BAB 3 METODOLOGI PENELITIAN
3.1 Jenis Penelitian Jenis penelitian ini adalah penelitian kuasi eksperimental laboratorium dengan
rancangan penelitian post test only control group design.
3.2 Tempat dan Waktu Penelitian 3.2.1 Tempat Penelitian
: 1. Laboratorium Obat Tradisional Fakultas Farmasi USU
2. Laboratorium Pusat Penyakit Tropis Universitas Airlangga
3.2.2 Waktu Penelitian : September 2013
– November 2013
3.3 Sampel dan Besar Sampel Penelitian 3.3.1 Sampel Penelitian
Koloni Aggregatibacter actinomycetemcomitans Serotipe-C yang telah diisolasi dan dibiakkan dalam media Triptic Soy Agar TSA.
3.3.2 Besar Sampel Penelitian
Adapun penentuan besar sampel dilakukan berdasarkan SOP Standard Operational Procedure di Laboratorium Pusat Penyakit Tropis Universitas
Airlangga. Jumlah pengulangan yang dilakukan pada penelitian ini menggunakan rumus Federer yaitu:
Keterangan: t = jumlah kelompok perlakuan dalam penelitian
t-1 r-1 15
Universitas Sumatera Utara
r = banyak replikasi perlakuan ulang
Pada penelitian ini digunakan 5 perlakuan, yakni ekstrak kulit jeruk purut dengan konsentrasi 100, 50, 25, 12,5, dan 6,25. Oleh karena itu, banyak
replikasi pada penelitian ini adalah sebagai berikut: t-1 r-1
15 5-1 r-1
15 4 r-1
15 r-1
3,75 r
4,75
Jumlah perlakuan ulang r yang digunakan dalam penelitian ini adalah 5 kali perulangan.
a. Penentuan nilai KHM
- Kelompok I
: ekstrak dengan konsentrasi 100 = 5 sampel -
Kelompok II : ekstrak dengan konsentrasi 50
= 5 sampel -
Kelompok III : ekstrak dengan konsentrasi 25
= 5 sampel -
Kelompok IV : ekstrak dengan konsentrasi 12,5 = 5 sampel
- Kelompok V
: ekstrak dengan konsentrasi 6,25 = 5 sampel -
Kelompok VI : kontrol Mac Farland
= 1 sampel -
Kelompok VII : kontrol negatif ekstrak kulit jeruk purut
tanpa suspensi Aggregatibacter actinomycetemcomitans
= 1 sampel Jumlah sampel = 27 sampel
b. Penentuan nilai KBM
Dari hasil penentuan nilai KHM diperoleh beberapa kelompok yang dilanjutkan dengan perhitungan jumlah koloni bakteri dengan metode Drop
Plate Mills Mesra. -
Kelompok I : ekstrak dengan konsentrasi 100 = 5 sampel
- Kelompok II
: ekstrak dengan konsentrasi 50 = 5 sampel
Universitas Sumatera Utara
- Kelompok III
: ekstrak dengan konsentrasi 25 = 5 sampel
- Kelompok IV
: ekstrak dengan konsentrasi 12,5 = 5 sampel -
Kelompok V : ekstrak dengan konsentrasi 6,25 = 5 sampel
- Kelompok VI
: kontrol Mac Farland = 1 sampel
- Kelompok VII
: kontrol negatif ekstrak kulit jeruk purut tanpa
suspensi Aggregatibacter actinomycetemcomitans = 1 sampel
Jumlah sampel = 27 sampel
3.4 Variabel Penelitian Variabel Bebas
- Ekstrak kulit jeruk purut dengan konsentrasi 100, 50, 25, 12,5,
6,25
Variabel Tergantung
- Pertumbuhan bakteri Aggregatibacter actinomycetemcomitans pada media
TSA dengan pengukuran nilai KHM dan KBM.
Variabel Terkendali
- Keseragaman kondisi jeruk purut yang digunakan
-
Cara ekstraksi
- Lama penyimpanan, lama pengiriman, suhu saat pengiriman bahan coba
ekstrak etanol kulit jeruk purut ke laboratorium -
Cara pengeringan -
Waktu pengeringan
Variabel Tak Terkendali
-
Pola pemeliharaan tanaman jeruk purut
-
Kondisi tanah tempat tanaman jeruk purut ditanam
3.5 Definisi Operasional
- Ekstrak kulit jeruk purut adalah ekstrak yang diperoleh dengan melakukan
ekstraksi kulit jeruk purut yang telah diperkolasi dengan pelarut etanol 96 sehingga diperoleh ekstrak kental kulit jeruk purut.
Universitas Sumatera Utara
- Koloni Aggregatibacter actinomycetemcomitans adalah bakteri
Aggregatibacter actinomycetemcomitans yang berasal dari stem cell Aggregatibacter actinomycetemcomitans Serotipe-C dan kemudian
dikultur pada media TSA dalam suasana anaerob. -
KHM Konsentrasi Hambat Minimum adalah konsentrasi minimum bahan coba yang mampu menghambat pertumbuhan bakteri setelah
diinkubasi selama 24 jam dan mulai tidak tumbuh koloni bakteri pada media pembenihan dengan menggunakan metode dilusi.
- KBM Konsentrasi Bakterisidal Minimum adalah konsentrasi minimum
bahan coba yang dapat membunuh 99,9 atau 100 bakteri setelah dilakukan uji dilusi selama 24 jam, dengan cara menghitung jumlah koloni
bakteri pada media padat dengan menggunakan metode Drop Plate Mills Mesra.
3.6 Bahan dan Alat Penelitian 3.6.1 Bahan Penelitian
Kategori