Daya antibakteri minyak atsiri daun kemangi (Ocimum basilicum L.) sebagai zat aktif dan sediaan gel terhadap Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 dan Bacillus Subtilis ATCC 6633.

i

DAYA ANTIBAKTERI MINYAK ATSIRI DAUN KEMANGI (Ocimum basilicum L.) SEBAGAI ZAT AKTIF DAN SEDIAAN GEL TERHADAP

Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 DAN Bacillus subtilis ATCC 6633

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S. Farm.)

Program Studi Farmasi

Oleh:

Marsela Lotjita Parahita

NIM : 098114062

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA

ii

DAYA ANTIBAKTERI MINYAK ATSIRI DAUN KEMANGI (Ocimum basilicum L.) SEBAGAI ZAT AKTIF DAN SEDIAAN GEL TERHADAP

Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 DAN Bacillus subtilis ATCC 6633

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S. Farm.)

Program Studi Farmasi

Oleh:

Marsela Lotjita Parahita

NIM : 098114062

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA

iv

v

---- MAHATMA GANDHI----

This thesis IS Dedicated to:

Jesus christ

Mother mary

My late dad: IGN. SUKASWORO

My wonderful mom: C. SARTINI]

My sisters: ima, ika, dita

And my almamater

viii PRAKATA

Puji dan syukur penulis haturkan kepada Tuhan yang Maha Esa atas berkat

dan rahmat-Nya, sehingga penulis dapat menyelesaikan laporan penelitian yang

berjudul “Daya Antibakteri Minyak Atsiri Daun Kemangi (Ocimum basilicum L.) Sebagai Zat Aktif dan Sediaan Gel Terhadap Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 dan Bacillus subtilis ATCC 6633” ini untuk memenuhi salah satu syarat

untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S. Farm) di Fakultas Farmasi,

Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.

Selesainya penulisan laporan penelitian ini, tidak terlepas dari bantuan

baik berupa bimbingan, dukungan, sarana, maupun finansial dari berbagai pihak.

Oleh karena itu, dengan rendah hati penulis ingin mengucapkan terima kasih

kepada:

1. Ipang Djunarko, M.Sc., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas

Sanata Dharma Yogyakarta.

2. C. M. Ratna Rini Nastiti, M.Pharm., Apt. selaku Dosen Pembimbing yang

telah memberikan pengarahan, masukan, kritik, saran dan semangat selama

persiapan, penelitian, sampai penyusunan skripsi ini.

3. Rini Dwiastuti, M.Sc., Apt., selaku Dosen Penguji yang telah memberikan

waktu, kesempatan, masukan dan bimbingan selama kuliah maupun selama

ix

4. Yohanes Dwiatmaka, M.Si., selaku Dosen Penguji yang telah memberikan

waktu, kesempatan, masukan dan bimbingan selama kuliah maupun selama

penyelesaian skripsi ini.

5. Seluruh dosen Fakultas Farmasi, Universitas Sanata Dharma, yang telah

memberikan ilmu selama penulis menempuh pendidikan di Fakultas Farmasi.

6. Seluruh staf laboratorium, staf kebersihan, dan staf keamanan Fakultas

Farmasi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Terutama Pak Mukminin,

Pak Wagiran, Mas Sigit, Pak Musrifin, Mas Agung, Pak Parlan, Pak Yuwono

yang telah banyak membantu kelancaran penulis dalam melakukan penelitian.

7. Agustina Prita Pangudyaswara, Fitri Apriliyani Tiran, dan Putu Eny Guna

Pramita, selaku teman seperjuangan skripsi atas kerjasama, semangat dan

masukan yang diberikan.

8. Teman-teman „Gosipol‟, Agustina Erni Purnamasari, Christina Yessy Jessica, F. Eky Suprabawati, Katherine Jessica Ariani, Bernadhea Wikan Pangesti,

Diah Intan Sari, Yenny atas persahabatan, semangat, dan kekompakan selama

4 tahun ini.

9. Teman-teman FKK B 2009, FSM B 2009, Kelompok praktikum C 2009, atas

kebersamaan, kerjasama dan kenangan selama di Fakutas Farmasi.

10.Semua pihak yang tidak dapat disebutkan satu per satu yang telah membantu

penulis dalam menyelesaikan pendidikan di perguruan tinggi ini.

Penulis menyadari bahwa masih banyak kekurangan dalam penyusunan

x

menuju perubahan yang lebih baik. Semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi

pembaca pada khususnya dan ilmu pengetahuan pada umumnya.

xi DAFTAR ISI

HALAMAN SAMPUL ... i

HALAMAN JUDUL ... ii

HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ... iii

HALAMAN PENGESAHAN ... iv

HALAMAN PERSEMBAHAN ... v

PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ... vi

LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI... vii

PRAKATA ... viii

DAFTAR ISI ... xi

DAFTAR TABEL ... xv

DAFTAR GAMBAR ... xvi

DAFTAR LAMPIRAN ... xvii

INTISARI ... xviii

ABSTRACT ... xix

BAB I PENGANTAR ... 1

A. Latar Belakang ... 1

B. Perumusan Masalah ... 4

C. Keaslian Penelitian ... 4

D. Manfaat Penelitian ... 5

1. Manfaat teoretis ... 5

2. Manfaat praktis ... 5

xii

BAB II PENELAAHAN PUSTAKA ... 6

A. Bau Kaki ... 6

B. Staphylococcus epidermidis ... 7

C. Bacillus subtilis ... 7

D. Uji Daya Antibakteri ... 8

E. Minyak Atsiri Daun Kemangi ... 9

F. Destilasi Minyak Atsiri ... 11

G. Gel ... 12

H. Landasan Teori ... 13

I. Hipotesis ... 15

BAB III METODOLOGI PENELITIAN ... 16

A. Jenis dan Rancangan Penelitian ... 16

B. Variabel dan Definisi Operasional ... 16

1. Variabel penelitian ... 16

2. Definisi operasional ... 16

C. Bahan Penelitian ... 17

D. Alat Penelitian ... 17

E. Tata Cara Penelitian ... 18

1. Identifikasi tanaman kemangi ... 18

2. Pengumpulan daun kemangi ... 18

3. Destilasi minyak atsiri daun kemangi ... 18

xiii

5. Identifikasi kualitatif minyak atsiri daun kemangi dengan metode

KLT ... 20

6. Penyiapan media uji ... 20

7. Uji daya antibakteri minyak atsiri daun kemangi dengan metode difusi sumuran... 20

8. Penentuan nilai KHM dan KBM dengan dilusi padat ... 22

9. Pembuatan gel anti bau kaki minyak atsiri daun kemangi ... 24

10.Uji sifat fisik sediaan gel anti bau kaki minyak atsiri daun kemangi ... 25

11.Uji daya antibakteri sediaan gel anti bau kaki minyak kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis dengan metode difusi sumuran ... 26

