Saran KESIMPULAN DAN SARAN 1.

5. KESIMPULAN DAN SARAN 5.1. Kesimpulan Hasil penelitian penapisan antibakteri dan inhibitor topoisomerase I dari X. granatum disimpulkan sebagai berikut: 1 Rendemen ekstrak dalam pelarut metanol lebih besar dibandingkan menggunakan etil asetat dan heksana, rendemen tertinggi pada ekstrak metanol batang X. granatum sebesar 22.42. 2 Ekstrak kasar X. granatum dapat menghambat enzim topoisomerase I pada konsentrasi 50 gml, kecuali pada ekstrak akar heksana. 3 Ekstrak kasar metanol dari akar, batang, daun, daging buah dan biji X. granatum mengandung senyawa alkaloid, flavonoid dan tanin sedangkan saponin hanya pada ekstrak biji. Ekstrak metanol yang memiliki aktivitas antibakteri adalah ekstrak akar, batang, biji dan daging buah. 4 Ekstrak terpilih metanol batang X. granatum, memiliki MIC topoisomerase I pada konsentrasi 25 gml. Fraksi flavonoid dan tanin ekstrak metanol batang X. granatum dapat menghambat pertumbuhan bakteri E. coli non klinis dan daya hambat terhadap bakteri S. aureus klinis hanya pada fraksi flavonoid.

5.2. Saran

1 Fraksi alkaloid, flavonoid dan tanin dari ekstrak metanol batang X. granatum, perlu diuji aktivitas inhibitor topoisomerase I dan ditentukan MICnya. 2 Pemurnian fraksi terpilih yang memiliki aktivitas antibakteri dan inhibitor topoisomerase I, untuk penentuan struktur kimia. DAFTAR PUSTAKA Achmad SA. 1986. Kimia Organik Bahan Alam. Jakarta: Depdikbud Universitas Terbuka. Achmadi SS. 1992. Teknik Kimia Organik. Bogor: Jurusan Kimia Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor. Agarrado MTS. 2002. Phytochemicals and pulp from vegetable crops wastes. http:www.dgt.gov.phindex.php?option=com_undertaste=viewid=146 itemid=75 [2 Mei 2007]. Aksornkoae S. 1993. Ecology and Management of Mangroves. Thailand: IUCN. Akiyama et al. 1987. Genistein a specific inhibitor of tyrosine-specific protein kinases. J Biol Chem. 262.5592-5595. [AIMS] Australian Institute of arine Science. 2002. Field guide to the mangroves of queensland Canonball Mangrove-Xylocarpus granatum. http:www.aims.gov.aupagesreflibfg-mangrovespagesfgm-6465.htm [5 Maret 2006]. Ampisilin telah disepositkan di Drug Bank 2006 dengan nomor akses APRD00320. Bell SM. 1984. Antibiotic Sensitivity Testing by The CDS Methods. Di dalam Clinical Microbiology Up Date Programe. Edited: N. Hertwig. New South Wales: The Prince Wales Hospital. Budzianowski J. 1985. Pharmacognosy of the local plant P.officinalis. www.Cis.Um.Ed.Mt-phcysymp98KevinGauci. Html-7k. [24 Desember 2006]. Bruneton. 1993. Pharmacognosy, Phytochemistry, Medicinal Plants. Paris: Lavoisier Publishing. Brutlag D. 2000. DNA Topoisomerase. Biochemistry 201, Advenced Molecular Biology. [Januari 7, 2000]. Cotran RS. Kumar V. Robbins SL. 1994. Pathologic Basis of Disease. Philadelphia: WB Saunders Company. Corral LG. Post LS. Montville TJ. 1988. Antimicrobial activity of sodium bicarbonat. J. Food Sci. 53. Dardanela D. 2005. Penapisan beberapa tanaman asli Indonesia yang berpotensi sebagai antikanker secara enzimatis. [skripsi]. Bogor: Departemen Kimia FMIPA Institut Pertanian Bogor. Darusman LK. Sajuthi D. Komar. Pamungkas J. 1995. Ekstraksi komponen bioaktif sebagai bahan obat dari kerang-kerangan, bunga karang, dan ganggang di perairan P. Pari Kepulauan Seribu Tahap II: Fraksinasi dan Bioassay, Buletin Kimia No 10 Bulan Desember. Bogor: Jurusan Kimia- FMIPA IPB. 41 Davidson. Branen. 