Dialisis Nimotuzumab HASIL DAN PEMBAHASAN

28 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Dialisis Nimotuzumab

Sediaan nimotuzumab seperti yang tertera pada brosurnya mengandung bahan utama nimotuzumab dan bahan pendukung lainnya seperti dibasik sodium pospat Na 2 HPO 4 , monobasik sodium pospat NaH 2 PO 4 , sodium klorida NaCl, dan polisorbat 80 Haryuni, 2013. Dialisis dimaksudkan untuk memurnikan dan mengkondisikan nimotuzumab dalam larutan dapar yang diinginkan. Pada penelitian ini sediaan nimotuzumab didialisis menggunakan kaset dialisis 20 KD MWCO dalam 0,02 M dapar asetat pH 4,5 pada suhu 4 C selama 72 jam dengan penggantian dapar setiap 24 jam. Sediaan nimotuzumab yang telah di dialisis selanjutnya dianalisis dengan KCKT. KCKT yang dilengkapi dengan kolom eksklusi ukuran dan detektor uv digunakan untuk menentukan kemurnian dan waktu retensi r t nimotuzumab sebelum dan sesudah dialisis serta setelah proses fragmentasi. Penentuan kemurnian nimotuzumab dilakukan dengan membandingkan persentase area puncak nimotuzumab terhadap total area puncak-puncak kromatogram cuplikan. Penentuan r t yang merupakan fungsi berat molekul BM dilakukan dengan membandingkan terhadap r t protein standar dengan BM antara 670000 – 1350 Dalton. Gambar 4.1. Kromatogram standar protein. Waktu Retensi menit Re sp o n Ala t m V UIN Syarif Hidayatullah Jakarta Tabel 4.1. Komponen standar protein Gambar 4.1 dan Tabel 4.1 berturut-turut memperlihatkan kromatogram standar protein dan komponen, BM dan r t standard protein, sedangkan kromatogram nimotuzumab sebelum dan sesudah dialisis dapat dilihat pada Gambar 4.2. Gambar 4.2. Kromatogram nimotuzumab. Keterangan : A nimotuzumab sebelum dialisis, B nimotuzumab sesudah dialisis dan C kondisi kolom SEC Aglient Bio SEC-3 yang diinjeksikan blanko air. Protein Berat Molekul Dalton Retention Time menit Thyroglobuin 670000 5,187 -globulin 158000 5,637 ovalbumin 44000 6,497 myoglobin 17000 7,563 vitamin B12 1350 10,233 Re sp o n Ala t m V R esp o n Alat m V Waktu Retensi menit Waktu Retensi menit A B R esp o n Alat m V Waktu Retensi menit C UIN Syarif Hidayatullah Jakarta Nimotuzumab sebelum dan sesudah dialisis memberikan puncak dengan r t berturut-turut pada 5,743 dan 5,737 menit. Puncak nimotuzumab dengan r t tersebut jika dibandingkan r t standar protein Tabel 4.1 maka BM nimotuzumab diperkirakan sekitar 150.000 Da. Kemurnian nimotuzumab sebelum dan setelah didialisis berdasarkan persentase luas puncak berurut-turut adalah 96,6 dan 100.

4.2 Fragmentasi Nimotuzumab