12
BAB 3 METODE PENELITIAN
3.1. Waktu dan Tempat
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Pebruari 2013 sampai April 2014 bertempat di Laboratorium Kultur Jaringan Departemen Biologi, Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam dan Laboratorium Terpadu Universitas Sumatera Utara, Medan.
3.2. Bahan dan Alat
Bahan tanaman yang digunakan dalam penelitian ini adalah apical bud klon tanaman kelapa sawit yang berasal dari Pusat Penelitian Kelapa Sawit PPKS
Marihat, Pematang Siantar Lampiran 1. Bahan kimia yang digunakan adalah bahan-bahan penyusun media MS Murashige dan Skoog, 1962 Lampiran 2,
ZPT 2,4-D, agar, HCl 0,1N, NaOH 0,1N, HgCl
2
0,1, akuades, alkohol 70, Benlate
®
2 gl, Bayclin
®
10 dan 20, Tween
®
80, Nitrogen Cair PVP, EDTA pH 8, HCl pH 8, NaCl, CTAB, Kloroform, Fenol, Etanol, Natrium Asetat,
Isoamilalkohol, Buffer Tris-EDTA, Agarose, ddH
2
O steril, dNTP, pewarna ethidium bromide, primer RAPD.
Alat-alat yang digunakan adalah botol kultur, pisau, gunting, pinset, cawan petri, autoklaf, neraca analitik, pemanas, shaker, gelas ukur, kertas saring, spatula,
batang pengaduk, pipet tetes, pipet serologi, propipet, handsprayer, bunsen, mikroskop stereo, pH meter, kertas pembungkus, aluminium foil, kertas label,
selotip, karet, entkas, rak kultur, PCR, sentrifugasi, elektroforesis, vortex, tabung 1,5 ml, pipet serologi, propipet, lumping porselin, water bath, freezer, tisu gulung,
lemari pendingin.
3.3. Rancangan Percobaan
Penelitian ini menggunakan metode percobaan Rancangan Acak Lengkap RAL dengan 2 faktorial. Jumlah ulangan untuk setiap kelompok ditentukan dengan
menggunakan rumus Federer 1963 dalam Chairul et al., 1992 yaitu:
Universitas Sumatera Utara
13 t-1 n-
1 ≥ 15 T = jumlah perlakuan
N = jumlah ulangan
Faktor 1 A : Perlakuan media MS dengan penambahan ZPT 2,4-D
A : Konsentrasi 0 mgl sebagai kontrol
A
1
: Konsentrasi 110 mgl A
2
: Konsentrasi 120 mgl A
3
: Konsentrasi 130 mgl Faktor 2 B :
Perlakuan interval subkultur B
: 3 kali subkultur B
1
: 4 kali subkultur B
2
: 5 kali subkultur Sehingga diperoleh kombinasi perlakuan 4 x 3 = 12 perlakuan
A B
A B
1
A B
2
A
1
B A
1
B
1
A
1
B
2
A
2
B A
2
B
1
A
2
B
2
A
3
B A
3
B
1
A
3
B
2
Jumlah percobaan adalah 12 perlakuan, dengan masing-masing ulangan 3 kali, sehingga jumlah total 36 botol.
3.4. Cara Kerja 3.4.1. Sterilisasi Alat dan Bahan
Kategori