Gambar 15. Biakan murni Aggregatibacter
actinomycetemcomitans
3.7.5 Penentuan KHM bahan coba
Bahan coba ekstrak kulit jeruk purut yang dipakai terdiri dari konsentrasi 100, 50, 25, 12,5, 6,25. Masing-masing konsentrasi tersebut diambil
sebanyak 1 ml lalu dimasukkan ke dalam mikro plate kemudian diberi label sesuai dengan konsentrasinya. Selanjutnya ambil 1 ml suspensi bakteri yang telah
dipersiapkan sebelumnya dengan menggunakan mikropipet lalu dimasukkan ke dalam masing-masing mikro plate bahan coba yang telah diberi label kamudian
divoteks. Lalu mikro plate tersebut diinkubasi pada suhu 37˚C selama 24 jam pada
inkubator CO
2
dan diamati kekeruhan yang terjadi dengan membandingkan tabung- tabung tersebut dengan kontrol untuk menentukan nilai KHM dari masing-masing
bahan coba. Tabung dengan kekeruhan yang mulai tampak jernih untuk setiap kelompok perlakuan merupakan KHM yaitu konsentrasi minimum ekstrak atau bahan
uji apapun
yang mampu
menghambat pertumbuhan
Aggregatibacter actinomycetemcomitans dalam media perbenihan setelah diinkubasi 24 jam dan tidak
tumbuh koloni kuman dalam perbenihan tersebut.
Universitas Sumatera Utara
Gambar 16. Suspensi bakteri a dimasukkan ke bahan coba dan b diinkubasi selama 24 jam
3.7.6 Penentuan KBM bahan coba
Penelitian dilanjutkan dengan penentuan KBM bahan coba dengan menggunakan metode Drop Plate Mills Mesra. Bahan coba dengan konsentrasi
100, 50, 25, 12,5, 6,25 masing- masing divoteks dan diambil 50 μl untuk
tiap konsentrasi lalu diteteskan ke dalam media padat Triptic Soy Agar direplikasi 5 petri, diamkan selama 15-20 menit sampai mengering dan diinkubasi dalam inkubator
CO
2
dengan suhu 37˚C selama 24 jam. Dilakukan perhitungan jumlah koloni bakteri dengan prinsip satu sel bakteri hidup bila dibiakkan pada media padat akan tumbuh
menjadi 1 koloni bakteri. Perhitungannya adalah bila bentuk koloni melebar dianggap berasal dari 1 koloni, bila bentuknya 2 koloni bersinggungan dianggap sebagai 2
koloni. Satuan yang dipakai adalah CFU Colony Forming Unit ml cairan suspensi.
Apabila telah dihitung jumlah koloni bakteri pada masing-masing tetesan, kemudian dibuat jumlah reratanya dan dikalikan dengan faktor pengenceran dan
faktor pengali. Oleh karena konsentrasi yang akan dilakukan perhitungan jumlah koloni bakteri merupakan konsentrasi awal sebelum dilakukan dilusi maka faktor
pengenceran x 1, selain itu karena pada penetesan suspensi bahan coba dan bakteri pada media padat sebanyak 50 μl, maka hasil perhitungan harus dikali dengan faktor
pengali 20 untuk mendapatkan hasil sesuai satuan standar CFUml. a
b
Universitas Sumatera Utara
Gambar 17. Metode Drop Plate Mills Mesra
3.8 Skema Alur Penelitian
Kategori