60
Lampiran 6. Spektrum Serapan Derivat Pertama Baku Kloramfenikol dan Baku
Prednisolon
a. Kloramfenikol
nm. 200.00
250.00 300.00
350.00 400.00
Ab s.
0.0500
0.0000
-0.0480
Universitas Sumatera Utara
61
Lampiran 6. Lanjutan
nm. 200.00
250.00 300.00
350.00 400.00
A bs.
0.0500
0.0000
-0.0480
Universitas Sumatera Utara
62
Lampiran 6. Lanjutan b.
Prednisolon
n m. 2 0 0 .0 0
2 5 0 .0 0 3 0 0 .0 0
3 5 0 .0 0 4 0 0 .0 0
Ab s.
0 .0 2 0 0 0 .0 1 0 0
0 .0 0 0 0 -0 .0 1 0 0
-0 .0 2 0 0 -0 .0 2 4 2
Universitas Sumatera Utara
63
Lampiran 6. Lanjutan
n m. 2 0 0 .0 0
2 5 0 .0 0 3 0 0 .0 0
3 5 0 .0 0 4 0 0 .0 0
Ab s.
0 .0 2 0 0 0 .0 1 0 0
0 .0 0 0 0 -0 .0 1 0 0
-0 .0 2 0 0 -0 .0 2 4 2
Universitas Sumatera Utara
64
Lampiran 7. Spektrum Serapan Derivat Kedua Baku Kloramfenikol dan Baku
Prednisolon
a. Kloramfenikol
nm. 200.00
250.00 300.00
350.00 400.00
Ab s.
0.0100 0.0050
0.0000 -0.0050
-0.0100
Universitas Sumatera Utara
65
Lampiran 7. Lanjutan
n m. 2 0 0 .0 0
2 5 0 .0 0 3 0 0 .0 0
3 5 0 .0 0 4 0 0 .0 0
Ab s.
0 .0 1 0 0 0 .0 0 5 0
0 .0 0 0 0 -0 .0 0 5 0
-0 .0 1 0 0
Universitas Sumatera Utara
66
Lampiran 7. Lanjutan b.
Prednisolon
nm. 200.00
250.00 300.00
350.00 400.00
A bs.
0.0050
0.0000
-0.0030
Universitas Sumatera Utara
67
Lampiran 7. Lanjutan
nm. 200.00
250.00 300.00
350.00 400.00
A bs.
0.0050
0.0000
-0.0030
Universitas Sumatera Utara
68
Lampiran 8. Spektrum Serapan Panjang Gelombang Analisis Kloramfenikol dan
Prednisolon
nm. 200.00
250.00 300.00
350.00 400.00
A bs.
0.0100
0.0000
-0.0100
-0.0200
Universitas Sumatera Utara
69
Lampiran 9. Data Kalibrasi Kloramfenikol BPFI, Persamaan Regresi dan
Koefisien Korelasi Kalibrasi serapan derivat kedua kloramfenikol pada panjang gelombang 227,60nm
No. Konsentrasi μgmL X
Absorbansi Y 1.
0,0000 0,00000
2. 12,0000
0,00240 3.
14,0000 0,00285
4. 16,0000
0,00311 5.
18,0000 0,00346
6. 20,0000
0,00390
Perhitungan persamaan garis regresi No.
X Y
XY X
2`
Y
2
1. 0,00000
0,00000 0,00000
0,00000 0,0000000000
2. 12,00000
0,00240 0,02880
144,00000 0,00000576
3. 14,00000
0,00285 0,03990
196,00000 0,00000812
4. 16,00000
0,00311 0,04976
256,00000 0,00000967
5. 18,00000
0,00346 0,06228
324,00000 0,00001197
6. 20,00000
0,00390 0,07800
400,00000 0,00001521
ΣX = 80 =13,33
ΣY = 0,01572 = 0,00262
ΣXY = 0,25874
ΣY
2
= 1320
Σ Y
2
= 0,00005074
Maka, persamaan garis regresinya adalah
Universitas Sumatera Utara
70
Lampiran 9 . Lanjutan
Perhitungan Koefisien Korelasi
=
0,9990 Maka, koefisien korelasi dari data kalibrasi serapan derivat kedua kloramfenikol
pada panjang gelombang 227,60 nm adalah 0,9990.
Universitas Sumatera Utara
71 Lampiran 10. Data Kalibrasi Prednisolon BPFI, Persamaan Regresi dan
Koefisien Korelasi Kalibrasi serapan derivat kedua prednisolon pada panjang gelombang 292,80 nm
No. Konsentrasi μgmL X
Absorbansi Y 1.
0,00000 0,00000
2. 8,00000
0,00023 3.
10,00000 0,00027
4. 12,00000
0,00032 5.
14,00000 0,00038
6. 16,00000
0,00044
Perhitungan Persamaan Garis Regresi No.