F. Analisis Data ... 26

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ... 28

A. Identifikasi Daun Kemangi ... 27

B. Penyiapan Bahan Daun Kemangi ... 27

C. Destilasi Minyak Atsiri Daun Kemangi ... 27

D. Karakterisasi Minyak Atsiri Daun Kemangi ... 29

E. Uji Daya Antibakteri Minyak Atsiri Daun Kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis ... 32

F. Penentuan nilai KHM dan KBM Minyak Atsiri Daun Kemangi . 38 G. Formulasi Sediaan Gel Anti Bau Kaki Minyak Atsiri Daun Kemangi ... 41

xiv

H. Uji Sifat Fisik Sediaan Gel Anti Bau Kaki ... 44

I. Uji daya antibakteri Sediaan Gel Anti Bau Kaki Minyak Atsiri Daun Kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis ... 47

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ... 50

A. Kesimpulan ... 50

B. Saran... 50

DAFTAR PUSTAKA ... 51

LAMPIRAN ... 54

xv

DAFTAR TABEL

Tabel I. Formula sediaan gel anti bau kaki minyak atsiri daun kemangi .... 25

Tabel II. Hasil uji � ± SD diameter zona hambat minyak atsiri daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis ... 33 Tabel III. Hasil uji distribusi normal data diameter zona daya hambat variasi

konsentrasi minyak atsiri daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis ... 36 Tabel IV . Hasil post hoc test diameter zona daya hambat variasi konsentrasi

minyak atsiri daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis 37 Tabel V. Hasil post hoc test diameter zona daya hambat variasi konsentrasi

minyak atsiri daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis 37 Tabel VI. Hasil uji KHM dan KBM minyak atsiri daun kemangi terhadap

Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis ... 38 Tabel VII. Data hasil pengukuran viskositas dan daya sebar ... 45

Tabel VIII. Hasil � ± SD pengukuran diameter zona hambat sediaan gel anti bau kaki terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis ... 46 Tabel IX. Hasil uji distribusi normal data diameter zona hambat gel minyak atsiri

daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis ... 47 Tabel X. Hasil post hoc test diameter zona hambat gel minyak atsiri daun

kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis ... 47 Tabel XI. Hasil post hoc test diameter zona daya hambat gel minyak atsiri daun

xvi

DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Morfologi tanaman kemangi ... 9

Gambar 2. Daun kemangi ... 27

Gambar 3. Minyak atsiri daun kemangi ... 28

Gambar 4. Profil kromatografi lapis tipis ... 31

Gambar 5. Grafik konsentrasi vs diameter zona hambat minyak atsiri daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis ... 34

xvii

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Pengesahan Surat Determinasi ... 54

Lampiran 2. Surat keterangan Staphylococcus epidermidis ... 55

Lampiran 3. Surat keterangan Bacillus subtilis ... 56

Lampiran 4. Data rendemen destilat minyak atsiri daun kemangi ... 57

Lampiran 5. Data karakterisasi minyak atsiri daun kemangi ... 57

Lampiran 6. Uji daya antibakteri minyak atsiri daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis ... 58

Lampiran 7. Uji daya antibakteri minyak atsiri daun kemangi terhadap Bacillus subtilis ... 59

Lampiran 8. Penentuan nilai KHM dan KBM Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis ... 60

Lampiran 9. Sediaan gel anti bau kaki minyak atsiri daun kemangi ... 63

Lampiran 10. Uji aktivitas antibakteri gel anti bau kaki minyak atsiri daun kemangi ... 64

Lampiran 11. Pengukuran pH sediaan gel anti bau kaki minyak atsiri daun kemangi ... 66

Lampiran 12. Pengukuran uji sifat fisik sediaan gel minyak atsiri daun kemangi ... 66

xviii INTISARI

Minyak kemangi (Ocimum basilicum L.) memiliki daya antibakteri terhadap bakteri penyebab bau pada kaki. Eugenol adalah senyawa di daun kemangi yang mempunyai aktivitas sebagai antibakteri. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui daya antibakteri minyak kemangi dan gel minyak kemangi dalam menghambat bakteri Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis.

Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental murni dengan rancangan penelitian acak lengkap pola searah. Tahapan penelitian meliputi uji daya antibakteri minyak atsiri daun kemangi terhadap beberapa variasi konsentrasi dengan difusi sumuran; dilanjutkan dengan penentuan nilai KHM dan KBM dengan dilusi padat, dan pengujian daya antibakteri gel minyak kemangi. Data yang diperoleh dianalisis menggunakan uji normalitas Shapiro Wilk, dilanjutkan dengan uji Kruskal-Wallis dan uji Wilcoxon menggunakan program R 2.14.1.

Berdasarkan hasil penelitian, minyak kemangi mempunyai kemampuan menghambat bakteri Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis. Nilai KHM dan KBM minyak atsiri daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis berturut-turut adalah 2% v/v dan 2.5% v/v, dan terhadap Bacillus subtilis, yaitu berturut-turut 2%v/v dan 2.5% v/v. Daya antibakteri gel minyak kemangi dan minyak kemangi 15% tidak berbeda bermakna.

Kata kunci: minyak kemangi, Staphylococcus epidermidis, Bacillus subtilis, gel, antibakteri

xix

ABSTRACT

Basil oil (Ocimum basilicum L.) has antibacterial power against odor-causing bacteria on the feet. Eugenol in basil leaves is compound that has an activity as an antibacterial antibacterial activity. The aim of this study was to determine the antibacterial gel basil oil and basil oil in inhibiting the bacteria

Staphylococcus epidermidis and Bacillus subtilis.

This study was an experimental study design which had one way complete random design. Research began with a study of antibacterial activity of essential oils of basil leaves on some variation of the concentration with diffusion wells; followed by determination of MIC and MBC values with solid dilution; gel of basil leave oils has also tested in terms of antibacterial activity against

Staphylococcus epidermidis and Bacillus subtilis. Data were analyzed using the Shapiro Wilk normality test, followed by Kruskal-Wallis test and Wilcoxon test by using R 2.14.1 program.

