Penetapan Kadar Kloramfenikol dan Prednisolon Dalam Sediaan Krim Secara Spektrofotometri Derivatif Dengan Metode Zero Crossing

Lampiran 1. Krim Klorfeson® dan Chloramfecort-H®

Lampiran 2. Komposisi krim Klorfeson® dan Chloramfecort-H® Daftar Spesifikasi krim

1. Klorfeson® (PT. Molex Ayus Pharmaceutical) No. Reg : DKL9730904629A1

Expire Date : Januari 2017 Komposisi :

Tiap gram krim mengandung: Kloramfenikol Base… 20 mg Prednisolon………….. 2,5 mg 2. Chloramfecort-H® (PT. Kimia Farma)

No. Reg : DKL7212416829A1 Expire Date : Desember 2016 Komposisi :

Tiap gram mengandung: Kloramfenikol Base ……... 20 mg Prednisolone……… 2,5 mg

Lampiran 3. Gambar Alat

Gambar 3 Spektrofotometer UV-Vis (Shimadzu 1800)

Gambar 4 Neraca analitik (Mettler Toledo)

Lampiran 4. Bagan Alir Prosedur Penelitian

dimasukkan ke labu 25mL dan dicukupkan dengan etanol absolut sampai garis tanda dimasukkan ke labu 25mL dan dicukupkan etanol absolut sampai garis tanda dimasukkan ke labu 25mL dan dicukupkan etanol absolut sampai garis tanda dimasukkan ke labu 25mL dan dicukupkan etanol absolut sampai garis tanda diambil 5 mL

dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 mL

dilarutkan dan dicukupkan dengan etanol absolut

LIB II kloramfenikol 100 μg/mL

12 μg/mL 14 μg/mL 16 μg/mL 18 μg/mL

diambil 3,0 mL diambil 3,5 mL diambil 4 mL

diambil 5,0 mL

diambil 4,5 mL

diukur serapan Kloramfenikol

ditimbang 50 mg

dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 mL

dilarutkan dan dicukupkan dengan etanol absolut

Lampiran 4. (Lanjutan) dimasukkan ke labu 25mL dan dicukupkan etanol absolut sampai garis tanda dimasukkan ke labu 25mL dan dicukupkan etanol absolut sampai garis tanda dimasukkan ke labu 25mL dan dicukupkan etanol absolut sampai garis tanda dimasukkan ke labu 25mL dan dicukupkan etanol absolut sampai garis tanda diambil 5 mL

dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 mL

dilarutkan dan dicukupkan dengan etanol absolut

LIB II Prednisolon 100 μg/mL

8 μg/mL 12 μg/mL 14 μg/mL 16 μg/mL

diambil 2,0 mL diambil 3,0 mL diambil 3,5 mL diambil 4,0 mL Prednisolon

ditimbang 50 mg

dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 mL

dilarutkan dan dicukupkan dengan etanol absolut

Lampiran 4. (Lanjutan)

Persamaan Regresi

dibuat kurva kalibrasi Larutan Standar Kloramfenikol

(12; 14; 16; 18; 20 μg/mL )

diukur serapan pada λ 200-400 nm

ditransformasikan ke serapan derivat pertama ditransformasikan ke serapan derivat kedua ditentukan zero crossing

ditentukan panjang gelombang analisis

Lampiran 4. (Lanjutan)

Persamaan Regresi

dibuat kurva kalibrasi Larutan Standar Prednisolon

(8; 10; 12; 14;16 μg/mL)

diukur serapan pada λ 200-400 nm ditransformasikan ke serapan derivat pertama

ditransformasikan ke serapan derivat kedua

ditentukan zero crossing ditentukan panjang gelombang analisis

Lampiran 4. (Lanjutan)

ditimbang

dikeluarkan isi tube, kemudian ditimbang tube kosong

ditimbang setara 20 mg kloramfenikol

dihitung kesetaraan prednisolon yang terkandung didalamnya (penimbangan dilakukan sebanyak 6 kali pengulangan)

dimasukkan kedalam labu tentukur 50 mL dilarutkan dengan etanol absolut

dihomogenkan dengan sonikator selama 15 menit dicukupkan dengan etanol absolut sampai garis tanda dihomogenkan

disaring

dibuang ± 10 mL filtrat pertama filtrat selanjutnya ditampung dipipet 2 mL

ditambahkan 6 ml larutan prednisolon (untuk adisi) dimasukkan kedalam labu tentukur 50 mL

dicukupkan dengan etanol absolut sampai garis tanda diukur pada λ 227,60 nm untuk kloramfenikol dan

292,80 nm untuk prednisolon 10 tube

Lampiran 5. Spektrum Serapan Baku Kloramfenikol dan Baku Prednisolon a. Kloramfenikol

n m.

2 0 0 .0 0 2 5 0 .0 0 3 0 0 .0 0 3 5 0 .0 0 4 0 0 .0 0

Ab

s.

1 .5 0 0 0

1 .0 0 0 0

0 .5 0 0 0

Lampiran 5. (Lanjutan)

n m.

2 0 0 .0 0 2 5 0 .0 0 3 0 0 .0 0 3 5 0 .0 0 4 0 0 .0 0

Ab

s.

1 .5 0 0 0

1 .0 0 0 0

0 .5 0 0 0

Lampiran 5. (Lanjutan) b. Prednisolon

nm.

200.00 250.00 300.00 350.00 400.00

A

bs.

1.0000

0.5000

0.0000

Lampiran 5. (Lanjutan)

nm.

200.00 250.00 300.00 350.00 400.00

A

bs.

1.0000

0.5000

0.0000

Lampiran 6. Spektrum Serapan Derivat Pertama Baku Kloramfenikol dan Baku Prednisolon

a. Kloramfenikol

nm.

200.00 250.00 300.00 350.00 400.00

Ab

s.

0.0500

0.0000

Lampiran 6. (Lanjutan)

nm.

200.00 250.00 300.00 350.00 400.00

A

bs.

0.0500

0.0000

Lampiran 6. (Lanjutan) b. Prednisolon

n m.

2 0 0 .0 0 2 5 0 .0 0 3 0 0 .0 0 3 5 0 .0 0 4 0 0 .0 0

Ab

s.

0 .0 2 0 0

0 .0 1 0 0

0 .0 0 0 0

-0 .0 1 0 0

-0 .0 2 0 0

Lampiran 6. (Lanjutan)

n m.

2 0 0 .0 0 2 5 0 .0 0 3 0 0 .0 0 3 5 0 .0 0 4 0 0 .0 0

Ab

s.

0 .0 2 0 0

0 .0 1 0 0

0 .0 0 0 0

-0 .0 1 0 0

-0 .0 2 0 0

Lampiran 7. Spektrum Serapan Derivat Kedua Baku Kloramfenikol dan Baku Prednisolon

a. Kloramfenikol

nm.

200.00 250.00 300.00 350.00 400.00

Ab

s.

0.0100

0.0050

0.0000

-0.0050

Lampiran 7. (Lanjutan)

n m.

2 0 0 .0 0 2 5 0 .0 0 3 0 0 .0 0 3 5 0 .0 0 4 0 0 .0 0

Ab

s.

0 .0 1 0 0

0 .0 0 5 0

0 .0 0 0 0

-0 .0 0 5 0

Lampiran 7. (Lanjutan) b. Prednisolon

nm.

200.00 250.00 300.00 350.00 400.00

A

bs.

0.0050

0.0000

Lampiran 7. (Lanjutan)

nm.

200.00 250.00 300.00 350.00 400.00

A

bs.

0.0050

0.0000

Lampiran 8. Spektrum Serapan Panjang Gelombang Analisis Kloramfenikol dan Prednisolon

nm.

200.00 250.00 300.00 350.00 400.00

A

bs.

0.0100

0.0000

-0.0100

Lampiran 9. Data Kalibrasi Kloramfenikol BPFI, Persamaan Regresi dan Koefisien Korelasi

Kalibrasi serapan derivat kedua kloramfenikol pada panjang gelombang 227,60nm No. Konsentrasi (μg/mL) (X) Absorbansi (Y)

1. 0,0000 0,00000

2. 12,0000 0,00240

3. 14,0000 0,00285

4. 16,0000 0,00311

5. 18,0000 0,00346

6. 20,0000 0,00390

Perhitungan persamaan garis regresi

No. X Y XY X2` Y2

1. 0,00000 0,00000 0,00000 0,00000 0,0000000000 2. 12,00000 0,00240 0,02880 144,00000 0,00000576 3. 14,00000 0,00285 0,03990 196,00000 0,00000812 4. 16,00000 0,00311 0,04976 256,00000 0,00000967 5. 18,00000 0,00346 0,06228 324,00000 0,00001197 6. 20,00000 0,00390 0,07800 400,00000 0,00001521

ΣX = 80 =13,33

ΣY = 0,01572 = 0,00262

ΣXY = 0,25874

ΣY2 = 1320

Σ Y2 = 0,00005074

Lampiran 9 . (Lanjutan)

Perhitungan Koefisien Korelasi ( )

=

0,9990

Maka, koefisien korelasi dari data kalibrasi serapan derivat kedua kloramfenikol pada panjang gelombang 227,60 nm adalah 0,9990.

Lampiran 10. Data Kalibrasi Prednisolon BPFI, Persamaan Regresi dan Koefisien Korelasi

Kalibrasi serapan derivat kedua prednisolon pada panjang gelombang 292,80 nm No. Konsentrasi (μg/mL) (X) Absorbansi (Y)

1. 0,00000 0,00000

2. 8,00000 0,00023

3. 10,00000 0,00027

4. 12,00000 0,00032

5. 14,00000 0,00038

6. 16,00000 0,00044

Perhitungan Persamaan Garis Regresi

No. X Y XY` X2 Y2

1. 0,00000 0,00000 0,00000 0,00000 0,00000 2. 8,00000 0,00023 0,00184 64,00000 5,0.10-8 3. 10,00000 0,00027 0,00270 100,00000 7,0.10-8 4. 12,00000 0,00032 0,00384 144,00000 10.10-8 5. 14,00000 0,00038 0,00532 196,00000 14.10-8 6. 16,00000 0,00044 0,00704 256,00000 19.10-8

ΣX = 60

=10,00

ΣY = 0,00164

= 0,00027

ΣXY =

0,02074 ΣX 2

= 760 ΣY2 = 57.10-8

Lampiran 10. (Lanjutan)

Perhitungan Koefisien Korelasi ( )

Maka, koefisien korelasi dari data kalibrasi serapan derivat kedua Prednisolon pada panjang gelombang 292,80 nm adalah 0,9977.

