15
3 METODOLOGI
3.1 Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian dilaksanakan pada bulan September 2014 hingga Mei 2016 di beberapa Laboratorium sebagai berikut:
SEAFAST Center South East Asian Food and Agricultural Science and Technology IPB,
Laboratorium Mikrobiologi dan Immunologi PSSP Pusat Studi Satwa Primata IPB,
Kebun Percobaan Leuwikopo IPB, Laboratarium Kimia Pangan ITP IPB,
Laboratorium Jasa Analisis LJA IPB, Laboratorium Pelayanan Kimia Analitik Balai Penelitian Ternak Ciawi,
Laboratorium BPPT Biotek Serpong, dan Laboratorium Pusat Studi Biofarmaka IPB.
3.2 Bahan dan Alat Penelitian Bahan
Bibit tanaman torbangun Plectranthus amboinicus Lour. Spreng diperoleh dari Pusat Studi Biofarmaka IPB Cikabayan. Spesimen tanaman telah
diautentikasi oleh Pusat Penelitian Biologi, LIPI Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia Cibinong Bogor Surat Keterangan Identifikasi Tumbuhan terdapat
pada Lampiran 1. Pelarut yang digunakan untuk proses ekstraksi antara lain: etanol absolut, n-heksana, kloforom, dan etil asetat diperoleh dari Merck-
Germany. Kertas saring Whatman No. 42 untuk menyaring ekstrak. Berbagai pelarut standar HPLC untuk analisa HPLC dan LC-MS terdiri atas metanol, air
HPLC, asam asetat, asetonitril, dan asam format. Filter membran ukuran pori 0.45 µm berbahan nylon Minisart Sartorius digunakan untuk preparasi sampel. Sel
yang digunakan adalah sel adenokarsinoma payudara galur MCF-7 yang disediakan oleh PSSP IPB berasal dari ATCC® American Type Culture
Collection. Reagen dan bahan untuk kultur sel dan uji biologis antara lain: medium Roswell Park Memorial Institute RPMI 1640 Sigma-Aldrich USA,
fetal bovine serum FBS Gibco, penicillinstreptomycin, dimethyl sulfoxide DMSO, Merck-Germany, larutan penyangga
Dulbecco’s Phosphate Buffer Saline DPBS, Gibco, trypsin, trypane blue, 3-4,5-dimethylthiazol-2-yl-2,2-
diphenyltetrazolium bromide MTT, Rneasy Mini Kit Qiagen untuk ekstraksi RNA, dan iCycler One-Step qRealTime-PCR Kit KAPA BIOSYSTEMS.
Peralatan penelitan
Peralatan untuk proses ekstraksi yaitu refrigerator, freeze drier Martin Christ Gamma 2-16 LSC plus, Germany, freezer, blender, timbangan analitik
Sartorius, alat-alat gelas, vortex, sonicator, sentrifus kapasitas besar IEC Centra-8 Thermo Scientific, USA, platform shaker Innova 2100 Fisher
Scientific, rotary evaporator Buchi, Switzerland, vacuum filter, desikator, dan