I I BAH AN D AN CARA KERJA

BAB I I I BAH AN D AN CARA KERJA

I I I . 1 . D I SAI N PEN ELI TI AN

Penelit ian ini m er upak an st udi cr oss sect ional unt uk m enget ahui hubungan j enis bat u dengan j enis bakt eri.

I I I . 2 . W AKTU D AN TEM PAT PEN ELI TI AN

Penelit ian ini dilak sanak an di r um ah Sak it Haj i Adam Malik Medan di Bagian Labor at or ium Pat ologi Klinik ( Sub bagian Kim ia Klinik dan sub bagian Mik r obniologi) , dan bek er j a sam a dengan Bagian Bedah Ur ologi GK USI SU,RSUD Dr .Pir ngadi dan

beber apa Rum ah Sak it Sw ast a di k ot a Medan. Pengam bilan dan penelit ian sam ple dilak uk an pada Desem ber 1999 dan dilanj ut k an m ulai ak hir Mar et 2000 sam pai Sept em ber 2000. Penelit ian t er hent i selam a 3 bulan ( Januar i 2000 sam pai Mar et 2000) disebabk an sedang m enj alani St age luar di bagian Peny ak it Dalam ) .

I I I .3 .POPU LASI D AN SAM PEL

Populasi sam ple adalah populasi t er j angk au dar i pasie n dengan bat u ur in bagin at as y ang ber obat / dir aw at oleh dok t er ahli Bedah Ur ologi di RSUD Dr .Pir ngadi dan beber apa RS.Sw ast a di k ot a Medan. Pasien y ang dim asuk k an dalam penelit ian ini adalah sem ua y ang m em enuhi cr it er ia ink lusi/ ek lusi selam a per iode diat as.

I I I . 4 . KRI TERI A I N KLU SI D N EKSKLU SI

Kr it e r ia in k lu si :

• Sem ua pasien yang telah ditegakkan m enderita batu saluran kem ih bagian at as oleh bagian Bedah Ur ologi FK UI SU/ RSUD Dr .Pir ngadi Medan. • Adanya persetuj uan dari keluarga dan penderita untuk diikutkan da lam penelit ian ini • Minim al tidak m endapat Antibiotik 3 hari terakhir • Dewasa.

Kr it e r ia e k k lu si :

• Pendrita dan kelaurga m enolak diikutkan dalam penelitian ini • Mendapat terapi antibiotik/ antiseptik m inim al dalam 3 hari terakhir • Anak- an ak

I I I .5 .PROSES PEN GAM BI LAN SAM PEL

Pender it a BSK bagian at as biasany a dik et ahui pada m alam har i m enj elang dilak uk an oper asi k eesok an har iny a, y ait u set elah m endapat infor m si dar i bagian Bedah Ur ologi. Set engah j am m enj elang oper asi pasien t elah dibaw a k e bagian OK dan lebih kur ang ½ sam pai 1 j am set elah pem bedahan dim ulai dilak uk an pengam bilan ur in pr ok sim al bat u. Jik a ur inny a t idak didapat m nak a unt uk k ult ur diam bil bahan y ang ber asal dar i sw ap bat u Dalm penelit ian ini dar i 40 sam pel y ang dik ult ur , 6 sam pel ber asal dar i sw ap bat u. Set elah cair an didapat bar u dilak uk an pengangk at an bat u. Jik a bat uny a sat u m ak a bat u dipot onh dua dim ana separ oh diam bil unt uk dianalisa at au bisa j uga diam bilsecar a ut uh, sedangk an j ik a bat uny a lebih dar i sat u m ak a diam bilsat u at au beber apa buah. Pem er ik saan bat u ini dilak uk an set elah sebelum ny a m em ber i t ahu k epada pasien/ k eluar ga pasien.

