Uji Efek Ekstrak Etanol Daun Pepaya (Carica Papaya Linn.) Terhadap Penurunan Kadar Glukosa Darah Tikus Putih Jantan Galur Wistar Yang Diinduksi Aloksan

56 Lampiran 1. Identifikasi Sampel

58

Lampiran 3. Gambar Tanaman Pepaya dan Daun Pepaya

Tanaman pepaya

59

60

Lampiran 4. Hasil Pemeriksaan Mikroskopik Serbuk Simplisia Daun Pepaya

1 2

3

4 5

Gambar Mikroskopik Serbuk Simplisia Daun Pepaya

(pembesaran 10 x 40)

Keterangan :

1. Kristal kalsium oksalat bentuk roset

2. Berkas pengangkut dengan penebalan spiral 3. Berkas pengangkut dengan penebalan tangga 4. Stomata tipe anomositik

61 Skrining Fitokimia Daun Pepaya

Daun pepaya

Skrining fitokimia karakterisasi

Simplisia daun pepaya

Di cuci dari pengotor sampai bersih Ditiriskan

Ditimbang berat basahnya

Dirajang dan dikeringkan dalam lemari pengering

Ditimbang berat keringnya

Dihaluskan dengan blender

Disimpan dalam wadah yangtertutup rapat sebelum digunakan

- Penetapan kadar air - Penetapan kadar sari larut

air

- Penetapan kadar sari larut etanol

- Penetapan kadar abu total - Penetapan kadar abu tidak

larut asam

7. Pemeriksaan glikosida 8. Pemeriksaan flavonoid 9. Pemeriksaan alkaloid 10.Pemeriksaan saponin 11.Pemeriksaan tanin

12.Pemeriksaan steroid/triterpenoid Serbuk simplisia

62

Dicuci ampas dengan etanol 96% Disaring dengan kertas saring hingga diperoleh 100 bagian Dimasukkan ke dalam sebuah bejana Ditambahkan pelarut etanol 96% sebanyak 75 bagian

Direndam selama 5 hari terlindung dari cahaya, sambil sering diaduk

Disaring dengan kertas saring

Dipindahkan kedalam bejana tertutup Dibiarkan ditempat sejuk dan terlindung cahaya selama 2 hari

Dienap tuangkan atau saring

Dipekatkan dengan rotary evaporator pada suhu 40o C dan dikeringkan dengan

hairdryer

Lampiran 6. Bagan Alur Pembuatan Ekstrak EtanolDaun Pepaya

maserat I

Serbuk simplisia daun pepaya

ampas

maserat II

maserat

63

Dikondisikan selama 2 minggu untuk adaptasi Ditimbang dan ditandai dengan spidol

Dipuasakan selama 10 – 16 jam hanya diberi air minum

Dimasukkan ke dalam restrainer untuk menahan ekor

Dibersihkan dengan alkohol

Diambil darah dari pembuluh vena dengan cara digunting

Disentuhkan pada test strip pada alat glukometer Dilihat angka yang tertera pada alat glukotest

Kadar glukosa darah puasa pada

hari ke -0 Tikus

64

Dikondisikan selama 2 minggu untuk adaptasi Ditimbang dan ditandai dengan spidol

Dipuasakan selama 10 – 16 jam hanya diberi air minum

Diberikan perlakuan selama 2 minngu dihitung dari hari ke- 3

Kelompok 1 : Na-CMC 0,5 %

Kelompok 2 : Ekstrak Etanol Daun Pepaya 200 mg/kgBB Kelompok 3 : Ekstrak Etanol Daun Pepaya 400 mg/kgBB Kelompok 4 : Ekstrak Etanol Daun Pepaya 600 mg/kgBB Kelompok 5 : Metformin 45 mg/kgBB

Diukur KGD pada hari ke- 3, 5, 7, 9, 11,13 dan 15.

Lampiran 8. Bagan Alur Pengujian Efek Penurunan KGD Tikus yang Diinduksi Aloksan

Kadar glukosa darah Tikus

Tikus Hiperglikemik

65

Glucometer (GlucoDrTM)

Wadah strip GlucoDrTM Glucotest strip (GlucoDrTM strip test)

66

Lampiran 10. Perhitungan Hasil Penetapan Kadar Air Serbuk Simplisia Daun Pepaya

Kadar air = volume air (ml)

berat sampel (g)

x

100%

1. Sampel 1

Berat sampel = 5,009 g Volume air = 0,2 ml Kadar air = 0,2

5,009x100%

= 3,993 % 2. Sampel 2

Berat sampel = 5,002 g Volume air = 0,2 ml Kadar air = 0,2

5,002

x

100%

= 3,998 % 3. Sampel 3

Berat sampel = 5,005 g Volume air = 0,2 ml Kadar air = 0,2

5,005 x100%

= 3,996 %

Kadar air rata – rata = 3,993%+3,998%+3,996%

3

67 Simplisia Daun Pepaya

1. Kadar sari yang larut dalam air I

Berat cawan = 36,5398 g

Berat cawan + berat sari = 36,8507 g

Berat sampel = 5,0008 g

Berat sari = 0,3109 g

Kadar sari yang larut dalam air = 0,3109

5,0008

x

100

20

x

100% = 31,088 %

2. Kadar sari yang larut dalam air II

Berat cawan = 43,2787 g

Berat cawan + berat sari = 43,5861 g

Berat sampel = 5,0007 g

Berat sari = 0,3074 g

Kadar sariyang larut dalam air = 0,3074

5,0007

x

100

20

x

100% = 30,735 %

3. Kadar sari larut dalam air III

Berat cawan = 37,6660 g

Berat cawan + berat sari = 37,9818 g

Berat sampel = 5,0009 g

Berat sari = 0,3158 g

Kadar sari yang larut dalam air = 0,3158

5,0009

x

100

20

x

100%= 31,574 %

Kadar sari yang larut dalam air rata – rata = 31,088% + 30,735 %+ 31,574%

3

= 31,132 % Kadar sari yang larutdalam air = berat sari

berat simplisia

x

100

68

Lampiran 12. Perhitungan Hasil Penetapan Kadar Sari Larut Etanol Serbuk Simplisia Daun Pepaya

1. Kadar sarilarut etanol I

Berat cawan = 43,1006 g

Berat cawan + Berat Sari = 43,267 g

Berat sampel = 5,0009 g

Berat sari = 0,1664 g Kadar sari larut etanol = 0,1664

5,0009

x

100

20

x

100%

= 16,637 % 2. Kadar sari larutetanol II

Berat cawan = 45,1668g

Berat cawan + Berat Sari = 45,3362 g

Berat sampel = 5,0007 g

Berat sari = 0,1694 g Kadar sari larut etanol = 0.1694

5,0007

x

100

20

x

100%

= 16,937 % 3. Kadar sari larut etanol III

Berat cawan = 43,0914 g

Berat cawan + Berat Sari = 43,2446 g

Berat sampel = 5,0006 g

Berat sari = 0,1532 g Kadar sari larut etanol =0,1532

5,0006

x

100

20

x

100%

= 15,318%

Kadar sari larut etanol rata-rata =16,637% +16,937%+15,318%

3

= 16,297 % Kadar sari larut etanol

=

berat sari

berat simplisia

x

100

69 Daun Pepaya

1. Kadar abu total I

Berat kurs kosong = 41,1931 g Berat kurs setelah dipijar = 41,4233 g

Berat sampel = 2,007 g

Berat abu = 0,2302 g

Kadar abu total = 0,2302 g

2,007 g x 100% = 11,469 %

2. Kadar abu total II

Berat kurs kosong = 38,7767 g Berat kurs setelah dipijar = 39,0197 g

Berat sampel = 2,005 g

Berat abu = 0,2430 g

Kadar abu total = 0,2430 g

2,005 gx 100% = 12,119 %

3. Kadar abu total III

Berat kurs kosong = 41,134 g Berat kurs setelah dipijar = 41,3681 g

Berat sampel = 2,006 g

Berat abu = 0,2341 g

Kadar abu total = 0,2341 g

2,006 g x 100% = 11,669 %

Kadar abu total rata-rata =11,469%+12,119%+11,669%

3

= 11,752 % Kadar abu total = berat abu

70

Lampiran 14. Perhitungan Hasil Penetapan Kadar Abu Tidak Larut Asam Serbuk Simplisia Daun Pepaya

Kadar abu tidak larut asam = Berat abu

Berat sampel x 100%

1. Kadar abu tidak larut asam I

Berat sampel = 2,007 g

Berat abu = 0,0174 g

Kadar abu tidak larut asam = 0,0174 g

2,007 g x 100% = 0,866 %

2. Kadar abu tidak larut asam II

Berat sampel = 2,005 g

Berat abu = 0,0185 g

Kadar abu tidak larut asam = 0,0185 g

2,005 g x 100% = 0,922 %

3. Kadar abu tidak larut asam III

Berat sampel = 2,006 g

Berat abu = 0,0168 g

Kadar abu tidak larut asam = 0,0168 g

2,006 g x 100% = 0,837%

Kadar abu tidak larut asam =0,866 %+ 0,922 %+ 0,837%

3

71

Tabel Konversi Dosis Antara Jenis Hewan Dengan Manusia (Harmita dan Radji, 2008) Mencit 20 g Tikus 200 g Marmot 400 g Kelinci 1,5 kg Kera 4 kg Anjing 12 kg Manusia 70 kg Mencit 20 g

1,0 7,0 12,25 27,8 64,1 124,3 387,9 Tikus

200 g

0,14 1,0 1,74 3,0 9,2 17,8 56,0

Marmot 400 g

0,008 0,57 1,0 2,25 5,2 10,2 31,5 Kelinci

1,5 kg

0,04 0,25 0,44 1,0 2,4 4,5 14,2

Kera 4 kg

0,016 0,11 0,19 0,42 1,0 1,9 6,1 Anjing

12 kg

0,008 0,06 0,10 0,22 0,52 1,0 3,1 Manusia

70 kg

0,0026 0,018 0,031 0,07 0,16 0,32 1,0

1. Perhitungan Dosis Ekstrak Etanol Daun Pepaya

- Dosis suspensi ekstrak daun pepaya yang akan dibuat adalah 200 mg/kg bb, 400 mg/kg bb dan 600 mg/kg bb. Berarti dosis 200 mg,

400 mg dan 600 mg tersebut diberikan untuk hewan dengan 1 kg berat badan. Karena 1

100 x 1 kg = 1

100 x 1000 g = 10 ml. Maka tiap dosis dilarutkan dalam 10,0 ml suspensi Na-CMC.

- Cara pembuatan suspensi ekstrak daun pepaya :

Timbang 200 mg, 400 mg, dan 600 mg ekstrak etanol daun pepaya, kemudian masing-masing dilarutkan dalam 10,0 ml suspensi Na-CMC. - Volume suspensi ekstrak daun pepaya yang diberika kepada tikus

adalah 1

100 x BB. Misal BB tikus = 200 g. Maka suspensi yang diberikan 1

72 2. Perhitungan Dosis Metformin

- Dosis manusia (BB = 70 kg) = 500 mg/hari (Nolte dan Karam, 2010) - Dosis tikus (BB = 200 g) = 500 mg x 0,018 x 1000 g

200 g = 45 mg/kg bb

- Menurut FI edisi III, penetapan kadar tablet = 20 tablet, maka diambil 20 tablet Metformin, digerus dan ditimbang berat totalnya = 10.792 mg - Berat bahan aktif Metformin-HCl dalam 20 tablet Metformin adalah

= 500 mg/tab x 20 tab = 10.000 mg. - Serbuk tablet Metfomin yang digunakan :

45 10000 mg =

X

10792 mg X = 48,564 mg ≈ 50 mg - Cara pembuatan suspensi Metformin :

Timbang 50 mg serbuk tablet Metformin dilarutkan dalam 10,0 ml suspensi Na-CMC.

- Volume yang diberikan = 1

100 x BB Misal BB tikus = 200 g

Maka volume suspensi Metformin yang diberikan 1

100 x 200 g = 2 ml.

3. Perhitungan Dosis Glibenklamid

- Dosis manusia (BB = 70 kg) = 5 mg/hari (Nolte dan Karam, 2010) - Dosis tikus (BB = 200 g) = 5 mg x 0,018 x 1000 g

200 g = 0,45 mg/kg bb

- Menurut FI edisi III, penetapan kadar tablet = 20 tablet, maka diambil 20 tablet Metformin, digerus dan ditimbang berat totalnya = 4002,5 mg - Berat bahan aktif Metformin-HCl dalam 20 tablet Metformin adalah

73 0,45

100 mg = X

4002 ,5 mg X = 18,01 mg ≈ 18 mg - Cara pembuatan suspensi Glibenklamid :

Timbang 18 mg serbuk tablet Glibenklamid dilarutkan dalam 10,0 ml suspensi Na-CMC.

- Volume yang diberikan = 1

100 x BB Misal BB tikus = 200 g

Maka volume suspensi Metformin yang diberikan 1

100 x 200 g = 2 ml.

4. Perhitungan Larutan Aloksan untuk Diinjeksi Secara Intraperitoneal (i.p) - Dosis aloksan untuk tikus = 150 mg/kg bb (i.p)

- Aloksan monohidrat 150 mg dilarutkan dalam larutan fisiologis NaCl 0,9 % dalam labu tentukur 10 ml.