Lampiran 11. Perhitungan Batas Deteksi (Limit of Detection, LOD) dan Batas Kuantitasi (Limit of Quantitation, LOQ) Kloramfenikol

Persamaan garis regresi kloramfenikol adalah

No. X Y Yi Y-Yi (10-5) (Y-Yi)2 (10-10)

1 0,00000 0,00000 0,00009 -9 81

2 12,00000 0,00240 0,00237 3 9

3 14,00000 0,00285 0,00275 10 100

4 16,00000 0,00311 0,00313 -2 4

5 18,00000 0,00346 0,00351 -5 25

6 20,00000 0,00390 0,00389 1 1

Σ(Y-Yi)2 220

7,416.10-5

1,1709 μg/mL

Lampiran 12. Perhitungan Batas Deteksi (Limit of Detection, LOD) dan Batas Kuantitasi (Limit of Quantitation, LOQ) Prednisolon

Persamaan garis regresi prednisolon adalah Y = 0,00003X - 0,00003

No. X Y Yi Y-Yi (10-5) (Y-Yi)2 (10-10)

1 0,00000 0,00000 -0,00003 3 9

2 8,00000 0,00023 0,00021 2 4

3 10,00000 0,00027 0,00027 0 0

4 12,00000 0,00032 0,00033 -1 1

5 14,00000 0,00038 0.00039 -1 1

6 16,00000 0,00044 0,00045 -1 1

Σ (Y-Yi)2 16 2,0.10-5

2 μg/mL

Lampiran 13. Spektrum Serapan Derivat Kedua Krim

nm.

200.00 250.00 300.00 350.00 400.00

A

b

s.

0.0100

0.0000

-0.0100

Lampiran 13. (Lanjutan)

nm.

200.00 250.00 300.00 350.00 400.00

A

b

s.

0.0100

0.0000

-0.0100

Lampiran 14. Hasil Analisis Kadar Kloramfenikol dan Prednisolon dalam sediaan Krim

1. Kadar kloramfenikol dalam sediaan krim (Tiap gram mengandung 20 mg kloramfenikol dalam satu tube)

Nama Sediaan Penimba-ngan (g) Setara (mg) Absorbansi pada λ = 227,6 nm

Konsentra- si teoritis

(μg/mL)

Konsentra-si kloramfeni

kol (μg/mL)

Kadar (%)

Kadar (mg)

KRIM X

0,9982 19,964 0,00313 15,971 16,000 100,17 20,03 1,0253 20,506 0,00319 16,405 16,316 99,45 19,89 0,9980 19,960 0,00304 15,968 15,526 97,22 19,44 0,9981 19,962 0,00307 15,970 15,684 98,20 19,64 1,0350 20,700 0,00319 16,560 16,316 98,52 19,70 0,9983 19,966 0,00313 15,973 16,000 100,16 20,03

KRIM Y

1,0253 20,506 0,00320 16,405 16,368 99,77 19,95 1,0253 20,506 0,00314 16,405 16,053 97,84 19,57 0,9980 19,960 0,00307 15,968 15,684 98,21 19,64 0,9981 19,962 0,00320 15,970 16,368 102,48 20,50 0,9740 19,480 0,00309 15,584 15,789 101,31 20,26 1,0560 21,120 0,00320 16,896 16,368 96,87 19,37

Lampiran 14. (Lanjutan)

2. Kadar prednisolon dalam sediaan krim (Tiap gram mengandung 2,5 mg prednisolon dalam satu tube)

Nama Sediaan Penimba-ngan (g) Setara (mg) Absorbansi pada λ = 292,8 nm

Konsentra-si teoritis (μg/mL)

Konsentrasi Prednisolon

(μg/mL)

Kadar (%)

Kadar (mg)

KRIM X

0,9982 2,496 0,00021 7,996 8,000 99,67 2,49

1,0253 2,563 0,00022 8,051 8,333 103,13 2,58 0,9980 2,495 0,00022 7,996 8,333 103,83 2,60

0,9981 2,495 0,00021 7,996 8,000 99,68 2,49

1,0350 2,588 0,00022 8,070 8,333 102,88 2,57

0,9983 2,496 0,00021 7,997 8,000 99,67 2,49

KRIM Y

1,0253 2,563 0,00022 8,051 8,333 103,13 2,58 1,0253 2,563 0,00022 8,051 8,333 103,13 2,58

0,9980 2,495 0,00021 7,996 8,000 99,68 2,49

0,9981 2,495 0,00022 7,996 8,333 103,83 2,60

0,9740 2,435 0,00022 7,948 7,667 96,10 2,40

Lampiran 15. Contoh Perhitungan Kadar Kloramfenikol dan Prednisolon dalam Sediaan Krim

i.) Data penimbangan tube krim X dan krim Y Berat 10 tube krim X = 122,395 g Berat 10 tube kosong = 21,539 g

Berat krim X = 122,395 g – 21,539 g = 100,855 g Berat 10 tube krim Y = 127,325 g

Berat 10 tube kosong = 27,368 g

Berat krim Y = 127,325 g – 27,368 g = 99,958 g ii.) Contoh perhitungan kadar untuk kloramfenikol dan prednisolon iia. Perhitungan kadar untuk kloramfenikol

Sediaan krim yang digunakan krim X dan krim Y yang tiap gram mengandung kloramfenikol 20 mg dan prednisolon 2,5 mg

Ditimbang krim setara dengan 20 mg kloramfenikol, maka jumlah krim yang ditimbang adalah;

x

1 x 1 g = 1 g

Dilarutkan 1 g krim dalam etanol absolut dalam labu tentukur 50 mL sampai garis tanda. Larutan kemudian dihomogenkan, disaring, lebih kurang 10 mL filtrat pertama dibuang. Filtrat selanjutnya ditampung (larutan A).

Lampiran 15. (Lanjutan)

Konsentrasi kloramfenikol larutan B = = 16 μg/mL

iib. Perhitungan kadar untuk prednisolon

Dihitung kesetaraan prednisolon yang terkandung dalam 1g krim.

x

2 x ( 2,5 mg) = 2,5 mg

Konsentrasi prednisolon larutan A = x 1000 μg = 50 μg/mL

Kemudian dari larutan A, dipipet 2,0 mL dan dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 mL dan diencerkan dengan etanol absolut hingga garis tanda (larutan B).

Konsentrasi prednisolon larutan B = = 2 μg/mL

Konsentrasi analisis untuk prednisolon 8 μg/mL, sedangkan konsentrasi dalam larutan B adalah 2,0 μg/mL. Maka untuk mendapatkan konsentrasi analisis dilakukan penambahan baku prednisolon untuk metode adisi. Penambahan baku dilakukan dengan pembuatan LIB konsentrasi 50 μg/mL.

Konsentrasi yang dibutuhkan dari adisi = 8 μg/mL - 2 μg/mL = 6,0 μg/mL

Lampiran 15. (Lanjutan)

Jadi konsentrasi Prednisolon = = 8 μg/mL

iii.)Contoh perhitungan kadar kloramfenikol dan prednisolon dari krim X: iiia. Perhitungan kadar untuk kloramfenikol

Berat krim salep yang ditimbang adalah 0,9982 g, maka terlebih dahulu dihitung kesetaraan kloramfenikol.

Kesetaraan kloramfenikol = x (20 mg) = 19,964 mg Konsentrasi kloramfenikol = x 1000 μg = 399,28 μg/mL Konsentrasi teoritis kloramfenikol = x 2 mL

= 15,971 μg/mL

Absorbansi kloramfenikol pada derivat kedua pada panjang gelombang 227,60 nm adalah 0,00313

Kadar kloramfenikol dihitung dari persamaan regresi pada panjang gelombang analisis kloramfenikol Y = 0,00019X + 0,00009

Konsentrasi kloramfenikol: Y = 0,00019X + 0,00009

0,00313 = 0,00019X + 0,00009 0,00313 - 0,00009 = 0,00019X

Lampiran 15. (Lanjutan)

iiib. Perhitungan kadar untuk prednisolon

Untuk prednisolon, berat krim salep yang ditimbang adalah 0,9982 g, maka terlebih dahulu dihitung kesetaraan prednisolon.

Kesetaraan prednisolon = x ( 2,5 mg) = 2,495 mg Konsentrasi prednisolon = x 1000 μg = 49,91 μg/mL Konsentrasi teoritis prednisolon = x 8 mL= 7,996 μg/mL

Absorbansi prednisolon pada derivat kedua pada panjang gelombang 292,80 nm adalah 0,00021.

Kadar prednisolon dihitung dari persamaan regresi pada panjang gelombang analisis prednisolon Y = 0,00003X - 0,00003

Konsentrasi prednisolon : Y = 0,00003X - 0,00003

0,00021 = 0,00003X - 0,00003 0,00021+0,00003 = 0,00003X

X =

X = 8,0 μg/mL Kadar prednisolon = x 99,63 %

Lampiran 16. Perhitungan Statistik Kloramfenikol pada krim X

SD =

=

=

= 1,1784

Pada interval kepercayaan 95% dengan nilai α = 0,05, dk = n-1= 5, maka t_(α/2,dk) = 2,5706

Data diterima jika t hitung < t tabel

t hitung 1 = = 2,5289

t hitung 2 = = 1,0324

No. X Kadar (%)

2

1 100,17 1,22 1,4884

2 99,45 0,50 0,2401

3 97,22 -1,73 2,9929

4 98,20 -0,75 0,5625

5 98,52 -0,43 0,1849

6 100,16 1,21 1,4641

Lampiran 16. (Lanjutan)

t hitung 4 = = 1,5659

t hitung 5 = = 0,9007

t hitung 6 = = 2,5081

Karena data ke-3 ditolak maka dilakukan perhitungan tanpa menyertakan data ke-3.

