kompor listrik, tanur pengabuan, kapas bebas lemak, labu lemak, tabung Soxhlet, penangas air, labu Kjeldahl, alat destilasi, labu erlenmeyer, buret, pipet
volumetrik, pipet mikro, gelas ukur, blender, sentrifuse,
rotary vacuum evaporator, corong terpisah, botol vial, gelas piala, pipet tetes, tabung reaksi, vortex, kertas saring Whatman : 10 dan 42 bebas abu,
corong Buchner, labu takar dan spektrofotometer UV-Vis.
3.3 Metode Penelitian
Penelitian ini bersifat deskriptif dari data yang diperoleh dan terdiri atas beberapa tahapan, yaitu tahap pengambilan sampel, tahap perhitungan rendemen
daun, tangkai daun dan batang, tahap pembuatan ekstrak kasar kangkung air, tahap analisis komposisi kimia kangkung air berupa analisis proksimat kadar air,
lemak, protein, abu, abu tak larut asam dan serat kasar, uji fitokimia dan uji aktivitas antioksidan terhadap ekstrak kasar kangkung air.
3.3.1 Pengambilan dan preparasi bahan baku
Sampel kangkung air dilakukan di Desa Carang Pulang, Kelurahan Cikarawang, Kecamatan Dramaga, Bogor. Sampel dipetik secara langsung dalam
area yang dibatasi transek kuadrat 1 m
2
. Kangkung tersebut kemudian dimasukkan dalam plastik dan segera dipreparasi di Laboratorium Karakterisasi
Bahan Baku, Departemen Teknologi Hasil Perairan. Semua bagian kangkung dibersihkan dari kotoran seperti tanah, pasir dan lumpur. Kemudian sampel
dihitung rendemennya dengan perumusan sebagai berikut:
Kangkung dibagi menjadi dua bagian. Bagian pertama merupakan bagian yang akan diuji kadar air, lemak, protein, kadar abu, abu tidak larut asam dan
serat kasat uji proksimat dalam keadaan utuh dan segar. Kangkung dikecilkan ukurannya dengan pisau untuk mempermudah proses uji. Bagian kedua
merupakan bagian yang akan dikeringkan dan diekstrak untuk diuji aktivitas antioksidan dan fitokimia yang terkandung di dalamnya, yaitu bagian daun,
tangkai daun dan batang. Kangkung yang telah kering dihancurkan
dengan blender sehingga diperoleh bentuk serbuk halus. Serbuk halus tersebut akan diekstraksi dengan pelarut yang telah disiapkan dan selanjutnya akan diuji
secara fitokimia dan uji aktivitas antioksidan.
3.3.2 Analisis proksimat
Analisis proksimat
merupakan suatu
analisis yang
dilakukan untuk memprediksi komposisi kimia suatu bahan, termasuk di dalamnya analisis
kadar air, lemak, protein, abu, abu tidak larut asam dan serat kasar.
1 Kadar air AOAC 2005
Tahap pertama
yang dilakukan
untuk menganalisis
kadar air
adalah mengeringkan cawan porselen dalam oven pada suhu 105
o
C selama 1 jam. Cawan tersebut diletakkan ke dalam desikator kurang lebih 15 menit atau
dibiarkan hingga beratnya konstan kemudian ditimbang. Sebanyak 5 gram contoh dimasukkan ke dalam cawan tersebut, kemudian dikeringkan dengan oven pada
suhu 105
o
C selama 5 jam atau hingga beratnya konstan. Cawan tersebut kemudian dimasukkan ke dalam desikator dan dibiarkan sampai beratnya konstan,
selanjutnya ditimbang kembali. Perhitungan kadar air :
2 Kadar lemak AOAC 2005
Contoh seberat 5 gram W
1
dimasukkan ke dalam kertas saring pada kedua ujung bungkus ditutup dengan kapas bebas lemak dan selanjutnya dimasukkan
ke dalam selongsong lemak, kemudian sampel yang telah dibungkus dimasukkan dalam labu lemak yang sudah ditimbang berat tetapnya W
2
dan disambungkan dengan tabung Soxhlet. Selongsong lemak dimasukkan ke dalam ruang ekstraktor
tabung Soxhlet dan disiram dengan pelarut lemak n-heksana. Kemudian dilakukan refluks selama 6 jam. Pelarut lemak yang ada dalam labu lemak
didestilasi hingga semua pelarut lemak menguap. Pada saat destilasi pelarut akan tertampung di ruang ekstraktor, pelarut dikeluarkan sehingga tidak kembali