74

Lampiran 16. Data Pengukuran Kadar Glukosa Darah (KGD) Tikus Metode Induksi Aloksan 1. KGD tikus setelah pemberian suspensi Na-CMC 0,5 % b/v sebanyak 1 % bb

No Hewan

BB Hewan

KGD sebelum diinduksi

aloksan (mg/dL)

KGD setelah diinduksi

aloksan (mg/dL)

KGD setelah perlakuan (mg/dL) Hari ke-

3 5 7 9 11 13 15

1 173,7 98 377 303 351 423 348 327 230 259

2 166,2 93 362 485 354 334 370 219 272 206

3 163,9 98 249 551 211 329 246 449 427 200

4 155,2 95 413 437 431 381 272 296 268 474

5 154,3 88 352 459 437 344 486 398 292 228

Rata-rata 94,4 350,6 447 356,8 362,2 344,4 337,8 297,8 273,4

75

2. KGD tikus setelah pemberian ekstrak etanol daun pepaya dosis 200 mg/kg bb

No Hewan

BB Hewan

KGD sebelum diinduksi

aloksan (mg/dL)

KGD setelah diinduksi

aloksan (mg/dL)

KGD setelah perlakuan (mg/dL) Hari ke-

3 5 7 9 11 13 15

1 166,8 91 464 446 384 376 172 164 90 88

2 163,1 93 368 304 283 170 140 117 95 93

3 162,1 103 366 311 216 184 124 91 84 75

4 158,5 103 325 326 253 174 150 87 84 81

5 166,2 94 460 326 298 116 108 102 94 84

Rata-rata 96,8 396,6 460 286.8 204 138,8 112,2 89,4 84,2

76 Lampiran 16. (lanjutan)

3. KGD tikus setelah pemberian ekstrak etanol daun pepaya dosis 400 mg/kg bb

No Hewan

BB Hewan

KGD sebelum diinduksi

aloksan (mg/dL)

KGD setelah diinduksi

aloksan (mg/dL)

KGD setelah perlakuan (mg/dL) Hari ke-

3 5 7 9 11 13 15

1 171,7 83 463 422 432 265 151 116 107 106

2 164,7 81 474 345 310 251 184 172 125 120

3 165 87 350 298 209 147 118 144 119 104

4 151,2 95 321 345 245 194 120 115 117 106

5 179,5 101 398 298 303 295 185 143 129 106

Rata-rata 89,4 401,2 341,6 299,8 230,4 151,6 138 119,4 108,4

77

4. KGD tikus setelah pemberian ekstrak etanol daun pepaya dosis 600 mg/kg bb

No Hewan

BB Hewan

KGD sebelum diinduksi

aloksan (mg/dL)

KGD setelah diinduksi

aloksan (mg/dL)

KGD setelah perlakuan (mg/dL) Hari ke-

3 5 7 9 11 13 15

1 160 88 335 217 278 155 135 115 112 83

2 154,8 87 484 361 312 120 122 128 106 81

3 156 80 350 286 186 137 117 127 107 96

4 160 78 414 446 322 157 146 121 113 94

5 165,7 87 325 404 312 189 158 169 126 115

Rata-rata 84 381,6 342,8 282 151,6 135,6 132 112,8 93,8

78 Lampiran 16. (lanjutan)

5. KGD tikus setelah pemberian suspensi metformin 45 mg/kg bb

No Hewan

BB Hewan

KGD sebelum diinduksi

aloksan (mg/dL)

KGD setelah diinduksi

aloksan (mg/dL)

KGD setelah perlakuan (mg/dL) Hari ke-

3 5 7 9 11 13 15

1 160,1 93 460 389 361 230 102 99 85 82

2 167,4 95 562 387 340 206 126 113 105 102

3 158,8 98 494 429 354 330 123 126 102 99

4 160,7 88 571 452 375 352 147 102 99 77

5 159,8 95 543 499 363 413 137 119 79 75

Rata-rata 93,8 526 431,2 358,6 306,2 127 111,8 94 87

79

1. Persen penurunan KGD tikus setelah pemberian suspensi Na-CMC 0,5 % b/v sebanyak 1 % bb

No Hewan BB Hewan

Persen penurunan KGD setelah perlakuan (mg/dL) Hari ke-

3 5 7 9 11 13 15

1 173,7 19,62 6,89 -12,20 7,69 13,26 38,99 31,29

2 166,2 -33,97 2,20 7,73 -2,20 39,50 24,86 43,09

3 163,9 -121,28 15,26 -32,12 1,20 -80,32 -71,48 19,67

4 155,2 -5,81 -4,35 7,74 34,14 28,32 35,10 -14,76

5 154,3 -30,39 -24,14 2,27 -38,06 -13,06 17,04 35,22

Rata-rata -34,36 -0,82 -5,31 0,55 -2,45 8,90 22,90

80 Lampiran 17. (lanjutan)

2. Persen penurunan KGD tikus setelah pemberian ekstrak etanol daun pepaya dosis 200 mg/kg bb

No Hewan BB Hewan

Persen penurunan KGD setelah perlakuan (mg/dL) Hari ke-

3 5 7 9 11 13 15

1 166,8 3,87 17,24 18,96 62,93 64,65 80,60 81,03

2 163,1 17,39 23,09 53,80 61,95 68,20 74,18 74,72

3 162,1 15,02 40,98 49,72 66,12 75,13 77,04 79,50

4 158,5 -0,30 22,15 46,46 53,84 73,23 74,15 75,07

5 166,2 29,13 35,21 74,78 76,52 77,82 79,56 81,73

Rata-rata 13,02 27,73 48,74 64,27 71,81 77,11 78,41

81

3. Persen penurunan KGD tikus setelah pemberian ekstrak etanol daun pepaya dosis 400 mg/kg bb

No Hewan BB Hewan

Persen penurunan KGD setelah perlakuan (mg/dL) Hari ke-

3 5 7 9 11 13 15

1 171,7 8,85 6,69 42,76 67,38 74,94 76,88 77,10

2 164,7 27,21 34,59 47,04 61,18 63,71 73,62 74,68

3 165 14,85 40,28 58,00 66,28 58,85 66,00 70,28

4 151,2 -7,47 23,67 39,56 62,61 64,17 63,55 66,97

5 179,5 25,12 23,86 25,87 53,51 64,07 67,58 73,36

Rata-rata 13,71 25,82 42,65 62,19 65,15 69,53 72,48

82 Lampiran 17. (lanjutan)

4. Persen penurunan KGD tikus setelah pemberian ekstrak etanol daun pepaya dosis 600 mg/kg bb

No Hewan BB Hewan

KGD setelah perlakuan (mg/dL) Hari ke-

3 5 7 9 11 13 15

1 160 35,22 17,01 53,73 59,70 65,67 66,56 75,22

2 154,8 25,41 35,53 75,20 74,79 73,55 78,09 83,26

3 156 18,28 46,85 60,85 66,57 63,71 69,42 72,57

4 160 -7,72 22,22 62,07 64,73 70,77 72,70 77,29

5 165,7 -24,30 4,00 41,84 51,38 48,00 61,23 64,61

Rata-rata 9,37 25,12 58,74 63,43 64,34 69,60 74,59

83

5. Persen penurunan KGD tikus setelah pemberian suspensi metformin 45 mg/kg bb

No Hewan BB Hewan

Persen penurunan KGD setelah perlakuan (mg/dL) Hari ke-

3 5 7 9 11 13 15

1 160,1 15,43 21,52 50,00 77,82 78,47 81,52 82,17

2 167,4 31,13 39,50 63,34 77,58 79,89 81,31 81,85

3 158,8 13,15 28,34 33,19 75,10 74,49 79,35 79,95

4 160,7 20,84 34,32 38,35 74,25 82,13 82,66 86,51

5 159,8 8,10 33,14 23,94 74,76 78,08 85,45 86,18

Rata-rata 17,73 31,36 41,76 75,90 78,61 82,06 83,33

84

Lampiran 18. Data Persen Penurunan Kadar Glukosa Darah (KGD) Tikus Perbandingan Antar Kelompok Metode Induksi Aloksan 1. Persen penurunan KGD tikus setelah pemberian ekstrak etanol daun pepaya dosis 200 mg/kg bb

No Hewan BB Hewan

Persen penurunan KGD setelah perlakuan (mg/dL) Hari ke-

3 5 7 9 11 13 15

1 166,8 -47,19 -9,40 11,11 50,57 49,84 60,86 66,02

2 163,1 37,31 20,05 49,10 62,16 46,57 65,07 54,85

3 162,1 43,55 -2,36 44,07 49,59 79,73 80,32 62,50

4 158,5 25,40 41,29 54,33 44,85 70,60 68,65 82,91

5 166,2 28,97 31,80 66,27 77,77 74,37 67,80 63,15

Rata-rata 17,61 16,27 44,97 56,99 64,22 68,54 65,88

85

2. Persen penurunan KGD tikus setelah pemberian ekstrak etanol daun pepaya dosis 400 mg/kg bb

No Hewan BB Hewan

Persen penurunan KGD setelah perlakuan (mg/dL) Hari ke-

3 5 7 9 11 13 15

1 171,7 -39,27 -23,07 37,35 67,38 64,52 53,47 59,07

2 164,7 28,86 12,42 24,85 61,18 21,46 54,04 41,74

3 165 45,91 0,94 55,31 66,28 67,92 72,13 48,00

4 151,2 21,05 43,15 49,08 62,61 61,14 56,34 77,63

5 179,5 35,07 30,66 14,24 53,51 64,07 55,82 53,50

Rata-rata 18,32 12,82 36,16 62,19 55,82 58,36 55,99

86 Lampiran 18. (lanjutan)

3. Persen penurunan KGD tikus setelah pemberian ekstrak etanol daun pepaya dosis 600 mg/kg bb

No Hewan BB Hewan

Persen penurunan KGD setelah perlakuan (mg/dL) Hari ke-

3 5 7 9 11 13 15

1 160 28,38 20,79 63,35 61,20 64,83 51,30 67,95

2 154,8 25,56 11,86 64,07 67,02 73,55 61,02 60,67

3 156 48,09 11,84 58,35 52,43 63,71 74,94 52,00

4 160 -2,05 25,29 58,79 46,32 70,77 57,83 80,16

5 165,7 11,98 28,60 45,05 67,48 48,00 56,84 49,56

Rata-rata 22,39 19,68 57,92 58,89 64,17 60,39 62,07

87

4. Persen penurunan KGD tikus setelah pemberian suspensi metformin 45 mg/kg bb

No Hewan BB Hewan

Persen penurunan KGD setelah perlakuan (mg/dL) Hari ke-

3 5 7 9 11 13 15

1 160,1 -28,38 -2,84 83,91 70,68 69,72 63,04 68,33

2 167,4 20,20 3,95 62,13 65,94 48,40 61,39 50,48

3 158,8 22,14 -67,77 -0,30 50,00 71,93 76,11 50,50

4 160,7 -3,43 12,99 8,23 45,95 65,54 63,05 83,75

5 159,8 -8,71 16,93 -16,70 71,81 70,10 72,94 67,10

Rata-rata 0,36 -7,34 27,45 60,88 65,14 67,31 64,03

88

Lampiran 19. Data Hasil Selisih (Delta) KGD Tikus Metode Induksi Aloksan 1. KGD tikus setelah pemberian suspensi Na-CMC 0,5 % b/v sebanyak 1 % bb

No Hewan BB Hewan KGD sebelum diinduksi aloksan (mg/dL) KGD setelah diinduksi aloksan (mg/dL) Δ (Induksi – awal)

KGD setelah perlakuan (mg/dL)

Δ (hari 3 - awal) Δ (hari 5 - awal) Δ (hari 7 - awal) Δ (hari 9 - awal) Δ (hari 11 - awal) Δ (hari 13 - awal) Δ (hari 15 - awal)

1 173,7 98 377 279 205 253 325 250 229 132 161

2 166,2 93 362 269 392 261 241 277 126 179 113

3 163,9 98 249 151 453 113 231 148 351 329 102

4 155,2 95 413 318 342 336 286 177 201 173 379

5 154,3 88 352 264 371 349 256 398 310 204 140

Rata-rata 94,4 350,6 256.2 352.6 262.4 267.8 250 243.4 203.4 179

89

2. KGD tikus setelah pemberian ekstrak etanol daun pepaya dosis 200 mg/kg bb

No Hewan BB Hewan KGD sebelum diinduksi aloksan (mg/dL) KGD setelah diinduksi aloksan (mg/dL) Δ (Induksi – awal)

KGD setelah perlakuan (mg/dL)

Δ (hari 3 - awal) Δ (hari 5 - awal) Δ (hari 7 - awal) Δ (hari 9 - awal) Δ (hari 11 - awal) Δ (hari 13 - awal) Δ (hari 15 - awal)

1 166,8 91 464 373 355 293 285 81 73 -1 -3

2 163,1 93 368 275 211 190 77 47 24 2 0

3 162,1 103 366 263 208 113 81 21 -12 -19 -28

4 158,5 103 325 222 223 150 71 47 -16 -19 -22

5 166,2 94 460 366 232 204 22 14 8 0 -10

Rata-rata 96,8 396,6 299,8 245,8 190 107,2 42 15,4 -7,4 -12.6

90 Lampiran 19. (lanjutan)

3. KGD tikus setelah pemberian ekstrak etanol daun pepaya dosis 400 mg/kg bb

No Hewan BB Hewan KGD sebelum diinduksi aloksan (mg/dL) KGD setelah diinduksi aloksan (mg/dL) Δ (Induksi – awal)