Lampiran 16. (Lanjutan)

SD =

=

=

= 0,9134

Pada interval kepercayaan 95% dengan nilai α = 0,05, dk = n-1= 4, maka t_(α/2,dk) = 2,7764

Data diterima jika t hitung < t tabel

t hitung 1 = = 2,1299

t hitung 2 = = 0,3672

t hitung 3 = = 2,6929

t hitung 4 = = 1,9095

t hitung 5 = = 2,1054

No. X Kadar (%)

2

1 100,17 0,87 0,7569

2 99,45 0,15 0,0225

3 98,20 -1,10 1,2100

4 98,52 -0,78 0,6084

5 100,16 0,86 0,7396

Lampiran 16. (Lanjutan)

Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa semua t hitung < t tabel, maka semua data tersebut diterima.

Kadar kloramfenikol dalam krim X Tiap gram:

μ

= ± (

t

_{(α/2, dk}) x SD/√n)

= 99,30 ± (2,7764 x 0,9134/√5) = (99,30 ± 1,13)%

= (99,30 + 1,13)% = (99,30 – 1,13)%

Kandungan kloramfenikol dalam krim X tiap gram: = (99,30 ± 1,13)% x 20 mg

= x 20 mg = 19,63 mg

Lampiran 17. Perhitungan Statistik Prednisolon pada Krim X

SD =

=

=

= 1,9998

Pada interval kepercayaan 95% dengan nilai α = 0,05, dk = n-1= 5, maka t_(α/2,dk) = 2,5706

Data diterima jika t hitung < t tabel

t hitung 1 = =

t hitung 2 = = 2,0206

No. X

Kadar (%) 2

1 99,67 -1,81 3,2761

2 103,13 1,65 2,7225

3 103,83 2,35 5,5225

4 99,68 -1,80 3,2400

5 102,88 1,40 1,960

6 99,67 -1,81 3,2761

Lampiran 17. (Lanjutan)

t hitung 4 = = 2,2043

t hitung 5 = = 1,7144

t hitung 6 = = 2,2165

Karena data ke-3 ditolak maka dilakukan perhitungan tanpa menyertakan data ke-3

Lampiran 17. (Lanjutan)

SD =

=

=

= 1,8269

Pada interval kepercayaan 95% dengan nilai α = 0,05, dk = n-1= 4, maka t(α/2,dk) = 2,7764

Data diterima jika t hitung < t tabel

t hitung 1 = = 1,6352

t hitung 2 = = 2,5997

t hitung 3 = = 1,6230

t hitung 4 = = 2,2937

No. X

Kadar (%)

2

1 99,67 1,34 1,7956

2 103,13 2,12 4,4494

3 99,68 -1,33 1,7689

4 102,88 1,87 3,497

5 99,67 -1,34 1,7956

101,01 Σ 2

Lampiran 17. (Lanjutan)

Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa semua t hitung < t tabel, maka semua data tersebut diterima.

Kadar prednisolon dalam krim X tiap gram:

μ

= ± (

t

_{(α/2, dk}) x SD/√n)

= 101,01 ± (2,7764 x 1,8269/√5) = (101,01 ± 2,27)%

= (101,01 + 2,27)% = (101,01 – 2,27)%

Kandungan prednisolon dalam krim X tiap gram: = (101,01 ± 2,27)% x 2,5 mg

= x 2,5 mg = 2,47 mg

Lampiran 18. Perhitungan Statistik Kloramfenikol pada krim Y

SD =

=

=

= 2,1735

Pada interval kepercayaan 95% dengan nilai α = 0,05, dk = n-1= 5, maka t_(α/2,dk) = 2,5706

Data diterima jika t hitung < t tabel

t hitung 1 = = 0,3944

t hitung 2

=

= 1,769

No. X

Kadar (%)

2

1 99,77 0,35 0,1225

2 97,84 -1,58 2,4964

3 98,21 -1,21 1,4400

4 102,49 3,07 9,4249

5 101,31 1,89 3,5721

6 96,87 -2,55 6,5025

Lampiran 18. (Lanjutan)

t hitung 5 = = 2,1296

t hitung 6 = = 2,8732 (ditolak)

Karena data ke-4 dan data ke-6 ditolak maka dilakukan perhitungan tanpa menyertakan data ke-4 dan data ke-6

Lampiran 18. (Lanjutan)

SD =

=

=

= 1,589

Pada interval kepercayaan 95% dengan nilai α = 0,05, dk = n-1= 3, maka t_(α/2,dk) = 3,1824

Data diterima jika t hitung < t tabel

t hitung 1 = = 0,6136

t hitung 2 = = 1,8156

t hitung 3 = = 1,3499

t hitung 4 = = 2,5519

Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa semua t hitung < t tabel, maka semua data tersebut diterima.

No. X

Kadar (%)

2

1 99,77 0,49 0,2401

2 97,84 -1,44 2,0736

3 98,21 -1,07 1,1449

4 101,31 2,03 4,1209

Lampiran 18. (Lanjutan)

Kadar kloramfenikol dalam krim Y tiap gram:

μ

= ± (

t

_{(α/2, dk}) x SD/√n)

= 99,28 ± (3,1824 x 1,589/√4) = (99,28 ± 2,06)%

= (99,28 + 2,06)% = (99,28 – 2,06)%

Kandungan kloramfenikol dalam krim Y tiap gram: = (99,28 ± 2,06)% x 20 mg

= x 20 mg = 19,44 mg

Lampiran 19. Perhitungan Statistik Prednisolon pada krim Y

SD =

=

=

= 3,6275

Pada interval kepercayaan 95% dengan nilai α = 0,05, dk = n-1= 5, maka t(α/2,dk) = 2,5706

Data diterima jika t hitung < t tabel

t hitung 1 = = 0,7291

t hitung 2 = = 0,7291

No. X

Kadar (%)

1 103,13 1,08 1,1664

2 103,13 1,08 1,1664

3 99,68 -2,37 5,6169

4 103,83 1,78 3,1684

5 96,10 -5,95 35,4025

6 106,44 4,39 19,2721

Lampiran 19. (Lanjutan)

t hitung 4 = = 1,2017

t hitung 5 = = 4,0170 (ditolak)

t hitung 6 = = 2,9638 (ditolak)

Karena data ke-5 dan data ke-6 ditolak maka dilakukan perhitungan tanpa menyertakan data ke-5 dan data ke-6

Lampiran 19. (Lanjutan)

SD =

=

=

= 1,8709

Pada interval kepercayaan 95% dengan nilai α = 0,05, dk = n-1= 3, maka t_(α/2,dk) = 3,1824

Data diterima jika t hitung < t tabel

t hitung 1 = = 0,7349

t hitung 2 = = 0,7349

t hitung 3 = = 2,9531

t hitung 4 = = 1,4832

Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa semua t hitung < t tabel, maka

No. X

Kadar (%)

1 103,13 0,69 0,4761

2 103,13 0,69 0,4761

3 99,68 -2,76 7,6176

4 103,83 1,39 1,9321

Lampiran 19. (Lanjutan)

Kadar prednisolon dalam krim Y tiap gram:

μ

= ± (

t

_{(α/2, dk}) x SD/√n)

= 102,44 ± (3,1824 x 1,8709/√4) = (102,44 ± 2,43)%

= (102,44 + 2,43)% = (102,44 – 2,43)%

Kandungan prednisolon dalam krim Y tiap gram: = (102,44 ± 2,43)% x 2,5 mg

= x 2,5 mg = 2,50 mg

Lampiran 20. Spektrum Serapan Krim X pada Uji Perolehan Kembali

nm.

200.00 250.00 300.00 350.00 400.00

A

b

s.

0.0100

0.0000

-0.0100

Lampiran 20. (Lanjutan)

nm.

200.00 250.00 300.00 350.00 400.00

A

b

s.

0.0100

0.0000

-0.0100

Lampiran 20. (Lanjutan)

nm.

200.00 250.00 300.00 350.00 400.00

A

b

s.

0.0100

0.0000

-0.0100

Lampiran 21. Data Hasil % Perolehan Kembali Kloramfenikol pada krim X dengan Metode Penambahan Baku (Standard Addition Method)

No.

Kon- sen-trasi (%) Penim-bangan (g) Absor-bansi pada λ= 227,60 nm

Konsentrasi Baku yang

ditambahka n (mg) % perole-han kembali Setelah penambahan baku (mg) Sebelum penambahan baku (mg) 1. 80

0,585 0,00259 16,4474 11,6181 4,7995 100,62

2. 0,631 0,00273 17,3684 12,5317 4,7995 100,78

3. 0,585 0,00259 16,4474 11,6181 4,7995 100,62

4.

100

0,765 0,00328 20,9868 15,1929 5,9994 96,58

5. 0,765 0,00329 21,0526 15,1929 5,9994 97,67

6. 0,738 0,00324 20,7237 14,6567 5,9994 101,13

7.

120

0,840 0,00369 23,6842 16,6824 7,1993 97,26

8. 0,877 0,00382 24,5395 17,4172 7,1993 98,93

9. 0,876 0,00382 24,5395 17,3974 7,1993 99,21

Rata-rata ( ) 99,20

(SD) 1,71 (RSD) (%) 1,72

Lampiran 22. Data Hasil Persen Perolehan Kembali Prednisolon pada krim X dengan Metode Penambahan Baku (Standard AdditionMethod)

No.

Kon- sen-trasi (%) Penim-bangan (g) Absor-bansi pada λ= 292,80 nm

Konsentrasi Baku yang

ditambahkan (mg) % perole-han kembali Setelah penambaha n baku (mg)

Sebelum penambahan

baku (mg)

1.

80

0,585 0,00017 2,0833 1,4773 0,5978 101,39

2. 0,631 0,00018 2,1875 1,5934 0,5978 99,38

3. 0,585 0,00017 2,0833 1,4773 0,5978 101,39

4.

100

0,765 0,00023 2,7083 1,9318 0,7472 103,92

5. 0,765 0,00023 2,7083 1,9318 0,7472 103,92

6. 0,738 0,00022 2,6042 1,8636 0,7472 99,10

7.