Kem udian set elah k edua bahan pem er ik saan diper oleh seger a k em bali k e Labor at or ium Pat ologi Klinik Rum ah Sak it Haj i Adam Malik unt uk m elak uk an k ult ur Kem udian set elah k edua bahan pem er ik saan diper oleh seger a k em bali k e Labor at or ium Pat ologi Klinik Rum ah Sak it Haj i Adam Malik unt uk m elak uk an k ult ur

1. Dalam pengam bilan urin sering terjadi hal sebagai berikut : • Urin yang diam bil tidak dapat diam bil secara langsung dengan syringe disposible seh ingga per lu dilak uk an insisi unt uk m endapat k an ur in t er sebut . • Tidak selalu didapatkan urin penderita, terutam a pada batu j enis staghorn y ang t elah m engisi selur uh pelv is r enal. Dan k adang - k adang j uga pada bat u ginj al y ang buk an j enis st aghor n k adang- kadang j uga t ak k didapat k an ur inny a. Dalam hal ini bahan unt uk k ult ur diam bil dar i sw ap bat u. Pada penelit ian ini didapat i sebany ak 6 sam pel unt uk k ult ur y ang ber asal dar i sw ap bat u.

2. Kendala Dalam pengam bilan batu • Ada beberapa pasien/ keluarga pasien t idak m au m enyerahkan bat u hasil oper asi unt uk diper ik sa m esk ipun sebelum ny a t elah m eny et uj ui unt uk dilak uk an analisa bat u.

• Karena batu yang diperiksa tidak diperiksa secara uth (keseluruhan) m aka

ada k em ungk inan t er j adi per obahan per sent ase bat u at au j enis bat u.

Akibat kendala - k endala diat as m ak a pem er ik saan y ang t elah dir encanak an sebelum ny a t idak dapat dik er j ak an seper t i : § Urinalisa : pem eriksaan ini tidak dapat dikerjakan karena urin yang m au

diper ik sa t idak ada seper t i y ang dij um pai pada bat u j enis st ghor n. § Direct sm ear j uga tidak dapat dikerj akan karena urin yang didapat sudah

ber cam pur dengan dar h sehingga pada dir ect sm ear lapangan pandang penuh dengan er it r oso\ i t .

§ Beberapa pasien yang m elihat batu hasil operasi sebelum nya analisa, pem er ik saan t er pak sa dibat alk an k ar ena pasien/ k eluar ga pasien belum

ber sedia m em ber ik an dengan ber bagai alasan.

I I I . 6 . CARA PEM ERI KSAAN

I I I . 6 . 1 . AN ALI SA BATU

Analisa bat u dilak uk an dengan m enggunak an Reagensia k it dar i MERCK Mer ck ognost ( Ur inar y Calculi Analy sis)

Pr in sip d a r i a n a lisa b a t u

Sam ple bat u ur in dilar ut k n sehom ogen m ungk in. Dengan lar ut an ini m acam- m acam k om ponen bat u dit ent uk an secar a sem i k w ant it at ip. Kalsium ny a dit ent uk an

dengan m et ode t it r im et r is ( y ait u m em bandingk an w ar na secar a v isual) unt uk m en en t u k an ok salat , fosfat , m agnesium am m onium , asam ur at dan sist in Kom posisi bat u ur in didapat k an dar i hasil penent uan ini dengan per t oongan m ist ar hit ung y ang t ersedia.

I si r e a ge n sia k it :

Disam ping r egensia y ang diper luk an unt uk analisa bat u ur in, k it j uga dilengk api dengan alat - alat ber ik ut :

1. Gelas ukur 100 m l dengan pem bagian skala 1 m l

2. Gayung plastik kecil

3. 2 Spatula plastik

4. 1 sendok takar m erah dan 1 sendok takar hitam

5. 4 tabung reaksi plastik

Pe r sia p a n sa m p le :

Reagensia 1. ( asam sulfat pek at 95- 97% ) Bat u y ang ak an dianalisa dig ir us dalam m or t ar sam pai halus. Puder y ang didapat t er sebut diaduk benar- benar , pindahk an sam ple dengan spat ula y ang t er sedia

( sej um lah uj ung spat ula penuh sam pai bat as. per es) k ealam gay ng plast ik ( m er ah) t am bahk an 5 t et es r eagen 1, dan diaduk dengan spat ula supay a t er cam pur sem pur na.

Tim b u ln y a g a s se la m a p e n ca m p u r a n m e n u n j u k k a n a d a n y a ca r b o n a t e .