KGD setelah perlakuan (mg/dL)

Δ (hari 3 - awal) Δ (hari 5 - awal) Δ (hari 7 - awal) Δ (hari 9 - awal) Δ (hari 11 - awal) Δ (hari 13 - awal) Δ (hari 15 - awal)

1 171,7 83 463 380 339 349 182 68 33 24 23

2 164,7 81 474 393 264 229 170 103 91 44 39

3 165 87 350 263 211 122 60 31 57 32 17

4 151,2 95 321 226 250 150 99 25 20 22 11

5 179,5 101 398 297 197 202 194 84 42 28 5

Rata-rata 89,4 401,2 311,8 252,2 210,4 141 62,2 48,6 30 19

91

4. KGD tikus setelah pemberian ekstrak etanol daun pepaya dosis 600 mg/kg bb

No Hewan BB Hewan KGD sebelum diinduksi aloksan (mg/dL) KGD setelah diinduksi aloksan (mg/dL) Δ (Induksi – awal)

KGD setelah perlakuan (mg/dL)

Δ (hari 3 - awal) Δ (hari 5 - awal) Δ (hari 7 - awal) Δ (hari 9 - awal) Δ (hari 11 - awal) Δ (hari 13 - awal) Δ (hari 15 - awal)

1 160 88 335 247 129 190 67 47 27 24 -5

2 154,8 87 484 397 274 225 33 35 41 19 -6

3 156 80 350 270 206 106 57 37 47 27 16

4 160 78 414 336 368 244 79 68 43 35 16

5 165,7 87 325 238 317 225 102 71 82 39 28

Rata-rata 84 381,6 297,6 258,8 198 67,6 51,6 48 28,8 9.8

92 Lampiran 19. (lanjutan)

5. KGD tikus setelah pemberian suspensi metformin 45 mg/kg bb

No Hewan BB Hewan KGD sebelum diinduksi aloksan (mg/dL) KGD setelah diinduksi aloksan (mg/dL) Δ (Induksi – awal)

KGD setelah perlakuan (mg/dL)

Δ (hari 3 - awal) Δ (hari 5 - awal) Δ (hari 7 - awal) Δ (hari 9 - awal) Δ (hari 11 - awal) Δ (hari 13 - awal) Δ (hari 15 - awal)

1 160,1 93 460 367 296 268 137 9 6 -8 -11

2 167,4 95 562 467 292 245 111 31 18 10 7

3 158,8 98 494 396 331 256 232 25 28 4 1

4 160,7 88 571 483 364 287 264 59 14 11 -11

5 159,8 95 543 448 404 268 318 42 24 -16 -20

Rata-rata 93,8 526 432,2 337,4 264,8 212,4 33,2 18 0,2 -6.8

93 Kel.

% penurunan KGD rata-rata setelah perlakuan (mg/dL) ± SEM hari ke-

3 p 5 P 7 p 9 p 11 p 13 p 15 P

I -34,36 - 0,052 -0,82 - 0,006* -5,31 - 0,001* 0,55 - 0,000* -2,45 - 0,000* 8,90 - 0,000* 22,90 - 0,000* ± ± ± ± ± ± ±

23,77 6,64 7,63 11,57 21,36 20,46 10,14

II 13,02 0,089 0,999 27,73 0,015# 0,991 48,74 0,000# 0,952 64,27 0,000# 0,626 71,81 0,000# 0,988 77,11 0,000# 0,995 78,14 0,000# 0,951 ± ± ± ± ± ± ±

5,21 4,44 8,93 3,66 2,38 1,33 1,48

III 13,7 0,082 0,999 25,82 0,025# 0,956 42,65 0,001# 1,000 62,19 0,000# 0,475 65,15 0,001# 0,869 69,53 0,001# 0,874 72,48 0,000# 0,531 ± ± ± ± ± ± ±

6,27 5,74 5,22 2,45 2,64 2,47 1,76

IV 9,37 0,132 0,989 25,12 0,030# 0,934 58,74 0,000# 0,442 63,43 0,000# 0,564 64,34 0,001# 0,844 69,60 0,001# 0,876 74,59 0,000# 0,714 ± ± ± ± ± ± ±

11,02 7,42 5,46 3,87 4,44 2,83 3,05

V 17,73 0,052 - 31,36 0,006# - 41,76 0,001# - 75,90 0,000# - 78,61 0,000# - 82,06 0,000# - 83,33 0,000# - ± ± ± ± ± ± ±

3,92 3,03 6,84 0,74 1,25 1,00 1,28

Keterangan : I = Kontrol Na-CMC 0,5%; II = EEDP 200 mg /kg bb ; III = EEDP 400 mg /kg bb; IV = EEDP 600 mg /kg bb; V = Metformin 45 mg /kg bb * = Berbeda signifikan dengan Metformin ; # = Berbeda signifikan dengan Na-CMC

94

Lampiran 21. Signifikansi Persentase Penurunan KGD Rata-Rata Antar Kelompok Tikus yang Diinduksi Aloksan

Kel.

% penurunan KGD rata-rata setelah perlakuan (mg/dL) ± SEM hari ke-

3 p 5 P 7 p 9 p 11 p 13 p 15 p

I 17,61 - 0,778 16,27 - 0,446 44,97 - 0,707 56,99 - 0,934 64,22 - 1,000 68,54 - 0,994 65,88 - 0,996 ± ± ± ± ± ± ±

16,50 9,71 9,23 5,92 6,71 3,24 4,63

II 18,32 - 0,756 12,82 - 0,575 36,16 - 0,949 62,19 - 0,997 55,82 - 0,725 58,36 - 0,292 55,99 - 0,751 ± ± ± ± ± ± ±

14,96 11,55 7,56 2,45 8,65 3,48 6,12

III 22,39 - 0,626 19,68 - 0,334 57,92 - 0,277 58,89 - 0,990 64,17 - 1,000 60,39 - 0,504 62,07 - 0,995 ± ± ± ± ± ± ±

8,40 3,42 3,41 4,15 4,43 3,96 5,57

IV 0,36 - - -7,34 - - 27,45 - - 60,88 - - 65,14 - - 67,31 - - 64,03 - - ± ± ± ± ± ± ±

9,46 15,49 19,33 5,39 4,13 3,00 6,25

Keterangan : I = EEDP 200 mg /kg bb ; II = EEDP 400 mg /kg bb ; III = EEDP 600 mg /kg bb ; IV = Metformin 45 mg /kg bb ; * = Berbeda signifikan dengan Metformin ; # = Berbeda signifikan dengan Na-CMC

95 Kel.

Δ

(Induksi –awal)

KGD setelah perlakuan (mg/dL) ± SEM

Δ (hari 3- awal) p Δ (hari 5- awal) p Δ (hari 7- awal) p Δ (hari 9- awal) p Δ (hari 11- awal) p Δ (hari 13- awal) p Δ (hari 15- awal) p I

256,2 352,6 - 0,997 262,4 - 1,000 267,8 - 0,707 250 - 0,000* 243,4 - 0,000* 203,4 - 0,000* 179 - 0,000* ± ± ± ± ± ± ± ±

27,95 41,15 42,02 17,05 43,79 39,87 33,46 51,05

II

299,8 245,8

0,179 0,305 190,0 0,493 0,461 107,2 0,011# 0,149 42 0,000# 0,998 15,4 0,000# 0,791 -7,4 0,000# 0,997 -12,6 0,000# 0,102 ± ± ± ± ± ± ± ±

29,80 27,63 30,27 45,70 11,82 16,09 4,76 27,04

III

311,8 252,2

0,226 0,373 210,4 0,765 0,735 141,0 0,057 0,487 62,2 0,000# 0,880 48,6 0,000# 1,000 30 0,000# 0,658 19 0,000# 0,405 ± ± ± ± ± ± ± ±

32,56 24,92 39,42 26,13 15,05 12,19 3,89 28,38

IV

297,6 258,8

0,284 0,451 198,0 0,601 0,568 67,6 0,001# 0,024 51,6 0,000# 0,975 48 0,000# 0,836 28,8 0,000# 0,691 9,8 0,000# 0,037 ± ± ± ± ± ± ± ±

30,19 41,93 24,59 11,45 7,60 9,14 3,63 33,75

V

432,2 337,4

0,997 - 264,8 1,000 - 212,4 0,707 - 33,2 0,000# - 18 0,000# - 0,2 0,000# - - 6,8 0,000# - ± ± ± ± ± ± ± \±

21,91 21,16 7,00 38,83 8,36 3,84 5,27 22,32

Keterangan : I = Kontrol Na-CMC 0,5% ; II = EEDP 200 mg /kg bb ; III = EEDP 400 mg /kg bb ; IV = EEDP 600 mg /kg bb ; V = Metformin 45 mg /kg bb; * = Berbeda signifikan dengan Metformin ; # = Berbeda signifikan dengan Na-CMC

52

DAFTAR PUSTAKA

American Diabetes Association (ADA). (2008). Diagnosis and Classification of Diabetes Mellitus. Diabetes Care, 35 (1). care.diabetesjournals.org. Cheng, A.Y.Y., dan Fantus, G.I. (2005). Oral Antihyperglicemic Therapy for

Type 2 Diabetes Mellitus. Canadian Medical Association or its Licensors. 172(2) : 213-226.

Depkes RI. (1986). Sediaan Galenik. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Halaman. 1-2, 6-7, 12.

Depkes RI. (1989). Materia Medika Indonesia. Jilid V. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Halaman 116-117.

Depkes RI. (1995). Materia Medika Indonesia. Jilid VI. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Halaman 322-355.

Depkes RI. (2005).Pharmaceutical Care untuk Penyakit Diabetes Mellitus. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Halaman 35-45. Depkes RI.(2010). Suplemen Farmakope Herbal Indonesia. Jakarta: Kementerian

Kesehatan Republik Indonesia. Halaman 134-136, 140, 141, 146-149. Ditjen POM. (1995). Farmakope Indonesia. Edisi IV. Jakarta: Departemen

Kesehatan Republik Indonesia.Halaman 7

Ditjen POM. (2000). Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Cetakan pertama. Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Halaman 10-11, 14, 16-17. Ditjen POM. (1979). Farmakope Indonesia. Edisi III. Jakarta: Departemen

Kesehatan Republik Indonesia. Halaman 33.

Fransworth, N.R. (1966). Biologycal And Phytochemical Screening of Plants.. Chicago: Reheis Chemical Company. Journal of Pharmaceutical Science 55(3): 262-265.

Harborne, J.B. (1987). Metode Fitokimia. Penerjemah : Kosasih Padwaminata dan Iwang Soediro. Bandung : Penerbit ITB. Halaman 152.

Harmita., dan Radji, M. (2008). Buku Ajar Analisis Hayati. Edisi III. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC. Halaman 66.

Ismawan,B., dan Syariefa, E. (2013). 100 Plus Herbal Indonesia Bukti Ilmiah dan Racikan. Volume 11. Depok: PT. Trubus Swadaya. Halaman480-484.

Kemenkes RI.(2014). Profil Kesehatan Indonesia Tahun 2013. Jakarta: Kementerian Kesehatan Republik Indonesia. Halaman 167.

53

Halaman 209.

Malviya, N., Sanjay, J., dan Sapna, M. (2010). Antidiabetic Potential of Medicina; Plants. Acta Poloniae Pharmaceutica-Drugs Research. 67(2) : 113-118, 2010.

Manaf, A. (2010). Insulin: Mekanisme Sekresi Dan Aspek Metabolisme. Editor: Sudoyo, A.W., Setiyohadi, B., Alwi, I., Simadibrata, K.M., dan Setiati S. (2010). Buku Ajar Ilmu Penyakit Dalam. Edisi keempat. Jilid ketiga. Jakarta: Balai Penerbit Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. Halaman 1896-1897.

Muhtadi, A., Hendriani, R., dan Mustarichie, R. (2013). Pharmacological Screening of Various Indonesian Herbals Potentially Used as Antidiabetic. International Research Journal of Pharmaceutical and Applied Science (IRJPS). 3(1) : 90-95.

Nolte, M. S., dan Karam, J. H.. (2010). Hormon Pankreas & Obat Antidiabetes. Editor: Katzung, B. G. Farmakologi Dasar dan Klinik. Jakarta: Penerbit Buku kedokteran EGC. Halaman: 704-709.

Patil, S., Shetty, S., Bhide, R., dan Narayanan, S. (2013). Evaluation of Platelet Augmentation Activity of Carica papaya Leaf Aqueous Extract in Rats. Journal of Pharmacognosy and Phytochemistry. 1(5) : 57-60, 2013. Patil, T., Patil, S., Patil, A., dan Patil, S. (2014). Carica papaya Leaf Extracts –

An Ethnomedicinal Boon.International Journal of Pharmacognosy and Phytochemical Research. 6(2) : 260-265.