120

0,840 0,00026 3,0208 2,1212 0,8967 100,33

8. 0,877 0,00027 3,1250 2,2146 0,8967 101,53

9. 0,876 0,00027 3,1250 2,2121 0,8967 101,81

Rata-rata ( ) 101,42

(SD) 1,71 (RSD) (%) 1,69

Lampiran 23.Contoh Perhitungan Persentase Perolehan Kembali (%recovery) Sampel yang digunakan adalah krim X

Tiap gram mengandung kloramfenikol 20 mg dan prednisolon 2,5 mg Berat kesetaraan penimbangan sampel pada penetapan kadar = 20 mg Perolehan 80%

Kloramfenikol 80% = x 20 mg = 16 mg

Krim kloramfenikol 70% = x 16 mg = 11,2 mg Penimbangan krim setara 11,2 mg kloramfenikol Sampel yang ditimbang x 1 g = 0,560 g

Baku kloramfenikol 30% = x 16 mg = 4,8 mg Jumlah prednisolon dalam krim yang ditimbang : = x (2,5 mg) = 1,4 mg

Baku prednisolon yang ditambahkan : =

= 0,6 mg Perolehan100%

Kloramfenikol 100% = x 20 mg = 20 mg     mg mg mgx 20 16 5 , 2 100 30

Lampiran 23. (Lanjutan)

Penimbangan krim setara 14 mg kloramfenikol Sampel yang ditimbang x 1 g = 0,700 g

Baku kloramfenikol 30% = x 20 mg = 6 mg Jumlah prednisolon dalam krim yang ditimbang : = x ( 2,5 mg) = 1,75 mg

Baku prednisolon yang ditambahkan :

= = 0,75 mg

Perolehan 120%

Kloramfenikol 120% = x 20 mg = 24 mg

Krim Kloramfenikol 70% = x 24 mg = 16,8 mg Penimbangan krim setara 16,8 mg kloramfenikol Sampel yang ditimbang x 1 g = 0,840 g

Baku kloramfenikol 30% = x 24 mg = 7,2 mg Jumlah prednisolon dalam krim yang ditimbang : = x (2,5 mg) = 2,1 mg

    mg mg mgx 20 20 5 , 2 100 30

Lampiran 23. (Lanjutan)

Contoh perhitungan % perolehan kembali pada perolehan 80% Misalnya absorbansi analisis (Y) :

Penimbangan sampel = 0,585 g Kloramfenikol (227,60 nm) = 0,00259 Prednisolon (292,80 nm) = 0,00017

Faktor Pengenceran Kloramfenikol = = 1250 Faktor Pengenceran Prednisolon = = 312,5 A. Kloramfenikol

Persamaan regresi pada panjang gelombang analisis kloramfenikol (λ=227,60 nm):

Y = 0,00019X + 0,00009

Konsentrasi kloramfenikol (X): Y = 0,00019X + 0,00009 0,00259 = 0,00019X + 0,00009 0,00259 – 0,00009 = 0,00019X

X =

X = 13,1579 μg/mL Konsentrasi sampel setelah penambahan bahan baku (CF):

Lampiran 23. (Lanjutan)

Konsentrasi sampel sebelum penambahan bahan baku (CA): (CA)

=

Keterangan : A = berat sampel yang akan ditimbang setara 11,2 mg krim kloramfenikol 70%

B = analit kloramfenikol 70% C = kadar rata-rata sampel

(CA) =

x

(11,2 mg x 99,30%) = 11,6181 mg Jumlah baku yang ditambahkan ( ) = D x E

Keterangan : D = Baku kloramfenikol 30% (yang ditambahkan) E = % kadar baku kloramfenikol dari sertifikat analisis ( ) = 4,8 mg x 99,99%

= 4,7995 mg

Maka % perolehan kembali kloramfenikol: % perolehan kembali

=

x 100 %

% perolehan kembali = x 100%

Lampiran 23. (Lanjutan) B. Prednisolon

Persamaan regresi pada panjang gelombang analisis prednisolon (λ= 292,80 nm): Y= 0,00003X - 0,00003

Konsentrasi prednisolon (X): Y = 0,00003X - 0,00003 0,00017 = 0,00003X - 0,00003 0,00017 + 0,00003 = 0,00003X

X = = 6,6667μg/mL Konsentrasi awal setelah penambahan bahan baku (CF):

= x faktor pengenceran

= x 312,5

= 2,0833 mg

Konsentrasi sampel sebelum penambahan bahan baku (CA): =

Keterangan : A = berat sampel yang akan ditimbang setara 11,2 mg krim kloramfenikol 70%

B = jumlah prednisolon dalam 0,585 g berat sampel yang akan ditimbang

Lampiran 23. (Lanjutan)

Keterangan : D = baku prednisolon 30% (yang ditambahkan) E = % kadar baku prednisolon dari sertifikat analisis ( ) = 0,6 mg x 99,63%

= 0,5978 mg

Maka % perolehan kembali prednisolon: % perolehan kembali = x 100 %

Lampiran 24. Perhitungan Rata-Rata, Standar Deviasi dan Relatif Standar Deviasi perolehan kembali kloramfenikol pada krim X

SD =

=

= 1,71

RSD =

x

100%

=

x 100% = 1,72% No Kadar perolehan

kembali [X](%) Xi-X (Xi–X)2

1. 100,62 1,42 2,0164

2. 100,78 1,58 2.4964

3. 100,62 1,42 2,0164

4. 96,58 -2,62 6,8644

5. 97.67 -1,53 2,3409

6. 101,13 1,93 3,7249

7. 97,26 -1,94 3,7636

8. 98,93 -0,27 0,0729

9. 99,21 0,01 0,0001

Lampiran 25. Perhitungan Rata-Rata, Standar Deviasi dan Relatif Standar Deviasi perolehan kembali prednisolon pada krim X

SD =

=

= 1,71

RSD

=

x 100%

= x 100%

No

Kadar perolehan

kembali [X] (%) Xi-X (Xi–X)2

1. _101,39 -0,03 0,0009

2. _99,38 -2,04 4,1616

3. _101,39 -0,03 0,0009

4. _103,92 2,50 6,2500

5. _103,92 2,50 6,2500

6. _99,10 -2,32 5,3840

7. _100,33 1,09 1,1881

8. _101,53 0,11 0,0121

9. _101,81 0,39 0,1521

DAFTAR PUSTAKA

Cairns, D. (2008). Essentials of Pharmaceutical Chemistry. Third Edition. London: Pharmaceutical Press. Halaman 162 - 163.

Dachriyanus. (2004). Analisis Struktur Senyawa Organik Secara Spektroskopi. Padang: Andalas University Press. Halaman 7.

Day, R.A., dan Underwood, A.L. (1998). Quantitative Analysis Sixtth Edition. Penerjemah: Sopyan, I. (2002). Analisis Kimia Kuantitatif Edisi Ke Enam. Jakarta: Penerbit Erlangga. Halaman 383, 399-404.

Ditjen. POM. (1995). Farmakope Indonesia. Edisi IV. Jakarta: Departemen Kesehatan RI Jakarta. Halaman 189, 692-693.

Ditjen. BKAK. (2014). Farmakope Indonesia. Edisi V. Jakarta: Kementerian Kesehatan RI. Halaman 689, 1049.

Gandjar, I.G. dan Rohman, A. (2007). Kimia Farmasi Analisis. Yogyakarta: Pustaka Pelajar. Halaman 235-236, 240-243 dan 466, 468-469.

Harmita, (2004). Petunjuk Pelaksanaan Validasi Metode I dan Cara Perhitungannya. Majalah Ilmu Kefarmasian I(3): 117-135.

Moffat, A.C., Osselton, M.D., dan Widdop, B. (2005). Clarke’s Analysis of Drug

and Poisons. Third Edition. London: Pharmaceutical Press.

Munson, J.W. (1984). Pharmaceutical Analysis – Part B Modern Methods. Penerjemah : Harjana. (1991). Analisis Farmasi Metode Modern – Bagian

B. Surabaya: Erlangga University Press. Halaman 385.

Nurhidayati L. (2007). Spektrofotometri Derivatif dan Aplikasinya dalam Bidang Farmasi. Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia 5(2) : 93-99.

Owen, A.J. (1995). Uses of Derivative Spectroscopy Aplication Note UV - Visible

Spectroscopy. HP Way: Agilent Technologies.

Gandjar, I.G. dan Rohman, A. (2007). Kimia Farmasi Analisis. Yogyakarta: Pustaka Pelajar. Halaman 235-236, 240-243 dan 466, 468-469.

Sudjana. (2005). Metode Statistika. Bandung: Penerbit Tarsito. Halaman 93, 145, 201, 225.

Talsky,G. (1994). Derivative Spectrophotometry. Low and High Order. Weinhem Germany: VCH Verlagsdesellschaft mbH. Halaman 18, 35.

Tan, T.H. dan Rahardja, K. (2007). Obat-Obat Penting Khasiat, Penggunaan, dan

Efek-Efek Sampingnya. Edisi Keenam. Jakarta: PT. Elex Media

Komputindo. Halaman 82-83, 686.

USP 30 – NF 25. (2007). United State Pharmacopoeia 30th edition. The National

Formulary. 25th edition. London: The United States Pharmacopoeial

BAB III

METODE PENELITIAN

3.1 Jenis Penelitian

Penelitian ini termasuk jenis penelitian deskriptif dengan metode spektrofotometri derivatif terhadap analisa campuran kloramfenikol dan prednisolon yang terkandung pada dua sediaan krim.

3.2 Tempat dan Waktu Penelitian

Penelitian ini dilakukan pada bulan Mei sampai dengan Juli 2015 di Laboratorium Penelitian Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara.

3.3 Alat

Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah spektrofotometer UV-Visible (dapat dilihat pada Lampiran 3 halaman 51), Personal Computer (PC) yang dilengkapi software UV Probe 2.42 (UV-1800 Shimadzu), neraca analitik (Mettler Toledo), kuvet, kertas saring, bola karet, spatula, alat gelas dan alat-alat lainnya yang diperlukan dalam penyiapan sampel.