The research result of basil oil had the ability to inhibit the bacteria Staphylococcus epidermidis and Bacillus subtilis. MIC and MBC values of basil essential oils against Staphylococcus epidermidis that are 2% v/v and 2.5% v/v, and against Bacillus subtilis that are 2% v/v and 2.5% v/v. Antibacterial activity of gel basil oil and 15% basil oil was not significantly different.

Keywords: basil oil, Staphylococcus epidermidis, Bacillus subtilis, gel, antibacteria

1 BAB I PENGANTAR A. Latar Belakang

Indonesia memiliki iklim tropis yang panas dan lembab sepanjang tahun.

Keadaan yang seperti ini dapat menyebabkan timbulnya keringat yang berlebih,

dan menimbulkan bau tak sedap pada tubuh yang mempunyai banyak kelenjar

keringat. Keringat pada dasarnya tidak berbau dan mudah menguap, namun, di

daerah-daerah tertentu tidak selalu mudah menguap, seperti di ketiak dan kaki.

Hal ini dapat memicu pertumbuhan bakteri yang dapat menguraikan keringat

membentuk senyawa yang menghasilkan bau tak sedap. Bromhidrosis atau bau

badan yang tidak enak paling sering disebabkan karena adanya keringat yang

berlebih dari kelenjar keringat eccrine atau apocrine, yang kemudian akan menyebabkan pertumbuhan bakteri yang berlebihan di kulit. Kelenjar keringat

apocrine terletak di ketiak, sedangkan kelenjar keringat eccrine ada yang terletak di kaki (Jacknin, 2001). Permukaan tubuh yang bau dapat ditimbulkan oleh

keringat, sebum, dan sel-sel kulit mati yang telah diuraikan oleh bakteri menjadi

senyawa berbau (Prabowo dkk., 2012). Bromhidrosis di kaki yang terjadi ketika

kulit menebal, dalam keadaan panas, atau dalam keadaan basah dapat menjadi

tempat tumbuh yang baik untuk bakteri. Bakteri akan merusak lapisan paling atas

dari sel kulit dan sel keringat, kemudian membentuk senyawa kimia yang

menghasilkan bau tak enak (Jacknin, 2001).

Beberapa bakteri yang diduga dapat menjadi penyebab bau badan ialah

aeruginosa dan Streptococcus pyrogenes (Endarti, Yulinah, dan Soediro, 2002). Selain itu, bau pada kaki dapat disebabkan oleh fungi Candida albicans dan bakteri Staphylococcus aureus (Tierno, 2001).

Bacillus subtilis merupakan salah satu spesies flora normal yang banyak ditemukan di kulit. Golongan bakteri Bacillus sp. diketahui mempunyai peranan penting sebagai penyebab bau kaki. Bacillus subtilis memegang peranan sebesar 11,5% dalam menyebabkan bau kaki, sedangkan Staphylococcus epidermidis

memegang peranan 86,5% (Ara dkk., 2006).

Staphylococcus epidermidis merupakan suatu flora normal di kulit manusia yang mampu menimbulkan infeksi pada kulit atau jaringan lunak (Jawetz,

Melnick, dan Adelberg, 1996). Bakteri Staphylococcus epidermidis pada kulit akan mendegradasi asam amino leucine menjadi isovaleric acid. Ketika sel bakteri di kulit berkembangbiak di keringat, bakteri akan memecah beberapa protein di

keringat (Pommerville, 2011).

Masalah bau kaki ini melibatkan beberapa spesies bakteri, dan dua bakteri

yang termasuk adalah Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis.

Staphylococcus epidermidis merupakan bakteri mayoritas di kulit, sehingga peran bakteri ini dalam menyebabkan bau kaki cukup tinggi. Bacillus subtilis

merupakan bakteri yang memiliki enzim leucine dehydrogenase paling tinggi, sehingga mampu menimbulkan bau kaki yang paling menyengat (Ara dkk., 2006).

Mekanisme terjadinya bau kaki adalah karena timbulnya keringat dari

kelenjar eccrine yang mengandung kandungan organik seperti asam amino leusin. Bakteri di kaki yang mempunyai enzim pendegradasi leucine dehydrogenase akan

mendegradasi asam amino leusin di keringat menjadi isovaleric acid, yaitu suatu

volatile lower fatty acids yang merupakan senyawa berbau. Bakteri yang mempunyai banyak enzim leucine dehydrogenase akan menimbulkan bau yang sangat menyengat (Ara dkk., 2006).

Minyak atsiri yang banyak di alam Indonesia memegang peranan bagi

kesehatan. Di Indonesia, penggunaan minyak atsiri dapat melalui beberapa cara,

yaitu melalui mulut (oral), pemakaian luar (topikal), pernapasan (inhalasai atau

kemoterapi), dan pestisida nabati (Kardinan, 2005).

Bagian dari tanaman kemangi (Ocimum basilicum L.) yang banyak digunakan adalah daunnya. Dalam penggunaannya, daun kemangi sering disuling

dan diambil kandungan minyak atsirinya (Dzulkarnain dan Wahjoedi, 1996).

Minyak atsiri kemangi mempunyai kandungan senyawa dominan seperti linalool,

methylclavicol (estragol), 1-8 sineol, eugenol, terpineol, geraniol(1,6,7)

(Sastroamidjojo, 2001).

Senyawa kimia dalam minyak atsiri, yaitu eugenol, linalool (Knolbloch et al. cit., Hadipoentyanti dan Sri, 2008) dan metil eugenol dapat bersifat sebagai anti bakteri. Eugenol adalah senyawa turunan fenol yang dapat berfungsi sebagai

bakteriostatik terhadap fungi maupun bakteri. Eugenol dapat mengganggu struktur

lipid bilayer membran luar bakteri, memecah lipid dan mitokondria, serta

menyebabkan kebocoran protein membran sel bakteri (Winarsih, Onggung, dan

Septiana, 2010).

Pembuatan minyak atsiri daun kemangi ke dalam bentuk sediaan gel anti

berbeda, sehingga mempengaruhi pelepasan zat aktif dari basis yang akan

mempengaruhi pelepasan bahan aktif dari basis yang mempengaruhi efektivitas

sediaan gel menghambat pertumbuhan bakteri penyebab bau pada kaki.