1993. Antimicrobial in Food. Ed ke-2. New York: Marcel Dekker, Inc. Dewick PM. 2001. Medicinal Natural Product A Biosynthetic Approach. Second Edition. England: John Wiley and Sons. Dwijoseputro. 1990. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Ed. Ke-2. Jakarta: PT Djambatan. Elizabeth C. Ashton. Donald J. Macintosh. 2002. Preliminary assessment of the plant diversity and community ecology of the sematan mangrove forest, Serawak, Malaysia. Forest Ecology and Management 166:111-129. [FDA] Food and Drug Administration. 2004. FDA seizes adulterated crabmeat in lousiana product contains chloramphenicol and poses unacceptable Risk. http:www.fda.govbhstopicsanswer2004AWSO1297.html [24 Desember 2006]. Frederick et al. 2003. Apoptosis induction in human cell by sungucine from Strychnos icaja root. Naunyn-Schemieldeberg’s Arch Pharmacol. 367:260- 265. Greenwald P. 1996. Chemoprevention of cancer. J Scintific American 9: 96-99. Griffits EJF. Miller DT. Suzuki. Lewontin RG. Gelbart WM. 1993. An Introduction to Genetic Analysis 5 th ed. W.H. New York: Preeman and Company. Harborne JB. 1987. Metode Fitokimia. Edisi kedua. Patmawinata K. Soedro I., penerjemah. Terjemahan dari: Phytochemical Methods. Bandung: ITB. Hardjito L. Kingston D. 2004. Laporan RUT 2004. Bioactive compounds from Indonesia marine invertebrates and their sustainable production through maricultured. Harismah K. 2002. Daun Jambu Biji untuk Sariawan. http:www.suaramerdeka. comharian020615ragam2.htm [1 April 2007]. Herba. 2003. Panduan pengembangan tanaman obat. http:www.karyasari. com. [15 Pebruari 2006]. Houghton PJ. Raman A. 1998. Laboratory Handbook for The Fractionation of Natural Extracts. Tokyo: Chapmal and Hall. Hostetmann K. Wolfender JL. dan Rodrigue ZS. 1997. Rapid detection and subsequent isolation of biactive constituents of crude plant extracts. Planta Med. 63: 2-10. Husain I. 1994. Elevation of topoisomerase I massenger RNA, protein and catalytic activity in human tumors: demonstration of tumor-type specificity and implication for cancer chemotherpy. Cancer Research 541: 539-546. Hsiang YH. 1989. Arrest of replication fork by drug-stabilized topoisomerase I DNA cleavable complexes as a mechanism of cell killing by campthothecin. Cancer Research 49:5077-5082. 42 Jia et.al. 2001. Method for the prevention and treatment of chronic venous insufficiency. United States Patent:6,210,680. Joseph MC. 1989. Protein-linked DNA strand breaks induced in mammalian cells by camptothecan inhibitor of topoisomerase I. Cancer Research 522: 525-532. Karyadi E. 2002. Memperbaiki pola makan mencegah kanker. http:cis.nci.nih.govfact3-62 p. [15 Pebruari 2006]. Kanazawa A. Ikeda T. Endo T. 1995. A novel approach to mode of action of cationic biocides morphological effect on antibacterial activity. J Appl Bacterial 78:55-60. Kim JM. Marshall MR. Cornell JA. Boston. Wei CI. 1995. Antibacterial activity of carvacrol, citral and geraniols against Salmonella typhimurium in culture medium and on fish cubes. J Food Sci. 696: 1365-1366. Lim. 2001. Guides to the mangroves of Singapore nyireh bunga Xylocarpus granatum.http:mangrove.nus.edu.sgguidebookstext1077.htm. [10 Maret 2006] Madigan TD. Martinko JM. Parker J. 2003. Brock Biology of Microorganism. Tenth edition. Pearson Education, Inc. Mangan Y. 2003. Cara Bijak Menaklukan Kanker. Jakarta: Agromedia Pustaka. Makker H.P.S, Becker. 