Prameswari, O.M., dan Wijdanarko, S.B. (2014). Uji Efek Air Daun Pandan Wangi terhadap Penurunan Kadar Glukosa Darah dan Histopatologi Tikus Diabetes Mellitus. Jurnal Pangan dan Agrobisnis. 2(2): 16-27. Purnamasari, D. (2010). Diagnosis dan Klasifikasi Diabetes Melitus. Editor:

Sudoyo, A.W., Setiyohadi, B., Alwi, I., Simadibrata, K.M., dan Setiati S. (2010). Buku Ajar Ilmu Penyakit Dalam. Edisi keempat. Jilid ketiga. Jakarta: Balai Penerbit Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. Halaman 1880-1881.

Rohilla, A., dan Ali, S. (2012). Alloxan Induced Diabetes : Mechanisms and Effects. International Journal of Reseacrh in Pharmaceutical and Biomedic Sciences. 3(2) ; 819-823

Rojop, J.E.I., Zagoya, D.J.C., Castillo, B.J.L., Osorio, M.P.H., Rodriguez, C.A.E., Zarate, T.C.A., et al.(2012). Hypoglicemic Effect of Carica papaya Leaves in Streptozotocin-Induced Diabetic Rats. BMC Complementary and Alternative Medicine. 12(236) : 1-11, 2012.

54

Sagnia, B., Fedeli, D., Casetti, R., Montesano, C., Falcioni, G., dan Colizzi, V. (2014). Antioxidant and Anti-Inflammatory Activities of Extracts from Cassia alata, Eleusine indica, Eremomastax speciosa, Carica papaya and Polyscias fulva Medicinal Plants Collected in Cameroon. 9(8) : 1-10. Sholhah, F.A., Tjandrakirana, dan Qomariyah, N. (2013). Pengaruh Pemberian

Kombinasi Rebusan Biji Alpukat (Persea americana) dan Biji Pepaya (Carica papaya) terhadap Kadar Glukosa Darah Mencit. LenteraBio Berkala Ilmiah Biologi. 2(1) : 191-195.

Soegondo, S. (2010). Farmakoterapi Pada Pengendalian Glikemia Diabetes Melitus Tipe 2. Editor: Sudoyo, A.W., Setiyohadi, B., Alwi, I., Simadibrata, K.M., Setiati S. (2010). Buku Ajar Ilmu Penyakit Dalam. Edisi keempat. Jilid ketiga. Jakarta: Balai Penerbit Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. Halaman 1844-1890.

Sudhakar, N., dan Vidhya, R.M.T. (2014). Potential Medicinal Properties of Carica papaya Linn. International Journal of Pharmacy and Pharmacuetical Sciences. 6(2) : 168-173.

Suharmiati. (2003). Pengujian Bioaktifitas Anti Diabetes Mellitus Tumbuhan Obat.

Cermin Dunia Kedokteran. (140): 8-13.

Suyono, S. (2010). Diabetes Melitus di Indonesia. Editor: Sudoyo, A.W., Setiyohadi, B., Alwi, I., Simadibrata, K.M., Setiati S. (2010). Buku Ajar Ilmu Penyakit Dalam. Edisi keempat. Jilid ketiga. Jakarta: Balai Penerbit Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. Halaman 1877.

Syamsuhidayat, S. S., dan Hutapea, J. R. (2000). Inventaris Tanaman Obat Indonesia (I). Jakarta: Departemen Kesehatan dan Kesejahteraan Sosial Republik Indonesia. Halaman 51-52.

Szkudelski, T.. (2001). The Mechanism Of Alloxan And Streptozotocin Action in β Cells Of The Rat pancreas. Physiol Res 50. Halaman 536-546.

Tan, H.J., dan Rahardja, K. (2007). Obat-Obat Penting. Edisi keenam. Jakarta: PT Elex Media Komputindo. Halaman 738-749.

Tandra, H. (2015a). Diabetes Bisa Sembuh : Petunjuk Praktis Mengalahkan dan Menyembuhkan Diabetes. Jakarta: PT. Gramedia. Halaman 2.

Tandra, H. (2015b). Strategi Mengalahkan Komplikasi Diabetes dari Kepala sampai Kaki. Jakarta: PT. Gramedia. Halaman 1.

Triplitt, C.L., Reasner, C.A., dan Isley, W.L. (2008). Diabetes Mellitus. Editor: Dipiro, J.T., Talbert, R.L., Yee, G.C., Matzke G.R., Wells, B.G., dan Posey, L.M. Pharmacotherapy: A Pathophysiologic Approach. Seventh edition. United States of America: The McGraw-Hill Companies, Inc. Halaman: 1205, 1207, 1209, 1213.

55

C.J. (2013). Effect of Extraction Condotions on Total Phenolic Compounds and Antioxidant Activities of Carica papaya Leaf Aqueous Extracts. Journal of Herbal Medicine. 3 : 104-111.

Vuong, Q.V., Hirun, S., Chuen, T.L.K., Goldsmith, C.D., Murchie, S., Bowyer, M.C., et al.(2015). Antioxidant and Anticancer Capacity of Saponin-enriched Carica papaya Leaf Extracts. International Journal of Food Science and Technology. 50 : 169-177,2015.

World Health Organization (WHO). (2014). Diabetes. Tanggal diakses 17 September

World Health Organization (WHO). (2015). Diabetes. Tanggal diakses 17 September

World Health Organization (WHO). (1998). Quality Control Methods For Medicinal Plant Materials. England: WHO. Halaman 28.

Zastrow, V.M., dan Bourne, R.H. (2001). Reseptor dan Farmakodinamika Obat. Editor: Bertram G. Katzung. Farmakologi Dasar dan Klinik. Edisi 1. Jakarta : Salemba Medika. Halaman 53.

17 BAB III

METODE PENELITIAN

Metode penelitian ini dilakukan dengan metode eksperimental yang meliputi pengumpulan sampel, identifikasi sampel, pengolahan sampel, pemeriksaan karakteristik simplisia, skrining fitokimia simplisia, pembuatan ekstrak etanol daun pepaya, penyiapan hewan percobaan, pengujian efek ekstrak etanol daun pepaya terhadap penurunan kadar glukosa darah (KGD) tikus dengan metode toleransi glukosa dan induksi aloksan. Data hasil penelitian dianalisis

dengan one way ANOVA (Analysis of variance) dan dilanjutkan dengan uji Tukey HSD untuk melihat perbedaan nyata antar perlakuan menggunakan

program SPSS (Statistical Product and Service Solution) versi 19.0. Penelitian dilakukan di Laboratorium Farmakognosi dan Laboratorium Farmakologi Fakultas Farmasi Sumatera Utara pada bulan Maret sampai dengan Agustus 2015.

3.1 Alat dan Bahan 3.1.1 Alat – alat

Alat-alat yang digunakan pada penelitian ini meliputi lemari pengering,

blender (National), oven (Memmert), neraca listrik (Mettler Toledo), neraca hewan (GW-1500), mikroskop, desikator, penangas air, rotary evaporator (Heidolph WB-2000), Glucometer (GlucoDrTM) dan Glucotest strip

(GlucoDrTM strip test), spuit, oral sonde, spatula, mortir dan stamfer, alat-alat gelas dan alat laboratorium lainnya.

18

Bahan yang digunakan pada penelitian ini adalah daun pepaya. Bahan kimia yang digunakan berkualitas pro analisa kecuali dinyatakan lain adalah kloral hidrat, toluen, kalium iodida, bismuth nitrat, asam nitrat, iodium, α-naftol, besi (III) klorida, timbal (II) asetat, serbuk seng, serbuk magnesium, asam asetat anhidrida, isopropanol, natrium hidroksida, asam klorida pekat, asam sulfat pekat, kloroform, n-heksan, metanol, etanol 96%, larutan fisiologis NaCl 0,9%, aloksan (Sigma Aldrich), tablet metformin (Hexapharm Jaya), tablet glibenklamid (Indofarma), Na-CMC dan air suling (teknis).

3.2 Penyiapan Sampel 3.2.1 Pengumpulan Sampel

Sampel yang digunakan adalah daun pepaya muda yang telah dipisahkan dari tangkainya. Pengumpulan sampel dilakukan secara purposif yaitu tanpa membandingkan dengan sampel dari daerah lain. Sampel diambil di Pasar 10 Tuntungan, Desa Sukarende, Kecamatan Kutalimbaru, Kabupaten Deli Serdang, Sumatera Utara.

3.2.2 Identifikasi Sampel

Identifikasi sampel daun pepaya dilakukan di Herbarium Bogo-riense, Bidang Botani Pusat Penelitian Biologi-LIPI Bogor. Hasil identitifikasi sampel dapat dilihat pada Lampiran 1, halaman 56.

3.2.3 Pengolahan Sampel

Sampel yang digunakan pada penelitian ini adalah daun pepaya muda yang telah dipisahkan dari tangkainya. Daun daun pepaya muda dikumpulkan,

19

dipisahkan dari tangkainya, dicuci bersih di bawah air mengalir, ditiriskan, dan ditimbang berat basahnya (diperoleh berat basah sebesar 4,2 kg). Daun pepaya selanjutnya dirajang untuk mempermudah proses pengeringan

kemudian dikeringkan di lemari pengering sampai daun kering (ditandai bila diremas daun rapuh), kemudian ditimbang berat keringnya (diperoleh berat kering sebesar 1,3 kg). Simplisia yang telah kering diblender menjadi serbuk dan disimpan dalam wadah plastik yang tertutup rapat di tempat yang terlindung dari cahaya.

3.3 Pembuatan Pereaksi 3.3.1 Pereaksi Bouchardat

Larutkan 2 gram iodium P dan 4 gram kalium iodida P dalam air secukupnya hingga 100 ml (Depkes, RI., 1995).

3.3.2 Pereaksi Dragendorff

Campur 20 ml larutan bismut nitrat P 40% b/v dalam asam nitrat P dengan 50 ml larutan kalium iodida P 54,5% b/v, diamkan sampai memisah sempurna. Ambil larutan jernih dan encerkan dengan air secukupnya hingga 100 ml (Depkes, RI., 1995).

3.3.3 Pereaksi Mayer

Campurkan 60 ml larutan raksa (II) klorida P 2,266% b/v dan 10 ml

larutan kalium iodida P 50% b/v, ditambahkan air secukupnya hingga 100 ml (Depkes, RI., 1995).

20

Sebanyak 3 g α-naftol dilarutkan dalam asam nitrat 0,5 N dan ditambahkan air suling hingga 100 ml (Depkes, RI., 1995).

3.3.5 Pereaksi Timbal (II) Asetat 0,4 M

Sebanyak 15,17 g timbal (II) asetat dilarutkan dalam air bebas karbondioksida hingga 100 ml (Depkes, RI., 1995).

3.3.6 Pereaksi Asam Klorida 2 N

Sebanyak 7,293 g asam klorida pekat diencerkan dengan air suling sampai 100 ml (Depkes, RI., 1995).

3.3.7 Pereaksi Asam Sulfat 2 N

Larutan asam sulfat pekat sebanyak 9,8 ml ditambahkan air suling sampai 100 ml (Depkes, RI., 1995).

3.3.8 Pereaksi Liebermann-Burchard

Campur secara perlahan 5 bagian volume asam sulfat P dengan 50 bagian volume etanol 95% P. Tambahkan hati-hati 5 bagian volume asam asetat anhidrid ke dalam campuran tersebut, dinginkan (Depkes, RI., 2010).

3.3.9 Larutan Kloralhidrat

Larutkan 50 g kloralhidrat ditimbang lalu dilarutkan dalam 20 ml air suling (Depkes, RI., 2010).

3.4 Pemeriksaan Karakteristik Simplisia

Pemeriksaan karakteristik simplisia meliputi pemeriksaan makroskopik, mikroskopik, penetapan kadar air, penetapan kadar sari larut air, penetapan kadar sari larut dalam etanol, penetapan kadar abu total, dan penetapan kadar abu tidak

21

larut dalam asam. Bagan alur pembuatan simplisia, pemeriksaan karakteristik dan skrining fitokimia daun pepaya dapat dilihat pada Lampiran 5, halaman 61.

3.4.1 Pemeriksaan Makroskopik

Pemeriksaan makroskopik dilakukan dengan mengamati bentuk, warna, rasa dan ukuran dari daun pepaya.

3.4.2 Pemeriksaan Mikroskopik

Pemeriksaan mikroskopik untuk serbuk simplisia dilakukan sebagai berikut : sejumlah serbuk simplisia diletakkan merata di atas objek glass yang

telah ditetesi larutan kloralhidrat, ditutupi dengan kaca penutup dan dilihat di bawah mikroskop pada berbagai perbesaran.

3.4.3 Penetapan Kadar Air

Penetapan kadar air dilakukan menurut metode Azeotropi (destilasi toluen). Alat terdiri dari labu alas bulat 500 ml, pendingin, tabung penyambung, tabung penerima 5 ml berskala 0,05 ml, alat penampung dan pemanas listrik. Cara kerja :

1. Penjenuhan toluen

Sebanyak 200 ml toluen dan 2 ml air suling dimasukkan ke dalam labu alas bulat, lalu didestilasi selama 2 jam. Toluen dibiarkan mendingin selama 30 menit, dan dibaca volume air pada tabung penerima dengan ketelitian 0,05 ml (WHO, 1998).