1. Perumusan masalah

1) Apakah minyak atsiri daun kemangi mempunyai daya antibakteri terhadap

Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis?

2) Bagaimanakah daya hambat minyak atsiri daun kemangi dan gel minyak

atsiri daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis?

2. Keaslian penelitian

Dewi (2008), melaporkan bahwa minyak atsiri daun kemangi

mempunyai aktifitas antifungi terhadap Malassezia furfur dengan konsentrasi terendah adalah 6,25% (v/v). Komponen yang dimungkinkan berperan adalah

golongan terpenoid.

Berdasarkan penelitian Maryati, Ratna, dan Triastuti (2007), tanaman

Ocimum basilicum L. mempunyai aktivitas antibakteri terhadap bakteri

Staphylococcus aureus dan Escherichia coli dengan nilai KBM berturut-turut adalah 0,5% v/v dan 0,25% v/v.

Penelitian Lertsatitthanakorn dan Satayavongthip (2012), membahas

tentang formulasi gel kaki deodoran dari minyak cinnamon yang dapat

dijadikan salah satu alternatif kosmetik yang dapat menurunkan bakteri

Sejauh penelusuran pustaka yang dilakukan oleh penulis, penelitian

tentang “Daya Antibakteri Minyak Atsiri Daun Kemangi (Ocimum basilicum

L.) Sebagai Zat Aktif dan Sediaan Gel Terhadap Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 dan Bacillus subtilis ATCC 6633” belum pernah dilakukan.

3. Manfaat penelitian

a. Manfaat teoretis

Menambah informasi ilmu pengetahuan, khususnya dalam bidang

farmasi, mengenai pengembangan dan pemanfaatan tanaman obat

tradisional yang kandungannya berkhasiat sebagai antibakteri.

b. Manfaat praktis

Sebagaisalah satu alternatif untuk mengurangi bau di kaki dengan

menghambat bakteri Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis

menggunakan minyak atsiri daun kemangi.

B. Tujuan Penelitian

a. Memastikan minyak atsiri daun kemangi mempunyai daya antibakteri

terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis.

b. Jika minyak atsiri daun kemangi mempunyai daya antibakteri, maka

digunakan untuk mengetahui daya hambat minyak atsiri daun kemangi dan

formula gel minyak atsiri daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis.

6 BAB II

PENELAAHAN PUSTAKA

A. Bau Kaki

Bau kaki disebut juga bromohidrosis, sedangkan kaki berkeringat disebut

hiperhidrosis. Bau kaki terutama disebabkan oleh keringat. Menurut Toselli, (2005), terdapat sekitar 250.000 kelenjar keringat di kaki yang lebih banyak

dibandingkan dengan bagian tubuh yang lainnya. Keringat di kaki sebenarnya

tidak berbau keluar, sama seperti keringat di ketiak atau di tempat lain. Tetapi,

bakteri di permukaan kaki mengolah keringat dan timbullah bau, ditambah sepatu

dan kaus kaki yang menciptakan lingkungan yang gelap dan lembap yang

memungkinkan bakteri berkembang subur (Leyner and Goldberg, 2006).

Terdapat dua jenis kelenjar keringat yaitu kelenjar keringat eccrine dan

apocrine. Kelenjar keringat apocrine dapat ditemukan di ketiak, areola mammae,

dan di bagian alat kelamin, sedangkan kelenjar keringat eccrine dapat ditemukan di seluruh tubuh termasuk di kaki. Keringat eccrine sebagian besar terdiri dari air tetapi juga mengandung sodium klorida, asam laktat dan urea dalam jumlah yang

kecil. Keringat ini pada dasarnya tidak berbau tajam, tetapi dapat menjadi bau

yang tidak enak karena disebabkan oleh bakteri yang ada di kulit. Pada awalnya

telah diketahui bahwa penyebab bau pada kaki adalah rantai asam lemak dari

pelargonic acid dan caproic acid, namun belakangan diketahui bahwa penyebab bau pada kaki, yaitu isovaleric acid (Elsevier, 1997).

Zat kimia yang paling banyak berada di kaki adalah asam isovalerat yang

dengan intensitas asam isovalerat. Bau tak sedap dari kaki dapat diinkubasi dari

keringat tubuh dan lipid dari bakteri. Kelenjar keringat eccrine adalah sumber nutrisi utama di kaki dan dapat menjadi nutrisi pula untuk pertumbuhan bakteri

(Kanda et al., cit., Toller and Dodd, 1992).

B. Staphylococcus epidermidis

Bakteri Staphylococcus epidermidis merupakan bakteri Gram-positif, koloni berwarna putih atau kuning, dan bersifat anaerob fakultatif. Bakteri ini

tidak mempunyai lapisan protein A pada dinding sel, dapat meragi laktosa, tidak

meragi manitol, dan bersifat koagulase negatif. Staphylococcus epidermidis dapat menyebabkan infeksi kulit ringan yang disertai dengan pembentukan abses.

Staphylococcus epidermidis biotipe-1 dapat menyebabkan infeksi kronis pada manusia (Radji, 2010).

Staphylococcus epidermidis merupakan suatu flora normal di kulit manusia yang termasuk dalam stafilokokus nonhemolitik aerob dan anaerob serta

koagulase negatif. Bakteri aerob dan anaerob seringkali bersama-sama

menimbulkan infeksi yang sinergis pada kulit atau jaringan lunak. Koloni S. epidermidis berwarna abu-abu sampai putih pada isolasi pertama. Banyak koloni membentuk pigmen hanya bila telah lama dieramkan (Jawetz, Melnick, dan

Adelberg, 1996).

C. Bacillus subtilis

Bacillus subtilis adalah bakteri Gram positif yang membentuk endospora yang tahan terhadap kondisi lingkungan yang tidak menguntungkan, dan

berbentuk batang. Merupakan bakteri yang motil dengan flagela dan bersifat

aerobik (Devine, 2000).

Bacillus subtilis diketahui terdapat pada kulit dan dapat menimbulkan bau yang kuat pada kaki dan dapat meningkat pada saat terjadi bau pada kaki.

Menurut Takemura et al., bahwa bau tidak enak disebabkan oleh Bacillus subtilis

yang didukung dengan adanya isobutyric acid, isovaleric acid dan 2-methylbutyric acid. Isovaleric acid diprediksikan diproduksi di kulit ketika asam amino leusin yang ada dalam keringat dimetabolisme oleh mikroorganisme

normal di kulit, yaitu salah satunya oleh Bacillus subtilis (Ara et al., 2006).

