Malondialdehid MDA Sebagai Produk Peroksida Lipid Pemeriksaan Malondialdehid MDA plasma

25 Conjugated atau polymerazed MDA dapat terhidrolisa dalam medium asam dan labil dalam pemanasan. Metode TBARS menggunakan teknik kolorimetri dengan melihat perubahan warna, tetapi mempunyai hasil yang tidak spesifik ,oleh karena juga terukur aldehid yang lain. Hasil TBA –MDA mempunyai hasil yang lebih baik dengan menggunakan teknik fluorometri. Pemeriksaan yang lebih spesifik menggunakan metode high performance liquid chromatography HPLC spektrofotometri, dan memenuhi kriteria akurasi, spesifisitas dan sensitivitas dan metode ini sebagai pilihan untuk evaluasi status stres oksidatif Sumber: Helliwell dan Gutteridge 1994 Gambar 2.4 reaksi malondialdehid dengan TBA Pengukuran MDA mudah dilakukan baik secara spektrofotometrik atau fluorometrik. Uji TBARs thiobarbituric acid reactive substances, merupakan salah satu uji yang paling lama dan paling sering digunakan untuk mengukur proses peroksidasi lipid asam lemak tidak jenuh. Uji TBARs dapat menilai stres oksidatif berdasarkan reaksi asam tiobarbiturat dengan malondialdehid MDA. Supernatan plasma direaksikan dengan asam tiobarbiturat menghasilkan kromofor berwarna merah muda yang dibaca pada panjang gelombang 532nm. Nilai normal MDA tergantung metode yang digunakan , lebih dari 4 μmoll dengan mengukur TBAR dengan metode kolorimetri, kadar normal hingga 2,5 μmoll dengan metode fluorometri, dan kadar 0,60 - 1μmoll dengan metode HPLC highperformance liquid chromatography 26 dan metode ini yang saat ini menjadi pilihan sebagai petanda biologis stres oksidatif. 19 Dengan metode spektrofotometri dapat ditentukan kadar MDA plasma yang menunjukkan secara spesifik kadar MDA total dan memberikan hasil yang serupa dengan kadar MDA yang didapat menggunakan metode HPLC, dengan koofisien variasi 1,2 – 3,4 . Kadar MDA dengan metode spektot rofotometri 1,04 ± 0,43 μmoll. 18 27

2.2. Kerangka Teori

Uncoupling mitokondria Asam lemak bebas FFA berkonjugasi dengan ROS Obesitas Protein kinase C Penyimpanan lemak pada jar. Adiposa berlebih Pembentukan ROS CO 2 - , H2O2 O 2 - H 2 O - OH ↑ ROS O 2 - Asam lemak bebas FFA berlebih O 2 ↑ Glukosa darah ↑ ROS hidroxide ↑ NADPH Oksidasi ↓ enzim antioksidan ↓ sintesis Glutation ↑ ROS ↓ enzim AOX Otot skelet endothelium jaringan hati Jar. adiposa Stres Oksidatif Jaringan adiposa berlebih inflamasi Infiltrasi leukosit IL-6 ↑ TNFα ↑ CRP Myeloperoksidasi NADPH ↑ aktivitas NADPH ↓ reseptor insulin hiperglikemi Pembentukan ROS Chloramin, reaktif aldehid, tyrosin peroksida Pembentukan ROS TBAR, Peroksida lipid, MDA 28

2.3. Kerangka Konsep

Keterangan : _______ : Variabel yang diteliti ----------- : Variabel perancu Sinar UV Merokok Stres Penyakit metabolik Olahraga Konsumsi makanan mengandung Lipid, protein, dan karbohidrat Berat badan berlebih oleh timbunan lemak Obesitas Overweight Peningkatan profil lipid Peroksida lipid meningkat Radikal bebas ROS Stres Oksidatif Kematian sel Peningkatan biomarker stres oksidatif Malondialdehid MDA Plasma meningkat Antioksidan ROS Sumber antioksidan: Suplemen Vit. C Vit. E Multivitamin dan mineral Buah dan sayuran hijau 29

2.4. Definisi Operasional

No Variabel Pengukur Alat Ukur Cara Pengukuran Skala Pengukuran 1. Indeks Masa Tubuh IMT, kriteria Asia Pasifik. Peneliti Timbangan badan dan meteren merk Seca dengan ketelitian 0,1 kg. Berat badan Kg dibagi dengan tinggi badan m 2 . Kriteria: normal 18,5-22,9 dan Obesitas 25. Kategorik 2. MDA plasma Peneliti Spektrofotometer Baca pada spektrofotometer dibagi dengan 153.000 Numerik