3.3. Cara Kerja
3.3.1. Sterilisasi alat-alat penanaman.
Alat-alat seperti botol kultur, pinset, gunting, cawan petri disterilisasi dengan menggunakan Oven pada suhu 180
o
C selama 2 jam.
3.3.2. Pembuatan Media Vacin dan Went VW
Pembuatan media VW secara umum adalah sebagai baerikut: 2,0 gr Ca
3
PO
4 2
; 5,25 gr KNO
3
; 2,5 gr KH
2
PO
4
; 2,5 gr MgSO
4
7H
2
O, 5 gr NH
4 2
SO
4,
dan vitamin Lampiran 1 dilarutkan dalam 500 ml akuades di labu ukur 1000 ml, kemudian ditambahkan gula 20 grl, arang aktif 2 grl dan agar 8 grl, BAP 5 ppm
dan air kelapa 150 ml. Kemudian ditambahkan akuades hingga volume 950 ml, lalu diaduk hingga homogen menggunakan magnetic stirrer dan spin bar. pH
media diatur hingga mencapai 5,8-6 dengan penambahan HCl dan NaOH, setelah itu ditambahkan akuades lagi sampai volume 1000 ml. Media dalam labu ukur
dipindahkan ke dalam 4 buah erlenmeyer 500 ml, ditutup dengan alumunium foil dan diikat dengan karet gelang. Kemudian media VW disterilisasi di autoclave
pada suhu 121
o
Cselama 1 jam + 15 menit. Media yang sudah steril disimpan di dalam ruang kultur sebelum digunakan.
3.3.3. Pembuatan media MS
Larutan stok yang termasuk larutan garam-garam anorganik dibuat dalam beberapa kelompok stok lampiran 2. Dari larutan stok, dimasukkan stok A
sebanyak 10 ml, stok B 10 ml, stok C 10 ml, stok D 5 ml, stok E 5 ml , stok F 5
ml, BAP 5 ppm, IAA 1 ppm ke dalam labu ukur berukuran 1000 ml yang telah berisi 400 ml akuades. Selanjutnya ditambahkan gula 20 gr, arang aktif 2 gr dan
bakto agar 8 gr, kemudian volume media ditambahkan akuades hingga volume 950 ml dan diaduk hingga homogen menggunakan magnetic stirrer dan spin bar.
Lalu pH media diatur hingga mencapai 5,8-6 dengan cara penambahan HCl dan NaOH. Media ditambah akuades hingga volume 1000 ml. Media dalam labu ukur
dipindahkan ke dalam 4 buah erlenmeyer 500 ml, ditutup dengan alumunium foil dan diikat dengan karet gelang. Kemudian media disterilisasi dengan autoclave
pada suhu 121
o
Cselama 1 jam + 15 menit. Media yang sudah steril disimpan di dalam ruang kultur sebelum digunakan.
3.3.4. Penuangan Media
Kategori