D. Uji Daya Antibakteri

Uji daya antibakteri dapat dilakukan menggunakan dua cara, yaitu:

1. Metode difusi

Prinsip metode difusi adalah pengukuran potensi antibakteri

berdasarkan pengamatan diameter daerah hambatan bakteri karena

berdifusinya obat dari titik awal pemberian ke daerah difusi. Pada metode

difusi ini digunakan paper disk, lubang sumuran, atau silinder tak beralas yang mengandung senyawa antibakteri di atas media yang diinkubasi pada suhu

37C selama 18-24 jam. Setelah penginkubasian didapatkan diameter hambatan jernih sebagai daya antibakteri (Jawetz, Melnick, and Adelberg,

1996).

2. Metode dilusi

Masing-masing konsentrasi larutan uji ditambahkan suspensi bakteri

uji berdasarkan kekeruhan media. Media yang kekeruhannya paling tipis

merupakan media dengan konsentrasi yang dapat menghambat pertumbuhan

bakteri. Potensi antibakteri dapat ditentukan dengan melihat konsentrasi

terendah yang dapat menghambat bakteri (McKane dan Kandel, 1996).

E. Minyak Atsiri Daun Kemangi

Minyak atsiri merupakan salah satu jenis minyak nabati yang

multimanfaat. Minyak atsiri berupa cairan kental yang dapat disimpan pada suhu

ruangan. Minyak atsiri dapat diperoleh dari berbagai tanaman seperti daun, bunga,

buah, biji, kulit biji, batang, akar, atau rimpang. Ciri dari minyak atsiri adalah

mudah menguap dan beraroma khas (Syahbana, 2010).

Minyak atsiri daun kemangi adalah minyak esensial yang berasal dari

tanaman kemangi (Ocimum basilicum L.) yang termasuk famili Lamiaceae (mint family) (Mars, 2007).

1. Deskripsi tanaman daun kemangi

Klasifikasi tanaman Ocimum basilicum L. menurut Kartesz (2013): Kerajaan : Plantae

Subkerajaan : Tracheobionta

Superdivisi : Spermatophyta

Divisi : Magnoliophyta

Kelas : Magnoliopsida

Subkelas : Asteridae

Orde : Lamiales

Suku : Lamiaceae

Genus : Ocimum L.

Spesies : Ocimum basilicum L.

Sinonim : Ocimum americanum L., Ocimum album L.,

Basilicum citratum Rumph, Ocimum

menthaefolium Hochst (Seidemann, 2005).

Nama daerah : Solasih (Sunda); telasih (Jawa); dan amping,

kukuru (Minahasa) (Agromedia, 2008).

Kemangi merupakan tanaman berupa semak dengan tinggi mencapai

60 cm dengan batang berkayu, berbentuk bulat, dan bercabang. Daun tunggal,

berbentuk bulat telur, dengan panjang 1-5 cm, dan letaknya berhadapan.

Bunga berbentuk malai, daun pelindung berbentuk elips, dan berwarna hijau.

Kelopak bunga berbentuk ginjal dan berambut. Benang sari berwarna kuning,

berwarna ungu dan kepala putik berwarna putih. Mahkota bunga berbibir dua

dan berwarna putih (Agromedia, 2008).

Kegunaan daun kemangi, yaitu dapat dimanfaatkan untuk mengobati

bau badan dan bau keringat, bau mulut, badan lesu, ejakulasi primer, peluruh

gas perut, peluruh haid, peluruh ASI, panas dalam dan sariawan (Hariana,

2008). Minyak atsiri daun kemangi mengandung 1,8-cineole, eugenol, limonene, ocimene, geranial, cis-3-hexenol, citronellol, alpha-terpineol, camphor, methyleugenol, methyl cinnamate, dan linalool (Khare, 2004).

2. Deskripsi minyak atsiri daun kemangi

Minyak atsiri daun kemangi dapat dimanfaatkan untuk menghilangkan

bau badan dan bau mulut. Minyak atsiri daun kemangi banyak digunakan

sebagai bahan campuran pembuatan obat ataupun untuk perawatan tubuh

seperti sabun mandi, parfum, body lotion, minyak gosok, dan permen pelega tenggorokan (Putriyanti dkk., 2009). Menurut Khare (2004), minyak atsiri

daun kemangi (Ocimum basilicum) mempunyai aktivitas antibakteri dari

Bacillus subtilis dan Staphylococcus sp.. Senyawa yang ditemukan dapat sebagai antibakteri adalah eugenol. Kandungan bahan aktif utama dari minyak

atsiri daun kemangiadalah eugenol yaitu berkisar 30-46% (Kardinan, 2005).

F. Destilasi Minyak Atsiri

Terdapat tiga cara yang biasa dilakukan untuk mengambil komponen

minyak atsiri, yaitu destilasi, ekstraksi memakai pelarut dan pengaliran udara atau

atsiri adalah dengan penyulingan (Kardinan, 2005). Destilasi atau penyulingan

adalah proses pemisahan komponen yang berupa cairan atau padatan dari dua

macam campuran, berdasarkan titik uapnya dan proses ini dilakukan terhadap

minyak atsiri yang tidak larut air (Guenther, 2006). Tiga jenis destilasi, yaitu:

1. Destilasi air

Bahan-bahan tanaman yang didestilasi langsung terkena dasar ketel

dan air. Sesuai untuk simplisia kering yang tidak rusak dengan pendidihan

(Departemen Kesehatan RI, 1985).

2. Destilasi uap air

Bahan tanaman berinteraksi dengan uap air panas dengan tekanan lebih

dari 1 atm (Departemen Kesehatan RI, 1985). Digunakan untuh bahan yang

mengandung minyak atsiri dengan titik didih tinggi (Guenther, 2006).

3. Destilasi uap dan air

Bahan tanaman tidak mengalami kontak langsung dengan dasar ketel

karena diletakkan dalam angsang alat destilasi (Guenther, 2006). Untuk bahan

yang kering atau segar yang mungkin rusak saat pendidihan (Tyler et al., 1988).