Pindahk an lar ut an t er sebut dalam gelas uk ur 100 m l dan diisi seper t iga bagian den gan aqu adest . Kem udian t am bahk an lagi aquadest sam pai t anda 50 m l dan diaduk benar- benar dengan gay ng plast ik ( m er ah) t er sebut . Lar ut an t er sebut dipidnahk an k eadlam t abung- t abung r eak si k ecil sam pai t anda unt uk penent uan m asing- m asing k om ponen, k ecuali m agnesium . Dilak uk an analisa dalam t abung r eak si t er sebut .

Ka lsiu m :

Pr in sip : Laku k an t it r asi dengan r eagensia 4 ( Tit r iplex I I I ( et hy lendim it r ilo - t et r acet ic acid) . Sebagai indicat or diper gunak an r eagensia 3 ( Calconcar box y lix acid bubuk halus) .

Pr ose d u r :

1. Ke dalam larutan sam ple ditam bahkan 2 tetes reagen 2 (Larutan sodium hy dr ox ide 27% dan 1 spat ula penuh ( per es) r eagensia 3 ( bubuk halus calconcar box y lic acid ) Dikocok.

2. Sam bil dikocok ditam bahkan reagensia 4 (larutan titriplex I I I ) tetes dem i t et es sam pai w ar na lar ut an ber ubah dar i m er ah ke bir u. Dihit ung j um lah t et esan y ang diper luk an unt uk m er obah w ar na.

3. Kalikan jum lah tetesan ini dengan 5 dan ini m enunjukkan % kalsium dari batu ginj al.

Ok sa la t :

P r i n si p : Ter bent uk ny a k om plek ber w ar na oleh ir on I I I dengan sulfoslicy lic acid m elepask an ok salat .

Pr ose d u r :

1. Sam pel sam bil digoyang ; ditam bahkan kedalam nya 2 tetes reagensia 5 (lar ut an buffer bor at e) 3 t et es regensia 6 ( lar ut an ir on ( I I I ) chlor ide) d an 3 t et es reagensia 7 ( lar ut an sulfosalicy ic acid)

2. Diam kan selam a 2 m enit

3. Letakkan tabung reaksi di bagian tengah dari skala warna oxalate yang putih dan dibandingk an w ar na lar ut an dengan sk ala w ar na y ang sesuai, dengan m elihat dar i at as m enem bus k ealam lar ut an. Nilai- nilai diant ar 2 w ar na dit ent ukan sendir i. Dan dibaca k adar % dar i bat u ok salat .

Am onium :

Pr in sip : Tam bahk an r eagensia Nessler , m ak a am m onium ak an m enghasilk an lar ut an y ang ber w ar na k uning sam pai cok lat .

Pr ose d u r :

1. Sam bil digoyang - goyangkan tam bahkan ke dalam larutan sam ple : 3 tetes r eagensia 8 ( lar ut an pot assium m er cur y iodide) dan 3 t et es lar ut an r eagensia

2 ( larut an sodium hydro x ide 2 7 % ) .

2. Letakkan tabung reaksi dibagian tengah dari skala warna am m onium yang put ih dan dibndingk an w ar na lar ut an dengan sk ala w ar na y ang sesuai dengan

m elaihat dar i at as m enem bus kedalam lar ut an. Nilai- nila ant ra harus dikira - kira.

3. Dibaca % kadar oksalat dari bat u ginj al

Fosfa t :

Pr insip : Sesudah dit am bahk an lar ut an m oly bdat e k edalam lar ut an sam ple, m ak a t er bent k ny a m oly bdat ophosphor ic acid. Dengan penam bahan lar ut an pr eduk si m ak a t er j adilah lar ut an m oly bdenum blue.

Pr ose d u r :

1. Sam bil digoyang- goyangkan t am bahkan bert urut - turut kedalam sam ple 5 t et es reagen 9 ( lar ut an am m onoim m oly bdat e) dna 5 t et es r eagen 10 ( lar ut an per eduk si) ( 4- m et hy lam ino phenol m oly bdenum ble )

2. Diam kan selam a 5 m enit

3. Let akkan t abung reaksi dibagian t engah dari skala warna phosphat e yang put ihdn dibandingk an w ar na lar ut an dengan sk ala w ar na y ang sesuai dengan m elihat dar i at as m enem bus k edalam lar ut an. Nilai- nilai ant ar a har uslah dikira.

