6. Jarum dilepaskan dari semprit, piston ditempatkan pada bagian tengah semprit.
7. Jarum kembali diletakkan pada semprit dan aspirat yang ada di dalam ujung jarum disemprotditeteskan ke atas kaca objek dengan menekan
piston.
3.7.1.2. Prosedur Pewarnaan Sitologi dengan Diff-Quik Stain Set
1. Celupkan sediaan ke dalam larutan fiksatif selama 5 detik 5 kali celup
masing-masing satu detik. Kelebihannya biarkan mengalir. 2.
Celupkan sediaan ke dalam larutan I selama 5 detik 5 kali celup masing- masing satu detik. Kelebihannya biarkan mengalir.
3. Celupkan sediaan ke dalam larutan II selama 5 detik 5 kali celup masing-
masing satu detik. Kelebihannya biarkan mengalir. 4.
Cuci sediaan dengan air destilasi atau air diionisasi. 5.
Keringkan dan siap untuk dibaca.
3.7.2. Prosedur Kerja Imunositokimia Mycobacterium Tuberculosis Antibody
p ab905 pada Sediaan Hapus
1. Buat sediaan hapus, fiksasi dalam metanol absolut. 2. Cuci dalam air mengalir selama 5 menit.
Universitas Sumatera Utara
3. Bloking endogen peroksida metanol + H2O2 selama 30 menit. 4. Cuci dalam air mengalir selama 5 menit.
5. Pretreatment dengan Working Citrate Solution pada microwave: -
Cook I, power level high selama 5 menit -
Cook II, power level warm selama 5 menit Dinginkan selama lebih kurang 45 menit
6. Cuci dalam PBS pH 7,4 sebanyak 3x, masing-masing selama 5 menit. 7. Tandai populasi sel dengan Pap pen.
8. Teteskan antibodi primer, diamkan selama 1 jam. 9. Cuci dengan PBS pH 7,4 selama 5 menit atau sampel bersih.
10. Teteskan Envision plus, diamkan selama 30 - 45 menit. 11. Cuci dengan PBS pH 7,4 + Twin 20 selama 5 menit atau sampai bersih.
12. Teteskan kromogen DAB, diamkan selama 10 menit. 13. Cuci dengan air mengalir selama 5 menit.
14. Counterstain dengan Hematoxylin Mayers selama 5–10 menit. 15. Cuci dengan air mengalir selama 5 menit.
16. Masukkan ke dalam larutan litium karbonat jenih 5 dalam akuades. 17. Birukan dalam air mengalir.
18. Dehidrasi alkohol 80, alkohol 96, alkohol absolut masing-masing selama 5 menit.
19. Clearing xylol I, xylol II, xylol III masing-masing selama 5 menit.
Universitas Sumatera Utara
20. Mounting, tutup dengan entelan. 21. Sediaan siap untuk dibaca.
3.8. Alat-alat Penelitian dan Bahan Penelitian 3.8.1. Alat-alat Penelitian
Alat- alat yang diperlukan untuk penelitian ini adalah staining jar, rak object glass, rak inkubasi, pap pen, pipet mikro, timbangan bahan kimia, kertas saring,
pengukur waktu, gelas Erlenmeyer, gelas beker, tabung sentrifuge 15 ml, microwave, spin master, object glass, kaca penutup, entelan dan mikroskop
cahaya.
3.8.2. Bahan Penelitian
Antibodi primer : rabbit polyclonal to Mycobacterium tuberculosis antibody
ab905, Abcam, dengan pengenceran 200x.
Envision + Dual Link system-HRP DAB+ 284 dari DakoCytomation, terdiri dari
- 1 x 15 mL : Dual Endogenous Enzyme Block
- 1 x 15 mL : Labelled Polymer-HRP
Universitas Sumatera Utara