2. Penetapan kadar air simplisia

Sebanyak 5 g serbuk simplisia yang telah ditimbang seksama dimasukkanke dalam labu bulat berisi toluen tersebut, lalu dipanaskan hati-hati selama 15 menit. Setelah toluen mendidih, kecepatan tetesan diatur lebih kurang

22

tetesan dinaikkan hingga 4 tetes tiap detik. Setelah semua air terdestilasi, bagian dalam pendingin dibilas dengan toluen. Destilasi dilanjutkan selama 5 menit, kemudian tabung penerima dibiarkan mendingin pada suhu kamar. Setelah air dan toluen memisah sempurna, volume air dibaca dengan ketelitian 0,05 ml. Selisih kedua volume air yang dibaca sesuai dengan kandungan air yang terdapat dalam bahan yang diperiksa. Kadar air dihitung dalam persen (WHO,1998).

3.4.4 Penetapan Kadar Sari Larut Dalam Air

Sebanyak 5 g serbuk simplisia yang telah dikeringkan di udara, dimaserasi selama 24 jam dalam 100 ml air-kloroform P (2,5 ml kloroform dalam air suling sampai 1 liter) dalam labu bersumbat sambil dikocok sesekali selama 6 jam pertama, kemudian dibiarkan selama 18 jam, lalu disaring. Sejumlah 20 ml filtrat diuapkan sampai kering dalam cawan penguap yang berdasar rata yang telah dipanaskan dan ditara. Sisa dipanaskan pada suhu 105°C sampai bobot tetap. Kadar dalam persen sari yang larut dalam air dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan (Depkes, RI., 1995).

3.4.5 Penetapan Kadar Sari Larut Dalam Etanol

Sebanyak 5 g serbuk simplisia serbuk simplisia yang telah dikeringkan di udara, dimaserasi selama 24 jam dalam 100 ml etanol (95%) dalam labu bersumbat sambil dikocok sesekali selama 6 jam pertama dibiarkan selama

18 jam, kemudian disaring cepat untuk menghindari penguapan etanol. Diuapkan 20 ml filtrat sampai kering dalam cawan penguap yang berdasar rata yang telah dipanaskan dan ditara. Sisa dipanaskan pada suhu 1050C sampai bobot tetap.

23

Kadar sari larut dalam etanol dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan di udara (Depkes, RI., 1995).

3.4.6 Penetapan Kadar Abu Total

Sebanyak 2 g serbuk simplisia yang telah digerus dan ditimbang seksama dimasukkan dalam krus porselin yang telah dipijar dan ditara, kemudian diratakan. Krus dipijar perlahan-lahan sampai arang habis, pemijaran dilakukan pada suhu 600oC selama 3 jam. Kemudian didinginkan dan ditimbang sampai diperoleh bobot tetap. Kadar abu dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan di udara (Depkes, RI., 2010; WHO, 1998).

3.4.7 Penetapan Kadar Abu Tidak Larut Dalam Asam

Abu yang telah diperoleh dalam penetapan kadar abu total dididihkan dengan 25 ml asam klorida encer selama 5 menit, bagian yang tidak larut dalam asam dikumpulkan, disaring dengan kertas saring, dipijarkan, kemudian didinginkan dan ditimbang sampai bobot tetap. Kadar abu yang tidak larut dalam asam dihitung terhadap bobot yang dikeringkan di udara (Depkes, RI., 2010).

3.5 Skrining Fitokimia 3.5.1 Pemeriksaan Glikosida

Simplisia ditimbang sebanyak 3 g kemudian disari dengan 30 ml campuran 7 bagian volume etanol (95%) dan 3 bagian volume air suling di dalam alat pendingin alir balik, dinginkan dan disaring. Pada 20 ml filtrat ditambahkan 25 ml timbal (II) asetat 0,4 M, dikocok, didiamkan selama 5 menit lalu disaring. Filtrat disari dengan 20 ml campuran 3 bagian volume kloroform dan 2 bagian volume isopropanol, dilakukan sebanyak 3 kali. Sari air dikumpulkan dan

24

pada temperatur tidak lebih dari 50oC. Larutkan sisa dengan 2 ml metanol. Larutan tersebut digunakan untuk percobaan berikut: 0,1 ml larutan percobaan dimasukan dalam tabung reaksi dan diuapkan diatas penangas air. Pada sisa ditambahkan 2 ml air dan 5 tetes pereaksi Molisch, kemudian secara perlahan-lahan ditambahkan 2 ml asam sulfat pekat melalui dinding tabung, terbentuknya cincin berwarna ungu pada batas kedua cairan menunjukkan adanya ikatan gula (reaksi Molisch) (Depkes, RI., 1995).

3.5.2 Pemeriksaan Flavonoid

Sebanyak 10 g serbuk simplisia ditambahkan 10 ml air panas, dididihkan selama 5 menit dan disaring dalam keadaan panas. Filtrat yang diperoleh diambil 5 ml, ditambahkan 0,1 g serbuk magnesium, 1 ml asam klorida pekat dan 2 ml amil alkohol, dikocok dan dibiarkan memisah. Flavonoid positif jika terjadi warna merah atau kuning atau jingga pada lapisan amil alkohol (Farnsworth, 1966). 3.5.3 Pemeriksaan Alkaloid

Serbuk simpilisia ditimbang sebanyak 0,5 g kemudian ditambahkan 1 ml asam klorida 2 N dan 9 ml air suling, dipanaskan di atas penangas air selama

2 menit, didinginkan dan disaring. Filtrat yang diperoleh dipakai untuk tes alkaloid. Diambil 3 tabung reaksi, lalu ke dalamnya dimasukkan 0,5 ml filtrat. Pada masing-masing tabung reaksi :

a. Ditambahkan 2 tetes pereaksi Mayer b. Ditambahkan 2 tetes pereaksi Bouchardat c. Ditambahkan 2 tetes pereaksi Dragendorff

25

Alkaloid positif jika terjadi endapan pada dua dari tiga percobaan diatas (Depkes, RI., 1995).

3.5.4 Pemeriksaan Saponin

Sebanyak 0,5 g serbuk simplisia dimasukan ke dalam tabung reaksi, ditambahkan 10 ml air panas, dinginkan kemudian dikocok kuat-kuat selama 10 detik, jika terbentuk busa setinggi 1-10 cm yang stabil tidak kurang dari 10 menit dan tidak hilang dengan penambahan 1 tetes asam klorida 2 N

menunjukan adanya saponin (Depkes, RI., 1995). 3.5.5 Pemeriksaan Tanin

Sebanyak 0,5 g serbuk simplisia disari dengan 10 ml air suling, disaring

lalu filtratnya diencerkan dengan air suling sampai hampir tidak berwarna.

Diambil 2 ml larutan lalu ditambahkan 1 sampai 2 tetes pereaksi besi (III) klorida 1 %. Terjadi warna biru atau hijau kehitaman menunjukkan

adanya tanin (Farnsworth, 1966).

3.5.6 Pemeriksaan Steroid / Triterpenoid

Sebanyak 1 g sampel dimaserasi dengan 20 ml n-heksan selama 2 jam, lalu disaring. Filtrat diuapkan dalam cawan penguap. Pada sisa ditambahkan beberapa tetes pereaksi Liebermann-Burchard. Timbulnya warna biru atau biru hijau menunjukan adanya steroid, sedangkan warna merah, merah muda atau ungu menunjukkan adanya triterpenoid (Harborne, 1987).

3.6 Penyiapan Hewan Percobaan

Hewan percobaan yang digunakan dalam penelitian adalah tikus putih wistar jantan dengan berat badan 150-200 g sebanyak 25 ekor , dikelompokkan

26

terlebih dahulu tikus dikondisikan selama 2 minggu dalam kandang yang baik untuk menyesuaikan dengan lingkungannya.

3.7 Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Pepaya (EEDP)

Serbuk simplisia diekstraksi dengan cara maserasi dengan menggunakan pelarut etanol 96%. Menurut Farmakope Indonesia edisi III, (1979) caranya adalah sebagai berikut :

Sebanyak 10 bagian (500 g) serbuk simplisia dimasukkan ke dalam sebuah bejana, dituangi dengan 75 bagian (3,75 liter) cairan penyari (etanol 96%), ditutup, dibiarkan selama 5 hari terlindung dari cahaya sambil sering diaduk,

kemudian diserkai, diperas. Ampas diremaserasi dengan cairan penyari (etanol 96%) secukupnya hingga diperoleh 5 liter (100 bagian). Pindahkan ke

bejana tertutup, dibiarkan di tempat sejuk, terlindung dari cahaya selama 2 hari. Enap tuangkan atau saring. Pemekatan ekstrak dilakukan dengan alat rotary evaporator pada suhu 400C. Bagan alur pembuatan ekstrak etanol daun pepaya dapat dilihat pada Lampiran 6, halaman 62.

3.8 Pengujian Efek Penurunan Kadar Glukosa Darah 3.8.1 Pembuatan Suspensi Na-CMC 0,5%

Sebanyak 0,5 g Na-CMC 0,5% ditaburkan dalam lumpang yang berisi ± 10 ml air suling panas. Didiamkan selama 15 menit hingga diperoleh massa

27

dimasukkan ke labu tentukur 100 ml, dicukupkan volumenya dengan air suling hingga 100 ml.

3.8.2 Pembuatan Suspensi Metformin Dosis 45 mg/kg bb

Dosis metformin untuk manusia 500 mg/hari (Nolte dan Karam, 2010), maka dosis untuk tikus (BB = 200 g) dikonversikan = 500 mg x 0,018 = 9 mg.

Dosis per kg berat badan = 1000 g/200 g x 9 mg = 45 mg/kg bb. Timbang tablet metformin setara 45 mg , dimasukkan ke dalam lumpang dan ditambahkan suspensi Na-CMC 0,5% sedikit demi sedikit sambil digerus sampai homogen, volume dicukupkan hingga 10 ml. Perhitungan dosis suspensi metformin dapat dilihat pada Lampiran 15, halaman 72.

3.8.3 Pembuatan Suspensi Glibenklamid Dosis 0,45 mg/kg bb

Dosis glibenklamid untuk manusia 5 mg/hari (Nolte dan Karam, 2010), maka dosis untuk tikus (BB = 200 g) dikonversikan = 5 mg x 0,018 = 0,09 mg. Dosis per kg berat badan = 1000 g/200 g x 0,09 mg = 0,45 mg/kg bb. Timbang tablet glibenklamid setara 0,45 mg, dimasukkan dalam lumpang dan ditambahkan suspensi Na-CMC 0,5% sedikit demi sedikit sambil digerus sampai homogen, volume dicukupkan hingga 10 ml. Perhitungan dosis suspensi glibenklamid dapat dilihat pada Lampiran 15, halaman 72.

3.8.4 Pembuatan Suspensi Ekstrak Daun Pepaya (EEDP)

Suspensi ekstrak daun pepaya dibuatdengan 3 variasi dosis yakni dosis 200 mg/kg bb, 400 mg/kg bb, dan 600 mg/kg bb. Sejumlah 200 mg, 400 mg, dan 600 mg ekstrak daun pepaya ditimbang dan dimasukkan ke dalam lumpang dan ditambahkan suspensi Na-CMC 0,5% sedikit demi sedikit sambil digerus sampai

28

(EEDP)dapat dilihat pada Lampiran 15, halaman 71. 3.8.5 Pembuatan Larutan Aloksan 150 mg/kg bb

Aloksan monohidrat 150 mg dilarutkan dalam larutan fisiologis NaCl 0,9% b/v dalam labu tentukur 10 ml. Larutan selalu dibuat baru setiap

pengujian. Perhitungan aloksandapat dilihat pada Lampiran 15, halaman 73. 3.8.6 PenggunaanBlood Glucose Test Meter “GlucoDrTM ”

Kadar glukosa darah diukur dengan alat glucometer menggunakan tes strip yang bekerja secara enzimatis. Alat yang digunakan untuk mengukur kadar glukosa darah adalah GlucoDrTM. Glucometer ini secara otomatis akan hidup ketika test strip dimasukkan dan akan mati setelah beberapa menit test strip dicabut. GlucoDrTMcheck strip dimasukkan ke alat GlucoDrTM sehingga glucometer ini akan hidup secara otomatis, kemudian dicocokkan kode nomor yang muncul pada layar dengan yang ada pada vial GlucoDrTMtest strip. Tes strip yang dimasukkan pada glucometer pada bagian layar akan tertera angka yang harus sesuai dengan kode vial GlucoDrTMtest strip, kemudian pada layar monitor glucometer muncul tanda siap untuk diteteskan darah. Caranya dengan menyentuhkan darah yang keluar ke tes strip dan ditarik sendirinya melalui aksi kapiler. Ketika wadah terisi penuh oleh darah, alat mulai mengukur kadar glukosa darah.

3.8.7 Pengukuran Kadar Glukosa Darah (KGD)

Sebelum percobaan dilakukan, tikus dipuasakan (tidak diberi makan tetapi tetap diberi minum) selama 10-16 jam, masing-masing ditimbang berat badan dan diberi tanda pada ekor. Kemudian tikus diukur kadar glukosa darah dengan cara

29

mengambil darah tikus melalui pembuluh darah vena ekor. Darah disentuhkan pada strip test yang telah terpasang pada alat glucometer. Angka yang tampil pada layar dicatat sebagai kadar glukosa darah dalam satuan mg/dL.

