada penetapan kadar = 20 mg Perolehan 80 Kloramfenikol 80 = x 20 mg = 16 mg Krim kloramfenikol 70 = x 16 mg = 11,2 mg Penimbangan krim setara 11,2 mg kloramfenikol Sampel yang ditimbang x 1 g = 0,560 g Baku kloramfenikol 30 = x 16 mg = 4,8 mg Jumlah prednisolon dalam krim yang ditimbang : = x 2,5 mg = 1,4 mg Baku prednisolon yang ditambahkan : = = 0,6 mg Perolehan100 Kloramfenikol 100 = x 20 mg = 20 mg Krim kloramfenikol 70 = x 20 mg = 14 mg     mg mg mgx 20 16 5 , 2 100 30 Universitas Sumatera Utara 105 Lampiran 23. Lanjutan Penimbangan krim setara 14 mg kloramfenikol Sampel yang ditimbang x 1 g = 0,700 g Baku kloramfenikol 30 = x 20 mg = 6 mg Jumlah prednisolon dalam krim yang ditimbang : = x 2,5 mg = 1,75 mg Baku prednisolon yang ditambahkan : = = 0,75 mg Perolehan 120 Kloramfenikol 120 = x 20 mg = 24 mg Krim Kloramfenikol 70 = x 24 mg = 16,8 mg Penimbangan krim setara 16,8 mg kloramfenikol Sampel yang ditimbang x 1 g = 0,840 g Baku kloramfenikol 30 = x 24 mg = 7,2 mg Jumlah prednisolon dalam krim yang ditimbang : = x 2,5 mg = 2,1 mg Baku prednisolon yang ditambahkan : = = 0,9 mg     mg mg mgx 20 20 5 , 2 100 30     mg mg mgx 20 24 5 , 2 100 30 Universitas Sumatera Utara 106 Lampiran 23. Lanjutan Contoh perhitungan perolehan kembali pada perolehan 80 Misalnya absorbansi analisis Y : Penimbangan sampel = 0,585 g Kloramfenikol 227,60 nm = 0,00259 Prednisolon 292,80 nm = 0,00017 Faktor Pengenceran Kloramfenikol = = 1250 Faktor Pengenceran Prednisolon = = 312,5

