Gambar 3 Struktur Taurin
Sumber: Patel 2006
Taurin mengandung gugus amino, tetapi tidak memiliki gugus karboksil yang diperlukan untuk membentuk ikatan peptida. Itu sebabnya, molekul tersebut
tidak berfungsi sebagai pembangun struktur protein. Taurin merupakan senyawa tidak esensial bagi nutrien manusia karena secara internal dapat disintesis dari
asam amino metionin atau sistein dan piridoksin Vitamin B6. Taurin sangat diperlukan pada saat masa pertumbuhan. Taurin banyak ditemukan dalam susu
murni, telur, daging dan ikan. Taurin banyak dijumpai pada produk suplemen makanan atau minuman. Taurin dibentuk oleh tubuh di dalam hati yang diikuti
dengan reaksi oksidasi dari dekarboksilasi asam amino sistein Marsh dan May 2009.
Taurin memiliki fungsi mengatur osmoregulasi pada moluska laut agar tetap seimbang Welborn dan Manahan 1995. Pada manusia, taurin berfungsi
mempertahankan keseimbangan sel membran pada jaringan yang aktif, yaitu pada jaringan otak dan jantung Patel 2006. Taurin juga berfungsi membantu
metabolisme kolesterol dan mengemulsi asam empedu sehingga meringankan beban kerja dari hati, pankreas dan kantong empedu Smayda 2002.
2.3 High Performance Liquid Chromatography HPLC
HPLC secara mendasar merupakan perkembangan tingkat tinggi dari kromatografi kolom. High Performance Liquid Chromatography HPLC adalah
kromatografi yang dikembangkan menggunakan cairan sebagai fase gerak baik cairan polar maupun cairan non polar, dan bekerja pada tekanan tinggi
Adnan 1997. High Performance Liquid Chromatography HPLC merupakan suatu cara pemisahan komponen dari suatu campuran berdasarkan perbedaan
distribusiabsorbsiadsorbsi komponen di antara dua fase yang berbeda, yaitu fase diam stasioner dan fase gerak mobil Salamah 1997. Secara umum dapat
dikatakan bahwa kromatografi adalah suatu proses migrasi differensial dimana
komponen-komponen sampel ditahan secara selektif oleh fase diam Sudarmadji et al. 2007.
Pada kromatografi, partisi cair yang digunakan pada fase stasioner maupun fase mobil berupa cairan. Pelarut yang digunakan harus tidak dapat bercampur.
Pelarut yang lebih polar biasanya digunakan sebagai fase stasioner, oleh karena itu sistem ini dinamakan kromatografi fase normal normal phase
Chromatography. Bila fase stasioner yang dipakai senyawa non polar, sedangkan fase mobilnya polar atau terbalik dengan sistem fase normal maka sistemnya
disebut kromatografi
fase terbalik
reverse phase
choromatography Adnan 1997. Pelarut yang biasanya digunakan pada HPLC adalah air, metanol,
asetonitril, kloroform, dan pelarut lainnya yang berada dalam keadaan murni HPLC grade. Pelarut-pelarut tersebut sebelum digunakan harus disaring terlebih
dahulu dengan kertas saring milipore 0,45 mm dan harus dihilangkan gasnya degassing Salamah 1997.
Komponen utama alat yang dipakai dalam HPLC antara lain 1 reservoir zat pelarut untuk fase mobil; 2 pompa; 3 injektor; 4 kolom; 5 detektor dan
6 rekorder Adnan 1997. Jantung dari peralatan HPLC adalah kolom dimana terdapat fase diam dan terjadi pemisahan komponen antara fase diam dan fase
bergerak yang dialirkan dengan bantuan pompa Salamah 1997. Alur proses penggunaan HPLC dapat dilihat pada Gambar 4.
Gambar 4 Alur proses penggunaan HPLC
Sumber: Husgen dan Schuster 2001
Sebelum dilakukan analisis asam amino dengan kromatografi terlebih dahulu dilakukan pembuatan hidrolisat protein yang bertujuan untuk memutuskan
ikatan peptidanya dengan hidrolisis asam atau hidrolisis basa. Semua protein akan menghasilkan asam-asam amino jika dihidrolisis, tetapi ada beberapa protein
disamping menghasilkan asam amino juga menghasilkan molekul-molekul protein
yang masih berikatan. Hidrolisis asam yang umum digunakan adalah HCl 6 N yang menyebabkan kerusakan triptofan dan sedikit kerusakan juga terjadi pada
serin dan treonin. Hidrolisis basa biasanya menggunakan NaOH 2 –4 N dan tidak
merusak triptofan
tetapi menyebabkan
deaminasi asam
amino lain
Nur et al. 1992. Banyak senyawa yang sukar dideteksi oleh detektor HPLC. Salah satu
upaya yang dilakukan untuk mengatasi hal tersebut adalah dengan melakukan proses derivatisasi. Proses derivatisasi dapat dilakukan sebelum sampel
diinjeksikan pre colomn derivatization, atau sesudah pemisahan dari kolom post colomn derivatization Adnan 1997.
Metode analisis asam amino dengan HPLC memiliki beberapa keuntungan diantaranya dapat bekerja lebih cepat sehingga waktu yang dibutuhkan singkat
serta HPLC mampu memisahkan senyawa yang sangat serupa dengan resolusi yang baik Adnan 1997. Kelemahan dari metode ini adalah sulitnya mendeteksi
senyawa yang kita inginkan jika sampel yang digunakan memiliki banyak pengotor. Selain itu, kebersihan kolom HPLC harus dijaga, karena kolom yang
kotor tidak akan mampu mendeteksi senyawa yang akan dianalisis Husgen dan Schueter 2001.
3 METODOLOGI
3.1 Waktu dan Tempat Pelaksanaan