4. Dibaca kadar % fosfat dari batu ginjal.

M a gn e siu m :

Pr in sip : Magnesium dalam lar ut an buffer ber eaksi dengan per eak si w ar na dan m em bent uk zat k om plek ber w ar na m er ah .

Pr ose d u r :

1. Dihisap dengan pipet 1 m l larutan sam ple kedalam tabung reaksi dan dit am bahk an aquadest sam pai t anda, sam bil digoy ang - goy angk an t am bahk an

10 t et es r eagensia 11 (Lar ut an buffer ( bor at e buffer) dan 10 t et es r eagensia

12 ( per eak si w ana lar ut an 1- azo- 2hydroxy - 3- ( 2,4- dim et hyl- carboxanilido )

2. Setelah 1 m enit diletakkan tabuing reaksi di bagian tengah dari skala warna m agnesium y ang put ih dan dibandingk an w ar na lar ut an dengan sk ala w ar na

y ang sesuai dengan m elihat dar i at as m enem bus k edalam lar ut an. Nilai- nilai ant ara dikira - k ir a.

3. Dibaca kadar % m agnesium dari batu ginjal

Asa m U r a t :

Pr in sip : Dalam lar ut an buffer asam ur at ak an m er eduk si m oly bdat ophosphor ic acid dan m em bent uk m oly bdenum blue.

Pr ose d u r :

1. tam bahkan 3 tetes regeansia 13 ( larutan m olybdatophosphoric acid) dan digoyang- goy angk an.

2 . Diam k an selam a 2 m enit , k em udian sam bil digoy ang - goy an gk an t am bah k an

3 t et es r eagensia 5 ( lar ut an bor at e buffer )

3 . Seger a let ak k an t abung r eak si dibag ian t engah dar i sk ala w ar na ur icacid y ang put ih dan dibandingk an w ar na lar ut an dengan sk ala w ar na y ang sesuai

dengan m elihat dar i at as m enem bus k edalam lar ut an. Nilai- nilai ant ara dikira - k ir a. Per bandingan w ar na har uslah dilak uk an 10 det ik set elah penam bahan r eagensia 5 sebab w ar na y ang t er j adi t idak st abil dan m udah/ cepat ber obah m enj adi bir u.

4 . Baca kadar % dari asam urat

Sist in :

Pr in sip : Sodium sulfit e ak an m er eduk si sist in m enj adi sist ein. Dalam k eadaan alk ali sist ein dengan sodium nit r opr usside m em b ent uk w ar na m er ah.

Pr ose d u r :

1. Kedalam larutan sam ple ditam bahkan 10 tetes reagensia 14 ( larutan am m onia 10% ) dan 1 sendok t ak ar m er ah penuh r egensia 15 ( zat per eduk si ( sodium sulfit e) , dik ocok sam pai t er cam pur Sesudah 1 m nit t am bahk an 1 sendok t ak ar hit am penuh r eagensia 16 ( bubuk halus sodium nit r opr isside) dan dikocok lagi sam pai t er cam pur .

2. Setelah 30 detik diletakkan tabung dibagian tengah dari skala warna crystine y ang put ih dan dibandingk an w ar na lar ut an dengan sk ala w ar na y ang sesuai dengan m elihat dar i at as m enem bus k edalam lar ut an. Nilai- nilai ant ara dikira - kira.

3. Dibaca kadar % dari sistin Pe r h it u n ga n : Analisa k om ponen dengan r egensia k it ini ber dasar k an dalam bent uk- bent uk seny aw a- seny aw a k im ia y ang biasany a dit em uk an dalam ur inar y calculi ( bant uan ur in) . Kom posisi bat u ginj al didapat k an dar i nilai- nilai % k om ponenny a dengan per t olongan alat m ist ar hit ung. Car a per hit ungan :

1. Kalsium oksalat ( Whewellite) • Tem patkan kadar % oksalat ang didapat pada skala oxalate dan dibaca

nilai kalsium okslat yang sebanding pada sk ala k alsium ok salat . • Diperiksa j um lah kalsium yang dipergunakan unt uk reaksi pada skala k alsiu m Bila % k alsium y ang dit em uk an lebih besa dar i pada y ang dipak ai unt uk

r eak si ok salat diat as, m ak a per k ur angan per bedaan j um lah k alsium t er ebut . Per bedaan j um lah ini unt uk m enghit ung k alsium fosfat .

