Pembuatan Media Sterilisasi Eksplan

14

3.4.2. Pembuatan Media

Media yang digunakan adalah media dasar MS Murashige dan Skoog, 1962 dengan penambahan ZPT 2,4-D. Tahap awal pembuatan media adalah pembuatan larutan stok terlebih dahulu yaitu hara makro, mikro, iron, dan vitamin. Unsur- unsur lain ditimbang sesuai kebutuhan seperti sukrosa dan agar. Pembuatan media sebanyak 1000 ml. Larutan MS dibuat dengan cara memasukkan hara makro, mikro, iron, vitamin, sukrosa, ZPT ke dalam beaker glass lalu ditambahkan akuades sehingga volumenya menjadi 500 ml. Larutan dibagi dalam 5 beaker glass dan masing- masing berisi 100 ml, setiap bagian ditambahkan ZPT berupa 2,4-D sesuai dengan konsentrasi untuk masing-masing perlakuan, kemudian ditambahkan dengan akuades sehingga volumenya menjadi 200 ml. pH diatur sebesar 5,8 dengan cara menambahkan HCl 0,1 N atau NaOH 0,1 N. Dimasukkan Bacto agar 10 gl pada masing-masing perlakuan, lalu dipanaskan hingga mendidih dan dituang ke dalam botol kultur yang telah diberi label sesuai banyaknya ulangan. Botol kultur yang telah berisi media ditutup dengan aluminium foil dan plastik, diikat dengan karet gelang, disterilisasi dalam autoklaf bertekanan 15 psi pada suhu 121 C selama 30 menit kemudian disimpan dalam ruang kultur lebih kurang selama 1 minggu sebelum digunakan.

3.4.3. Sterilisasi Eksplan

Eksplan berupa apical bud kelapa sawit dibersihkan dengan air mengalir dan direndam dalam detergen selama + 10 menit, kemudian dibilas dengan akuades steril hingga bersih. Eksplan dishaker dalam larutan fungisida 0,2 yang diberi 200 µl tween 80 ® selama 30 menit. Selanjutnya dibilas dengan akuades steril. Eksplan direndam dalam larutan antibiotik Betadine ® selama 10 menit dan dibilas dengan akuades steril. Bahan tanaman dimasukkan ke dalam larutan Na- hipoklorit 1,0 selama 5 menit dan dibilas dengan akuades steril. Tahap selanjutnya bahan tanaman direndam dalam larutan HgCl 2 0,1 selama 30 menit, dan dibilas tiga kali dengan akuades steril masing-masing 5 menit. Eksplan steril dikeringkan di atas cawan petri steril yang berisi kertas saring. Eksplan siap ditanam Zulkarnain, 2009. Universitas Sumatera Utara 15

3.4.4. Induksi Kalus