menyandarkan pada alat pemanasan. Setelah kering, potongan jaringan siap untuk dipulas.
3.6.2. Prosedur Pulasan Imunohistokimia anti Cox-2
1. Siapkan preparat berupa potongan tipis jaringan 4 μm yang sudah
ditempelkan pada objek gelas yang telah dicoating 2. Preparat yang siap dipulas dimasukkan dalam inkubator 1 malam
dengan suhu 38 °c
3. Deparafinisasi dengan mencelupkan preparat ke dalam cairan Xylol sebanyak 3 kali, masing-masing selama 5 menit
4. Rehidrasi dengan cara mencelupkan secara berurutan dalam Etanol 98 sebanyak 3 kali, masing-masing selama 5 menit, Alkohol 90, 80 dan
70, masing-masing selama 5 menit 5. Bilas dengan air mengalir selama 5 menit
6. Masukkan ke dalam H
2
O
2
0,3 dalam metanol dingin selama 15 menit 7. Bilas dengan akuades selama 5 menit
8. Masukkan ke dalam larutan Buffer Sitrat yang telah dipanaskan sebelumnya dalam microwave selama 5 menit dan kemudian sebanyak
2 kali selama 5 menit 9. Dinginkan selama 20 menit dalam suhu ruangan
10. Bilas dengan akuades selama 5 menit dan keringkan air di sekitar potongan jaringan
11. Tandai disekeliling potongan jaringan yang ingin dipulas dengan pap pen 12. Bilas dalam larutan PBS selama 5 menit
13. Bersihkan dari sisa cairan pencuci 14. Teteskan blocking serum pada sediaan yang telah ditandai dengan pap
pen selama 5 menit 15. Bilas dalam larutan PBS selama 5 menit
16. Bersihkan dari sisa cairan pencuci 17. Teteskan antibodi primer anti
Cox -2 dengan pengenceran 1:50, inkubasi
dalam tempat tertutup dengan suhu ruangan selama 60 menit
Yayan Andrianto : Peranan pemeriksaan imunohistokimia cox-2 Pada karsinoma nasofaring, 2008. USU Repository©2008
18. Bilas dalam larutan PBS sebanyak 2 kali, masing-masing selama 5 menit 19. Bersihkan dari sisa cairan pencuci
20. Teteskan dengan antibodi sekunder, biotinylated universal, inkubasi
dalam tempat tertutup dengan suhu ruangan selama 10 menit 21. Bilas dalam larutan PBS sebanyak 2 kali, masing-masing selama 5 menit
22. Bersihkan dari sisa cairan pencuci 23.
Teteskan dengan streptavidin-peroxidase conjugate, inkubasi dalam tempat tertutup pada suhu ruangan selama 10 menit
24. Bilas dalam larutan PBS sebanyak 2 kali, masing-masing selama 5 menit 25. Bersihkan dari sisa cairan pencuci
26. Teteskan larutan kromogen dab selama 5-10 menit 27. Bilas dengan air mengalir
28. Counterstain dengan hematoksilin mayer selama 2 menit 29. Bilas dengan air mengalir
30. Dehidrasi dengan cara mencelupkan secara berurutan pada cairan
alkohol 70, 80, 90 dan etanol 98 masing-masing 20 celupan 31. Masukkan dalam cairan xylol selama 3 menit
32. Teteskan entelan dan tutup dengan kaca penutup.
3.7. Alat dan Bahan Penelitian 3.7.1. Alat-alat Penelitian
Kategori