X Y
XY
`
X
2
Y
2
1. 0,00000
0,00000 0,00000
0,00000 0,00000
2. 8,00000
0,00023 0,00184
64,00000 5,0.10
-8
3. 10,00000
0,00027 0,00270
100,00000 7,0.10
-8
4. 12,00000
0,00032 0,00384
144,00000 10.10
-8
5. 14,00000
0,00038 0,00532
196,00000 14.10
-8
6. 16,00000
0,00044 0,00704
256,00000 19.10
-8
ΣX = 60
=10,00
ΣY = 0,00164
= 0,00027
ΣXY = 0,02074
ΣX
2
= 760 ΣY
2
= 57.10
-8
Maka persamaan garis regresinya adalah
Universitas Sumatera Utara
72
Lampiran 10. Lanjutan
Perhitungan Koefisien Korelasi
Maka, koefisien korelasi dari data kalibrasi serapan derivat kedua Prednisolon pada panjang gelombang 292,80 nm adalah 0,9977.
Universitas Sumatera Utara
73
Lampiran 11. Perhitungan Batas Deteksi Limit of Detection, LOD dan Batas
Kuantitasi Limit of Quantitation, LOQ Kloramfenikol Persamaan garis regresi kloramfenikol adalah
No. X
Y Yi
Y-Yi 10
-5
Y-Yi
2
10
-10
1 0,00000
0,00000 0,00009
-9 81
2 12,00000
0,00240 0,00237
3 9
3 14,00000
0,00285 0,00275
10 100
4 16,00000
0,00311 0,00313
-2 4
5 18,00000
0,00346 0,00351
-5 25
6 20,00000
0,00390 0,00389
1 1
ΣY-Yi
2
220
7,416.10
-5
1,1709 μgmL
3,9032 μgmL
Universitas Sumatera Utara
74
Lampiran 12. Perhitungan Batas Deteksi Limit of Detection, LOD dan Batas
Kuantitasi Limit of Quantitation, LOQ Prednisolon Persamaan garis regresi prednisolon adalah Y = 0,00003X - 0,00003
No. X
Y Yi
Y-Yi 10
-5
Y-Yi
2
10
-10
1 0,00000
0,00000 -0,00003
3 9
2 8,00000
0,00023 0,00021
2 4
3 10,00000
0,00027 0,00027
4 12,00000
0,00032 0,00033
-1 1
5 14,00000
0,00038 0.00039
-1 1
6 16,00000
0,00044 0,00045
-1 1
Σ Y-Yi
2
16 2,0.10
-5
2 μgmL
6,6667 μgmL
Universitas Sumatera Utara
75
Lampiran 13. Spektrum Serapan Derivat Kedua Krim
nm. 200.00
250.00 300.00
350.00 400.00
A b
s.
0.0100
0.0000
-0.0100
-0.0200
Universitas Sumatera Utara
76
Lampiran 13. Lanjutan
nm. 200.00
250.00 300.00
350.00 400.00
A b
s.
0.0100
0.0000
-0.0100
-0.0200
Universitas Sumatera Utara
77
Lampiran 14. Hasil Analisis Kadar Kloramfenikol dan Prednisolon dalam
sediaan Krim 1.
Kadar kloramfenikol dalam sediaan krim Tiap gram mengandung 20 mg kloramfenikol dalam satu tube
Nama Sediaan
Penimba- ngan
g Setara
mg Absorbansi
pa da λ =
227,6 nm Konsentra-
si teoritis μgmL
Konsentra- si
kloramfeni kol
μgmL Kadar
Kadar mg
KRIM X 0,9982
19,964 0,00313
15,971 16,000
100,17 20,03
1,0253 20,506
0,00319 16,405
16,316 99,45
19,89 0,9980
19,960 0,00304
15,968 15,526
97,22 19,44
0,9981 19,962
0,00307 15,970
15,684 98,20
19,64 1,0350
20,700 0,00319
16,560 16,316
98,52 19,70
0,9983 19,966
0,00313 15,973
16,000 100,16
20,03
KRIM Y 1,0253
20,506 0,00320
16,405 16,368
99,77 19,95
1,0253 20,506
0,00314 16,405
16,053 97,84
19,57 0,9980
19,960 0,00307
15,968 15,684
98,21 19,64
0,9981 19,962
0,00320 15,970
16,368 102,48
20,50 0,9740
19,480 0,00309
15,584 15,789
101,31 20,26
1,0560 21,120
0,00320 16,896
16,368 96,87
19,37
Universitas Sumatera Utara
78
Lampiran 14. Lanjutan
2. Kadar prednisolon dalam sediaan krim Tiap gram mengandung 2,5 mg
prednisolon dalam satu tube
Nama Sediaan
Penimba- ngan
g Setara
mg Absorbansi
pa da λ =
292,8 nm Konsentra-
si teoritis μgmL
Konsentrasi Prednisolon
μgmL Kadar
Kadar mg
KRIM X 0,9982
2,496 0,00021
7,996 8,000
99,67 2,49
1,0253 2,563
0,00022 8,051
8,333 103,13
2,58 0,9980
2,495 0,00022
7,996 8,333
103,83 2,60
0,9981 2,495
0,00021 7,996
8,000 99,68
2,49 1,0350
2,588 0,00022
8,070 8,333
102,88 2,57
0,9983 2,496
0,00021 7,997
8,000 99,67
2,49
KRIM Y 1,0253
2,563 0,00022
8,051 8,333
103,13 2,58
1,0253 2,563
0,00022 8,051
8,333 103,13
2,58 0,9980
2,495 0,00021
7,996 8,000
99,68 2,49
0,9981 2,495
0,00022 7,996
8,333 103,83
2,60 0,9740
2,435 0,00022
7,948 7,667
96,10 2,40
1,0560 2,640
0,00020 8,112
8,667 106,44
2,66
Universitas Sumatera Utara
79
Lampiran 15. Contoh Perhitungan Kadar Kloramfenikol dan Prednisolon dalam
Sediaan Krim i.
