gas pada tabung durham, hasil menunjukkan positif + dan test dilanjutkan dengan test penegasan.
- Bila test negatif - berarti E. coli negatif - dan tidak perlu dilakukan test penegasan.
2. Test Penegasan Confirmative Test
Media yang digunakan adalah Brilliant Green Lactose Broth BGLB 2. Test ini untuk menegaskan hasil positif dari test perkiraan.
Cara pemeriksaan : 1. Dari tiap-tiap tabung presumptive yang positif, dipindahkan 1-2 ose ke
dalam tabung confirmative yang berisi 10 ml BGLB 2. 2. Satu seri tabung BGLB 2 diinkubasikan pada suhu 35-37
C selama 24- 48 jam untuk memastikan adanya E. coli dan satu seri yang lain
diinkubasikan pada suhu 44 C selama 24 jam untuk memastikan adanya
coliform tinja. 3. Pembacaan dilakukan setelah 24-48 jam dengan melihat jumlah tabung
BGLB 2 yang menunjukkan positif gas.
Pembacaan Hasil Pemeriksaan Laboratorium
Pembacaan hasil dari test penegasan dilakukan dengan menghitung jumlah tabung yang menunjukkan adanya gas baik pada seri tabung yang diinkubasi pada
suhu 37 C maupun pada seri tabung yang diinkubasi pada suhu 44
C. Angka yang diperoleh dicocokkan dengan tabel Most Probable Number
MPN atau Angka Paling Mungkin APM, maka akan diperoleh indeks MPN
Universitas Sumatera Utara
Coliformuntuk tabung yang diinkubasikan pada suhu 37 C dan indeks MPN
Escherichia coli untuk tabung yang diinkubasikan pada suhu 44 C.
Pemeriksaan lanjutan
Dengan kawat ose steril diambil bahan secara aseptis dari biakan media BGLB, kemudian ditanamkan dengan cara zigzag pada permukaan media endo agar,
lalu dimasukkan ke dalam inkubator pada suhu 37 C selama 48 jam. Setelah masa
inkubasi selesai, diamati pertumbuhan koloni ini. Jika koloni berbentuk bulat, licin berwarna kilap logam, selanjutnya dilakukan pemeriksaan identifikasi E. coli dengan
memakai pewarnaan gram.
Identifikasi Dengan Pewarnaan Gram
1. Koloni dari medio endo agar diambil dengan kawat ose steril lalu diletakkan pada object glass yang telah ditetesi dengan aquadest. Lalu
dikeringkan dengan nyala api bunsen perlahan-lahan.
2. Kemudian ditetesi dengan larutan gentian violet 5 selama 5 menit, lalu
cuci dengan mengalirkan air diatasnya.
3. Selanjutnya ditetesi dengan larutan lugol 1 selama 1 menit. Kemudian
larutan lugol dicuci dengan mengalirkan air diatasnya.
4. Langkah selanjutnya adalh menetesi alkohol 99 hingga tidak berwarna
lagi bersih.
5. Selanjutnya object glass ditetesi dengan larutan karbon fuchsin selama 3
menit. 6. Kemudian dibilas dengan air dan dikeringkan dengan kertas saring.
7. Fiksasi 3 kali.
