28
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Dialisis Nimotuzumab
Sediaan nimotuzumab seperti yang tertera pada brosurnya mengandung bahan utama nimotuzumab dan bahan pendukung lainnya
seperti dibasik sodium pospat Na
2
HPO
4
, monobasik sodium pospat NaH
2
PO
4
, sodium klorida NaCl, dan polisorbat 80 Haryuni, 2013. Dialisis
dimaksudkan untuk
memurnikan dan
mengkondisikan nimotuzumab dalam larutan dapar yang diinginkan. Pada penelitian ini
sediaan nimotuzumab didialisis menggunakan kaset dialisis 20 KD MWCO dalam 0,02 M dapar asetat pH 4,5 pada suhu 4
C selama 72 jam dengan penggantian dapar setiap 24 jam. Sediaan nimotuzumab yang telah
di dialisis selanjutnya dianalisis dengan KCKT. KCKT yang dilengkapi dengan kolom eksklusi ukuran dan
detektor uv digunakan untuk menentukan kemurnian dan waktu retensi r
t
nimotuzumab sebelum dan sesudah dialisis serta setelah proses fragmentasi. Penentuan kemurnian nimotuzumab dilakukan dengan
membandingkan persentase area puncak nimotuzumab terhadap total area puncak-puncak kromatogram cuplikan. Penentuan r
t
yang merupakan fungsi berat molekul BM dilakukan dengan membandingkan terhadap r
t
protein standar dengan BM antara 670000 – 1350 Dalton.
Gambar 4.1. Kromatogram standar protein.
Waktu Retensi menit Re
sp o
n Ala
t m
V
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Tabel 4.1. Komponen standar protein
Gambar 4.1 dan Tabel 4.1 berturut-turut memperlihatkan kromatogram standar protein dan komponen, BM dan r
t
standard protein, sedangkan kromatogram nimotuzumab sebelum dan sesudah dialisis dapat
dilihat pada Gambar 4.2.
Gambar 4.2.
Kromatogram nimotuzumab.
Keterangan : A nimotuzumab sebelum dialisis, B nimotuzumab sesudah dialisis dan C kondisi kolom SEC Aglient Bio SEC-3 yang diinjeksikan blanko air.
Protein Berat
Molekul Dalton
Retention Time
menit Thyroglobuin
670000 5,187
-globulin 158000
5,637 ovalbumin
44000 6,497
myoglobin 17000
7,563 vitamin B12
1350 10,233
Re sp
o n
Ala t
m V
R esp
o n
Alat m
V Waktu Retensi menit
Waktu Retensi menit
A
B
R esp
o n
Alat m
V
Waktu Retensi menit
C
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Nimotuzumab sebelum dan sesudah dialisis memberikan puncak dengan r
t
berturut-turut pada 5,743 dan 5,737 menit. Puncak nimotuzumab dengan r
t
tersebut jika dibandingkan r
t
standar protein Tabel 4.1 maka BM nimotuzumab diperkirakan sekitar 150.000 Da. Kemurnian
nimotuzumab sebelum dan setelah didialisis berdasarkan persentase luas puncak berurut-turut adalah 96,6 dan 100.
4.2 Fragmentasi Nimotuzumab