ke dalam labu lemak, selanjutnya labu lemak dikeringkan dalam oven pada suhu 105
o
C, setelah itu labu didinginkan dalam desikator sampai beratnya konstan W
3
. Perhitungan kadar lemak kangkung air:
Keterangan : W
1
= Berat sampel g W
2
= Berat labu lemak kosong g W
3
= Berat labu lemak dengan lemak g
3 Kadar protein AOAC 1980
Tahap-tahap yang dilakukan dalam analisis protein terdiri dari tiga tahap, yaitu destruksi, destilasi dan titrasi. Pengukuran kadar protein dilakukan dengan
metode mikro Kjeldahl. Sampel ditimbang sebanyak 0,25 gram dimasukkan ke dalam labu Kjeldahl 100 ml. Sebanyak 0,25 gram Selenium dan 3 ml H
2
SO
4
pekat serta sampel didekstruksi pemanasan dalam keadaan mendidih pada suhu 410
o
C selama 1 jam sampai larutan jernih. Setelah dingin ditambahkan 50 ml aquades dan 20 ml NaOH 40, lalu didestilasi dengan suhu destilator 100
o
C. Hasil destilasi ditampung dalam labu Erlenmeyer yang berisi campuran 10 ml
H
3
BO
3
2 dan 2 tetes indikator bromcherol green-methyl red berwarna merah muda 1:2. Setelah volume hasil tampungan destilat menjadi 40 ml dan
berwarna hijau kebiruan, destilasi dihentikan dan destilat dititrasi dengan HCl 0,10 N sampai berwarna merah muda. Perlakuan yang sama dilakukan juga
terhadap blanko. Dengan metode ini diperoleh kadar nitrogen total yang dihitung. Kadar protein dihitung dengan rumus sebagai berikut:
Faktor konversi alat = 2,5
Faktor konversi = 6,25
4 Kadar abu AOAC 2005
Cawan pengabuan dikeringkan di dalam oven selama 1 jam pada suhu 105
o
C, kemudian didinginkan selama 15 menit di dalam desikator hingga didapatkan berat yang konstan dan ditimbang. Sampel sebanyak 5 gram
dimasukkan ke dalam cawan pengabuan dan dipijarkan di atas nyala api bunsen hingga tidak berasap lagi. Setelah itu dimasukkan ke dalam tanur pengabuan
dengan suhu 400
o
C selama 1 jam, kemudian dimasukkan dalam desikator hingga didapatkan berat yang konstan dan ditimbang.
Kadar abu ditentukan dengan rumus:
5 Kadar abu tidak larut asam menurut SNI 01-3836-2000 BSN 2000
Abu hasil penetapan kadar abu total dilarutkan dalam 25 ml HCl 10 dan dididihkan selama 5 menit. Larutan tersebut kemudian disaring dengan kertas
saring bebas abu dan dicuci dengan air suling sampai bebas klorida. Kertas saring kemudian dikeringkan dalam oven. Abu yang telah kering kemudian diabukan
kembali dalam tanur dengan menggunakan wadah
cawan porselen. Cawan porselen tersebut kemudian didinginkan dalam desikator dan ditimbang
hingga beratnya tetap. Kadar abu tidak larut asam ditentukan dengan rumus:
6 Kadar serat kasar AOAC 1980 Sebanyak 1 gram sampel dilarutkan dengan 100 ml H
2
SO
4
1,25 dipanaskan hingga mendidih lalu dilanjutkan dengan destruksi selama 30 menit.
Kemudian disaring menggunakan kertas saring Whatman : 10 dan dengan bantuan corong Buncher. Residu hasil saringan dibilas dengan 20-30 ml
air mendidih dan dengan air sebanyak 3 kali. Residu dekstruksi kembali dengan 100 ml NaOH 1,25 selama 30 menit. Lalu disaring dengan cara sama seperti
di atas dan dibilas berturut-turut dengan 25 ml H
2
SO
4
1,25 mendidih, 2,5 ml air sebanyak tiga kali dan 25 ml alkohol. Residu beserta kertas saring dipindahkan
ke cawan porselin dan porselin ditimbang A, lalu dimasukkan dalam tanur 600
o
C selama 30 menit, didinginkan dan ditimbang kembali B. Kadar serat kasar dapat dihitung dengan perumusan sebagai berikut:
Keterangan: W
= bobot residu sebelum dibakar dalam tanur = A – bobot kertas saring + cawan
Wo = B – bobot cawan
A = bobot residu + kertas saring + cawan
B = bobot residu + cawan
3.3.3 Analisis antioksidan 1 Ekstraksi bahan aktif Quinn 1988 diacu dalam Darusman