Data penimbangan tube krim X dan krim Y Berat 10 tube krim X
= 122,395 g Berat 10 tube kosong
= 21,539 g Berat krim X
= 122,395 g – 21,539 g = 100,855 g Berat 10 tube krim Y
= 127,325 g Berat 10 tube kosong
= 27,368 g Berat krim Y
= 127,325 g – 27,368 g = 99,958 g ii.
Contoh perhitungan kadar untuk kloramfenikol dan prednisolon iia. Perhitungan kadar untuk kloramfenikol
Sediaan krim yang digunakan krim X dan krim Y yang tiap gram mengandung kloramfenikol 20 mg dan prednisolon 2,5 mg
Ditimbang krim setara dengan 20 mg kloramfenikol, maka jumlah krim yang ditimbang adalah;
x
1
x 1 g = 1 g
Dilarutkan 1 g krim dalam etanol absolut dalam labu tentukur 50 mL sampai garis tanda. Larutan kemudian dihomogenkan, disaring, lebih kurang 10 mL filtrat
pertama dibuang. Filtrat selanjutnya ditampung larutan A. Konsentrasi kloramfenikol larutan A
x 1000 μg = 400 μgmL
Kemudian dari larutan A, dipipet 2,0 mL dan dimasukkan kedalam labu tentukur
50 mL dan diencerkan dengan etanol absolut hingga garis tanda larutan B.
Universitas Sumatera Utara
80
Lampiran 15. Lanjutan
Konsentrasi kloramfenikol larutan B = = 16
μgmL iib. Perhitungan kadar untuk prednisolon
Dihitung kesetaraan prednisolon yang terkandung dalam 1g krim.
x
2
x 2,5 mg = 2,5 mg
Konsentrasi prednisolon larutan A = x 1000
μg = 50 μgmL Kemudian dari larutan A, dipipet 2,0 mL dan dimasukkan ke dalam labu tentukur
50 mL dan diencerkan dengan etanol absolut hingga garis tanda larutan B. Konsentrasi prednisolon larutan B =
= 2 μgmL
Konsentrasi analisis untuk prednisolon 8 μgmL, sedangkan konsentrasi dalam
larutan B adalah 2,0 μgmL. Maka untuk mendapatkan konsentrasi analisis
dilakukan penambahan baku prednisolon untuk metode adisi. Penambahan baku dilakukan dengan pembuatan LIB konsentrasi 50
μgmL. Konsentrasi yang dibutuhkan dari adisi = 8
μgmL - 2 μgmL = 6,0 μgmL
Volume prednisolon dari LIB = = 6 mL
Maka volume analisis untuk prednisolon adalah = Volume prednisolon larutan B + Volume prednisolon dari LIB
= 2 mL+ 6 mL = 8 mL
Universitas Sumatera Utara
81
Lampiran 15. Lanjutan
Jadi konsentrasi Prednisolon = = 8
μgmL iii.
Contoh perhitungan kadar kloramfenikol dan prednisolon dari krim X: iiia. Perhitungan kadar untuk kloramfenikol
Berat krim salep yang ditimbang adalah 0,9982 g, maka terlebih dahulu dihitung kesetaraan kloramfenikol.
Kesetaraan kloramfenikol =
x 20 mg = 19,964 mg
Konsentrasi kloramfenikol =
x 1000 μg = 399,28 μgmL
Konsentrasi teoritis kloramfenikol = x 2 mL
= 15,971 μgmL
Absorbansi kloramfenikol pada derivat kedua pada panjang gelombang 227,60 nm adalah 0,00313
Kadar kloramfenikol dihitung dari persamaan regresi pada panjang gelombang analisis kloramfenikol Y = 0,00019X + 0,00009
Konsentrasi kloramfenikol: Y =
0,00019X + 0,00009 0,00313 =
0,00019X + 0,00009 0,00313 - 0,00009
= 0,00019X
X =
X =
16,0 μgmL
Kadar kloramfenikol = x 99,99 = 100,17
Universitas Sumatera Utara
82
Lampiran 15. Lanjutan
iiib. Perhitungan kadar untuk prednisolon Untuk prednisolon, berat krim salep yang ditimbang adalah 0,9982 g, maka terlebih
dahulu dihitung kesetaraan prednisolon. Kesetaraan prednisolon
= x 2,5 mg = 2,495 mg
Konsentrasi prednisolon =
x 1000 μg = 49,91 μgmL
Konsentrasi teoritis prednisolon =
x 8 mL= 7,996 μgmL
Absorbansi prednisolon pada derivat kedua pada panjang gelombang 292,80 nm adalah 0,00021.
