3. METODOLOGI PENELITIAN
3.1. Waktu dan Tempat
Penelitian dilaksananakan pada bulan Maret-Juni 2009 di Laboratorium Diagnostik, Departemen Ilmu dan Penyakit Hewan dan Kesehatan Masyarakat
Veteriner, Fakultas Kedokteran Hewan, Laboratorium Bioteknologi Hasil Perairan, Laboratorium Biokimia Hasil Perairan dan Laboratorium Mikrobiologi
Hasil Perairan, Departemen Teknologi Hasil Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Institut Pertanian Bogor.
3.2. Alat dan Bahan
Peralatan yang digunakan pada penelitian ini yaitu cawan petri, erlenmeyer 1 liter, inkubator shaker, oven, sentrifuse, timbangan, viskometer
gilmont bola jatuh, gelas ukur, kertas saring Whatman 42, satu unit membran Reverse osmosis
CSM Model No: RE75-1812-50GPD dengan nilai rejeksi 95 NaCl dan luas permukaan 0,38 m² Lampiran 1, termostat, baker glass 2 liter
dan chromameter Minolta CR 300. Bahan-bahan yang dilakukan dalam penelitian ini adalah bakteri
Pseudomonas aeruginosa yang diperoleh dari laboratorium Mikrobiologi Medik,
FKH-IPB, media pertumbuhan bakteri yaitu NA Nutrien Agar dan BHI Brain Heart Infusion
Broth, etanol 96, akuades dan NaOH.
3.3. Metode Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan dalam dua tahap. Tahap pertama, yaitu produksi alginat dari bakteri P. aeruginosa dan tahap kedua pemekatan alginat
dengan teknologi membran.
3.3.1. Produksi alginat dari Pseudomonas aeruginusa
a. Penentuan kurva pertumbuhan dan pengukuran konsentrasi alginat Modifikasi Hassett 1996
Inokulum yang diperoleh dari stok kultur FKH disegarkan dalam cawan padat dengan media NA selama 24 jam pada suhu 37
o
C. Mikroba tersebut diinokulasikan ke dalam 250 ml media BHI broth dalam erlenmeyer 1 liter dan
diinkubasi dalam shaker dengan kecepatan 150 rpm selama 48 jam pada suhu
37
o
C. Selama inkubasi dilakukan pengamatan pada jam ke-0, ke-3, ke-6, ke-9, ke-12, ke-18, ke-24, ke-30, ke-36, ke-42 dan ke-48. Parameter yang diamati
selama inkubasi, yaitu biomassa kering bakteri, konsentrasi alginat dan viskositas. Parameter tersebut diamati untuk mengetahui laju pertumbuhan bakteri dan laju
pembentukan produk alginat yang nantinya digunakan untuk penetapan waktu proses optimal pada produksi alginat skala besar. Diagram penentuan kurva
pertumbuhan dan pengukuran konsentrasi alginat dapat dilihat pada Gambar 8.
b. Produksi alginat skala besar.
Kategori