A. Kloramfenikol

Persamaan regresi pada panjang gelombang analisis kloramfenikol λ=227,60 nm: Y = 0,00019X + 0,00009 Konsentrasi kloramfenikol X: Y = 0,00019X + 0,00009 0,00259 = 0,00019X + 0,00009 0,00259 – 0,00009 = 0,00019 X X = X = 13,1579 μgmL Konsentrasi sampel setelah penambahan bahan baku C F : = x faktor pengenceran = x 1250 = 16,4474 mg Universitas Sumatera Utara 107 Lampiran 23. Lanjutan Konsentrasi sampel sebelum penambahan bahan baku C A : C A = Keterangan : A = berat sampel yang akan ditimbang setara 11,2 mg krim kloramfenikol 70 B = analit kloramfenikol 70 C = kadar rata-rata sampel C A = x 11,2 mg x 99,30 = 11,6181 mg Jumlah baku yang ditambahkan = D x E Keterangan : D = Baku kloramfenikol 30 yang ditambahkan E = kadar baku kloramfenikol dari sertifikat analisis = 4,8 mg x 99,99 = 4,7995 mg Maka perolehan kembali kloramfenikol: perolehan kembali = x 100 perolehan kembali = x 100 = 100,62 Universitas Sumatera Utara 108 Lampiran 23. Lanjutan B. Prednisolon Persamaan regresi pada panjang gelombang analisis prednisolon λ= 292,80 nm: Y= 0,00003X - 0,00003 Konsentrasi prednisolon X: Y = 0,00003X - 0,00003 0,00017 = 0,00003X - 0,00003 0,00017 + 0,00003 = 0,00003X X = = 6,6667 μgmL Konsentrasi awal setelah penambahan bahan baku C F : = x faktor pengenceran = x 312,5 = 2,0833 mg Konsentrasi sampel sebelum penambahan bahan baku C A : = Keterangan : A = berat sampel yang akan ditimbang setara 11,2 mg krim kloramfenikol 70 B = jumlah prednisolon dalam 0,585 g berat sampel yang akan ditimbang C = kadar rata-rata sampel C A = x 1,4 mg x 101,01 = 1,4773 mg Jumlah baku yang ditambahkan = D x E Universitas Sumatera Utara 109 Lampiran 23. Lanjutan Keterangan : D = baku prednisolon 30 yang ditambahkan E = kadar baku prednisolon dari sertifikat analisis = 0,6 mg x 99,63 = 0,5978 mg Maka perolehan kembali prednisolon: perolehan kembali = x 100 perolehan kembali = x 100 = 101,39 Universitas Sumatera Utara 110 Lampiran 24. Perhitungan Rata-Rata, Standar Deviasi dan Relatif Standar Deviasi perolehan kembali kloramfenikol pada krim X SD = = = 1,71 RSD = x 100 = x 100 = 1,72 No Kadar perolehan kembali [X] Xi-X Xi–X 2 1. 100,62 1,42 2,0164 2. 100,78 1,58 2.4964 3. 100,62 1,42 2,0164 4. 96,58 -2,62 6,8644 5. 97.67 -1,53 2,3409 6. 101,13 1,93 3,7249 7. 97,26 -1,94 3,7636 8. 98,93 -0,27 0,0729 9. 99,21 0,01 0,0001 = 99,20 Σ Xi–X 2 =23,2960 Universitas Sumatera Utara 111 Lampiran 25. Perhitungan Rata-Rata, Standar Deviasi dan Relatif Standar Deviasi perolehan kembali prednisolon pada krim X SD = = = 1,71 RSD = x 100 = x 100 = 1,69 No Kadar perolehan kembali [X] Xi-X Xi–X 2 1. 101,39 -0,03 0,0009 2. 99,38 -2,04 4,1616 3. 101,39 -0,03 0,0009 4. 103,92 2,50 6,2500 5. 103,92 2,50 6,2500 6. 99,10 -2,32 5,3840 7. 100,33 1,09 1,1881 8. 101,53 0,11 0,0121 9. 101,81 0,39 0,1521 =101,42 ∑ Xi–X 2 =23,3997 Universitas Sumatera Utara 112 Lampiran 26. Daftar Nilai Distribusi t Universitas Sumatera Utara 113 Lampiran 27. Sertifikat Pengujian Kloramfenikol Universitas Sumatera Utara 114 Lampiran 28. Sertifikat Pengujian Prednisolon Universitas Sumatera Utara 46 DAFTAR PUSTAKA Cairns, D. 2008. Essentials of Pharmaceutical Chemistry. Third Edition. London: Pharmaceutical Press. Halaman 162 - 163. Dachriyanus. 2004. Analisis Struktur Senyawa Organik Secara Spektroskopi. Padang: Andalas University Press. Halaman 7. Day, R.A., dan Underwood, A.L. 1998. Quantitative Analysis Sixtth Edition. Penerjemah: Sopyan, I. 2002. Analisis Kimia Kuantitatif Edisi Ke Enam. Jakarta: Penerbit Erlangga. Halaman 383, 399-404. Ditjen. POM. 1995. Farmakope Indonesia. Edisi IV. Jakarta: Departemen Kesehatan RI Jakarta. Halaman 189, 692-693. Ditjen. BKAK. 2014. Farmakope Indonesia. Edisi V. Jakarta: Kementerian Kesehatan RI. Halaman 689, 1049. Gandjar, I.G. dan Rohman, A. 2007. Kimia Farmasi Analisis. Yogyakarta: Pustaka Pelajar. Halaman 235-236, 240-243 dan 466, 468-469. Harmita, 2004. Petunjuk Pelaksanaan Validasi Metode I dan Cara Perhitungannya. Majalah Ilmu Kefarmasian I3: 117-135. Moffat, A.C., Osselton, M.D., dan Widdop, B. 2005. Clarke’s Analysis of Drug and Poisons. Third Edition. London: Pharmaceutical Press. Munson, J.W. 1984. Pharmaceutical Analysis – Part B Modern Methods. Penerjemah : Harjana. 1991. Analisis Farmasi Metode Modern – Bagian B. Surabaya: Erlangga University Press. Halaman 385. Nurhidayati L. 2007. Spektrofotometri Derivatif dan Aplikasinya dalam Bidang Farmasi. Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia 52 : 93-99. Owen, A.J. 1995. Uses of Derivative Spectroscopy Aplication Note UV - Visible Spectroscopy. HP Way: Agilent Technologies. Gandjar, I.G. dan Rohman, A. 2007. Kimia Farmasi Analisis. Yogyakarta: Pustaka Pelajar. Halaman 235-236, 240-243 dan 466, 468-469. Satiadarma, K., Mulja, M., Tjahjono, D.H., Kartasasmita, R.E. 2004. Asas Pengembangan Prosedur Analisis. Edisi Pertama. Surabaya: Airlangga University Press. Halaman 46-49, 86 - 93. Siswandono, dan Soekardjo, B. 2000. Kimia Medisinal 2. Surabaya: Airlangga University Press. Halaman 426-427. Universitas Sumatera Utara 47 Sudjana. 2005. Metode Statistika. Bandung: Penerbit Tarsito. Halaman 93, 145, 201, 225. Talsky,G. 1994. Derivative Spectrophotometry. Low and High Order. Weinhem Germany: VCH Verlagsdesellschaft mbH. Halaman 18, 35. Tan, T.H. dan Rahardja, K. 2007. Obat-Obat Penting Khasiat, Penggunaan, dan Efek-Efek Sampingnya. Edisi Keenam. Jakarta: PT. Elex Media Komputindo. Halaman 82-83, 686. USP 30 – NF 25. 2007. United State Pharmacopoeia 30 th edition. The National Formulary. 25 th edition. London: The United States Pharmacopoeial Convention. Halaman 1705, 3004. Universitas Sumatera Utara 19