Kadar prednisolon dihitung dari persamaan regresi pada panjang gelombang analisis prednisolon Y = 0,00003X - 0,00003
Konsentrasi prednisolon : Y
= 0,00003X - 0,00003
0,00021 =
0,00003X - 0,00003 0,00021+0,00003
= 0,00003X
X =
X =
8,0 μgmL
Kadar prednisolon = x 99,63
= 99,67
Universitas Sumatera Utara
83
Lampiran 16. Perhitungan Statistik Kloramfenikol pada krim X
SD =
=
= = 1,1784
Pada interval kepercayaan 95 dengan nilai α = 0,05, dk = n-1= 5, maka t
α2,dk
= 2,5706 Data diterima jika t hitung t tabel
t hitung 1 =
= 2,5289
t hitung 2 =
= 1,0324
t hitung 3 =
= 3,6029 ditolak No.
X Kadar
2
1 100,17
1,22 1,4884
2 99,45
0,50 0,2401
3 97,22
-1,73 2,9929
4 98,20
-0,75 0,5625
5 98,52
-0,43 0,1849
6 100,16
1,21 1,4641
98,95 Σ
2
=
6,9329
Universitas Sumatera Utara
84
Lampiran 16. Lanjutan
t hitung 4 =
= 1,5659
t hitung 5 =
= 0,9007
t hitung 6 =
= 2,5081 Karena data ke-3 ditolak maka dilakukan perhitungan tanpa menyertakan data
ke-3.
Universitas Sumatera Utara
85
Lampiran 16. Lanjutan
SD =
= =
= 0,9134 Pada interval kepercayaan 95 dengan nilai α = 0,05, dk = n-1= 4,
maka t
α2,dk
= 2,7764 Data diterima jika t hitung t tabel
t hitung 1 =
= 2,1299
t hitung 2 =
= 0,3672
t hitung 3 =
= 2,6929
t hitung 4 =
= 1,9095
t hitung 5 =
= 2,1054 No.
X Kadar
2
1 100,17
0,87 0,7569
2 99,45
0,15 0,0225
3 98,20
-1,10 1,2100
4 98,52
-0,78 0,6084
5 100,16
0,86 0,7396
99,30 Σ
2
=
3,3374
Universitas Sumatera Utara
86
Lampiran 16. Lanjutan
Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa semua t hitung t tabel, maka semua data tersebut diterima.
Kadar kloramfenikol dalam krim X Tiap gram:
μ
= ±
t
α2, dk
x SD √n
= 99,30 ± 2,7764 x 0,9134 √5
= 99,30 ± 1,13 = 99,30 + 1,13
= 99,30 – 1,13 Kandungan kloramfenikol dalam krim X
tiap gram: = 99,30 ± 1,13 x 20 mg
= x 20 mg
= 19,63 mg =
x 20 mg = 20,09 mg
Universitas Sumatera Utara
87
Lampiran 17. Perhitungan Statistik Prednisolon pada Krim X
SD =
=
=
= 1,9998 Pada interval kepercayaan 95 dengan nilai α = 0,05, dk = n-1= 5,
maka t
α2,dk
= 2,5706 Data diterima jika t hitung t tabel
t hitung 1 =
=
t hitung 2 =
= 2,0206
t hitung 3 =
= 2,8778 ditolak No.
X Kadar
2
1 99,67
-1,81 3,2761
2 103,13
1,65 2,7225
3 103,83
2,35 5,5225
4 99,68
-1,80 3,2400
5 102,88
1,40 1,960
6 99,67
-1,81 3,2761
101,48 Σ
2
= 19,9972
Universitas Sumatera Utara
88
Lampiran 17. Lanjutan
t hitung 4 =
= 2,2043
t hitung 5 =
= 1,7144
t hitung 6 =
= 2,2165 Karena data ke-3 ditolak maka dilakukan perhitungan tanpa menyertakan data
ke-3
Universitas Sumatera Utara
89
Lampiran 17. Lanjutan
SD =
= =
= 1,8269 Pada interval kepercayaan 95 dengan nilai α = 0,05, dk = n-1= 4,
maka t
α2,dk
= 2,7764 Data diterima jika t hitung t tabel
t hitung 1 =
= 1,6352
t hitung 2 =
= 2,5997
t hitung 3 =
= 1,6230
t hitung 4 =
= 2,2937
t hitung 5 =
= 1,6352 No.
X Kadar
2
1 99,67
1,34 1,7956
2 103,13
2,12 4,4494
3 99,68
-1,33 1,7689
4 102,88
1,87 3,497
5 99,67
-1,34 1,7956
101,01 Σ
2
= 13,3514
Universitas Sumatera Utara
90
Lampiran 17. Lanjutan
Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa semua t hitung t tabel, maka semua data tersebut diterima.
