75 Lampiran 13. Prosedur Analisis Mikro ba
a. Populasi Bakteri Total Plate CountTPC
Analisis populasi bakteri dilakukan dengan metode TPC pada media PCA Plate Count Agar. Pembuaatan media PCA dengan melarutkan 15 agar, 1 g
dextrosa, 5 g tripton, 1.5 g yeast ke dalam 1000 ml aquadest. Larutan tersebut dipanaskan sambil diaduk dengan magnetic stirer sampai mendidih dan homogen.
Selanjutnya larutan disterilisasi dalam autoclave pada suhu 121
o
C selama 15 menit. Setelah agak dingin media dituang ke dalam cawan petri steril ± 15-20 ml
dan dinginkan. Setelah padat cawan petri ditutup pada posisi dibalik. Metode TPC dilakukan dengan melarutkan 1 g sampel dengan 9 ml NaCl
faali 0.9 ke dalam tabung reaksi. Larutan ini mempunyai pengenceran 10
-1
dan pengenceran dilakukan sampai 10
-6
. Setiap kali pengenceran larutan diaduk dengan vortek. Selanjutnya 0.1 ml larutan dari pengenceran 10
-4
sampai 10
-6
dituang ke media PCA menggunakan ependorf dan stip steril. Selanjutnya larutan disebar dengan sprider yang telah dicelup ke dalam alkohol dan dipanaskan.
Kemudian diinkubasi pada suhu ruang selama 48 jam. Koloni yang dihitung hanya yang berjumlah 30 – 300 koloni.
b. Isolasi Bakteri
Pada penelitian ini isolasi mikroba dilakukan dengan metode cawan tuanggores yaitu dengan menginokulasi sampel pada media padat NA Nutrient
Agar yang telah ditambahkan zat antibiotik nistatyn berfungsi menghambat
pertumbuhan kapang dan khamir. Inokulasi dilakukan dengan cara: melarutkan 1 gram sampel dengan 10 mL aquadest steril kemudian dishaker selama 30 menit.
Sebanyak 100 µl supernatan yang terbentuk dituang ke permukaan media padat
76 NA. Masing-masing cawan petri diinkubasi dengan posisi terbalik pada suhu
kamar selama 24-48 jam. Bakteri yang tumbuh dipindahkan ke media padat NA lain untuk memperoleh biakan murni. Isolat yang tumbuh dipisahkan berdasarkan
perbedaan bentuk dan morfologinya ke media padat NA baru yang tidak mengandung nistatyn untuk memperoleh koloni tunggal single coloni. Isolat-
isolat tersebut dipindahkan menggunakan jarum ose yang telah dipanaskan dengan menggoreskannya pada permukaan media. Koloni yang tumbuh diinkubasi
selama 3 hari pada suhu ruang. Hal tersebut dilakukan berulang-ulang sampai diperoleh isolat murni dan dipindahkan ke media padat NA miring. Isolat
diinkubasi selama 3 hari pada suhu ruang selanjutnya disimpan di lemari pendingin.
c. Uji Kemampuan Bakteri Mendegradasi Profenofos
Kategori