2. Magnesium am m onium fosfat ( St ruvit ) • Tem patkan kadar % m agnesium yang didapat pada skala m agenesium dan baca nilai m agnesium fosfat y ang sebanding pada sk ala st r uv it • Periksa j um lah am m onium dan fosfat yang terpakai pada reaksi diatas, m asing pada sk ala am m onium dan sk ala fosfat . Bila j um lah % am m onium dan % fosfat lebih bany ak dar i y ang dipak ai unt uk r eaksi diat as, m aka m asing- m asing diper k ur angk an. Per bedaan j um lah am m onium dipak ai unt uk m enghit ung am m oniu m ur at , sedangk an per bedaan fosfat dipak ai unt uk m enghit ung k alsium fosfat .

3. Am onium urat : • Nilai am m onium yang didapat atau perbedaan am m onium dari ad.2

dit em pat k an pada sk ala am m onium . Baca % am m onium ur at y ang sesuai den gan sk ala am m on iu m u r at .

• Diperiksa j um lah asam urat diperlukan unt uk reaksi diat as pada skala asam urat Bila j um lah % asam ur at lebih bany ak dar i pada y ang dipak ai unt uk r eak si diat as, m ak a dit ent uk an dengan car a m em per k ur angk anny a. Dan inilah j um lah k adar asam ur at .

4. Kalsium fosfat • Tem pat kan % Kalsium dari hasil analisa at au dari hasil perbedaan pada

ad. 1 . Pada w ak t u y ang sam a diper ik sa pada sk ala fosfat , nilai- nilai m ana y ang paling sesuai apa dengan nilai y ang didapat sebenar ny a at au dar i hasil pengur angan pada ad.2

• Baca pada skala berikut nya apakah kadar brushite atau apatite yang sesuai.

I I I .6 .2 .KU LTU R U RI N

Dik er j ak an sesuai dengan st andar k ult ur pada bagian Mik r obiologi. Seger a set elah sam ple sam pai di bagian Pat ologi dilak uk an penanam an pada m edia agar

Cled ( m edia k husus unt u ur in) y ang t elah disediak an. Bila penanam an t er pak sa dit unda m ak a ur iny ang diam bil disim pan/ dim ask uk k an dalam t er m os es. Penundaan ini paling lam a dapat dilak uk an t idak lebih dar i 24 j am . ( 33, 34)

Set elah dilak uk an penanam an m edia disim pan dalam incubat or suhu 37 0 C dan dilihat ada t idak ny a per t um buhan k um an esok har iny a ( set elah 18 sam pai 24 j am ) .

Ca r a p e n a n a m a n : ( d e n g a n ca r a g o r e sa n sin a m b u n g ) : (20)

1. Dengan osse yang t elah st eril, diam bil sat u m at a osse suspensi dan gores secar a sinam bung pada set engah per m uk aan lem peng agar .

2. Tanpa m em anaskan osse, putar lem pengan 180 deraj ad, digunakan sisi m ata osse y ang sam a dan digor esk an pada sisi per m uk aan lem peng agar .

3. Tutup cawan petri dan blikan dan inkubasi 18- 24 j am dalam incubator pada suhu 37 der j at C

Pe n ila ia n p e r t um b u h a n ( I SK) :

Mengingat ur in unt uk k ult ur diam bil secar a langsung k elok asi dim ana ur in ber ada, m elalui suat u oper asi pengangk at an bat u salur an k em ih, m ak a ber apapun k oloni y ang t um buh dalam penanam an ( k ult ur ) dianggap posit if m ender it a infek si salu r an k emih .