Kadar prednisolon dalam krim X tiap gram :
μ
= ±
t
α2, dk
x SD √n
= 101,01 ± 2,7764 x 1,8269 √5
= 101,01 ± 2,27 = 101,01 + 2,27
= 101,01 – 2,27 Kandungan prednisolon dalam krim X
tiap gram: = 101,01 ± 2,27 x 2,5 mg
= x 2,5 mg = 2,47 mg
= x 2,5 mg = 2,58 mg
Universitas Sumatera Utara
91
Lampiran 18. Perhitungan Statistik Kloramfenikol pada krim Y
SD =
=
=
= 2,1735 Pada interval kepercayaan 95 dengan nilai α = 0,05, dk = n-1= 5,
maka t
α2,dk
= 2,5706 Data diterima jika t hitung t tabel
t hitung 1 =
= 0,3944
t hitung 2
=
= 1,769
t hitung 3 =
= 1,3521
t hitung 4 =
= 3,4591ditolak No.
X Kadar
2
1 99,77
0,35 0,1225
2 97,84
-1,58 2,4964
3 98,21
-1,21 1,4400
4 102,49
3,07 9,4249
5 101,31
1,89 3,5721
6 96,87
-2,55 6,5025
99,42 Σ
2
= 23,6204
Universitas Sumatera Utara
92
Lampiran 18. Lanjutan
t hitung 5 =
= 2,1296
t hitung 6 =
= 2,8732 ditolak Karena data ke-4 dan data ke-6 ditolak maka dilakukan perhitungan tanpa
menyertakan data ke-4 dan data ke-6
Universitas Sumatera Utara
93
Lampiran 18. Lanjutan
SD =
= =
= 1,589 Pada interval kepercayaan 95 dengan nilai α = 0,05, dk = n-1= 3,
maka t
α2,dk
= 3,1824 Data diterima jika t hitung t tabel
t hitung 1 =
= 0,6136
t hitung 2 =
= 1,8156
t hitung 3 =
= 1,3499
t hitung 4 =
= 2,5519 Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa semua t hitung t tabel, maka
semua data tersebut diterima. No.
X Kadar
2
1 99,77
0,49 0,2401
2 97,84
-1,44 2,0736
3 98,21
-1,07 1,1449
4 101,31
2,03 4,1209
99,28 Σ
2
= 7,5795
Universitas Sumatera Utara
94
Lampiran 18. Lanjutan
Kadar kloramfenikol dalam krim Y tiap gram :
μ
= ±
t
α2, dk
x SD √n
= 99,28 ± 3,1824 x 1,589 √4
= 99,28 ± 2,06 = 99,28 + 2,06
= 99,28 – 2,06 Kandungan kloramfenikol dalam krim Y tiap gram:
= 99,28 ± 2,06 x 20 mg =
x 20 mg = 19,44 mg =
x 20 mg = 20,27 mg
Universitas Sumatera Utara
95
Lampiran 19. Perhitungan Statistik Prednisolon pada krim Y
SD =
=
=
= 3,6275 Pada interval kepercayaan 95 dengan nilai α = 0,05, dk = n-1= 5,
maka t
α2,dk
= 2,5706 Data diterima jika t hitung t tabel
t hitung 1 =
= 0,7291
t hitung 2 =
= 0,7291
t hitung 3 =
= 1,6000 No.
X Kadar
1 103,13
1,08 1,1664
2 103,13
1,08 1,1664
3 99,68
-2,37 5,6169
4 103,83
1,78 3,1684
5 96,10
-5,95 35,4025
6 106,44
4,39 19,2721
102,05 Σ
= 65,7927
Universitas Sumatera Utara
96
Lampiran 19. Lanjutan
t hitung 4 =
= 1,2017
t hitung 5 =
= 4,0170 ditolak
t hitung 6 =
= 2,9638 ditolak Karena data ke-5 dan data ke-6 ditolak maka dilakukan perhitungan tanpa
menyertakan data ke-5 dan data ke-6
Universitas Sumatera Utara
97
Lampiran 19. Lanjutan
SD =
= =
= 1,8709 Pada interval kepercayaan 95 dengan nilai α = 0,05, dk = n-1= 3,
maka t
α2,dk
= 3,1824 Data diterima jika t hitung t tabel
t hitung 1 =
= 0,7349
t hitung 2 =
= 0,7349
t hitung 3 =
= 2,9531
t hitung 4 =
= 1,4832 Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa semua t hitung t tabel, maka
semua data tersebut diterima. No.
X Kadar
1 103,13
0,69 0,4761
2 103,13
0,69 0,4761
3 99,68
-2,76 7,6176
4 103,83
1,39 1,9321
102,44 Σ
= 10,5019
Universitas Sumatera Utara
98
Lampiran 19. Lanjutan
Kadar prednisolon dalam krim Y tiap gram:
μ
= ±
t
α2, dk
x SD √n
= 102,44 ± 3,1824 x 1,8709 √4
= 102,44 ± 2,43 = 102,44 + 2,43
= 102,44 – 2,43 Kandungan prednisolon dalam krim Y
tiap gram: = 102,44 ± 2,43 x 2,5 mg
= x 2,5 mg = 2,50 mg
= x 2,5 mg = 2,62 mg
Universitas Sumatera Utara
99
Lampiran 20. Spektrum Serapan Krim X pada Uji Perolehan Kembali
nm. 200.00
250.00 300.00
350.00 400.00
A b
s.