3.4 Bahan

Bahan yang digunakan adalah etanol absolut (Moffat, 2005), kloramfenikol BPFI, prednisolon BPFI (sertifikat pengujian dapat dilihat pada Lampiran 27 dan 28 halaman 113 dan 114), Krim X dan Krim Y

3.5 Pengambilan Sampel

Pengambilan sampel dilakukan secara purposif, yaitu ditentukan atas dasar pertimbangan bahwa sampel yang terambil mempunyai karakteristik yang sama dengan yang diteliti (Sudjana, 2005). Sampel yang digunakan yaitu krim X dan krim Y yang tiap gram mengandung kloramfenikol 20 mg dan prednisolon 2,5 mg.

3.6 Prosedur Penelitian

3.6.1 Pembuatan Larutan Induk Baku dan Larutan Standar 3.6.1.1 Pembuatan Larutan Induk Baku Kloramfenikol

Ditimbang dengan seksama 50 mg baku pembanding kloramfenikol kemudian dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 mL, ditambahkan 10 mL dengan etanol absolut hingga larut, dicukupkan volume dengan etanol absolut sampai garis tanda sehingga didapatkan larutan dengan konsentrasi 1000 μg/mL (LIB I). Dari larutan LIB I dipipet 5 mL dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 mL, dicukupkan dengan etanol absolut sampai garis tanda sehingga didapatkan larutan dengan konsentrasi 100 μg/mL (LIB II). Bagan alir prosedur penelitian dapat dilihat pada Lampiran 4 halaman 51.

3.6.1.2 Pembuatan Larutan Induk Baku Prednisolon

Dibuat larutan induk prednisolon dengan melarutkan 50 mg serbuk prednisolon BPFI dalam labu tentukur 50 mL, ditambahkan 10 mL dengan etanol

dicukupkan dengan etanol absolut sampai garis tanda sehingga didapatkan larutan dengan konsentrasi 100 μg/mL (LIB II). Bagan alir prosedur penelitian dapat dilihat pada Lampiran 4 halaman 52.

3.6.1.3 Pembuatan Larutan Standar Kloramfenikol

Larutan standar dibuat dalam 5 labu tentukur 25 mL yang memiliki konsentrasi masing-masing 12 μg/mL, 14 μg/mL, 16 μg/mL, 18 μg/mL, dan 20 μg/mL, dengan cara mengencerkan sebanyak 3,0 mL; 3,5 mL; 4,0 mL; 4,5 mL; dan 5,0 mL secara berurutan dari LIB II kloramfenikol menggunakan pelarut etanol absolut. Bagan alir prosedur penelitian dapat dilihat pada Lampiran 4 halaman 51.

3.6.1.4 Pembuatan Larutan Standar Prednisolon

Diambil sebanyak 2,0 mL; 2,5 mL; 3,0 mL; 3,5 mL; dan 4,0 mL dari LIB II prednisolon. Kemudian masing-masing dimasukkan ke dalam 5 labu tentukur 25 mL. Dilarutkan dengan pelarut etanol absolut. Kemudian dicukupkan dengan pelarut yang sama untuk membuat larutan standar dengan konsentrasi 8 μg/ml; 10 µg/mL, 12 μg/mL; 14 µ g/mL; dan 16 μg/mL. Bagan alir prosedur penelitian dapat dilihat pada Lampiran 4 halaman 52.

3.6.1.5 Pembuatan Larutan Baku Prednisolon untuk Adisi

Ditimbang baku prednisolon 10 mg, kemudian dimasukkan ke dalam labu tentukur 200 mL, ditambahkan etanol sebanyak 20 mL, disonikasi selama 10

3.6.2 Pembuatan Spektrum Serapan Maksimum

3.6.2.1 Pembuatan Spektrum Serapan Maksimum Kloramfenikol

Diambil sebanyak 3,5 mL dari LIB II kloramfenikol (konsentrasi = 100 μg/mL) kemudian dimasukan ke dalam labu tentukur 25 mL untuk kemudian dilarutkan dengan etanol absolut. Selanjutnya larutan diencerkan dengan pelarut yang sama hingga garis tanda, lalu dikocok sampai homogen untuk memperoleh larutan kloramfenikol dengan konsentrasi 14 μg/mL. Diukur serapannya pada panjang gelombang 200-400 nm. Bagan alir prosedur penelitian dapat dilihat pada Lampiran 4 halaman 51.

3.6.2.2 Pembuatan Spektrum Serapan Maksimum Prednisolon

Diambil sebanyak 3,0 mL dari LIB II prednisolon (konsentrasi = 100 μg/mL) kemudian dimasukan ke dalam labu tentukur 25 mL untuk diencerkan dengan pelarut etanol absolut hingga garis tanda, lalu dikocok sampai homogen untuk memperoleh larutan dengan konsentrasi 12 μg/mL. Diukur serapannya pada panjang gelombang 200-400 nm. Bagan alir prosedur penelitian dapat dilihat pada Lampiran 4 halaman 52.

3.6.3 Pembuatan Spektrum Serapan Derivatif

3.6.3.1 Pembuatan Spektrum Serapan Derivatif Kloramfenikol

Spektrum serapan (tanpa diderivatkan) dari larutan standar kloramfenikol dengan konsentrasi 12 μg/mL, 14 μg/mL, 16 μg/mL, 18 μg/mL, dan 20 μg/mL

3.6.3.2 Pembuatan Spektrum Serapan Derivatif Prednisolon

Spektrum serapan (tanpa diderivatkan) dari larutan standar Prednisolon dengan konsentrasi 8 μg/mL; 10 μg/mL; 12 μg/mL; 14 μg/mL; dan 16 μg/mL pada panjang gelombang 200 – 400 nm. Kemudian spektrum ditransformasikan menjadi spektrum serapan derivat pertama dan kedua dengan Δλ = 2 nm. Bagan alir prosedur penelitian dapat dilihat pada Lampiran 4 halaman 54.

3.6.4 Penentuan Zero Crossing

Penentuan zero crossing diperoleh dengan menumpangtindihkan spektrum serapan masing-masing derivat dalam berbagai konsentrasi larutan. Zero crossing masing-masing zat ditunjukkan oleh panjang gelombang yang memiliki serapan nol pada berbagai konsentrasi.

3.6.5 Penentuan Panjang Gelombang Analisis

Larutan kloramfenikol dengan konsentrasi 16 μg/mL, larutan prednisolon dengan konsentrasi 8 μg/mL, dan larutan campuran kloramfenikol 16 μg/mL dan prednisolon 8 μg/mL. Kemudian ketiga larutan ini diukur serapannya pada panjang gelombang 200 – 400 nm.Selanjutnya ditransformasikan menjadi spektrum serapan derivat pertama dan kedua dari masing-masing zat tunggal dan dari campuran kloramfenikol dan prednisolon. Spektrum serapan derivat kedua dari larutan zat tunggal dan campuran keduanya ditumpangtindihkan. Yang dipilih untuk menjadi panjang gelombang analisis adalah yang pada panjang gelombang

3.6.6 Pembuatan dan Penentuan Linearitas Kurva Kalibrasi

3.6.6.1 Pembuatan dan Penentuan Linearitas Kurva Kalibrasi Kloramfenikol Larutan standar kloramfenikol dengan konsentrasi 12 μg/mL; 14 μg/mL; 16 μg/mL; 18 μg/mL; dan 20 μg/mL, kemudian diukur serapan derivat kedua (Δλ = 2 nm) pada panjang gelombang analisis yang telah ditentukan. Kemudian dilakukan analisis hubungan antara konsentrasi dan nilai serapan sehingga diperoleh persamaan regresi linear y = ax + b, dan berdasarkan nilai serapan pada panjang gelombang analisis, dilakukan pula perhitungan LOD dan LOQ digunakan rumus :

Keterangan : SB = simpangan baku

LOD = limit of Detection LOQ = limit of Quantitation

3.6.6.2 Pembuatan dan Penentuan Linearitas Kurva Kalibrasi Prednisolon Larutan standar Prednisolon dengan konsentrasi 8 μg/mL; 10 μg/mL; 12 μg/mL; 14 μg/mL dan 16 μg/mL, kemudian diukur serapan derivat kedua

3.6.7 Penentuan Kadar Kloramfenikol dan Prednisolon dalam Sediaan Krim

Ditimbang 10 tube krim X yang mengandung kloramfenikol 20 mg dan prednisolon 2,5 mg kemudian dikeluarkan isinya satu per satu dari dalam tube, kemudian di masukkan ke dalam beker glass. Selanjutnya ditimbang seksama sejumlah krim setara dengan 20 mg kloramfenikol, dihitung kesetaraan kloramfenikol yang terkandung di dalamnya (penimbangan krim X dilakukan sebanyak enam kali pengulangan). Selanjutnya dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 mL, dan ditambahkan etanol absolut 10 mL, disonikasi selama 15 menit, sampai krimnya larut, kemudian dicukupkan dengan etanol absolut sampai garis tanda, dikocok sampai homogen. Larutan tersebut kemudian disaring, lebih kurang 10 mL filtrat pertama dibuang. Filtrat selanjutnya ditampung. Kemudian dari filtrat ini dipipet sebanyak 2,0 mL, ditambahkan 6 mL larutan prednisolon (untuk adisi), dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 mL, dicukupkan dengan etanol absolut sampai garis tanda sehingga diperoleh larutan yang didalamnya terdapat kloramfenikol konsentrasi 16 μg/mL dan prednisolon konsentrasi 8 μg/mL. Diukur serapan pada panjang gelombang 200 − 400 nm, selanjutnya spektrum serapan ditransformasikan menjadi spektrum serapan derivat kedua

dengan Δλ = 2 nm pada panjang gelombang analisis kloramfenikol dan

prednisolon masing-masing 227,60 nm dan 292,80 nm. Bagan alir prosedur penelitian penentuan kadar kloramfenikol dan prednisolon dapat dilihat pada

3.6.8 Analisis Data Penetapan Kadar Secara Statistik

Data perhitungan kadar kloramfenikol dan prednisolon dianalisis secara statistik dengan menggunakan uji t tabel dapat dilihat pada Lampiran 26 halaman 112.

Rumus yang digunakan adalah :

SD =

( )

1 -n X -Xi 2

∑

Untuk mencari t hitung digunakan rumus:

t hitung = SD n

X Xi

/

−

Data diterima jika thitung < ttabel pada interval kepercayaan 95% dengan nilai α = 0,05.

