25 cawan penguap ditambahkan 2 tetes asam asetat anhidrida dan 1 tetes asam sulfat
pekat.Timbul warna ungu atau merah kemudian berubah menjadi hijau biru menunjukkan adanya steroidatriterpenoida Harbone, 1987.
3.7 Pembuatan Ekstrak n- Heksana, Etilasetat dan Etanol Daun Sembung
Rambat secara Maserasi Pembuatan ekstrak dilakukan secara maserasi dengan menggunakan tiga
pelarut. Cara kerja: Sebanyak 350g serbuk simplisia dimaserasi dengan cairan penyari n-heksana didalam wadah dan ditutup rapat. Selanjutnya, dibiarkan pada
suhu kamar selama 5 hari terlindung dari cahaya matahari sambil sering diaduk, kemudian disaring menghasilkan maserat n-heksana dan ampasnya dikeringkan
dengan cara diangin-anginkan kemudian dimaserasi kembali menggunakan cairan penyari etilasetat dengan prosedur maserasi yang sama. Setelah maserat etilasetat
diperoleh, ampasnya dikeringkan kembali dengan cara diangin-anginkan dan dimaserasi kembali dengan cairan penyari etanol dengan prosedur maserasi yang
sama. Masing-masing maserat yang diperoleh dipekatkan dengan alat penguap rotary evaporator
dan dikeringkan dengan freeze dryer Depkes RI, 1979.
3.8 Sterilisasi Alat
Alat-alat yang digunakan dalam uji aktivitas antimikroba ini disterilkan terlebih dahulu sebelum dipakai.Alat-alat gelas disterilkan di dalam oven pada
suhu 170
o
C selama 1-2 jam.Media disterilkan di autoklaf pada suhu 121
o
C selama 15 menit.Jarum ose dan pinset dengan lampu Bunsen Ditjen POM, 1995.
Universitas Sumatera Utara
26
3.9 Pembuatan Media
3.9.1 Media Nutrien Agar NA
Komposisi: Bacto beef extract
3,0 g Bacto Peptone
5,0 g Bacto agar
15,0 g Sebanyak 28 g nutrien agar NA dimasukkan ke dalam erlemenyer
tambahkan air suling 1000 ml, lalu dipanaskan sampai larut kemudian disterilkan di dalam autoklaf pada suhu 121
o
C selama 15 menit Oxoid, 1998.
3.9.2 Media Nutrient Broth NB
Komposisi: Bacto beef extract
3,0 g Bacto peptone
5,0 g Sebanyak 8 g nutrien agar NA dimasukkan ke dalam erlemenyer
tambahkan air suling 1000 ml, lalu dipanaskan sampai larut kemudian disterilkan di dalam autoklaf pada suhu 121
o
C selama 15 menit Oxoid, 1998.
3.9.3 Pembuatan Media Agar Miring
Sebanyak 10 ml media nutrient agar yang sudah dicairkan dimasukkan ke dalam tabung reaksi steril, didiamkan pada temperatur kamar sampai memadat
pada posisi miring membentuk sudut 30-45
o
C. Kemudian disimpan dalam lemari pendingin pada suhu 5
o
C Lay, 1994.
3.10 Pembuatan Stok Kultur
