PENGAMBILAN SAMPEL 1. Pengambilan Sampel Darah

berpendar hijau fluorescensi pada sampel yang diamati dengan menggunakan mikroskop flurorescen. Alat penting yang diperlukan : a. Laminar flow cabinet, b. Mikroskop fluoresensi. Reagensia dan bahan-bahan biologik: a. Larutan PBS pH 7,2 tanpa Ca 2+ dan Mg 2+ , disimpan pada suhu 4°C, b. Aseton high grade, c. Konjugat anti rabies FITC, d. Kontrol otak positif rabies, e. Kontrol otak negatif rabies. Prosedur uji: 1. Buat sekurang-kurangnya 4 slide preparat; 2 preparat ulas smear dan 2 preparat tekan gerusan dari sampel otak segar mengandung dasar cerebellum, hippocampus, cortex dan medulla oblongata setipis mungkin pada gelas slide. Disamping itu buat slide preparat dari otak yng mengandung virus rabies dan otak yang tidak mengandung virus rabies sebagai pembandingkontrol positif dan negatif, 2. Bila sampel otak telah diawetkan dalam 50 gliserol – PBS, maka preparat dicuci beberapa kali dengan PBS untuk menghilangkan gliserol yang dapat menutupi fluoresensi, 3. Preparat kemudian dikeringkan dengan cara dihembuskan angin diangin-angin, lalu dimasukkan ke dalam coplin jar kontainer yang mengandung aseton dingin preparat terendam dan simpan di dalam freezer -15 o C samapi -20 o C untuk selama 2 – 4 jam, 4. Preparat kemudian diangkat dari rendaman aseton dingin lalu dikeringkan diangin-angin, 5. Setelah preparat kering, buat garis demarkasi melingkar pada lokasi lapisan sampel yang tipis sepanjang 2,5 cm dengan menggunakan pensil lilin wax marking pencil sebanyak 2 buah lokasi per slide. Demikian juga dengan slide preparat kontrol diperlakukan sama seperti slide preparat sampel, 6. Teteskan konjugat anti rabies FITC sebanyak 2 tetes pada lokasi yang didemarkasi. Usahakan cairan konjugat tersebar secara merata menutupi lokasi demarkasi, 7. Tempatkan slide preparat tadi secara horisontal pada rak yang datar di atas baki yang cukup mengandung air, baki ditutup dan lalu ditempatkan di dalam inkubator dengan suhu 37 o C selama 30 menit, 8. Setelah selesai masa inkubasi, slide preparat kemudian di rendam dalam PBS pH 7,4, kemudian di cuci rinse dengan meneteskan cairan PBS sehingga menutupi preparat sebanyak 2 kali masing-masing untuk selama 10 menit, 9. Slide preparat kemudian dipindahkan dan dikeringkan dengan cara menempatkannya secara vertikal,