0.0100
0.0000
-0.0100
-0.0200
Universitas Sumatera Utara
100
Lampiran 20. Lanjutan
nm. 200.00
250.00 300.00
350.00 400.00
A b
s. 0.0100
0.0000
-0.0100
-0.0200
Universitas Sumatera Utara
101
Lampiran 20. Lanjutan
nm. 200.00
250.00 300.00
350.00 400.00
A b
s. 0.0100
0.0000
-0.0100
-0.0200
Universitas Sumatera Utara
102
Lampiran 21. Data Hasil Perolehan Kembali Kloramfenikol pada krim X
dengan Metode Penambahan Baku Standard Addition Method No.
Kon- sen-
trasi Penim-
bangan g
Absor- bansi
pada λ=
227,60 nm
Konsentrasi Baku yang
ditambahka n mg
perole- han
kembali Setelah
penambahan baku mg
Sebelum penambahan
baku mg
1. 80
0,585 0,00259
16,4474 11,6181
4,7995 100,62
2. 0,631
0,00273 17,3684
12,5317 4,7995
100,78 3.
0,585 0,00259
16,4474 11,6181
4,7995 100,62
4. 100
0,765 0,00328
20,9868 15,1929
5,9994 96,58
5. 0,765
0,00329 21,0526
15,1929 5,9994
97,67 6.
0,738 0,00324
20,7237 14,6567
5,9994 101,13
7. 120
0,840 0,00369
23,6842 16,6824
7,1993 97,26
8. 0,877
0,00382 24,5395
17,4172 7,1993
98,93 9.
0,876 0,00382
24,5395 17,3974
7,1993 99,21
Rata-rata 99,20
SD 1,71 RSD 1,72
Universitas Sumatera Utara
103
Lampiran 22. Data Hasil Persen Perolehan Kembali Prednisolon pada krim X
dengan Metode Penambahan Baku Standard AdditionMethod No.
Kon- sen-
trasi Penim-
bangan g
Absor- bansi
pada λ=
292,80 nm
Konsentrasi Baku yang
ditambahkan mg
perole- han
kembali Setelah
penambaha n baku mg
Sebelum penambahan
baku mg
1. 80
0,585 0,00017
2,0833 1,4773
0,5978 101,39
2. 0,631
0,00018 2,1875
1,5934 0,5978
99,38 3.
0,585 0,00017
2,0833 1,4773
0,5978 101,39
4. 100
0,765 0,00023
2,7083 1,9318
0,7472 103,92
5. 0,765
0,00023 2,7083
1,9318 0,7472
103,92 6.
0,738 0,00022
2,6042 1,8636
0,7472 99,10
7. 120
0,840 0,00026
3,0208 2,1212
0,8967 100,33
8. 0,877
0,00027 3,1250
2,2146 0,8967
101,53 9.
0,876 0,00027
3,1250 2,2121
0,8967 101,81
Rata-rata 101,42
SD 1,71 RSD 1,69
Universitas Sumatera Utara
104
Lampiran 23.Contoh Perhitungan Persentase Perolehan Kembali recovery Sampel yang digunakan adalah krim X
Tiap gram mengandung kloramfenikol 20 mg dan prednisolon 2,5 mg Berat kesetaraan penimbangan sampel pada penetapan kadar = 20 mg
Perolehan 80
Kloramfenikol 80 = x 20 mg = 16 mg
Krim kloramfenikol 70 = x 16 mg = 11,2 mg
Penimbangan krim setara 11,2 mg kloramfenikol Sampel yang ditimbang
x 1 g = 0,560 g
Baku kloramfenikol 30 = x 16 mg = 4,8 mg
Jumlah prednisolon dalam krim yang ditimbang : =
x 2,5 mg = 1,4 mg Baku prednisolon yang ditambahkan :
= = 0,6 mg
Perolehan100
Kloramfenikol 100 = x 20 mg = 20 mg
Krim kloramfenikol 70 = x 20 mg = 14 mg
mg mg
mgx 20
16 5
, 2
100 30
Universitas Sumatera Utara
105
Lampiran 23. Lanjutan
Penimbangan krim setara 14 mg kloramfenikol Sampel yang ditimbang
x 1 g = 0,700 g
Baku kloramfenikol 30 = x 20 mg = 6 mg
Jumlah prednisolon dalam krim yang ditimbang : =
x 2,5 mg = 1,75 mg Baku prednisolon yang ditambahkan :
= = 0,75 mg
Perolehan 120
Kloramfenikol 120 = x 20 mg = 24 mg
Krim Kloramfenikol 70 = x 24 mg = 16,8 mg
Penimbangan krim setara 16,8 mg kloramfenikol Sampel yang ditimbang
x 1 g = 0,840 g
Baku kloramfenikol 30 = x 24 mg = 7,2 mg
Jumlah prednisolon dalam krim yang ditimbang : =
x 2,5 mg = 2,1 mg Baku prednisolon yang ditambahkan :
= = 0,9 mg
mg mg
mgx 20
20 5
, 2
100 30
mg mg
mgx 20
24 5
, 2
100 30
Universitas Sumatera Utara
106
Lampiran 23. Lanjutan Contoh perhitungan perolehan kembali pada perolehan 80
Misalnya absorbansi analisis Y : Penimbangan sampel