I d e n t if ik a si b a k t e r i :

Gam bar 2 Skem a ident ifikasi kokus gr am posit if dan bakt er i bat ang Gr am negat if

Kult ur ( agar Cled)

Kokus Gram posit if Bat ang Gram Negat if

Uj i Katalase

Uji Ok sidase

Uj i Koagulase

Penanam an pada

Micr obact

Micr obact

Agar dar ah

12E/ 12A

24E/ 12A+ 12B

I dent ifik asi st r ept ococcus I dent ifikasi bat ang Gram Ngat if St aphy lococcus m elihat zona hem olisa

I den t ifik asi

Ber dasar k an hasil biak an pada agar Cled, m ak a unt uk per t um buhan bak t er i y ang posit if pem er ik saan dilanj ut k an unt uk ident ifik asi bak t er i m enur ut car a y ang

lazim dipak ai di bagian Mik r obiologi ( labor at or ium Pat ologi Klinik FK USU/ RSU.H.Adam Malik )

Unt uk bak t er i k ok us Gr am posit if dilak uk an uj i k at alase dan penanam an pada St aphy lococcus. Dik at ak an St aphy lococcus aur eus bila uj i k oagulaseny a posit if. ( 16,41)

dan bila uj i k oagulse negat if dilanj ut k an dengan uj i MSA ( Manit ol Salt Agar ) guna m em bedak an St aphy loccoc cu s epider m is ( MSA n egat if) den gan St aph y loccoccu s pada sapr ohy t icus ( MSA posit if) . Sedangk an unt uk uj i k at alase negat if dilak uk an penanam an pada agar dar ah dan dilihat zona hem olisany a pada m edia agar dar ah unt uk ident isik asi St r ept ococcus. ( 41)

§ Hem alosis tipe alfa : Mem bentuk warna kehij au- hijauan dan hem olisis sebagian disek elilingi k oloniny a

§ Hem olisis tipe beta : Mem bentuk zona bening disekelilingi koloninya, tak ada sel dar ah yang m asih ut uh.

§ Hm atolisis tipe gam m a : Tdak m enyebabkan hem olis

Unt uk bak t eri bat ang Gr am negat ip dilanj ut k an pem er ik saan ber upa uj i ok sidase, dan r eak si biok im ia dengan m enggunak an sist im Micr obact 12E/ 12A dan sist in Nicr obat 24E/ 12A+ 12B, y ang di pr oduk si oleh MEDVED SCI ENCE PTY LTD, Aust r alia.

1. Sistim Microbact 12E/ 12A : Hanya digunakan untuk identifikasi oksidse negat if, nit r at posit if dn m er agi gluk osa, dan ak an ber guna unt uk sk r ining Ent er obact er iceae y ang pat ogen baik dar i usus m aupun dar i spesiem en ur in at au isolat um um lainny a.Reak si biok im ia pada sist im Micr obact 12E ( 12A) t dd Ok sidase Mot ilit y – Nit r at e – Ly sine – Or nit hine – H2S – Glucose – Mannit ol – Xy lose – O. N. P. G – I ndole – Ur ease – V. P – Cit r at e – T. D. A

2. Sistim Microbact 24E/ 12A+ 12B : Digunkan untuk identifikasi bakteri batang negat if Gr am dengan ok sidase posit if, nit r at negaif dan t idak m er agi Gluk osa ) MGNB) dengan r eak si biok im ia t dd : Ok sidase – Mot ilit y – Nit r at e – Lysine – Or nit hine- H2S – Glucose – Mannit ol – Xy lose – O.N.P.G – I ndole – Ur ease –

V. P _ Cit r at e – T. D. A – Gelat ing – Malonat e – I nosit ol – St or bit ol – Rham nose – Sucr ose – lact ose – Arabinose – Adon it ol – Raffinose – Salicin – Ar ginine

3. Khusus untuk bakteri golongan enterobacteriaceae ( Kj lebsiella, Serratia dan Ent er obact er ) dilanj ut k an pem er ik saan dengan sist im Micr obact 24E/ 12A+ 12B unt uk ident ifikasi spesiesny a dan dibaca set elah 2 4 j am

Pe r sia p a n u n t u k in ok u la si p a d a 1 2 E/ A d a n 2 4 E ( 1 2 E/ A+ 1 2 B)

Diam bil sat u k oloni dar i k ult ur dan diem ulsik an dalam 1,5 m l ( m inim um ) lar ut an saline fisiologis st er il j ik a m em ak ai m icr obact 12 E/ A at au 3 m l lar ut an slaine

f isiologis st er il k alau m em ak ai 24 E ( 12E/ A + 12B) , k em udian dicam pur dengan baik unt uk m endapat k an suspensi y ang hom ogen.