Keterangan : SD = standard deviation / simpangan baku Xi = kadar dalam satu perlakuan

−

X _{= kadar rata-rata dalam satu sampel}

n = jumlah perlakuan α = tingkat kepercayaan

Menurut Sudjana (2005), Untuk menghitung kadar kloramfenikol dan prednisolon sebenarnya dalam sampel secara statistik dapat digunakan rumus :

Keterangan : SD = standard deviation / simpangan baku

−

X _{= kadar rata-rata dalam satu sampel}

n = jumlah perlakuan

t = harga ttabel sesuai dengan derajat kepercayaan 3.6.9 Uji Validasi

3.6.9.1 Uji Akurasi

3.6.9.1.1. Pembuatan Larutan Baku Induk Kloramfenikol

Ditimbang seksama ± 60 mg Baku Pembanding Kloramfenikol BPFI, dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 ml. Selanjutnya dilarutkan dan diencerkan dengan etanol absolut sampai tanda (Konsentrasi 1,2 mg/ml).

3.6.9.1.2. Pembuatan Larutan Baku Induk Prednisolon

Ditimbang seksama ± 15 mg Baku Pembanding Prednisolon BPFI, dimasukkan ke dalam labu tentukur 100 ml. Selanjutnya dilarutkan dan diencerkan dengan etanol absolut sampai tanda (Konsentrasi. 0,15 mg/ml).

3.6.9.1.3. Pembuatan Larutan Uji

Konsentrasi 80% ( terdiri dari : 70% zat uji dan 30% baku ): 80% x 20 mg = 16 mg

Penimbangan zat uji: x 16 mg = 11,2 mg, penambahan baku:

Konsentrasi 100% ( terdiri dari : 70% zat uji dan 30% baku ): 100% x 20 mg = 20 mg

Penimbangan zat uji: x 20 mg = 16 mg, penambahan baku:

baku kloramfenikol: x 20 mg = 6 mg (~ 5 ml larutan baku induk)

baku prednisolon: = 0,75 mg (~ 5 ml larutan baku induk)

Konsentrasi 120% ( terdiri dari : 70% zat uji dan 30% baku ): 120% x 20 mg = 24 mg

Penimbangan zat uji: x 24 mg = 16,8 mg, penambahan baku:

baku kloramfenikol: x 24 mg = 7,2 mg (~ 6 ml larutan baku induk)

baku prednisolon: = 0,9 mg (~ 6 ml larutan baku induk)

Selanjutnya masing-masing konsentrasi analit (80%,100%,120%) dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 mL, dan ditambahkan etanol absolut 10 mL, disonikasi selama 15 menit, sampai krimnya larut, kemudian dicukupkan dengan etanol absolut sampai garis tanda, dikocok sampai homogen. Larutan

    mg mg mgx 20 20 5 , 2 100 30     mg mg mgx 20 24 5 , 2 100 30

masing konsentrasi analit sampel dengan rentang spesifik 80%, 100%, 120%, dilakukan sebanyak tiga kali pengulangan. Kemudian campuran sampel dan baku diukur serapannya pada panjang gelombang 200 – 400 nm, selanjutnya spektrum serapan ditransformasikan menjadi spektrum serapan derivat kedua dengan Δλ 2 nm pada panjang gelombang analisis kloramfenikol dan prednisolon masing-masing 227,6 nm dan 292,8 nm. Persen perolehan kembali dapat dihitung dengan rumus:

% perolehan kembali = 100 %

Keterangan: CF = konsentrasi sampel setelah penambahan bahan baku CA = konsentrasi sampel sebelum penambahan bahan baku C*A= Jumlah baku yang ditambahkan

3.6.9.2 Uji Presisi

Presisi diukur sebagai simpangan baku relatif atau koefisien variasi. Presisi merupakan ukuran yang menunjukkan derajat kesesuaian antara hasil uji individual ketika suatu metode dilakukan secara berulang untuk sampel yang homogen. Nilai simpangan baku relatif yang memenuhi persyaratan menunjukkan adanya keseksamaan metode yang dilakukan (Harmita, 2004). Simpangan baku relatif dapat dihitung dengan rumus berikut ini :

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN 4.1 Penentuan Spektrum Serapan Maksimum

Penentuan spektrum serapan maksimum dilakukan pada panjang gelombang 200–400 nm. Pengukuran kloramfenikol pada konsentrasi 14 μg/mL, sedangkan untuk prednisolon pada konsentrasi 12 μg/mL. Berdasarkan hasil

penelitian, diperoleh panjang gelombang maksimum kloramfenikol pada 274,20 nm dan prednisolon pada 243,20 nm. Spektrum serapan maksimum

kloramfenikol konsentrasi 14 μg/mL dan prednisolon konsentrasi 12 μg/mL masing-masing dapat dilihat pada Gambar 4.1 dan 4.2.

nm.

200.00 250.00 300.00 350.00 400.00

A

bs.

1.0000

0.5000

0.0000

n m.

2 0 0 .0 0 2 5 0 .0 0 3 0 0 .0 0 3 5 0 .0 0 4 0 0 .0 0

Ab

s.

1 .0 0 0 0

0 .5 0 0 0

0 .0 0 0 0 -0 .0 7 6 1

nm.

200.00 250.00 300.00 350.00 400.00

A

bs.

1.0000

0.5000

0.0000 -0.0761

Dari Gambar 4.6 dapat dilihat bahwa hasil tumpang tindih serapan kloramfenikol 16 µg/mL dan prednisolon 8 µg/mL terdapat serapan yang berimpit. Maka dilakukan derivatisasi untuk memperoleh zero crossing terhadap masing-masing komponen.

4.3 Penentuan Zero crossing pada Serapan Derivat

4.3.1 Penentuan Zero crossing pada Serapan Derivat Pertama

Spektrum serapan kloramfenikol konsentrasi 16 µg/mL dan prednisolon konsentrasi 8 µg/mL ditransformasikan menjadi spektrum serapan derivat pertama dengan Δλ = 2 nm. Hasil penentuan zero crossing pada derivat pertama diperoleh dengan menumpangtindihkan spektrum serapan derivat pertama pada masing zat. Zero crossing pada spektrum derivat pertama dari masing-masing zat ditunjukkan oleh panjang gelombang yang memiliki serapan nol. Spektrum kloramfenikol dan prednisolon pada spektrum serapan derivat pertama masing-masing dapat dilihat pada Gambar 4.7 dan 4.8. Spektrum tumpang tindih serapan kloramfenikol dan prednisolon dapat dilihat pada Gambar 4.9

A

bs.

0.0400

0.0200

nm.

200.00 250.00 300.00 350.00 400.00

A

bs.

0.0400

0.0200

0.0000

-0.0200

-0.0400

panjang gelombang 200-400 nm. Spektrum serapan yang telah diperoleh ditransformasikan menjadi spektrum serapan derivat kedua dengan ∆λ 2 nm. Spektrum serapan derivat kedua dari masing-masing zat tersebut ditumpangtindihkan. Spektrum kloramfenikol dan prednisolon pada serapan derivat kedua dapat dilihat pada Gambar 4.10 dan 4.11. Spektrum tumpang tindih kloramfenikol dan prednisolon pada serapan derivat kedua pada Gambar 4.12.

nm.

200.00 250.00 300.00 320.00

Ab

s.

0.0060 0.0050

0.0000

-0.0050

nm .

200.00 250.00 300.00 320.00

A

bs.

0.0060 0.0050

0.0000

-0.0050

spektrum derivat kedua. Untuk menentukan panjang gelombang analisis pada spektrum serapan pada masing-masing derivat dilakukan dengan mengamati panjang gelombang yang menunjukkan serapan senyawa pasangannya nol dan serapan senyawa lain dan campurannya memiliki nilai serapan sama atau hampir sama. Spektrum tumpang tindih serapan kloramfenikol 16 μg/mL, prednisolon 8 μg/mL dan campuran kloramfenikol 16 μg/mL dan prednisolon 8 μg/mL pada spektrum serapan derivat kedua dapat dilihat pada Gambar 4.13. Spektrum panjang gelombang analisis kloramfenikol dan prednisolon dapat dilihat pada Gambar 4.14 dan 4.15.

n m.

2 0 0 .0 0 2 5 0 .0 0 3 0 0 .0 0 3 2 0 .0 0

Ab

s.

0 .0 1 0 0

0 .0 0 5 0

0 .0 0 0 0

-0 .0 0 5 0

n m.

2 8 0 .0 0 2 8 5 .0 0 2 9 0 .0 0 2 9 5 .0 0

Ab

s.

0 .0 0 1 2 0 0 .0 0 1 0 0

0 .0 0 0 5 0

0 .0 0 0 0 0

Berdasarkan hasil spektrum serapan derivat kedua, diketahui bahwa zero

crossing untuk kloramfenikol berada pada panjang gelombang 223,80 nm;

227,60 nm dan 256,00 nm dan prednisolon pada panjang gelombang 286,80 nm 292,80 nm dan 295.60 nm. Setelah spektrum serapan derivat kedua dari kedua zat dan campuran ditumpangtindihkan, didapatkan panjang gelombang analisis untuk kloramfenikol pada 227,60 nm dan prednisolon pada 292,80 nm. Panjang gelombang analisis dan absorbansi pada derivat kedua dapat dilihat pada Tabel 4.1.

Tabel 4.1 Panjang Gelombang Analisis dan Absorbansi pada Derivat Kedua Panjang

Gelombang (nm)

Absorbansi Kloramfenikol

16 μg/mL Prednisolon 8 μg/mL Kloramfenikol Campuran dan Prednisolon

223,80 0,0047 0,0000 0,0048

227,60 0,0033 0,0000 0,0034

256,00 0,0002 0,0000 0,0002

286,80 0,0000 0,0004 0,0003

292,80 0,0000 0,0002 0,0002

295,60 0,0000 0,0001 0,0002

Berdasarkan Tabel 4.1 di atas diperoleh panjang gelombang analisis kloramfenikol dan prednisolon yang digunakan masing-masing adalah 227,60 nm dan 292,80 nm. Penentuan panjang gelombang analisis didasarkan pada nilai absorbansi ketiga larutan pada panjang gelombang tersebut.

