32 32
Langkah 3 : Annealing Pemanasan pada temperatur 53
o
C selama 30 detik. Langkah 4 : Elongation
Pemanasan pada temperatur 72
o
C selama 1 menit. Langkah 5 : Step 2-5 diulang 40 kali.
Langkah 6 : Pertahankan campuran pada suhu 72
o
C selama 5 menit Ini berguna bila PCR dimulai pada sore hari sebelum meninggalkan
laboratorium, sehingga dapat berproses sepanjang malam. DNA tidak akan rusak pada temperatur 72
o
C setelah semalaman. Hasil PCR dapat diidentifikasi dengan menggunakan agarose gel
electroforesis. Agarose gel electroforesis adalah suatu prosedur yang terdiri dari pengisian DNA dalam agarose gel dan kemudian menghubungkan arus listrik pada
gel. Sebagai hasilnya, rantai DNA yang lebih kecil bergerak lebih cepat dari pada rantai yang lebih besar melalui gel menuju arus positif. Ukuran dari hasil PCR
ditentukan dengan membandingkannya dengan suatu DNA ladder yang ukurannya sudah diketahui yang dimasukkan juga ke dalam gel Sudjadi, 2008.
II.6.5. Reverse Transcriptase
Reverse transcriptase adalah mengubah suatu molekul RNA menjadi DNA komplemennya. Proses ini membutuhkan suatu enzim yang disebut: reverse
transcriptase, yang diambil dari suatu retrovirus seperti: AMV Avian Myeloblastosis Virus. Enzim yang biasanya secara bersama berhubungan dengan enzim reverse
transcriptase adalah enzim RNA-dependent DNA polymerase dan enzim DNA-
p d f Machine
A pdf w rit er t hat produces qualit y PDF files w it h ease
Produce quality PDF files in seconds and preserve the integrity of your original docum ents. Com patible across nearly all Windows platform s, sim ply open the docum ent you want to convert, click “print”, select the
“ Broadgun pdfMachine printer” and that’s it Get yours now
Universitas Sumatera Utara
33 33
dependent DNA polymerase, yang bekerja bersama membentuk transcriptase dengan arah yang berlawanan dengan arah standar. Reverse transcriptase adalah enzim yang
dihasilkan oleh semua retrovirus untuk mentranskrip informasi genetik virus dari RNA menjadi DNA, sehingga dapat berintegrasi ke dalam genom host Sudjadi,
2008. Dalam penelitian, reverse transcriptase menyebabkan data yang di kode pada
rantai RNA dapat diubah menjadi bentuk DNA dan digunakan dalam PCR, sebab PCR tidak dapat mereplikasi molekul RNA secara langsung. Kombinasi proses
reverse transcriptase dan PCR disebut RT-PCR Sudjadi, 2008.
p d f Machine
A pdf w rit er t hat produces qualit y PDF files w it h ease
Produce quality PDF files in seconds and preserve the integrity of your original docum ents. Com patible across nearly all Windows platform s, sim ply open the docum ent you want to convert, click “print”, select the
“ Broadgun pdfMachine printer” and that’s it Get yours now
Universitas Sumatera Utara
34 34
BAB III METODE PENELITIAN
III.1. Rancangan Penelitian
Penelitian dilakukan secara deskriptif dengan menggunakan teknik Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction RT-PCR.
III.2. Tempat dan Waktu
Penelitian dilakukan di Laboratorium Klinik Mikrobiologi Rumah Sakit Haji Adam Malik Medan, dari bulan September 2008 sampai bulan Januari 2009.
III.3. Bahan dan Cara Kerja
Bahan penelitian adalah serum penderita Demam Dengue dan Demam Berdarah Dengue yang dirawat di Rumah Sakit Haji Adam Malik, Rumah Sakit
Pirngadi, dan Rumah Sakit Herna Medan. Darah penderita diambil dengan menggunakan syringe 3 ml. Pengambilan sampel serum penderita DDDBD dengan
gejala klinis lima hari pertama demam Singh K, et al, 2006 dan konfirmasi diagnosis DDDBD sesuai dengan kriteria WHO. Setelah itu, data masing-masing
sampel dimasukkan ke dalam lembar check list yang berisi mengenai informasi demografi pasien seperti nama, umur, jenis kelamin, alamat, dan pekerjaan, serta
hasil pemeriksaan laboratorium.
p d f Machine
A pdf w rit er t hat produces qualit y PDF files w it h ease
Produce quality PDF files in seconds and preserve the integrity of your original docum ents. Com patible across nearly all Windows platform s, sim ply open the docum ent you want to convert, click “print”, select the
“ Broadgun pdfMachine printer” and that’s it Get yours now
Universitas Sumatera Utara