3.8.8 Pengujian Aktivitas Antidiabetes Ekstrak Etanol Daun Pepaya (EEDP) dengan Metode Toleransi Glukosa

Tikus sebanyak 25 ekor dengan berat badan 150-200 g yang telah dipuasakan ditimbang berat badannya, diukur kadar glukosa darah (KGD) puasa, dikelompokkan secara acak menjadi 5 kelompok yang terdiri dari 5 ekor tikus yaitu :

Kelompok I : suspensi Na-CMC 0,5%

Kelompok II : suspensi EEDP dosis 200 mg/kg bb Kelompok III : suspensi EEDP dosis 400 mg/kg bb Kelompok IV : suspensi EEDP dosis 600 mg/kg bb

Kelompok V : suspensi glibenklamid dosis 0,45 mg/kg bb

Setiap kelompok yang telah diberikan sediaan uji, 30 menit kemudian diberikan larutan glukosa 50% dengan dosis 5 g/kg bb. Setelah pemberian glukosa dilakukan pengukuran KGD pada menit ke-30, 60, 90 dan 120 dengan menggunakan alat ukur glucometer.

3.8.9 Pengujian Aktivitas Antidiabetes Ekstrak Etanol Daun Pepaya (EEDP) dengan Metode Induksi Aloksan

Tikus yang telah digunakan pada pengujian aktivitas antidiabetes dengan metode toleransi glukosa dikondisikan selama 1 minggu terlebih dahulu. Sebelum ditentukan kadar glukosa darah puasa, tikus dipuasakan dan ditimbang berat

badannya, kemudian masing-masing tikus diinduksi dengan aloksan dosis 150 mg/kg bb secara intraperitoneal. Tikus diberi makan dan minum seperti biasa,

30

pada hari ke-3 hingga hari berikutnya hingga menunjukkan kenaikan kadar glukosa darah tikus untuk digunakan dalam pengujian. Tikus dianggap diabetes apabila kadar glukosa darah puasa ≥ 200 mg/dL dan telah dapat digunakan untuk pengujian. Selanjutnya disebut sebagai tikus diabetes.

Tikus diabetes dikelompokkan secara acak menjadi 5 kelompok yang terdiri dari 5 ekor tikus yaitu :

Kelompok I : suspensi Na-CMC 0,5%

Kelompok II : suspensi EEDP dosis 200 mg/kg bb Kelompok III : suspensi EEDP dosis 400 mg/kg bb Kelompok IV : suspensi EEDP dosis 600 mg/kg bb Kelompok V : suspensi metformin dosis 45 mg/kg bb

Kelima kelompok diberi perlakuan selama 2 minggu berturut-turut, selanjutnya pengukuran kadar glukosa darah diukur pada hari ke-3, 5, 7, 9, 11, 13, dan ke-15 menggunakan alat ukur glucometer.

3.9 Analisis Data

Data hasil penelitian dianalisis dengan one way ANOVA (Analysis of variance) dan dilanjutkan dengan uji Tukey HSD untuk melihat perbedaan

nyata antar perlakuan. Analisis Statistik ini menggunakan program SPSS versi 19.0.

31 BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Indentifikasi Sampel

Hasil identifikasi yang dilakukan di Herbarium Bogoriense, Bidang Botani Pusat Penelitian Biologi LIPI-Bogor adalah sampel daun pepaya yang digunakan

sebagai bahan uji termasuk suku Caricaceae, jenis Carica papaya Linn. Hasil identifikasi tumbuhan dapat dilihat pada Lampiran 1, halaman56.

4.2 Karakterisasi Simplisia 4.2.1 Pemeriksaan Makroskopik

Hasil pemeriksaan makroskopik daun pepaya yaitu daun tunggal, bentuk daun menyerupai telapak tangan menjari 5 – 9 bagian. Daun pepaya bertulang daun menjari, bagian atas daun berwarna hijau tua dan permukaan bawah berwarna hijau muda, berasa sangat pahit. Garis tengah helaian daun 25 – 75 cmHasil pemeriksaan dapat dilihat pada pada Lampiran 3, halaman 58.

4.2.2 Pemeriksaan Mikroskopik

Hasil pemeriksaan mikroskopik serbuk daun pepaya memperlihatkan adanya kristal kalsium oksalat berbentuk roset, berkas pengangkut dengan penebalan spiral, berkas pengangkut dengan penebalan tangga, dan stomata tipe anomositik. Hasil pemeriksaan dapat dilihat pada Lampiran 4, halaman 60.

4.2.3Pemeriksaan Karakteristik Serbuk Simplisia

Hasil pemeriksaan karakteristik serbuk simplisia daun pepaya dapat dilihat pada Tabel 4.1

32

No Karakteristik serbuk simplisia Simplisia

Kadar (%) Persy. MMI edisi V

1 Kadar air 3,99 -

2 Kadar sari larut dalam air 31,13 Tidak kurang dari 30 % 3 Kadar sari larut dalam etanol 16,29 Tidak kurang dari 15 % 4 Kadar abu total 11,75 Tidak lebih dari 12 % 5 Kadar abu tidak larut dalam asam 0,87 Tidak lebih dari 1 % Keterangan : (-) : tidak ada

Hasil penetapan kadar air dari simplisia daun pepaya yaitu 3,99%, yang menunjukkan bahwa kadar air simplisia memenuhi persyaratan yaitu tidak melebihi dari 10% (Depkes, RI., 1995). Penetapan kadar air dilakukan untuk memberi batasan atau rentang besarnya kandungan air di dalam simplisia, karena tingginya kandungan air dapat mempercepat pertumbuhan jamur (Ditjen POM., 2000).

Kadar sari larut air simplisia daun pepaya 31,13% dan kadar sari larut etanol simplisia daun pepaya 16,29%. Penetapan kadar sari yang larut air untuk mengetahui kadar senyawa kimia bersifat polar yang terkandung dalam daun pepaya, sedangkan kadar sari yang larut etanol dilakukan untuk mengetahui kadar senyawa yang larut dalam etanol, baik senyawa polar maupun non polar (Depkes, 1986).

Penetapan kadar abu total dilakukan untuk mengetahui kandungan mineral internal (abu fisiologis) yang berasal dari jaringan tanaman itu sendiri dan eksternal (abu non-fisiologis) yang merupakan residu dari luar seperti pasir dan tanah yang terdapat dalam sampel (Ditjen POM., 2000; WHO, 1998). Kadar abu tidak larut asam untuk menunjukkan jumlah silikat, khususnya pasir yang ada pada simplisia dengan cara melarutkan abu total dalam asam klorida (WHO,

33

1998). Penetapan kadar abu pada simplisia daun pepayamenunjukkan kadar abu total sebesar 11,75% dan kadar abu tidak larut dalam asam sebesar 0,87%. Hasil perhitungan karakterisasi simplisia daun pepaya dapat dilihat pada Lampiran10, halaman 66.

4.3 Ekstraksi

Hasil ekstraksi 500 gram simplisia dengan cara maserasi menggunakan pelarut etanol 96%, bertujuan untuk mengekstraksi senyawa yang terdapat pada simplisia daun pepaya, baik bersifat polar maupun non polar, diperoleh ekstrak etanol daun pepaya sebanyak 59,43 g ( % rendemen : berat ekstrak / berat simplisia x 100%: 59,43 g /500 g x 100% : 11,88 %).

4.4 Skrining Fitokimia

Penentuan golongan senyawa kimia serbuk simplisia daun pepaya untuk mendapatkan informasi golongan senyawa metabolit sekunder yang ada didalamnya. Hasil skrining fitokimia serbuk simplisiadaun pepaya dapat dilihat pada Tabel 4.2

Tabel 4.2Hasil skrining fitokimia serbuk simplisiadaun pepaya

No Parameter Serbuk simplisia

1 Alkaloid +

2 Flavonoid +

3 Glikosida +

4 Saponin +

5 Tanin +

6 Steroid/triterpenoid +

Keterangan:

34

senyawa alkaloid, flavonoid, glikosida, saponin, tanin dansteroid/triterpenoid. Golongan alkaloid terindentifikasi pada serbuk simplisia ditandai dengan adanya endapan putih atau putih kekuningan setelah ditambahkan pereaksi Mayer, endapan cokelat-cokelat kehitaman setelah ditambahkan pereaksi Bouchardat dan endapan kuning jingga setelah ditambahkan pereaksi Dragendroff (Depkes, RI., 1995). Steroid/triterpenoid memberikan hasil positifdenganterbentuknya warna hijau biru setelah ditambahkan pereaksi Liebermann-Burchard (Harborne, 1987). Golongan flavonoid memberikan hasil yang positif ditandai dengan penambahan serbuk magnesium dengan HCl pekat terjadi warna kuning atau jingga. Uji identifikasi tanin menunjukkan hasil positif dengan penambahan pereaksi FeCl3

1% terjadi warna biru kehitaman (Farnsworth, 1966). Adanya glikosida ditandai terbentuknya cincin ungu dengan pereaksi Molisch. Pada uji identifikasi saponin memberikan hasil positif dengan terbentuknya busa setelah dikocok kuat-kuat selama 10 menit dan dengan penambahan1 tetes HCl 2N buih/busa tidak hilang (Depkes, RI., 1995).

4.5 Pengujian Aktivitas Antidiabetes Ekstrak Etanol Daun Pepaya (EEDP) Pada penelitian ini menggunakan tikus jantan yang telah dilakukan uji

orientasi penurunan KGD dengan pemberian EEDP dosis 100 mg/kg bb, 200 mg/kg bb, 400 mg/kg bb, 600 mg/kg bb, 800 mg/kg bb dan 1000 mg/kg bb.

Berdasarkan hasil orientasi yang telah dilakukan, penurunan KGD sudah terlihat pada semua dosis kecuali EEDP dosis 100 mg/kg bb. Penurunan KGD dengan pemberian EEDP dosis 100 mg/kg bb tidak terlalu menunjukkan penurunan yang

35

bermakna. Dengan demikian ditetapkan dosis untuk pengujian selanjutnya digunakan EEDP dosis 200 mg/kg bb, 400 mg/kg bb, dan 600 mg/kg bb.

4.5.1 Pengujian Aktivitas Antidiabetes dengan Metode Uji Toleransi Glukosa Sebelum percobaan dilakukan, tikus dipuasakan (tidak diberi makan tetapi

tetap diberi minum) selama 10-16 jam, lalu ditimbang berat badan tikus masing-masing dan diberi tanda pada ekor. Kemudian masing-masing tikus diukur

KGD puasa tikus menggunakan alat glucometerGlucoDrTMuntuk mengetahui KGD awal.

Selanjutnya dikelompokkan secara acak menjadi 5 kelompok yang terdiri dari 5 ekor tikus dan diberi perlakuan secara oral yaitu Na-CMC 0,5%, EEDP dosis 200 mg/kg bb, EEDP 400 mg/kg bb, EEDP 600 mg/kg bb, dan glibenklamid 0,45 mg/kg bb. 30 menit setelah perlakuan masing-masing tikus diberi larutan glukosa 50% dosis 5 g/kg bb sebagai loading dose, dan diukur KGD masing-masing tikus pada menit ke 30, 60, 90, dan 120. Hasil persentase penurunan KGD uji toleransi glukosa dapat dilihat pada Tabel 4.3

36 Kelompok Uji

Rata- rata % penurunan KGD (mg/dL) ± SEM Menit

ke-60 p

Menit

ke-90 p

Menit

ke-120 p Na-CMC 0,5% -19,09 - 0,050* -13,46 - 0,024* -18,47 - 0,003* ± ± ±

9,53 5,75 10,63

EEDP 200 mg/kg bb

6,86 0,061 1,000 10,87 0,019# 1,000 26,70 0,001# 0,950 ± ± ±

8,49 5,99 4,83

EEDP 400 mg/kg bb

4,02 0,113 0,993 12,86 0,010# 0,995 20,32 0,003# 1,000 ± ± ±

4,05 3,63 4,57

EEDP 600 mg/kg bb

-1,42 0,315 0,841 3,45 0,157 0,873 18,94 0,004# 1,000 ± ± ±

2,91 2,03 4,03

Glibenklamid 0,45 mg/kg bb

7,77 0,050# - 10,15 0,024# - 20,19 0,003# - ± ± ±

3,28 6,15 5,57

Keterangan :

* : berbeda signifikan dengan kelompok Glibenklamid # : berbeda signifikan dengan kelompok Na-CMC

Ekstrak etanol daun pepaya dosis 200 mg/kg bb, 400 mg/kg bb dan 600 mg/kg bb menunjukkan penurunan KGD dimulai dari menit ke- 60, 90 dan 120 jika dibandingkan dengan kelompok kontrol Na-CMC. Hasil analisis persentase penurunan KGD menunjukkan bahwa pemberian EEDP dosis 200 mg/kg bb dan 400 mg/kg bb menunjukkan perbedaan yang signifikan pada menit ke-90 dan 120

jika dibandingkan dengan kelompok kontrol Na-CMC 0,5%, p = 0,019 dan p = 0,010. Pemberian EEDP dosis 600 mg/kg bb menunjukkan perbedaan yang

signifikan pada menit ke-120 jika dibandingkan dengan kelompok kontrol Na-CMC 0,5%, p = 0,004. Berdasarkan hasil analisis semua sediaan uji dan

37

0,05 yang menunjukkan terdapat perbedaan yang signifikan antara kelompok uji dengan kelompok kontrol. Hasil analisis juga menunjukkan bahwa pemberian EEDP dosis 200 mg/kg bb, 400 mg/kg bb dan 600 mg/kg bb tidak terdapat perbedaan persentase penurunan KGD yang signifikan dengan nilai signifikan berturut-turut 0,095; 1,000 dan 1,000atau memiliki efek yang sama dengan kelompok pembanding glibenklamid dosis 0,45 mg/kg bb. Berdasarkan hasil tersebut maka EEDP dosis 200 mg/kg bb, 400 mg/kg bb dan 600 mg/kg bb menunjukkan aktivitas antidiabetes.