BAB III METODE PENELITIAN

3.1 Jenis Penelitian

Penelitian ini termasuk jenis penelitian deskriptif dengan metode spektrofotometri derivatif terhadap analisa campuran kloramfenikol dan prednisolon yang terkandung pada dua sediaan krim.

3.2 Tempat dan Waktu Penelitian

Penelitian ini dilakukan pada bulan Mei sampai dengan Juli 2015 di Laboratorium Penelitian Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara.

3.3 Alat

Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah spektrofotometer UV-Visible dapat dilihat pada Lampiran 3 halaman 51, Personal Computer PC yang dilengkapi software UV Probe 2.42 UV-1800 Shimadzu, neraca analitik Mettler Toledo, kuvet, kertas saring, bola karet, spatula, alat-alat gelas dan alat- alat lainnya yang diperlukan dalam penyiapan sampel.

3.4 Bahan

Bahan yang digunakan adalah etanol absolut Moffat, 2005, kloramfenikol BPFI, prednisolon BPFI sertifikat pengujian dapat dilihat pada Lampiran 27 dan 28 halaman 113 dan 114, Krim X dan Krim Y . Universitas Sumatera Utara 20

3.5 Pengambilan Sampel

Pengambilan sampel dilakukan secara purposif, yaitu ditentukan atas dasar pertimbangan bahwa sampel yang terambil mempunyai karakteristik yang sama dengan yang diteliti Sudjana, 2005. Sampel yang digunakan yaitu krim X dan krim Y yang tiap gram mengandung kloramfenikol 20 mg dan prednisolon 2,5 mg. 3.6 Prosedur Penelitian 3.6.1 Pembuatan Larutan Induk Baku dan Larutan Standar