= 0,585 g Kloramfenikol 227,60 nm = 0,00259
Prednisolon 292,80 nm = 0,00017 Faktor Pengenceran Kloramfenikol =
= 1250 Faktor Pengenceran Prednisolon =
= 312,5
A. Kloramfenikol
Persamaan regresi
pada panjang
gelombang analisis
kloramfenikol λ=227,60 nm:
Y = 0,00019X + 0,00009 Konsentrasi kloramfenikol X: Y =
0,00019X + 0,00009 0,00259 =
0,00019X + 0,00009 0,00259 – 0,00009
= 0,00019
X X
= X
= 13,1579
μgmL Konsentrasi sampel setelah penambahan bahan baku C
F
: =
x faktor pengenceran =
x 1250 = 16,4474 mg
Universitas Sumatera Utara
107
Lampiran 23. Lanjutan
Konsentrasi sampel sebelum penambahan bahan baku C
A
: C
A
=
Keterangan : A = berat sampel yang akan ditimbang setara 11,2 mg krim kloramfenikol 70
B = analit kloramfenikol 70 C = kadar rata-rata sampel
C
A
=
x
11,2 mg x 99,30 = 11,6181 mg Jumlah baku yang ditambahkan
= D x E Keterangan : D = Baku kloramfenikol 30 yang ditambahkan
E = kadar baku kloramfenikol dari sertifikat analisis = 4,8 mg x 99,99
= 4,7995 mg Maka perolehan kembali kloramfenikol:
perolehan kembali
=
x 100
perolehan kembali = x 100
= 100,62
Universitas Sumatera Utara
108
Lampiran 23. Lanjutan B. Prednisolon
Persamaan regresi pada panjang gelombang analisis prednisolon λ= 292,80 nm: Y= 0,00003X - 0,00003
Konsentrasi prednisolon X: Y =
0,00003X - 0,00003 0,00017 =
0,00003X - 0,00003 0,00017 + 0,00003
= 0,00003X
X = =
6,6667 μgmL
Konsentrasi awal setelah penambahan bahan baku C
F
: =
x faktor pengenceran
= x 312,5
= 2,0833 mg Konsentrasi sampel sebelum penambahan bahan baku C
A
: =
Keterangan : A = berat sampel yang akan ditimbang setara 11,2 mg krim kloramfenikol 70
B = jumlah prednisolon dalam 0,585 g berat sampel yang akan ditimbang
C = kadar rata-rata sampel C
A
=
x
1,4 mg x 101,01 = 1,4773 mg Jumlah baku yang ditambahkan
= D x E
Universitas Sumatera Utara
109
Lampiran 23. Lanjutan
Keterangan : D = baku prednisolon 30 yang ditambahkan E = kadar baku prednisolon dari sertifikat analisis
= 0,6 mg x 99,63 = 0,5978 mg
Maka perolehan kembali prednisolon: perolehan kembali =
x 100
perolehan kembali = x 100 = 101,39
Universitas Sumatera Utara
110
Lampiran 24. Perhitungan Rata-Rata, Standar Deviasi dan Relatif Standar
Deviasi perolehan kembali kloramfenikol pada krim X
SD =
= = 1,71
RSD =
x
100
=
x 100 = 1,72 No
Kadar perolehan kembali [X]
Xi-X Xi–X
2
1. 100,62
1,42 2,0164
2. 100,78
1,58 2.4964
3. 100,62
1,42 2,0164
4. 96,58
-2,62 6,8644
5. 97.67
-1,53 2,3409
6. 101,13
1,93 3,7249
7. 97,26
-1,94 3,7636
8. 98,93
-0,27 0,0729
9. 99,21
0,01 0,0001
= 99,20
Σ
Xi–X
2
=23,2960
Universitas Sumatera Utara
111
Lampiran 25. Perhitungan Rata-Rata, Standar Deviasi dan Relatif Standar
Deviasi perolehan kembali prednisolon pada krim X
SD =
=
= 1,71
RSD
=
x
100
= x 100
= 1,69 No
Kadar perolehan kembali [X]
Xi-X Xi–X
2
1. 101,39
-0,03 0,0009
2. 99,38
-2,04 4,1616
3. 101,39
-0,03 0,0009
4. 103,92
2,50 6,2500
5. 103,92
2,50 6,2500
6. 99,10
-2,32 5,3840
7. 100,33
1,09 1,1881
8. 101,53
0,11 0,0121
9. 101,81
0,39 0,1521
=101,42
∑
Xi–X
2
=23,3997
Universitas Sumatera Utara
112
Lampiran 26. Daftar Nilai Distribusi t
Universitas Sumatera Utara
113
Lampiran 27. Sertifikat Pengujian Kloramfenikol
Universitas Sumatera Utara
114
Lampiran 28. Sertifikat Pengujian Prednisolon
Universitas Sumatera Utara
46
DAFTAR PUSTAKA
Cairns, D. 2008. Essentials of Pharmaceutical Chemistry. Third Edition. London: Pharmaceutical Press. Halaman 162 - 163.