I n o k u la si p a d a St r ip t e s u n t u k 1 2 E/ A d a 2 4 E ( 1 2 E/ A + 1 2 B)

Dengan m enggunak an pipet Past eur dit am bahk an 4 t et es suspensi bak t er i pada m asing- m asing sum u at au m engisi separ oh sum ur dar i t iap set m icr obact 12 E at au 24E. Menggunak an pipet st er il t au bot ol penet es, dit am bahk an / dilapisk an m iny ak m iner al st er il pada sum ur 1 , 2 , 3 unt uk 1 2 E/ A/ 2 4 E dan sum ur 2 0 / 8 dan at au sum ur 24/ 12 unt uk 24E/ 1 2 B. ( sum ur 2 0 / 8 t idak dilapisi dengan m iny ai m iner al st er il unt uk oksidase posit if,MGNB)

I nk k ubasi 3 5 0 ± 1 0 C selam a 18 – 2 4 j am

Pe m b a ca a n t e s m icr o b a ct :

- Micr obact 12A ( 12E) dibaca set elah 24 j am dan - Micr obact 24E ( 12A+ 12B) dibaca set elah 48 j am - Khusus unt uk m enent uk an st efik asi dar i gr up Klesiella/ Ent er obact er / Ser r at ia ( bat ang Gr am negat if ok sidase negat ip) digunk an m icr obact 24E dibaca set elah 24 jam. Hal- hal y ang per lu diper hat ik an dalam pem bacaan hasil r eak si biok im ia dar i sist in Micr obact y ait u :

1. 12Eatau 24E

§ Sum ur 8 ( produksi indol) : ditam bahkan 2 tetes reagen indole ( kovacs) . Diev aluasi set elah 2

§ Sum ur 10 ( reaksi V.P) ditam bahkan 1 tetes reagen V.P.I tetes reagen V.P.I I Dievaluasi set elah 15 - 30 m enit

§ Sum ur 12 ( tryptopan deam inase) ditam bahkan 1 t et es reagen TDA. Evaluasi segera

2 . M icr ob a ct 2 4 E/ 1 2 B

§ Sum ur 13 dibaca setelah 24 j am untuk Enterobacteriaceae dan 48 j am untuk MGNB

§ Sum ur 24/ 12 (Arginine reaction): dibaca setelah 24 jam untuk ent er obact er iaceae ( k uning- hij au negat if, bir u posit if)

Te s Re du k si N it r a t : Dibaca set elah ONPG dibaca ( sum ur 7) . Pada sum ur ONPG dit am bahk an 1 t et es r eagen nit r at I dan I I . Set elah dit am bahk an r eagen nit r at A dan

B m ak a j ik a t im bul :

a. War na m er ah

posit if

N0 2 +

b. War na k uning

Negat if

N0 2 –

Pada penam bahan Zink pouder

a. War n a k u n in g

Posit if

(N 2 +)

b. War na m er ah

Negat if

(N 2 -)

I I I .7 .AN ALI SA STATI STI K

Penelit ian dilak uk andengan cr oss- sect ional st udy . Pengolahan dat a dilak uk an dengan bant uan k om put er dan m enggunak an SPSS.Chi squar t es digunak an unt uk m em bandingk an pr opor si k ej adian unt uk 2 k elom pok dengan bat as k em ak naan P <

0, 05 dan at au Uj i Mut lak Fisher j ik a dij um pai nilai ex pect ed < 5

I I I .8 . KW ALI TI KON TROL

Ter hadap m edia y ang digunak an dalam penelit ian ini ( agar Cled dan agar Dar ah) dilak uk an penanam an bak t er i E. coli. Psedom onas aer oginosa dan

St aphy loccus aur eus ( y ang ber asal dar i biak an m ur ni) , k em udian dilanj ut k an dengan pem er ik saan r eak si biok im ia ( RBK) St am p bak er i ber asal dar i BLK Hasil : Dar i penanam an dan r eak si biok im ia y ang dilak uk an pada aw al dan per t engahan bulan Apr il, Mei Juni didapat k an hasil y ang sesuai dengan k et iga k um an t er sebut .

BAB I V