G. Gel

Menurut USP, gel didefinisikan sebagai sistem semisolid yang terdiri dari

dari partikel inorganik kecil atau molekul organik yang besar yang interpenetrated

oleh cairan. Gel juga didefinisikan sebagai sistem yang semi rigid yang

membatasi pergerakan dari medium dispers oleh jaringan ikatan tiga dimensi dari

Pembuatan gel menggunakan gelling agents yang merupakan suatu

polimer yang membentuk matriks tiga dimensi karena tingginya kadar dari cross-link ketika didispersikan ke dalam pelarut. Konsentrasi gelling agent yang digunakan adalah berkisar antara 0,5% – 10%, untuk membatasi pergerakan dari medium dispers yang terjebak dalam medium pendispernya yang kemudian akan

meningkatkan viskositas sediaan (Troy, 2006).

Gel mempunyai lebih banyak air dibandingkan krim dan ointment.

Alkohol banyak ditambahkan pada formulasi pembuatan gel, karena dengan

adanya air dan alkohol banyak obat yang mudah larut. Alkohol juga berperan

sebagai permeation enhancer yang membantu penetrasi obat ke dalam kulit, selain itu mempercepat pengeringan ketika diaplikasikan di kulit dan memberikan

sensasi dingin (Desai, 2007).

Salah satu contoh gelling agents adalah carbomer (Carbopol®) yang

memiliki bobot molekul yang tinggi, sintetik, polimer yang larut dalam air dari

hasil derivat acrylic acid (Desai and Mary, 2007).

H. Landasan Teori

Minyak atsiri daun kemangi mengandung 1,8-cineole, eugenol, limonene,

ocimene, geranial, cis-3-hexenol, citronellol, alpha-terpineol, camphor, methyleugenol, methyl cinnamate, dan linalool (Khare, 2004). Daun kemangi

dapat dimanfaatkan untuk mengobati bau badan, bau keringat, bau mulut, badan

lesu (Hariana, 2008). Senyawa kimia yang berperan sebagai antibakteri pada

minyak atsiri daun kemangi adalah eugenol (Winarsih, Onggung, dan Septiana,

Bau kaki yang disebut juga bromohidrosis disebabkan oleh keringat yang bercampur dengan bakteri. Zat kimia yang dapat menimbulkan bau kaki adalah

isovaleric acid (Toller and Dodd, 1992). Isovaleric acid adalah hasil degradasi asam amino leusin yang ada di keringat oleh bakteri yang mempunyai enzim

leusine dehydrogenase (Ara et al., 2006).

Staphylococcus epidermidis adalah suatu flora normal di kulit manusia yang dapat menimbulkan infeksi pada kulit (Jawetz, Melnick, dan Adelberg,

1996). Bacillus subtilis adalah salah satu penyebab bau pada kaki dengan memecah asam amino leusin menjadi isovaleric acid, penyebab bau yang tak sedap pada kaki. Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis adalah dua bakteri yang dapat menyebabkan bau yang kuat di kaki (Ara et al., 2006).

Gel adalah sistem semi-rigid yang mampu menahan pergerakan dari

medium dispernya dengan matriks tiga dimensi yang berasal dari medium

pendispersnya (Troy, 2006). Matriks yang terbentuk berasal dari gelling agent

yaitu contohnya adalah carbomer (Desai, 2007).

Pengujian daya antibakteri ini bertujuan untuk melihat kemampuan

minyak atsiri daun kemangi dan melihat nilai KHM dan KBM dalam menghambat

bakteri penyebab bau pada kaki, serta mengetahui daya hambat minyak daun atsiri

I. Hipotesis

1. Minyak atsiri daun kemangi dan gel minyak atsiri daun kemangi mempunyai

daya antibakteri terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis. 2. Terdapat perbedaan daya hambat antibakteri antara minyak atsiri daun

kemangi dan gel minyak atsiri daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis.

16 BAB III

METODOLOGI PENELITIAN

A. Jenis dan Rancangan Penelitian

Penelitian ini termasuk penelitian ekperimental murni dengan rancangan

penelitian acak lengkap pola searah.

B. Variabel dan Definisi Operasional 1. Variabel penelitian

a. Variabel bebas adalah variasi konsentrasi minyak atsiri daun kemangi dan

bentuk sediaan gel anti bau kaki.

b. Variabel tergantung adalah diameter zona hambat pertumbuhan bakteri

Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis.

c. Variabel pengacau terkendali yaitu suhu pembiakan dan inkubasi bakteri

(37C), waktu inkubasi (24 jam), diameter sumuran (8mm), kepadatan suspensi bakteri uji setara dengan larutan standar Mc Farland 0,5

(konsentrasi mikroba 1,5.108 CFU/ml), paparan sinar matahari pada saat

proses destilasi dan penyimpanan (fotosensitif).

d. Variabel pengacau tak terkendali adalah lingkungan tempat tumbuh

tumbuhan daun kemangi.

2. Definisi operasional

a. Minyak atsiri daun kemangi adalah minyak nabati yang mudah menguap

dan beraroma khas yang berasal dari daun kemangi (Ocimum basilicum

meletakkan daun di atas angsang alat destilasi, sehingga tidak berkontak

langsung dengan air di dasar ketel.

b. Gel minyak atsiri daun kemangi adalah sediaan topikal semisolid yang

mengandung bahan aktif minyak atsiri daun kemangi kadar 15% dengan

pembawa senyawa hidrofilik, yaitu carbopol yang digunakan untuk

mengurangi bau pada kaki sesuai dengan formula.

c. Diameter zona hambat adalah parameter daya antibakteri berupa diameter

area jernih yang dihasilkan agen antibakteri yang sudah dikurangi dengan

diameter area jernih dari kontrol negatif dan lubang sumuran.

C. Bahan Penelitian

Daun segar daun kemangi diperoleh dari Pasar Tradisional Beringharjo

Yogyakarta, aquadest, etanol 96%, larutan standar Mc Farland 0.5, kultur murni

Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 dan Bacillus subtilis ATCC 6633, Mueller Hinton Agar (Merck), Mueller Hinton Broth (Merck), propilenglikol,

carbopol 940, trietanolamin, natrium sulfat anhidrat, dan gel Medi-Klin®

(Clindamycin phosphate 1,2%).

D. Alat Penelitian

Microbiological Safety Cabinet, oven, piknometer 10 ml, hand refractometer, autoklaf, inkubator, pH meter, vortex, alat-alat gelas, ose, neraca analitik, mikropipet, pelubang sumuran no.4 (8mm), seperangkat alat destilasi,

E. Tata Cara Penelitian 1. Identifikasi tanaman kemangi

Identifikasi tanaman kemangi dilakukan di Laboratorium

Farmakognosi Fitokimia Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma

Yogyakarta dengan mengacu pada buku panduan menurut Steenis (1975),

untuk memastikan bahwa tanaman yang digunakan benar-benar tanaman

kemangi.