Dachriyanus. 2004. Analisis Struktur Senyawa Organik Secara Spektroskopi. Padang: Andalas University Press. Halaman 7.
Day, R.A., dan Underwood, A.L. 1998. Quantitative Analysis Sixtth Edition. Penerjemah: Sopyan, I. 2002. Analisis Kimia Kuantitatif Edisi Ke Enam.
Jakarta: Penerbit Erlangga. Halaman 383, 399-404. Ditjen. POM. 1995. Farmakope Indonesia. Edisi IV. Jakarta: Departemen
Kesehatan RI Jakarta. Halaman 189, 692-693. Ditjen. BKAK. 2014. Farmakope Indonesia. Edisi V. Jakarta: Kementerian
Kesehatan RI. Halaman 689, 1049. Gandjar, I.G. dan Rohman, A. 2007. Kimia Farmasi Analisis. Yogyakarta:
Pustaka Pelajar. Halaman 235-236, 240-243 dan 466, 468-469. Harmita, 2004. Petunjuk Pelaksanaan Validasi Metode I dan Cara
Perhitungannya. Majalah Ilmu Kefarmasian I3: 117-135. Moffat, A.C., Osselton, M.D., dan Widdop, B. 2005. Clarke’s Analysis of Drug
and Poisons. Third Edition. London: Pharmaceutical Press. Munson, J.W. 1984. Pharmaceutical Analysis – Part B Modern Methods.
Penerjemah : Harjana. 1991. Analisis Farmasi Metode Modern – Bagian B. Surabaya: Erlangga University Press. Halaman 385.
Nurhidayati L. 2007. Spektrofotometri Derivatif dan Aplikasinya dalam Bidang Farmasi. Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia 52 : 93-99.
Owen, A.J. 1995. Uses of Derivative Spectroscopy Aplication Note UV - Visible Spectroscopy. HP Way: Agilent Technologies.
Gandjar, I.G. dan Rohman, A. 2007. Kimia Farmasi Analisis. Yogyakarta: Pustaka Pelajar. Halaman 235-236, 240-243 dan 466, 468-469.
Satiadarma, K., Mulja, M., Tjahjono, D.H., Kartasasmita, R.E. 2004. Asas Pengembangan Prosedur Analisis. Edisi Pertama. Surabaya: Airlangga
University Press. Halaman 46-49, 86 - 93. Siswandono, dan Soekardjo, B. 2000. Kimia Medisinal 2. Surabaya: Airlangga
University Press. Halaman 426-427.
Universitas Sumatera Utara
47 Sudjana. 2005. Metode Statistika. Bandung: Penerbit Tarsito. Halaman 93, 145,
201, 225. Talsky,G. 1994. Derivative Spectrophotometry. Low and High Order. Weinhem
Germany: VCH Verlagsdesellschaft mbH. Halaman 18, 35. Tan, T.H. dan Rahardja, K. 2007. Obat-Obat Penting Khasiat, Penggunaan, dan
Efek-Efek Sampingnya. Edisi Keenam. Jakarta: PT. Elex Media Komputindo. Halaman 82-83, 686.
USP 30 – NF 25. 2007. United State Pharmacopoeia 30
th
edition. The National Formulary. 25
th
edition. London: The United States Pharmacopoeial Convention. Halaman 1705, 3004.
Universitas Sumatera Utara
19
BAB III METODE PENELITIAN
3.1 Jenis Penelitian
Penelitian ini termasuk jenis penelitian deskriptif dengan metode spektrofotometri derivatif terhadap analisa campuran kloramfenikol dan
prednisolon yang terkandung pada dua sediaan krim.
3.2 Tempat dan Waktu Penelitian
Penelitian ini dilakukan pada bulan Mei sampai dengan Juli 2015 di Laboratorium Penelitian Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara.
3.3 Alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah spektrofotometer UV-Visible dapat dilihat pada Lampiran 3 halaman 51, Personal Computer PC
yang dilengkapi software UV Probe 2.42 UV-1800 Shimadzu, neraca analitik Mettler Toledo, kuvet, kertas saring, bola karet, spatula, alat-alat gelas dan alat-
alat lainnya yang diperlukan dalam penyiapan sampel.
3.4 Bahan
Bahan yang digunakan adalah etanol absolut Moffat, 2005, kloramfenikol BPFI, prednisolon BPFI sertifikat pengujian dapat dilihat pada
Lampiran 27 dan 28 halaman 113 dan 114, Krim X dan Krim Y .
Universitas Sumatera Utara
20
3.5 Pengambilan Sampel
Pengambilan sampel dilakukan secara purposif, yaitu ditentukan atas dasar pertimbangan bahwa sampel yang terambil mempunyai karakteristik yang sama
dengan yang diteliti Sudjana, 2005. Sampel yang digunakan yaitu krim X dan krim Y yang tiap gram mengandung kloramfenikol 20 mg dan prednisolon
2,5 mg.
3.6 Prosedur Penelitian 3.6.1 Pembuatan Larutan Induk Baku dan Larutan Standar