1995. Isolation of tannins from leaves of some trees and shurubs and their properties. J Agric. Food Chem. 42: 123-129. Markham KR. 1988. Isolation Technigues for Flavonoids. Di dalam: Harborne JB, Mabry TJ, Mabry H, editor. Part 2. The Flavonoids. New York: Academic Press. Martono S. 1983. Isolasi dan identifikasi zat aktif berkhasiat analgetik pada daun Gendarussa vulgaris Nees. [ Laporan Penelitian ] . Yogyakarta: Fakultas Farmasi Univ. Gadjah Mada. Miller R. 2005. What is cancer? http:www.kidshealth.orgparentmedicalcancer.html [28 Nopember 2007]. Murakami A et al. 1998. Screening for in vitro antitumor-promoting activities of edible plans from Indonesia. J Cancer Detection and Prevention 226:516-525. Murhadi. 2002. Isolasi dan karakteristik komponen antibakteri dari biji atung Parinarium glaberrrimum Hassk. [tesis]. Bogor: Program Pascasarjana. Institut Pertanian Bogor. Pelczar MJ. Chan ECS. 1986. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Hadiotomo RS., penerjemah. Jakarta: UI-Press. Putri NE. 2004. Inhibisi fraksi aktif biji mahoni pada pertumbuhan Saccharomyces cerevisiae sebagai uji antikanker. [skripsi]. Bogor: Departemen Kimia. FMIPA Institut Pertanian Bogor. 43 Radiati LE. 2002. Mekanisme penghambatan virulensi bakteri entropatogen oleh ekstrak rimpang jahe Zingiber officinale Roscoe. [disertasi]. Bogor: Program Pascasarjana. Institut Pertanian Bogor. Raphael SS. 1987. Medical Laboratori Tecnology. Ed. Fourth. WB Saunders Company. Rivai H. 1995. Azas Pemeriksaan Kimia. Jakarta: UI-Press. Robinson T. 1995. Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi. Edisi Keenam. Padmawinata K, penerjemah. Bandung: ITB. Terjemahan dari: The Organic Constituents of Higher Plans. Sabine B. 1999. Research Biologist BAOBAB Farm. Schnack W. Mayer W. Haake M. 1990. Senyawa obat. Edisi ke-2. Wattimena JR. Soebito S., penerjemah. Yogyakarta: Gadjah Mada University Press. Schlegel HG. Schmidt K. 1994. Mikrobiologi Umum. Baskara T., penerjemah. Terjemahan dari: Allgemeine Mikrobiologie. Yogyakarta: Gajah Mada University Press. Semesi. Howell. 1992. The Mangroves of The Eastern African Region. United Nations Environment Programme UNEP. Kenya: Nairobi. SEO Consulting. 2007. Aplastic anemia information. http:www.what-is- aplastic-anemia.htm. [15 Maret 2007]. Siswandono dan Soekardjo. 1995. Kimia Medisinal. Surabaya: Universitas Airlangga. Smith JL. Maures MJ. Bencivengo MM. Kunsch CA. 1987. Effect of sodium chlorida up take of substrate by Staphylococcus aureus 196. J Food Protec. 50. Suffines M. Pezzuto JM. 1991. Assays related to cancer drugs discovery. Di dalam: Dey PM, Harborne JB eds. Methods in Plant Biochemistry Vol. 6. London: Academic Press. Suhartini S. 2003. Penapisan awal Caulerpa racemosa, Sesuvium portulacastrum, Xylocarpus granatum dan Ulva lactuca sebagai antimikroba [skripsi]. Bogor: Jurusan Teknologi Hasil Perikanan. Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan. Institut Pertanian Bogor. Sukardiman, Poermono H, Mubarika S, Sismindari. 