4.5.2 Pengujian Aktivitas Antidiabetes Ekstrak Etanol Daun Pepaya (EEDP) dengan Metode Induksi Aloksan

Tikus uji dikelompokkan secara acak menjadi 5 kelompok perlakuan yang terdiri dari 5 ekor tikus dan diberi perlakuan secara oral yaitu kelompok kontrol yang diberi suspensi Na-CMC 0,5%, kelompok uji dengan 3 variasi dosis perlakuan yaitu suspensi EEDP dosis 200 mg/kg bb, EEDP 400 mg/kg bb, EEDP 600 mg/kg bb, dan suspensi metformin dosis 45 mg/kg bb.

Sebelum pengujian dilakukan, tikus dipuasakan (tidak diberi makan tetapi tetap diberi minum) selama 10-16 jam, lalu ditimbang berat badan tikus masing-masing dan diberi tanda pada ekor. Kemudian masing-masing-masing-masing tikus diukur KGD puasa tikus menggunakan alat glucometerGlucoDrTMuntuk mengetahui KGD awal.

Hasil pengukuran KGD tikus rata-rata setelah puasa selama 10-16 jam, sebelum tikus diinduksi aloksan dosis 150 mg/kg bb ditunjukkan pada Tabel 4.4

38 aloksan dosis 150 mg/kg bb

Hasil tes homogenitas diperoleh nilai signifikan (0,057) pada α : 0,05 yang menunjukkan tidak terdapat perbedaan yang signifikan di antara kelompok kontrol, kelompok uji dan kelompok pembanding. Hal ini menunjukkan bahwa hewan coba yang digunakan dalam kondisi fisiologis yang homogen, yakni dalam kadar glukosa darah normal sehingga dapat digunakan sebagai hewan uji.

Tikus diinduksi dengan aloksan dosis 150 mg/kg bb secara intraperitoneal, diamati tingkah laku dan bobot badan, serta diukur KGD pada hari ke-3 hingga hari berikutnya sampai menunjukkan kenaikan KGD dan tikus mulai dapat mulai digunakan dalam pengujian. Tikus yang telah memiliki KGD ≥ 200 mg/dL disebut tikus diabetes Hasil rata-rata dari peningkatan KGD ditunjukkan pada Tabel 4.5

Kel. Tikus Normal Rata-rata KGD puasa (mg/dL) ± SEM

1. Na-CMC 0,5% 94,4 ± 1,86

2. EEDP 200 mg/kg bb 96,8 ± 2,57

3. EEDP 400 mg/kg bb 89,4 ± 3,76

4. EEDP 600 mg/kg bb 84,0 ± 2,07

5. Metformin 45 mg/kg bb 93,8 ± 1,65

39

Tabel 4.5 Hasil pengukuran KGDtikus rata-rata setelah diinduksi aloksan dosis 150 mg/kg bb

Kel. _{Tikus Normal Rata-rata KGD puasa (mg/dL) ± SEM}

1. Na-CMC 0,5% b/v 350,6 ± 27,42

2. EEDP 200 mg/kg bb 396,6 ± 27,78

3. EEDP 400 mg/kg bb 401,2 ± 30,15

4. EEDP 600 mg/kg bb 381,6 ± 29,92

5. Metformin 45 mg/kg bb 526,0 ± 21,20

Total 411,0 ± 16,62

Berdasarkan Tabel 4.5 terlihat bahwa pemberian aloksan dosis 150 mg/kg bb untuk semua hewan percobaan menghasilkan kadar glukosa darah rata-rata 411,0 mg/dL. Hasil tes homogenitas diperoleh p = 0,858 pada α : 0,05 yang menunjukkan tidak terdapat perbedaan yang signifikan di antara kelompok kontrol, kelompok uji dan kelompok pembanding. Hal ini menunjukkan bahwa hewan coba yang digunakan dalam kondisi fisiologis yang homogen, yakni tikus sudah dalam kondisi diabetes sehingga dapat digunakan sebagai hewan uji. Pemberian perlakuan dimulai setelah tikus positif diabetes (hari ke-1), setiap hari diberi sediaan uji selama 2 minggu, dan dilakukan pengukuran KGD pada hari ke-3, 5, 7, 9, 11, 1ke-3, dan 15.

Data KGD (mg/dL) pada masing-masing tikus pada semua kelompok perlakuan dilakukan perhitungan persen penurunan KGD antar individu, kemudian dianalisis secara statistik menggunakan ANOVA lalu dilanjutkan uji

40

persentase penurunan KGD rata-rata antar individu tikus setelah diinduksi aloksandapat dilihat pada Tabel 4.6dan Gambar 4.1.

Tabel 4.6 Hasil persentase penurunan KGD rata-rata antar individu tikus setelah diinduksi aloksan

Kelompok uji

% penurunan KGD rata-rata setelah perlakuan (mg/dL) ± SEM hari ke-

3 5 7 9 11 13 15

Kontrol Na-CMC 0,5 b/v

-34,36 -0,82 -5,31 0,55 -2,45 8,90 22,90

± ± ± ± ± ± ±

23,77 6,64 7,63 11,57 21,36 20,46 10,14 EEDP

200 mg/kgbb

13,02 27,73 48,74 64,27 71,81 77,11 78,14

± ± ± ± ± ± ±

5,21 4,44 8,93 3,66 2,38 1,33 1,48 EEDP

400 mg/kg bb

13,7 25,82 42,65 62,19 65,15 69,53 72,48

± ± ± ± ± ± ±

6,27 5,74 5,22 2,45 2,64 2,47 1,76 EEDP

600 mg/kg bb

9,37 25,12 58,74 63,43 64,34 69,60 74,59

± ± ± ± ± ± ±

11,02 7,42 5,46 3,87 4,44 2,83 3,05 Metformin 45

mg/kg bb

17,73 31,36 41,76 75,90 78,61 82,06 83,33

± ± ± ± ± ± ±

3,92 3,03 6,84 0,74 1,25 1,00 1,28 Berdasarkan Tabel 4.6 dapat dilihat bahwa tikus yang diberi perlakuan EEDP dosis 200 mg/kg bb, 400 mg/kg bb dan 600 mg/kg bb sudah menunjukkan penurunan KGD pada hari ke-3.Hasil analisis statistik penurunan KGD pada hari ke-3 belum menunjukkan perbedaan yang signifikan jika dibandingkan dengan kelompok Na-CMC dan metformin. Hal ini menyatakan bahwa kelompok hewan uji yang diberi EEDP dosis 200 mg/kg bb, 400 mg/kg bb, 600 mg/kg bb danmetformin belum memberikan efek yang signifikan dibandingkan dengan

41

kelompok kontrol yang hanya diberikan Na-CMC 0,5%.Hasil analisis statistik penurunan KGD sudah menunjukkan perbedaan yang signifikan mulai hari ke-5 dan terjadi sampai hari ke-15 jika dibandingkan kelompok Na-CMC.Pada hari ke-15, EEDP dosis 200 mg/kg bb, 400 mg/kg bb dan 600 mg/kg bb menunjukkan penurunan KGDdengan masing-masing persentase penurunan yaitu 78,14%; 72,48% dan 74,59 %. Berdasarkan hasil analisis statistik pada hari ke-15, EEDP dosis 200 mg/kg bb, 400 mg/kg bb dan 600 mg/kg bb menunjukkan perbedaan yang signifikan dengan nilai signifikan ketiganya 0,000 dibandingkan dengan hewan kelompok kontrol yang diberi Na-CMC 0,5%.Hal ini menyatakan bahwa terjadi perbedaan penurunan KGD yang signifikan antara kelompok yang diberi EEDP dan yang hanya diberi Na-CMC.

Pada hari ke-15, pemberian metformin 45 mg/kg bb menunjukkan persentase penurunan KGD sebesar 83,33%.Berdasarkan hasil analisis statistik pada hari ke-15, pemberian EEDP dosis 200 mg/kg bb, 400 mg/kg bb, dan 600 mg/kg bb dengan nilai signifikan berturut-turut 0,951; 0,531; dan 0,714 tidak menunjukkan perbedaan persentase penurunan KGD yang signifikan jika dibandingkan dengan kelompok hewan yang diberikan metformin 45 mg/kg bb. Hal ini menyatakan bahwa kelompok yang diberi EEDP mulai memberikan efek penurunan KGD tikus yang sama dengan metformin. Dengan demikian pemberian EEDP dosis 200 mg/kg bb, 400 mg/kg bb, dan 600 mg/kg bb dapat menurunkan KGD pada tikus yang diinduksi aloksan. Nilai signifikan persentase penurunan KGD rata-rata antar individu dapat dilihat pada Lampiran 20, halaman 93.

42

Gambar 4.1 Grafik hasil presentase penurunan KGD rata-rata antar individu tikus setelah diinduksi aloksan

-60% -50% -40% -30% -20% -10% 0% 10% 20% 30% 40% 50% 60% 70% 80% 90%

hari ke-3 hari ke-5 hari ke-7 hari ke-9 hari ke-11 hari ke-13 hari ke-15

P

e

rs

e

n

ta

se

P

w

n

u

ru

n

a

n

K

G

D

(

%)

Waktu (hari)

43

Data KGD (mg/dL) pada masing-masing tikus pada semua kelompok perlakuan juga dilakukan perhitungan persen penurunan KGD antar kelompok, kemudian dianalisis secara statistik menggunakan ANOVA lalu dilanjutkan uji Post Hoc Tukey HSD untuk melihat perbedaan nyataantar perlakuaan. Hasil persentase penurunan KGD rata-rata tikus antar kelompok tikus setelah diinduksi aloksandapat dilihat pada Tabel 4.7dan Gambar 4.2.

Tabel 4.7 Hasil persentase penurunan KGD rata-rata antar kelompok tikus setelah diinduksi aloksan

Kelompok uji

% penurunan KGD rata-rata setelah perlakuan (mg/dL) ± SEM

hari ke-

3 5 7 9 11 13 15

EEDP 200 mg/kgbb

17,61 16,27 44,97 56,99 64,22 68,54 65,88

± ± ± ± ± ± ±

16,50 9,71 9,23 5,92 6,71 3,24 4,63 EEDP

400 mg/kg bb

18,32 12,82 36,16 62,19 55,82 58,36 55,99

± ± ± ± ± ± ±

14,96 11,55 7,56 2,45 8,65 3,48 6,12 EEDP

600 mg/kg bb

22,39 19,68 57,92 58,89 64,17 60,39 62,07

± ± ± ± ± ± ±

8,40 3,42 3,41 4,15 4,43 3,96 5,57 Metformin 45

mg/kg bb

0,36 -7,34 27,45 60,88 65,14 67,31 64,03

± ± ± ± ± ± ±

9,46 15,49 19,33 5,39 4,13 3,00 6,25

Berdasarkan Tabel 4.7 dapat dilihat bahwa pemberian EEDP dosis 200 mg/kg bb, 400 mg/kg bb dan 600 mg/kg bbpada hari 3 dan hari

ke-5terdapat perbedaan persen penurunan KGDdengan kelompok metformin. Pada hari ke-3 dan ke-5 persen penurunan KGD kelompok metformin jauh lebih kecil dibandingkan kelompok hewan uji yang diberi EEDP dosis 200 mg/kg bb, 400 mg/kg bb dan 600 mg/kg bb. Hasil analisis statistikkelompok yang diberi EEDP

44

dibandingkan dengan kelompok yang diberi metformin.Hal ini menyatakan bahwa pemberian dosis 200 mg/kg bb, 400 mg/kg bb dan 600 mg/kg bb tidak menunjukkan penurunan KGD yang berbeda secara signifikan dengan kelompok yang diberi metformin 45 mg/kg bb. Persen penurunan KGD dari kelompok yang diberi EEDP dosis 200 mg/kg bb, 400 mg/kg bb dan 600 mg/kg bb juga tidak menunjukkan perbedaan yang signifikan dengan kelompok metformin pada hari ke-5 sampai hari ke-15. Hasil analisis statistik penurunan KGD juga menunjukkan perbedaan tidak yang signifikan pada hari ke-5 sampai dengan hari ke-15. Berdasarkan hasil di atas dapat disimpulkan bahwa kelompok yang diberi EEDP memberikan efek penurunan KGD tikus yang sama dengan kelompok yang diberi metformin mulai dari hari ke-3 sampai hari ke-15. Nilai signifikan persentase penurunan KGD rata-rata antar kelompok dapat dilihat padaLampiran 21, halaman 94.

