22 f. Tidak ada riwayat keluarga dengan kanker payudara dan kanker
ovarium g. Tidak ada riwayat pemakain obat- obat hormonal dan kontrasepsi
h. Tidak pernah mendapat kemoterapi i. Bersedia mengikuti penelitian dengan menandatangani surat
persetujuan penelitian
3.5.1. KRITERIA EKSKLUSI 3.5.2.1. Kasus
a. Pasien dengan hasil histopatologi yang bukan kanker ovarium
3.6. PROSEDUR KERJA
Penderita yang memenuhi kriteria penerimaan diberi penjelasan tentang penelitian yang akan dilakukan dan akan menandatangani lembar
persetujuan
3.6.1.Bahan Penelitian
Bahan yang diperlukan dalam penelitian ini adalahserum yang terdiri dari larutan Assay Buffer, larutan NADPH, larutan Glutation reduktase,
larutan GSH.
3.6.2.Alat Penelitian
Alat yang digunakan adalah tensimeter, stetoskop, disposable syringe 3cc, tabung sampel darah, Mikro pipet, well plate, lemari
pendingin, spektrofotometri, sentrifuge.
Universitas Sumatera Utara
23
3.6.3.Cara Kerja
Darah diambil melalui vena kubiti sebanyak 3 ml dengan zat pembekuandarah dan disentrifuge pada tekanan 4500 rpm selama 10
menit, untukmemisahkan serum darah pasien kemudian serum dimasukkan ke dalameppendorf. Penelitiandilakukan di Laboratorium
Terpadu FK USU Medan. Lalu dilakukan pemeriksaan kadar GPx dengan metode pemeriksaan enzimatik. Dengan cara :
1. Pipet 5-10 µl GPx positip kontrol kedalam well kosong dan tambahkan Assay Buffer sampai dapat volume akhir 50 µl
2. Pipet 50 µl Assay Buffer ke dalam well kosong ,ini adalah sebagai reagen kontrol RC.
3. Pipet 2-50 µl sampel ke dalam well kosong dan tambahkan Assay Buffer sampai didapat volume akhir 50 µl.
4. Reaction mix : tiap well siapkan 40 µl reaction mix 33 µl Assay Buffer
3 µl larutan 40 nM NADPH 2 µl larutan GR Glutation reductase
2 µl larutan GSH Glutation 5. Tambahkan 40 µl reaction mix pada tiap sampel, kontrol positif
dan kontrol reagen campur, inkubasi 15 menit di dalam
spektrofotometri merek thermo Scientific buatan Amerika
6. Tambahkan 10 µl Cumene Hydroperoksidase campur.
Universitas Sumatera Utara
24 7. Ukur panjang gelombang 340 nm pada waktu pertama T1
untuk mendapatkan absorbansi pertama A1. 8. Inkubasi pada suhu 25
c selama 5 menit di dalam spektrofotometri, ukur lagi pada waktu kedua T2 untuk
mendapatkan absorbansi kedua A2 hindari cahaya.
Perhitungan :
A. A
340 nm
= sampel A1- sampel A2 – RC A1- RC A2
Gunakan standard curve untuk mencari jumlah NADPH yang diperoleh
B. Dengan memasukkan nilai A
340 nm
ke dalam persamaan garis regresi yang diperoleh dari standard curve
GPx activity = B x sampel dilusi = nmolminml = mUml T2-T1x V
B = jumlah NADPH yang menurun antara T1 dan T2 nmol T1 = waktu pertama min
T2 = waktu kedua min V = volume sampel yang ditambahkan ke dalam well ml
Universitas Sumatera Utara
25
3.7. DEFINISI OPERASIONAL - Kanker ovarium