2002. Skrining aktivitas antikanker fraksi n-heksana, etil asetat, n-butanol dan ekstrak metanol benalu teh Scurula krthopurpurea dengan molekul target enzim DNA topoisomerase. Majalah Farmasi Airlangga 2:72-75. Suradikusumah E. 1989. Kimia Tumbuhan. Bogor: PAU Ilmut Hayat, IPB. Suragih A. 2002. Telaah kandungan kimia senyawa antimikroba biji tumbuhan mangrove Xylocarpus granatum koening [tesis]. Bandung: Program Studi Farmasi Institut Teknologi Bandung. Suryawiria U. 1978. Mikrobiologi Lingkungan. Ed. Ke-2. Bandung: Institut Teknologi Bandung. 44 Sutaryadi. 1991. Dari Jamu Menjadi Obat Tradisional Menuju ke Fitofarmaka. Surabaya: Laboratorium Botani Farmakalogi. Fakultas Farmasi. Universitas Airlangga. Hal. 26-28. Thomlinson. 1986. The botany of mangroves. Cambridge University Press. Cambride Tropical Biology. Series 413 pp. http:gopher.ulb.ac.be dagillikmangrovex granatum.htm. [15 Pebruari 2006]. [ TopoGEN ] TopoGen. 2006. Manual for topoisomerase drug screening kit. http:www.topogen.comhtml [28 Nopember 2007]. Volk WA. Wheeler MF. 1988. Mikrobiologi Dasar. Ed. Ke-5. Jakarta: Erlangga. Voigt R. 1994. Buku Pelajaran Teknologi Farmasi. Noerono S., penerjemah. Yogyakarta: Gadjah Mada University Press. Wikipedia. 2007. Chloroform. http:en.wikipedia.orgwikiChloroform. Williams RAD. Lambert PA. Singleton P. 1996. Antimicrobial Drug Action. Bios Scientific Publisher. Yulia LA. 2003. Uji aktivitas tabir surya sunscreen dari biji tumbuhan bakau Xylocarpus granatum. [skripsi]. Bogor: Jurusan Teknologi Hasil Perikanan. Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Institut Pertanian Bogor. Yanagihara MN et al. 2005. Leptosins isolated from marine fungus Leptoshaeria species inhibited DNA topoisomerases I andor II induced apoptopsis by inactivated Aktprotein kinase B. J Cancer Sciences 9611:816-824. Zahir A. 1996. DNA topoisomerase I inhibitor: cytotoxic flavones from Lethedon tannaensis. J Natural Product 59: 701 -703. Zakaria FR. 2001. Pangan dan pencegahan kanker. J Teknol dan Industri Pangan 12:171-177. Lampiran 1 Prosedur Ekstraksi Bahan Aktif Prosedur ekstraksi bahan aktif X. granatum yaitu: 1 Sebelum ekstraksi dimulai, bahan berupa X. granatum akar, batang, daun, daging buah dan biji dihaluskandiblender. Masing-masing sampel yang telah halus ditimbang sebanyak 50.00 g dan masukkan dalam erlenmeyer. Proses ekstraksi dilakukan secara bertingkat, dengan cara sampel ditambahkan pelarut sampai terendam dimulai dari heksana non polar, etil asetat semi polar dan metanol polar. Selanjutnya dilakukan maserasi dengan magnetic stirrer dengan tujuan mengeluarkan bahan aktif. Maserasi selama 24 jam pada suhu ruang dan selama maserasi erlenmeyer ditutup menggunakan aluminium foil untuk mencegah penguapan pelarut. 2 Selesai proses maserasi dilakukan penyaringan dengan corong kaca dan kertas saring Whatman untuk memisahkan filtrat dan ampasnya. Ampas kemudian direndam dengan pelarut kedua etil asetat, dimaserasi kembali selama 24 jam dan disaring sehingga diperoleh filtrat dari ampas kedua. Selanjutnya ampas kedua direndam kembali dengan pelarut ketiga metanol dimaserasi selama 24 jam dan disaring sehingga diperoleh filtrat ketiga. 3 Selanjutnya masing-masing filtrat dievaporasi dengan menggunakan evaporator vakum untuk menguapkan pelarut yang terikat dalam sampel dan apabila telah terbebas dari pelarutnya selanjutnya berturut-turut disebut ekstrak heksana, ekstrak etil asetat dan ekstrak metanol. 