45

Gambar 4.2 Grafik hasil persentase penurunan KGD rata-rata antar kelompok tikus setelah diinduksi aloksan

-30% -20% -10% 0% 10% 20% 30% 40% 50% 60% 70% 80%

hari ke-3 hari ke-5 hari ke-7 hari ke-9 hari ke-11 hari ke-13 hari ke-15

P

e

rs

e

n

ta

se

P

e

n

u

ru

n

a

n

K

G

D

(

%)

Waktu (hari)

46

perlakuan juga dilakukan perhitungan delta (selisih) KGD setelah diinduksi dikurangi dengann KGD awal, kemudian dianalisis secara statistik menggunakan ANOVA lalu dilanjutkan uji Post Hoc Tukey HSD untuk melihat perbedaan nyataantar perlakuaan. Hasil delta (selisih) KGD rata-rata tikus tikus setelah diinduksi aloksandapat dilihat pada Tabel 4.8 dan Gambar 4.3.

Tabel 4.8 Hasil selisih (delta) KGD rata-rata tikus setelah diinduksi aloksan

Kel

Δ (Induksi

-awal)

KGD setelah perlakuan (mg/dL) ± SEM Δ(hari3 -awal) Δ(hari 6-awal Δ(hari 7-awal Δ(hari 9-awal Δ(hari 11-awal Δ(hari 13-awal Δ(hari 15-awal I

256,2 352,6 262,4 267,8 250 243,4 203,4 179

± ± ± ± ± ± ± ±

27,95 41,15 42,02 17,05 43,79 39,87 33,46 51,05 II

299,8 245,8 190,0 107,2 42 15,4 -7,4 -12,6

± ± ± ± ± ± ± ±

29,80 27,63 30,27 45,70 11,82 16,09 4,76 27,04

III

311,8 252,2 210,4 141,0 62,2 48,6 30 19

± ± ± ± ± ± ± ±

32,56 24,92 39,42 26,13 15,05 12,19 3,89 28,38 IV

297,6 258,8 198,0 67,6 51,6 48 28,8 9,8

± ± ± ± ± ± ± ±

30,19 41,93 24,59 11,45 7,60 9,14 3,63 33,75

V

432,2 337,4 264,8 212,4 33,2 18 0,2 - 6,8

± ± ± ± ± ± ± ±

21,91 21,16 7,00 38,83 8,36 3,84 5,27 22,32 Keterangan :

I : Kontrol Na-CMC 0,5% II : EEDP 200 mg /kg bb III : EEDP 400 mg /kg bb IV : EEDP 600 mg /kg bb V : Metformin 45 mg /kg bb

47

Gambar 4.3 Grafik hasil selisih (delta) KGD rata-rata tikus setelah diinduksi aloksan

-100 0 100 200 300 400 500

Δ (Induksi-awal) Δ (hari 3-awal) Δ (hari 5-awal) Δ (hari 7-awal) Δ (hari 9-awal) Δ (hari 11-awal) Δ (hari 13-awal) Δ (hari 15-awal)

K

G

D (

m

g/

d

L)

Waktu (hari)

48

dengan KGD awal pada kelompok tikus yang diberi suspensi Na-CMC 0,5%menunjukkan KGD yang tinggi sampai hari ke-15 dibandingkan kelompok yang diberi EEDP dan metformin. Hasil analisa statistik selisih (delta) KGD tikus pada kelompok 200 mg/kg bb, dan 400 mg/kg bb menunjukkan perbedaan yang signifikan dibandingkan selisih (delta) KGD tikus pada kelompok diberi Na-CMC pada hari ke- 7, p = 0,011 dan p =0,011. Pada hari ke-9, seluruh tikus yang diberi EEDP 200 mg/kg bb, 400 mg/kg bb, 600 mg/kg bb dan metformin 45 mg/kg bb dengan nilai signifikan ketiganya 0,000 menunjukkan perbedaan selisih (delta) KGD yang signifikan dibandingkan tikus pada kelompok yang diberi Na-CMC 0,5% dosis1 % bb. Hasil analisa statistik menunjukkan perbedaan selisih (delta) KGD yang signifikan mulai dari hari ke- 7 sampai hari ke-15 pada semua tikus yang diberi EEDP dan metformindibanding tikus pada kelompok yang hanya diberi Na-CMC.

Pada hari ke-15, EEDP dosis 200 mg/kg bb, 400 mg/kg bb dan 600 mg/kg bb menunjukkanpenurunan yaitu -12,6% , 19% dan 9,8%. Hasil analisis statistik persentasepenurunan KGDpada hari ke-15,EEDP dosis 200 mg/kg bb, 400 mg/kg bb dan 600 mg/kg bb dengan nilai signifikan ketiganya 0,000menunjukkan perbedaan signifikan dibandingkan dengan kelompok kontroldibandingkan dengan hewan kelompok kontrol yang diberi Na-CMC 0,5%. Hal ini menyatakan bahwa pemberian EEDP dosis 200 mg/kg bb, 400 mg/kg bb dan 600 mg/kg bbmempunyai efek dapat menurunkan KGD tikus yang diinduksi aloksan.

Berdasarkan perhitungan selisih (delta) KGD, EEDP dosis 200 mg/kg bb menunjukkan penurunan KGD yang lebih tinggi dibandingkan dengan kelompok

49

yang diberi EEDP 400 mg/kg bb dan 600 mg/kg bb. Hasil analisa statistik dengan nilai signifikanberturut-turut 0,102; 0,405; dan 0,037 menunjukkan tidak adanya perbedaan yang signifikanselisih (delta) KGD tikus pada kelompok yang diberi EDDP 200 mg/kg bb, 400 mg/kg bb dan 600 mg/kg bb. Peningkatan pemberian dosis EEDP belum dapat menunjukkan peningkatann efek penurunan KGD tikus yang diinduksi aloksan. Peningkatan dosis obat seharusnya akan meningkatkan respon sebanding dengan dosis yang ditingkatkan. Namun, peningkatan dosis menyebabkan menurunnya peningkatan respon. Hal ini terjadi karena sudah tercapainya dosis obat yang tidak dapat meningkatkan respon (Zastrow, 2001).

Grafik 4.3 menunjukkan pada hari ke-15, selisih (delta) KGD tidak terlihat pada kelompok yang diberi EEDP dosis 200 mg/kg bb, 600 mg/kg bb dan metformin dosis 45 mg/kg bb. Pada hari ke-15, Grafik 3.3 hanya menunjukkan selisih (delta) KGD pada kelompok yang diberi Na-CMC dan EEDP 400 mg/kg bb. Hasil analisa statistik dengan nilai signifikan 0,102; 0,405; dan 0,037 menunjukkan tidak terdapat perbedaan yang signifikan di antara kelompok yang diberi EEDP 200, 400 dan 600 mg/kg bb. Hal ini menunjukkan bahwa pemberian EEDP 200 mg/kg bb, 400 mg/kg bb dan 600 mg/kg bbpada tikus yang diinduksi aloksan memberikan efek penurunan KGD seperti ditunjukkan pada tikus kelompok yang diberi metformin dosis 45 mg/kg bb.Nilai signifikan hasil selisih (delta) KGD rata-rata tikus dapat dilihat padaLampiran 22, halaman 95.

Daun pepaya mengandung alkaloid flavonoid, glikosida, komponen phenol, saponin, tanin dan steroid/triterpenoid (Patil, et al., 2013 ; Vuong, et al., 2013). Analisis fitokimia ekstrak etanol daun pepaya menunjukkan adanya alkaloid, glikosida, flavonoid, saponin, tanin, dan triterpenoid/steroid.Aloksan

xi

3.3.7 Pereaksi Asam Sulfat 2 N ... 20

3.3.8 Pereaksi Liebermann-Burchard ... 20

3.3.9 Larutan Kloralhidrat ... 20

3.4 Pemeriksaan Karakteristik Simplisia ... 20

3.4.1 Pemeriksaan Makroskopik ... 21

3.4.2 Pemeriksaan Mikroskopik ... 21

3.4.3 Penetapan Kadar Air ... 21

3.4.4 Penetapan Kadar Sari Larut Dalam Air ... 22

3.4.5 Penetapan Kadar Sari Larut Dalam Etanol ... 22

3.4.6 Penetapan Kadar Abu Total ... 23

3.4.7 Penetapan Kadar Abu Tidak Larut Dalam Asam .. 23

3.5 Skrining Fitokimia ... 23

3.5.1 Pemeriksaan Glikosida ... 23

3.5.2 Pemeriksaan Flavonoid ... 24

3.5.3 Pemeriksaan Alkaloid ... 24

3.5.4 Pemeriksaan Saponin ... 25

3.5.5 Pemeriksaan Tanin ... 25

3.5.6 Pemeriksaan Steroid/Triterpenoid ... 25

3.6 Penyiapan Hewan Percobaan ... 25

3.7 Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Pepaya (EEDP) ... 26

3.8 Pengujian Efek Penurunan Kadar Glukosa Darah ... 26

3.8.1 Pembuatan Suspensi Na-CMC 0,5% ... 26

3.8.2 Pembuatan Suspensi Metformin ... 27

xii

3.8.4 Pembuatan Suspensi Ekstrak Etanol Daun

Pepaya (EEDP) ... 27

3.8.5 Pembuatan Larutan Aloksan ... 28

3.8.6 Penggunaan blood gluco test meter GlucoDrTM .. 28

3.8.7 Pengukuran Kadar Glukosa Darah (KGD) ... 28

3.8.8 Pengujian Aktivitas Antidiabetes EEDP dengan Metode Toleransi Glukosa ... 29

3.8.9 Pengujian Aktivitas Antidiabetes EEDP dengan Metode Induksi Aloksan ... 29

3.9 Analisis Data ... 30

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ... 31

4.1 Identifikasi Sampel ... 31

4.2 Karakteristik Simplisia ... 31

4.3 Ekstraksi ... 33

4.4 Skrining Fitokimia ... 33

4.5 Pengujian Aktivitas Antidiabetes EEDP ... 34

4.5.1 Pengujian Aktivitas Antidiabetes dengan Metode Uji Tolerasi Glukosa ... 35

4.5.2 Pengujian Aktivitas Antidiabetes dengan Metode Induksi Aloksan ... 37

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ... 51

5.1 Kesimpulan ... 51

5.2 Saran ... 51

DAFTAR PUSTAKA ... 52

xiii

DAFTAR TABEL

Tabel Halaman

2.1 Kriteria diagnosis Diabetes mellitus (DM) ... 12 4.1 Hasil pemeriksaan karakterisasi serbuk simplisia

daun pepaya ... 32 4.2 Hasil skrining fitokimia serbuk simplisia daun pepaya ... 33 4.3 Hasil persentase penurunan KGD tikus pada uji tolenransi

glukosa ... 36 4.4 Hasil pengukuran KGD puasa tikus rata-rata sebelum

diinduksi aloksan dosis 150 mg/kg bb ... 38 4.5 Hasil pengukuran KGD tikus rata-rata setelah diinduksi

aloksan dosis 150 mg/kg bb ... 39 4.6 Hasil persentase penurunan KGD rata-rata tikus antar individu setelah diiduksi aloksan ... 40 4.7 Hasil persentase penurunan KGD rata-rata tikus antar

kelompok setelah diiduksi aloksan ... 43 4.8 Hasil persentase selisih (delta) KGD rata-rata tikus setelah

xiv

DAFTAR GAMBAR

Gambar Halaman

1.1 Kerangka Pikir Penelitian ... 5 4.9 Grafik hasil persentase penurunan KGD rata-rata tikus

antar individu setelah diberi perlakuan ... 42 4.10 Grafik hasil persentase penurunan KGD rata-rata tikus

antar kelompok setelah diberi perlakuan ... 45 4.11 Grafik hasil persentase selisih (delta) KGD rata-rata tikus

xv

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran Halaman

1. Identifikasi sampel ... 56 2. Rekomendasi persetujuan etik penelitian ... 57 3. Gambar tanaman pepaya dan daun pepaya... 58 4. Hasil pemeriksaan mikroskopik serbuk simplisia

daun pepaya ... 60 5. Bagan alur pembuatan simplisia, pemeriksaan karakteristik

dan skrining fitokimia daun pepaya... 61 6. Bagan alur pembuatan ekstrak etanol daun pepaya ... 62 7. Bagan alur pengukuran KGD tikus ... 63 8. Bagan alur pengujian efek penurunan KGD tikus yang

diinduksi aloksan ... 64 9. Gambar alat pengukur glukosa darah ... 65 10. Perhitungan hasil penetapan kadar air serbuk simplisia

daun pepaya ... 66 11. Perhitungan hasil penetapan kadar sari larut dalam air

serbuk simplisia daun pepaya ... 67 12. Perhitungan hasil penetapan kadar sari larut dalam etanol

serbuk simplisia daun pepaya ... 68 13. Perhitungan hasil penetapan kadar abu total serbuk

simplisia daun pepaya ... 69 14. Perhitungan hasil penetapan kadar abu tidak larut asam

serbuk simplisia daun pepaya ... 70 15. Perhitungan dosis dan pembuatan bahan uji ... 71 16. Data pengukuran hasil pengukuran KGD tikus metode

xvi

17. Data persen penurunan KGD tikus perbandingan antar individu metode induksi aloksan ... 79 18. Data persen penurunan KGD tikus perbandingan antar

kelompok metode induksi aloksan ... 84 19. Data hasil selisih (delta) KGD tikus penurunan metode induksi aloksan ... 88 20. Signifikansi persentase penurunan KGD rata-rata antar

individu tikus yang diinduksi aloksan ... 93 21. Signifikansi persentase penurunan KGD rata-rata antar

kelompok tikus yang diinduksi aloksan... 94 22. Signifikansi hasil selisih (delta) KGD rata-rata tikus yang