Sampel Alat Bahan Sampel, alat dan bahan

3.3 Pembuatan Media

3.3.1 Pembuatan Media NaCl 9

Komposisi: Natrium Klorida 0,9 g Air Suling ad 100 ml Cara pembuatan: Natrium klorida ditimbang sebanyak 0,9 g lalu dilarutkan dalam air suling steril sedikit demi sedikit dalam erlenmeyer 100 ml sampai larut sempurna, kemudian disterilkan di autoklaf pada suhu 121 o C selama 15 menit Sonnenwirth, 1980.

3.3.2 Pembuatan Media PCA

Komposisi: PCA 2,35 g Air suling ad 100 ml Timbang PCA sebanyak 2,35 g dan dimasukkan kedalam erlenmeyer 100 ml. dilarutkan dengan 100 ml air suling, lalu dihomogenkan. Dipanakan hingga larutan mendidih dan terlarut sempurna. Ditutup dengan aluminium foil lalu disterilkan dengan autoklaf pada suhu 121 o C selama 20 menit.

3.4 Prosedur

3.4.1 Sterilisasi Alat

Alat-alat yang digunakan disterilkan terlebih dahulu sebelum dipakai.Alat-alat gelas disterilkan di dalam oven pada suhu 170 selama 1 jam. Media disterilkan di autoklaf pada suhu 121 selama 15 menit Lay, 1992.

3.4.2 Pengenceran

Disetrilkan seluruh alat dan bahan yang digunakan. Dilakukan pengenceran 10 -1 menggunakan media pengencer NaCl. Diisi tabung reaksi 10 -1 menggunakan media NaCl sebanyak 9 ml tutup menggunakan pendopol. Disterilkan media tersebut didalam autoklaf selama 15 menit pada suhu 121 o C diamkan sampai dingin kemudian dipipet 1 ml sampel air sungai belawan masukkan kedalam pengenceran 10 -1 lalu homogenkan. Kemudian pipet 0,1 ml dari pengenceran 10 -1 masukkan kedalam 10 -1 lalu dihomogenkan.

3.4.3 Pengujian sampel

Persiapan dan homogenisasi dilakukan dan dibuat tingkat pengenceran menggunakan larutan pengencer NaCl. Sebanyak 1 ml dipipet dari pengenceran 10 -1 ke dalam cawan petri steril kemudian tuangkan 15 ml media PCA yang masih cair dengan suhu 45±1 ke dalam masing-masing cawan petri. Goyangkan cawan petri dengan hati-hati putar dan goyang ke depan, ke belakang, ke kanan dan ke kiri sehingga contoh pembenihan tercampur merata dan memadat. Biarkan sampai campuran dalam cawan petri memadat. Masukkan semua cawan petri dengan posisi terbalik ke dalam inkubator pada suhu 37 selama 24 jam. Jika memungkinkan inkubasi dilakukan dalam udara yang diperkaya dengan CO 2 dalam suatu jar anaerob. Catat pertumbuhan koloni pada setiap cawan petri yang mengandung 25 koloni sampai dengan 250 koloni setelah 24 jam.