2. Pengumpulan daun kemangi

Daun kemangi diperoleh dari Pasar Tradisional Beringharjo,

Yogyakarta. Bagian tanaman yang digunakan adalah bagian daun berwarna

hijau yang masih segar. Daun dipisahkan dari batang dan bunga, kemudian

dilakukan pencucian untuk menghilangkan kotoran yang kemungkinan masih

terdapat di daun.

3. Destilasi minyak atsiri daun kemangi

Destilasi uap dan air dilakukan dengan menimbang terlebih dahulu

bobot daun kemangi segar, kemudian didestilasi menggunakan air selama 4-6

jam. Daun kemangi berada di atas air dengan adanya pembatas sehingga air

tidak menyentuh daun kemangi secara langsung. Kemudian uap air dan

minyak dialirkan melalui pendingin dan hasil destilasi ditampung. Destilat

yang dihasilkan adalah berupa minyak dan air. Digunakan natrium sulfat

anhidrat untuk menarik air dari hasil destilat minyak atsiri, sehingga yang

4. Karakterisasi minyak atsiri daun kemangi a. Pemeriksaan organoleptis

Pemeriksaan organoleptis minyak atsiri dilakukan dengan melihat

warna, kejernihan, dan bau minyak atsiri hasil destilasi uap dan air.

Minyak kemangi memiliki warna kuning jernih, bau khas menyengat dan

mudah menguap (Dewi, 2008).

b. Pengukuran nilai bobot jenis minyak kemangi

Piknometer dicuci dan dibersihkan dengan air dan etanol 96%.

Dikeringkan dengan arus udara kering. Menimbang piknometer yang

bersih dan kering dengan seksama. Mengisi piknometer dengan air hingga

penuh, lalu direndam dalam air es sehingga suhunya mencapai ± 2ºC di

bawah suhu percobaan. Kemudian piknometer dikeluarkan dan dibiarkan

hingga suhu piknometer mencapai suhu ruangan, kemudian pipa kapiler

ditutup. Usap air yang menempel di dinding piknometer kemudian

ditimbang dengan seksama. Melihat kerapatan air pada suhu percobaan.

Kemudian piknometer dicuci dan dibersihkan, dan digunakan untuk

menghitung kerapatan minyak atsiri daun kemangi dengan cara yang sama

dengan perlakuan pada air. Di replikasi sebanyak tiga kali.

c. Pengukuran nilai indeks bias

Pengukuran indeks bias menggunakan alat hand refractometer

pada cahaya terang dan dilihat dengan memutar skala sampai terlihat garis

batas gelap dan terang dengan jelas.

5. Identifikasi kualitatif minyak atsiri daun kemangi dengan metode KLT

Fase diam yang digunakan silika gel GF254 dan fase gerak yang

digunakan untuk daun kemangi adalah n-heksana - etilasetat (10:1 v/v).

Deteksi menggunakan sinar UV 254 dan 366 nm dengan penampak bercak

yang digunakan adalah vanilin asam sulfat, dengan standar eugenol.

6. Penyiapan media uji

Pembuatan media MHA yaitu mencampurkan serbuk MHA 34 g

dalam aquadest 1000 ml. Pembuatan media MHB mencampurkan 21 g dalam

aquadest 1000 ml. Kemudian disterilkan dalam autoklaf 121C pada 1 atm selama 15 menit.

7. Uji daya antibakteri minyak atsiri daun kemangi dengan metode difusi sumuran

a. Penyiapan larutan uji

Dari hasil destilasi dibuat berbagai variasi pengenceran dengan

melarutkan minyak atsiri dengan etanol 96%. Dibuat beberapa variasi

konsentrasi destilat minyak kemangi yaitu 2,5%; 5%; 10%; 15%; 20%; 50%

dan 100%. Konsentrasi 100% minyak kemangi sebagai kontrol positif dan

b. Pembuatan suspensi bakteri

Diambil 1-3 ose kultur murni bakteri Staphylococcus epidermidis

dan Bacillus subtilis, diinokulasikan ke dalam 10 ml MHB dan divortex serta diinkubasi 37C selama 24 jam. Dibuat suspensi bakteri sesuai standar Mc Farland 0,5 (1,5.108 CFU/ml).

c. Uji daya antibakteri minyak atsiri daun kemangi terhadap

Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis dengan difusi sumuran

Pada uji ini digunakan kontrol sterilitas media dan kontrol

pertumbuhan bakteri uji. Kontrol sterilitas media ini berfungsi untuk

memastikan bahwa media yang digunakan bebas dari kontaminan. Kontrol

ini dibuat dengan menuang media MHA pada cawan petri steril.

Sedangkan kontrol pertumbuhan uji berfungsi untuk melihat bakteri

apakah suspensi bakteri yang digunakan dapat tumbuh dengan baik.

Pembuatan media ini dengan menambahkan bakteri uji pada media MHA

kemudian dilakukan pour plate pada cawan petri steril.

Pembuatan media untuk difusi sumuran menggunakan

perbandingan media dengan volume 1:6. Satu bagian, yaitu 5 ml

digunakan sebagai layer bawah, dituang ke dalam cawan petri steril dan dibiarkan memadat terlebih dahulu. Enam bagian, yaitu 30 ml digunakan

sebagai layer atas, yang dituang setelah media diinokulasi dengan bakteri uji.

Pembuatan lubang sumuran pada media MHA menggunakan

variasi konsentrasi minyak atsiri, kontrol pelarut (etanol 96%) dan kontrol

positif (minyak kemangi 100%). Pembuatan lubang menembus layer atas, sedangkan layer bawah sebagai alas supaya sampel tidak menyebar ke dasar cawan petri.

Minyak atsiri dengan berbagai variasi konsentrasi diinokulasikan

sebanyal 50 l dan diinkubasi selama 24 jam dengan suhu 37C. Saat akan diinkubasi sebelumnya cawan petri dibungkus menggunakan plastic wrab. Daya antibakteri yang diamati berdasarkan zona hambat yang terbentuk

dibandingkan kontrol pelarut etanol 96% dikurangi dengan diameter

sumuran yang digunakan (8mm). Dilakukan replikasi 3 kali.