227,60 nm karena pada panjang gelombang tersebut, nilai absorbansi dari prednisolon adalah nol, sedangkan untuk kloramfenikol dan larutan campuran kloramfenikol dan prednisolon memiliki nilai serapan hampir sama yaitu 0,0033 untuk kloramfenikol dan 0,0034 untuk campuran. Berdasarkan Nurhidayati boleh dilakukan bila berdekatan spektrum serapan penentuan panjang gelombang analisis kloramfenikol dan prednisolon dapat dilihat pada Lampiran 8 halaman 68. 4.5 Penentuan Linearitas Kurva Kalibrasi

4.5.1 Kurva Kalibrasi

Linearitas kurva kalibrasi menunjukkan hubungan yang linier antara absorbansi dengan konsentrasi. Persamaan regresi kloramfenikol, Y = 0,00019X + 0.00009 dengan korelasi r = 0,9990 dan prednisolon, Y = 0.00003X - 0,00003 dengan korelasi r = 0,9977. Nilai r > 0,995 menunjukkan adanya korelasi linier antara X dan Y (Moffat, 2005). Kurva kalibrasi kloramfenikol dan prednisolon pada masing-masing panjang gelombang 227,60 nm dan 292,80 nm dapat dilihat pada Gambar 4.16 dan 4.17. Data kalibrasi, persamaan regresi dan koefisien korelasi dapat dilihat pada Lampiran 9 halaman 69-70 dan Lampiran 10 halaman 71-72.

Standard Curve

b

s.

0.00430

Standard Curve

Conc. (mg/l)

0.00000 5.00000 10.00000 15.00000 18.00000

A

b

s.

0.00048

0.00040

0.00030

0.00020

0.00010

4.6 Penentuan Kadar Kloramfenikol dan Prednisolon dalam Sediaan Krim Penentuan penetapan kadar kloramfenikol dan prednisolon dalam krim yang beredar di apotik mengandung masing-masing kloramfenikol 20 mg dan prednisolon 2,5 mg. Sedangkan pengukuran kloramfenikol dan prednisolon baku pada sediaan kedua masing-masing kloramfenikol 16 μg/mL dan prednisolon 8 μg/mL. Agar tercapainya uji perbandingan tersebut maka dilakukan adisi dengan baku pembanding sebanyak 6,0 μg/mL dari larutan induk baku. Dibuat larutan uji sehingga di dalamnya terdapat kloramfenikol dan prednisolon kemudian diukur pada panjang gelombang 200 – 400 nm. Selanjutnya spektrum hasil serapan ditransformasikan menjadi spektrum serapan derivat kedua dengan Δλ = 2 nm. Berdasarkan spektrum tersebut dapat ditentukan absorbansi kloramfenikol dan prednisolon pada panjang gelombang analisis yang telah diperoleh sebelumnya, yaitu panjang gelombang 227,60 nm dan 292,80 nm. Contoh perhitungan penetapan kadar kloramfenikol dan prednisolon dapat dilihat pada Lampiran 15 halaman 79-82.

Spektrum serapan penetapan kadar kloramfenikol dan prednisolon pada krim X dan krim Y dapat dilihat pada Lampiran 13 halaman 75-76. Data hasil perhitungan kadar kloramfenikol dan prednisolon pada sediaan dengan nama dagang X dan Y setelah dilakukan analisa secara statistik (data dan perhitungan pada Lampiran 16 – Lampiran 19) dapat dilihat pada Tabel 4.2.

Tabel 4.2 Kadar kloramfenikol dan Prednisolon dalam sediaan krim

No Zat Krim X

(mg)

Krim Y (mg)

Persyaratan (mg) 1. Kloramfenikol 19,63-20,09 19,44-20,27 18,0-26,0 2. Prednisolon 2,47-2,58 2,50-2,62 2,25-2,75

Dapat dilihat pada Tabel 4.2 di atas, kadar kloramfenikol dan prednisolon pada kedua sediaan memenuhi persyaratan menurut USP XXX tahun 2007 dan Farmakope Indonesia Edisi V (2014), yaitu mengandung kloramfenikol tidak kurang dari 90,0% dan tidak lebih dari 130,0% dan prednisolon tidak kurang dari 90,0% dan tidak lebih dari 110,0% dari jumlah yang tertera pada etiket.

4.7 Uji Validasi 4.7.1 Uji Akurasi

Uji akurasi dengan parameter persen perolehan kembali dilakukan dengan menggunakan krim X. Metode penambahan baku dilakukan dengan menambahkan sejumlah tertentu larutan baku ke dalam sampel yang telah di adisi. Kemudian larutan diukur serapannya sesuai panjang gelombang analisis yang digunakan. Spektrum serapan uji perolehan kembali kloramfenikol dan prednisolon dalam krim X dapat dilihat pada Lampiran 20 halaman 99-101. Sedangkan data dan perhitungan uji perolehan kembali kloramfenikol dan prednisolon dalam krim dapat dilihat pada (Lampiran 21-22) halaman 102-103 dan Lampiran 23 halaman 104-109.

validasi prosedur analitik karena rata-rata berada di antara rentang 98-102% (Harmita, 2004).

Tabel 4.3 Hasil % perolehan kembali kloramfenikol dan prednisolon dengan metode penambahan baku standar (standard addition method) pada krim X Rentang Spesifik (%) Perolehan kembali Kloramfenikol (%) Perolehan kembali Prednisolon (%) 80

100,62 101,39

100,78 99,38

100,62 101,39

100

96,58 103,92

97,67 103,92

101,13 99,10

120

97,26 100,33

98,93 101,53

99,21 101,81

Rata-rata (% recovery)

Standard Deviation (SD) Relative Standard Deviation (RSD) (%)

99,20 1,71 1,72 101,42 1,71 1,69

4.7.2 Uji Presisi

Uji presisi dilakukan dengan perhitungan simpangan baku relatif. Berdasarkan data perhitungan terhadap kadar kloramfenikol dan prednisolon, diperoleh simpangan baku relatif untuk kloramfenikol dan prednisolon yaitu 1,72% dan 1,69%. Hasil simpangan baku relatif untuk kloramfenikol dan prednisolon memenuhi persyaratan yaitu ≤ 2% (Harmita, 2004). Perhitungan dan

BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN 5.1 Kesimpulan

Berdasarkan penelitian yang dilakukan, maka dapat disimpulkan:

a. Metode spektrofotometri derivatif dengan zero crossing dapat digunakan untuk menetapkan kadar kloramfenikol dan prednisolon dalam sediaan krim, dimana diperlukan metode tambahan untuk menetapkan kadar prednisolon menggunakan teknik adisi.

b. Kadar kloramfenikol dan prednisolon pada krim X dan krim Y memenuhi persyaratan pada USP 30 (2007) dan Farmakope Indonesia edisi V (2014). c. Uji validasi yang dilakukan pada krim X menunjukkan bahwa metode

spektrofotometri derivatif memenuhi persyaratan validasi.

5.2 Saran

Disarankan agar dilakukan penelitian lebih lanjut pada penetapan kadar kloramfenikol dan prednisolon dalam sediaan krim secara spektrofotometri derivatif dengan metode rasio spectra.

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA 2.1 Uraian Bahan

2.1.1 Kloramfenikol

Menurut Ditjen POM (1995), Rumus struktur :

Gambar 2.1 Struktur Kloramfenikol.

Nama Kimia : D-treo-(-)-2,2-Dikloro-N-[β-hidroksi-α -(hidroksimetil)-p-nitrofenetil]asetamida

Rumus Molekul : C11H12Cl2N2O5 Berat Molekul : 323,13

Pemerian : Hablur halus berbentuk jarum atau lempeng memanjang; putih hingga putih kelabu atau putih kekuningan;larutan

praktis netral terhadap lakmus P; stabil dalam larutan netral atau larutan agak asam

Kelarutan : Sukar larut dalam air; mudah larut dalam etanol, dalam propilenglikol, dalam aseton, dan dalam etil asetat.

Kloramfenikol mempunyai efek samping umum berupa gangguan lambung-usus, neuropati optis, radang lidah dan mukosa mulut. Tetapi yang sangat berbahaya adalah depresi sumsum tulang (myelodepresi) yang dapat berwujud dua bentuk anemia (Tan dan Rahardja, 2007).

2.1.2 Prednisolon

Menurut Ditjen POM (1995), Rumus struktur : CH2OH

H CH3 CO

HO OH CH3 H

H H

Gambar 2.2 Struktur Prednisolon

Nama Kimia : 11β,17,21-Trihidroksipregna-1,4-diena-3,20-dion[50-24-8] Rumus Molekul : C21H28O5

Berat Molekul : 360,45

Pemerian : Serbuk hablur, putih sampai praktis putih; tidak berbau. Kelarutan : Sangat sukar larut dalam air; larut dalam metanol dan dalam

dioksan; sukar larut dalam kloroform.

Prednisolon adalah glukokortikoid sintetik, ia memiliki lima kali potensi kortison asetat tetapi dalam dosis setara menyebabkan retensi natrium berkurang dan cairan meskipun beresiko lebih terhadap lambung. Glukokortikoid

Efek samping dari prenisolon jika penggunaanya dilakukan jangka panjang menyebabkan hipokalemia, tukak lambung, penekanan pertumbuhan, osteoporosis, muka bulat, penekanan sekresi kortikotropin, atropi kulit, memperberat penyakit diabetes melitus, mudah terkena infeksi, glaukoma, hipertensi, gangguan menstruasi, dan perubahan mental atau tingkah laku (Siswandono dan Soekardjo, 2000).

Saat ini, sangat banyak beredar produk obat yang mengandung kombinasi dua atau lebih bahan aktif. Kombinasi dimaksudkan agar obat dapat lebih efektif mencapai sasaran terapi. Salah satunya adalah kombinasi antara kloramfenikol dan prednisolon, yang digunakan untuk meringankan efek antiradang seperti dermatologis yang berat dan sebagai antibiotik.