46 Lampiran 2 Prosedur Pengujian Aktivitas Inhibitor Topoisomerase I Prosedur pengujian aktivitas inhibitor topoisomerase I adalah: 1 Melakukan persiapan gel agarosa 1, mula-mula agarosa sebanyak 1 g ditambahkan buffer TAETris Acid EDTA 1x sebanyak 100 ml dipanaskan sampai semua agarosa larut sempurna. Selanjutnya dituangkan ke dalam cetakan yang telah disiapkan dengan menempatkan sisir cetakan sumur tempat sampel. Perlu diperhatikan bahwa sisir harus tegak lurus sehingga migrasi DNA dipastikan dimulai dari permukaan yang lurus dan rata, serta sisir jangan sampai menyinggung alas gel sehingga sumur yang dibuat menjadi tidak bocor. Selanjutnya gel dibiarkan membeku dan sisir dilepaskan dengan hati-hati. 2 Gel agarosa yang telah dibuat dimasukkan dalam tangki elektroforesis, sehingga seluruh permukaan gel sudah terendam bufer TAE 1x. 3 Pengujian topoisomerase I dilakukan dengan cara menambahkan bahan- bahan reaksi ke dalam tabung ependorf secara berurutan yaitu: H 2 O hingga volume reaksi 20 5l, 10x buffer TGS sebanyak 2 5l, supercoiled DNA 250 ng5l sebanyak 1 5l, sampel ekstrak X.granatum bervariasi antara 1-2 5l, enzim topoisomerase I sebanyak 2 5l 4 unit. Penambahan bahan- bahan reaksi dilakukan di dalam es curah. 4 Pereaksi diinkubasi pada suhu 37 o C dalam heating block selama 30 menit, ditambah 2 µ l 110 dari volume pereaksi sodium dodecyl sulfate SDS 10 dan untuk membersihkan sisa-sisa enzim ditambahkan 50 µ gml proteinase K, diinkubasi kembali dalam heating block selama 30 menit. Tambahkan 2 µ l 110 dari volume pereaksi loading buffer dan 20 µ l volume yang sama khloroform : isoamyl alkohol atau CIA 24:1, divortek dan disentrifugasi selama 5 detik. Setelah reaksi selesai, lapisan atas berwarna biru diambil dan diisikan pada gel agarose 1 pada elektroforesis. 5 Selain menyiapkan reaksi dengan sampel, juga disiapkan reaksi-reaksi yang berfungsi sebagai kontrol, dengan rincian sebagai berikut: Kontrol 1 terdiri dari H 2 O, buffer, supercoiled DNA, enzim topoisomerase I, yang berfungsi untuk menunjukkan aktivitas enzim, dimana akan terjadi relaksasi DNA. 47 Kontrol 2 terdiri dari H 2 O, buffer, supercoiled DNA, pelarut sampel DMSO 10, yang berfungsi untuk menunjukkan bahwa pelarut tidak mempengaruhi mobilitas DNA. Kontrol 3 terdiri dari H 2 O, buffer, supercoiled DNA, pelarut sampel DMSO 10, enzim topoisomerase I, yang berfungsi untuk menunjukkan bahwa pelarut tidak mempengaruhi aktifitas enzim Kontrol 4 terdiri dari marker relaxed DNA. Kontrol 5 terdiri dari H 2 O, buffer, supercoiled DNA, camptothecin larutkan stok dalam 10 DMSO hingga 1 mM – gunakan 110 volume dalam reaksi, enzim topoisomerase I, berfungsi untuk mendeteksi cleavage complexes. 6 Selesai proses running dengan elektroforesis dilakukan proses staning gel dengan cara merendam dalam zat warna 0,5 µ gml ethidium bromida EtBr dan proses destaning dengan akuades. Selanjutnya pita-pita pada gel hasil elektroforesis diamati dengan menggunakan lampu UV. 7 Aktivitas inhibisi enzim DNA topoisomerase I ditentukan dengan mengamati kemampuan enzim untuk merubah bentuk supercoiled DNA menjadi bentuk relaxed DNA, serta digunakan kontrol inhibitor Camptothecin kontrol positif pada konsentrasi 100 5M 34,84 5gml. 48 Lampiran 3 Visualisasi Gel Agarose dengan Marker dan Kontrol TopoGen 2006 49 Lampiran 4 Prosedur Pengujian Fitokimia a. Alkaloid

1. Prinsip pengujian alkaloid