dalam oven bersuhu 105-110°C, sedangkan untuk proksimat dari daging ikan mengikuti metode Folch Takeuchi 1988.
3.7 Analisis Ekspresi Gen IGF-I dan GHR-1
Analisis ekspresi gen IGF-I dan GHR-1 dilakukan untuk mendapatkan informasi tentang ekspresi gen IGF-I dan GHR-1 akibat introduksi dari rGH
eksogen dengan cara mengambil sampel otak dan hati ikan gurame dari masing- masing perlakuan dosis rGH terbaik dan kontrol. Pengambilan sampel dilakukan
pada akhir perlakuan, yakni setelah pemberian pakan rElGH diberhentikan selama 4 minggu, selanjutnya ikan dipindahkan ke dalam akuarium. Pemberian pakan
yang mengandung rElGH, dan pakan kontrol dilakukan setelah ikan dipuasakan selama sehari untuk mengosongkan isi lambung. Jaringan hati dan otak diambil
pada jam ke-24 setelah perlakuan. RNA total diekstraksi menggunakan isogen Nippon Gen, Japan sesuai
prosedur dalam manual. Jaringan tersebut dimasukkan ke dalam masing-masing microtube yang berisi larutan isogen 200 µL, kemudian dihancurkan dengan
menggunakan penggerus yang telah disterilkan dengan dietylpyrocarbonate DEPC 0,1. Ke dalam microtube ditambahkan larutan isogen hingga mencapai
volume akhir 800 µL dan diinkubasi selama 5 menit pada suhu ruang sampai semua jaringan terlisis sempurna. Setelah itu, kloroform ditambahkan sebanyak
200 µL, kemudian disentrifugasi selama 5 menit dengan kecepatan 12.000 rpm pada suhu ruang. Supernatan yang terbentuk dipindahkan ke dalam microtube
baru yang telah berisi 400 µL larutan isopropanol, kemudian disentrifugasi selama 15 menit dengan kecepatan 12.000 rpm pada suhu 4°C. Supernatan pada
microtube dibuang, dan pelet RNA pada dasar microtube dilarutkan dengan cara menambahkan 1 mL etanol 70 dingin, kemudian disentrifugasi selama 15 menit
dengan kecepatan 12.000 rpm. RNA dikeringkan dengan cara membuang larutan yang terdapat pada microtube. Setelah kering sempurna, RNA dilarutkan dengan
30 µL DEPC 0,1. Konsentrasi hasil isolasi RNA total diukur menggunakan alat pengukur konsentrasi RNADNA GeneQuant. Absorbansi diukur dengan
panjang gelombang 260, dan 280 nm. Sintesis cDNA IGF-1 dan GHR-1 dilakukan menggunakan kit Ready-to-
Go You-Prime First Strand Beads, FSRMB GE Healthcare. Konsentrasi RNA
Kategori