2.2. Spektrofotometri

Spektrofotometer adalah alat untuk mengukur transmitan atau serapan suatu sampel sebagai fungsi panjang gelombang. Spektrofotometer merupakan penggabungan dari dua fungsi alat yang terdiri dari spektrometer yang menghasilkan sinar dari spektrum dengan panjang gelombang tertentu dan fotometer sebagai alat pengukur intensitas cahaya yang ditransmisikan atau yang diabsorpsi. Ketika cahaya (monokromatik atau heterogen) mengenai medium homogen, suatu bagian dari cahaya yang ada akan dipantulkan, sebagian diserap

Bagian molekul yang bertanggung jawab terhadap penyerapan cahaya disebut kromofor dan terdiri atas ikatan rangkap dua atau rangkap tiga, terutama jika ikatan rangkap tersebut terkonjugasi. Semakin panjang ikatan rangkap dua atau rangkap tiga terkonjugasi di dalam molekul, molekul tersebut akan lebih mudah menyerap cahaya (Cairns, 2008).

Gugus fungsi seperti –OH, -O, -NH2 dan –OCH3 yang memberikan transisi n → π* disebut gugus auksokrom. Gugus ini adalah gugus yang tidak dapat menyerap radiasi ultraviolet-sinar tampak, tetapi apabila gugus ini terikat pada gugus kromofor mengakibatkan pergeseran panjang gelombang ke arah yang lebih besar atau pergeseran batokromik (Gandjar dan Rohman, 2007). Efek hipsokromik atau pergeseran biru adalah pergeseran absorban ke daerah panjang gelombang yang lebih pendek karena adanya substitusiatau efek pelarut. Efek hipokromik adalah efek yang menyebabkan penurunan intensitas absorban (Dachriyanus, 2004).

Radiasi ultraviolet diabsorpsi oleh molekul organik aromatik, molekul yang mengandung elektron-π terkonjugasi atau atom yang mengandung elektron -n, menyebabkan transisi elektron di orbit terluarnya dari tingkat energi elektron dasar ke tingkat energi tereksitasi lebih tinggi. Besarnya absorbansi radiasi tersebut berbanding dengan banyaknya molekul analit yang mengabsorpsi dan dapat digunakan untuk analisis kuantitatif (Satiadarma, dkk., 2004)

Gambar 4.13 Spekrum Tumpang Tindih Serapan Derivatif Kedua Kloramfenikol dan Prednisolon dan Campuran Kloramfenikol dan Prednisolon ... 37 Gambar 4.14 Panjang Gelombang Analisis Kloramfenikol λ = 227,60

nm ... 37 Gambar 4.15 Panjang Gelombang Analisis Prednisolon λ=292,80 nm

... 38 Gambar 4.16 Kurva Kalibrasi Kloramfenikol Pada Panjang

Gelombang 227,60 nm ... 40 Gambar 4.17 Kurva Kalibrasi Prednisolon Pada Panjang Gelombang

292,80 nm ... 41

DAFTAR GAMBAR DALAM LAMPIRAN

Gambar Halaman

Gambar 1 Krim merek Klorfeson® ... 48

Gambar 2 Krim merek Chloramfecort-H® ... 48

Gambar 3 Spektrofotometer UV-Vis (Shimadzu 1800) ... 50

Gambar 4 Neraca analitik (Mettler Toledo) ... 50

Gambar 5 Sonikator (Branson 1510) ... 50

Gambar 6 Spektrum serapan kloramfenikol konsentrasi 12 μg/mL .. 56

Gambar 7 Spektrum serapan kloramfenikol konsentrasi 14 μg/mL ... 56

Gambar 8 Spektrum serapan kloramfenikol konsentrasi 16 µg/mL .. 56

Gambar 9 Spektrum serapan kloramfenikol konsentrasi 18 μg/mL .. 57

Gambar 10 Spektrum serapan kloramfenikol konsentrasi 20 μg/mL .. 57

Gambar 11 Spektrum serapan prednisolon konsentrasi 8 μg/mL ... 58

Gambar 12 Spektrum serapan prednisolon konsentrasi 10 μg/mL ... 58

Gambar 13 Spektrum serapan prednisolon konsentrasi 12 μg/mL ... 58

Gambar 14 Spektrum serapan prednisolon konsentrasi 14 μg/mL ... 59

Gambar 15 Spektrum serapan prednisolon konsentrasi 16 μg/mL ... 59

Gambar 16 Spektrum serapan derivat pertama kloramefenikol konsentrasi 12 μg/mL ... 60

Gambar 17 Spektrum serapan derivat pertama kloramefenikol konsentrasi 14 μg/mL ... 60

Gambar 18 Spektrum serapan derivat pertama kloramefenikol konsentrasi 16 μg/mL ... 60

Gambar 19 Spektrum serapan derivat pertama kloramefenikol konsentrasi 18 μg/mL ... 61

Gambar 20 Spektrum serapan derivat pertama kloramefenikol konsentrasi 20 μg/mL ... 61

Gambar 21 Spektrum serapan derivat pertama prednisolon konsentrasi 8 μg/mL ... 62 Gambar 22 Spektrum serapan derivat pertama prednisolon

konsentrasi 10 μg/mL ... 62 Gambar 23 Spektrum serapan derivat pertama prednisolon

konsentrasi 12 μg/mL ... 62 Gambar 24 Spektrum serapan derivat pertama prednisolon

konsentrasi 14 μg/mL ... 63 Gambar 25 Spektrum serapan derivat pertama prednisolon

konsentrasi 16 μg/mL ... 63 Gambar 26 Spektrum serapan derivat kedua kloramfenikol

konsentrasi 12 μg/mL ... 64 Gambar 27 Spektrum serapan derivat kedua kloramfenikol

konsentrasi 14 μg/mL ... 64 Gambar 28 Spektrum serapan derivat kedua kloramfenikol

konsentrasi 16 μg/mL ... 64 Gambar 29 Spektrum serapan derivat kedua kloramfenikol

konsentrasi 18 μg/mL mL ... 65 Gambar 30 Spektrum serapan derivat kedua kloramfenikol

konsentrasi 20 μg/mL ... 65 Gambar 31 Spektrum serapan derivat kedua prednisolon

konsentrasi 8 μg/mL ... 66 Gambar 32 Spektrum serapan derivat kedua prednisolon konsentrasi

10 μg/mL ... 66 Gambar 33 Spektrum serapan derivat kedua prednisolon

konsentrasi 12 μg/mL ... 66 Gambar 34 Spektrum serapan derivat kedua prednisolon

konsentrasi 14 μg/mL ... 67 Gambar 35 Spektrum serapan derivat kedua prednisolon

konsentrasi 16 μg/mL ... 67 Gambar 36 Spektrum serapan derivat kedua kloramfenikol

Gambar 37 Spektrum serapan derivat kedua prednisolon konsentrasi 8 μg/mL pada λ = 292,80 nm ... 68 Gambar 38 Spektrum serapan derivat kedua campuran

kloramfenikol konsentrasi 16 μg/mL dan prednisolon

konsentrasi 8 μg/mL ... 68 Gambar 39 Spektrum serapan krim X ... 75 Gambar 40 Spektrum serapan krim Y... 76 Gambar 41 Spektrum serapan perolehan kembali 80% pada krim X .. 99 Gambar 42 Spektrum serapan perolehan kembali 100% pada

krim X ... 100 Gambar 43 Spektrum serapan perolehan kembali 120% pada

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran Halaman

Lampiran 1. Krim Klorfeson® dan Chloramfecort-H® ... 48

Lampiran 2. Komposisi Krim Klorfeson® dan Chloramfecort-H® ... 49

Lampiran 3. Gambar Alat ... 50

Lampiran 4. Bagan Alir Prosedur Penelitian ... 51

Lampiran 5. Spektrum Serapan Baku Kloramfenikol dan Baku Prednisolon ... 56

Lampiran 6. Spektrum Serapan Derivat Pertama Baku Kloramfenikol dan Baku Prednisolon ... 60

Lampiran 7. Spektrum Serapan Derivat Kedua Baku Kloramfenikol dan Baku Prednisolon ... 64

Lampiran 8. Spektrum Serapan Panjang Gelombang Analisis Baku Kloramfenikol dan Baku Prednisolon ... 68

Lampiran 9. Data Kalibrasi Kloramfenikol BPFI, Persamaan Regresi dan Koefisien Korelasi ... 69

Lampiran 10. Data Kalibrasi Prednisolon BPFI, Persamaan Regresi dan Koefisien Korelasi ... 71

Lampiran 11. Perhitungan Batas Deteksi (Limit of Detection, LOD) dan Batas Kuantitasi (Limit of Quantitation, LOQ) Kloramfenikol ... 73

Lampiran 12. Perhitungan Batas Deteksi (Limit of Detection, LOD) dan Batas Kuantitasi (Limit of Quantitation, LOQ) Prednisolon ... 74

Lampiran 13. Spektrum Serapan Derivat Kedua Sampel ... 75

Lampiran 14. Hasil Analisis Kadar Kloramfenikol dan Prednisolon dalam Sediaan Krim ... 77

Lampiran 15. Contoh Perhitungan Kadar Kloramfenikol dan Prednisolon dalam Sediaan Krim ... 79

Lampiran 17. Perhitungan Statistik Prednisolon pada Krim X ... 87

Lampiran 18. Perhitungan Statistik Kloramfenikol pada Krim Y ... 91

Lampiran 19. Perhitungan Statistik Prednisolon pada Krim Y ... 95

Lampiran 20. Spektrum Serapan Krim X pada Uji Perolehan Kembali ... 99

Lampiran 21. Data Hasil Persen Perolehan Kembali Klorfeson pada Krim X dengan Metode Penambahan Baku (Standard Addition Method) ... 102

Lampiran 22. Data Hasil Persen Perolehan Kembali Prednisolon pada Krim X dengan Metode Penambahan Baku (Standard Addition Method) ... 103

Lampiran 23. Perhitungan Persen Perolehan Kembali ... 104

Lampiran 24. Perhitungan Rata-Rata, Standar Deviasi dan Relatif Standar deviasi Perolehan Kembali Kloramfenikol pada Krim X ... 110

Lampiran 25. Perhitungan Rata-Rata, Standar Deviasi dan Relatif Standar deviasi Perolehan Kembali Prednisolon pada Krim X ... 111

Lampiran 26. Daftar Nilai Distribusi t ... 112

Lampiran 27. Sertifikat Pengujian Kloramfenikol ... 113