28
3.8 Pengujian Kemampuan Antioksidan dengan Spektrofotometer Visibel 3.8.1 Prinsip metode aktivitas antiradikal bebas DPPH
Kemampuan sampel uji dalam meredam proses oksidasi DPPH sebagai radikal bebas dalam larutan metanol sehingga terjadi peredaman warna ungu
reaksi ini menyebabkan perubahan warna yang dapat di ukur dengan spektrofotometer dengan panjang gelombang 516 nm. Aktivitas peredaman
radikal bebas dapat ditentukan dengan nilai Inhibitor Consentration 50 IC
50
.
3.8.2 Pembuatan larutan blanko
Larutan DPPH 0,5 mM dipipet sebanyak 5 mL, kemudian dimasukkan ke dalam labu tentukur 25 mL, dicukupkan volumenya dengan metanol sampai garis
tanda, diperoleh larutan DPPH konsentrasi 40 µgmL.
3.8.3 Pembuatan larutan induk EEKBL
Sebanyak 25 mg sampel uji ditimbang kemudian dilarutkan dalam labu tentukur 25 mL dengan metanol lalu volumenya dicukupkan dengan metanol
sampai garis tanda konsentrasi 1000 µgmL.
3.8.4 Penentuan panjang gelombang serapan maksimum
Larutan DPPH konsentrasi 40 µgmL dihomogenkan dan diukur serapannya pada panjang gelombang 400-800 nm.
3.8.5 Waktu pengukuran
Waktu pengukuran operating time diperoleh dari hasil pengukuran larutan uji sampel EEKBL diukur pada panjang gelombang yang diperoleh 516
nm. Sebanyak 1,25 mL larutan induk baku EEKBL dipipet, dimasukkan ke dalam labu tentukur 25 mL, ditambahkan 5 mL larutan DPPH 0,5 mM lalu
dicukupkan dengan metanol sampai garis tanda 50 µgmL, dihomogenkan lalu diukur serapannya menggunakan spektrofotometer UV-vis selama 80 menit.
Universitas Sumatera Utara
29
3.8.6 Pembuatan larutan uji EEKBL
Larutan induk dipipet sebanyak 0,25; 0,50; 0,75; 1,00mL kemudian dimasukkan ke dalam labu tentukur 25 mL untuk mendapatkan konsentrasi 10,
20, 30, 40 µgmL, Masing-masing ke dalam labu tentukur ditambahkan 5 mL larutan DPPH 0,5 mM konsentrasi 200 µgmL lalu volume dicukupkan dengan
metanol sampai garis tanda. Larutan uji dihomogenkan dan didiamkan selama 60 menit, lalu diukur serapannya menggunakan spektrofotometer UV-visibel pada
panjang gelombang 516 nm.
3.8.7 Pembuatan larutan induk vitamin C
Sebanyak 25 mg serbuk vitamin C ditimbang, dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 mL dilarutkan dengan metanol lalu volumenya dicukupkan dengan
metanol sampai garis tanda konsentrasi 500µgmL.
3.8.8 Pembuatan larutan uji vitamin C
Larutan induk dipipet sebanyak 0,10; 0,20; 0,30; 0,40mL ke dalam labu ukur 25 mL untuk mendapatkan konsentrasi larutan uji 2, 4, 6, dan 8 µgmL,
kemudian masing-masing ditambahkan 5 mL larutan DPPH 0,5 mM konsentrasi 200 µgmL lalu volumenya dicukupkan dengan metanol sampai garis tanda.
Diamkan selama 60 menit, lalu diukur serapannya menggunakan spektrofotometer UV-visibel pada panjang gelombang 516 nm.
3.8.9 Penentuan persen peredaman
