67
j. Prosedur analisa aktivitas FP-Ase
1. Pembuatan pereaksi - Buffer sitrat
Larutan 0,05 M Na-sitrat dicampur dengan larutan 0,05 M asam sitrat dengan perbandingan 27:23, maka akan diperoleh larutan buffer sitrat dengan pH
4,8 pada konsentrasi 0,05 M - Pereaksi DNS
10,6 g DNS dan 19,8 g NaOH dilarutkan dalam 1416 ml air, kemudian ditambahkan 306 gr garam Rochele Na-K tartarat dan 7,6 ml fenol serta 8,3
metabisulfit 2. Pengujian aktivitas FP-Ase
Pengujian aktivitas enzim FP-ase dapat mencerminkan aktivitas umum selulase, karena substrat untuk pengujiannya digunakan serat yang masih bersifat
kristal sehingga melibatkan aktivitas C1 yang berperan sebagai pengaktif selulosa kristal menjadi selulosa reaktif
Substrat yang dipergunakan untuk pengujian adalah kertas saring Whatman no 1, sedangkan perekasinya adalah DNS. Sebagai standar dipergunakan larutan
glukosa. Bagan alir pengujian disajikan pada bagan berikut ini:
1 ml ml filtrat enzim 1 ml buffer sitrat pH 4,8
Inkbasi pada suhu 50
o
C selama 30 menit
Ditempatkan dalam air mendidih selama 5 menit
Dibaca absorbansinya pada panjang gelombang
550 nm Ditambahkan 3 ml
peraksi DNS Kertas saring Whatman No. 1
68
k. Prosedur analisa CMC-Ase
1. Pembuatan pereaksi - Larutan CMC-Ase
CMC sebanyak 10 g dilarutkan dalam 800 ml air panas sambil dikocok secara kontinyu, selanjutnya diambil 100 ml buffer sitrat 0,05 M pH 4,8, 10 ml
merthiolat 1 dan ditepatkan volumenya sampai 1 L. Larutan ini disimpan dalam lemari pendingin dan dipanaskan 50
o
C sebelum digunakan. - Pereaksi DNS
10,6 g DNS dan 19,8 g NaOH dilarutkan dalam 1416 ml air, kemudian ditambahkan 306 gr garam Rochele Na-K tartarat dan 7,6 ml fenol serta 8,3
metabisulfit 2. Pengujian aktivitas CMC-ase
Pengujian aktivitas
CMC-ase dapat
mencerminkan aktivitas
enzim endoglukanase yang menyerang selulosa yang telah diregangkan struktur seratnya
ataupun yang telah disubsitusi. Substrat yang dipergunakan untuk pengujiana ini adalah larutan CMC 1 sedangkan pereaksinya adalah DNS, sebagai standar
digunakan larutan glukosa. Bagan alir pengujiannya sebagai berikut:
69
l. Pengujian aktivitas enzim amiloglukosidae
Kategori