8. Penentuan nilai KHM dan KBM dengan dilusi padat

Uji ini menggunakan tiga macam kontrol, yaitu kontrol sterilitas media,

kontrol pertumbuhan bakteri, dan kontrol negatif (kontrol pelarut). Kontrol

pelarut ini berfungsi untuk melihat apakah pelarut yang digunakan untuk

melarutkan minyak atsiri, yaitu etanol 96% memiliki aktivitas menghambat

pertumbuhan bakteri uji atau tidak. Pembuatannya dengan cara menambahkan

bakteri uji dan etanol 96% ke dalam media MHA, kemudian dilakukan pour plate ke dalam cawan petri steril.

a. Uji daya antibakteri dengan dilusi padat

Untuk pengujian antibakteri dengan dilusi padat, variasi konsentrasi

minyak kemangi didapatkan berdasarkan daya hambat yang diperoleh

pada difusi sumuran. Konsentrasi terkecil yang mempunyai aktivitas

konsentrasinya diturunkan dan dinaikkan untuk nantinya dapat diketahui

nilai KHM dan KBM dari minyak atsiri daun kemangi.

Pembuatan suspensi dilakukan untuk kedua bakteri uji yang

kekeruhannya sudah dibandingkan dengan standar Mc Farland 0,5 dan

diinkubasi selama 24 jam. Variasi konsentrasi minyak kemangi yang telah

ditentukan sebanyak 1 ml bersama dengan suspensi bakteri sebanyak 1 ml

dimasukkan ke dalam cawan petri steril secara pour plate. Diinkubasikan selama 24 jam dengan suhu 37oC.

Pertumbuhan bakteri dilihat dari kekeruhan media, semakin banyak

pertumbuhan bakteri maka media akan semakin keruh, begitu pula

sebaliknya. Pembacaan hasil daya antibakteri diberi penilaian dengan

notasi (+++) untuk pertumbuhan bakteri yang sangat keruh, (++) keruh, (+)

agak keruh, dan (-) jernih. Kekeruhan media perlakuan dibandingkan

dengan kontrol sterilitas dan kontrol pertumbuhan.

b. Penentuan nilai KHM dan KBM

Penentuan nilai KHM dan KBM dengan melakukan streak plate

dari hasil uji daya antibakteri secara dilusi padat. Media dari hasil uji

dilusi padat berbagai variasi konsentrasi yang memberikan kejernihan

media secara visual, diambil 1 ose dan dilakukan streak plate pada media MHA steril.

Nilai KHM ditentukan dari konsentrasi terkecil yang menunjukkan

media jernih kemudian dilakukan streak plate dan masih terjadi pertumbuhan bakteri. Nilai KBM ditentukan dari konsentrasi terkecil yang

menunjukkan media jernih kemudian dilakukan streak plate dan tidak terjadi pertumbuhan bakteri di tempat dilakukan streak plate.

9. Pembuatan gel anti bau kaki minyak atsiri daun kemangi

Formula gel dalam 100 g (Yuliani, 2005).

R/ Etanol 96% 26,7 g

Propilenglikol 12,4 g

Larutan carbopol 3% b/v 34,0 g

Aquadest 17,2 g

Trietanolamin 1,4 g

Minyak atsiri 10,0 g

Komposisi minyak atsiri daun kemangi yang dimasukkan dalam

formula didapatkan dari nilai diameter zona hambat yang memberikan nilai

paling besar. Hal ini dilakukan agar daya hambat yang diberikan gel minyak

kemangi adalah yang paling baik.

Dari formula tersebut di atas dilakukan modifikasi sebagai berikut:

Tabel I. Formula sediaan gel anti bau kaki minyak kemangi Material Gel Minyak

Kemangi (gram)

Kontrol Basis Gel Minyak Kemangi (gram)

Etanol 96% 24,8 29,1 Propilenglikol 11,5 13,5 Larutan carbopol 3% b/v 31,5 37,1 Aquadest 15,9 18,8 Trietanolamin 1,3 1,5 Minyak atsiri 15 -

Larutan carbopol 3% b/v dibuat dengan cara mengembangkan

carbopol dalam aquadest yang sesuai dalam formula selama 24 jam.

Selanjutnya dicampurkan dengan propilenglikol, aquadest, etanol, minyak

atsiri daun kemangi, dan trietanolamin dengan mixer sampai terbentuk sediaan

gel.

10.Uji sifat fisik sediaan gel anti bau kaki minyak atsiri daun kemangi

Pengukuran sifat fisik gel anti bau kaki minyak kemangi dilakukan

48 jam setelah pembuatan, yang meliputi:

a. Uji viskositas

Pengukuran viskositas dilakukan dengan menggunakan Viscotester Rion seri VT 04. Sebanyak 100 gram sediaan dimasukkan ke dalam wadah dan

dipasang pada portable viscotester. Viskositas diamati pada skala yang ditunjukkan jarum penunjuk setelah tercapai kestabilan.

b. Uji daya sebar

Pada satu sisi double plate berskala diletakkan 0,5 g gel dan kemudian disatukan, didiamkan selama 1 menit, diberi beban 50 g didiamkan 1

menit, diberi tambahan beban 50 g dan didiamkan 1 menit, kemudian

diberi tambahan 50 g, sehingga bobot beban total 150 g, dan didiamkan 1

menit kemudian diukur diameter penyebarannya dengan melihat dari

beberapa sisi.

11.Uji daya antibakteri sediaan gel anti bau kaki minyak atsiri daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis dengan metode difusi sumuran

Dibuat 6 lubang sumuran dengan diameter 8 mm pada cawan petri

yang telah berisi MHA double layer. Masing-masing sumuran diisi 100 mg gel minyak kemangi, 100 mg kontrol basis gel, 50 µl (minyak kemangi 15%),

100 mg kontrol positif (Clindamycin phosphate gel), 50 µl kontrol negatif

(etanol 96%), kemudian diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37ºC. Sebelum

diinkubasi, cawan petri dibungkus menggunakan plastic wrab.

F. Analisis Data

Data yang diperoleh dari penelitian ini akan dianalisis menggunakan

program sofware R 2.14.1. Data yang akan dianalisis secara statistik meliputi data diameter zona hambat minyak kemangi dan gel anti bau kaki minyak kemangi

terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis, serta data pengukuran viskositas dan daya sebar gel anti bau kaki minyak kemangi. Analisis statistik

diawali dengan melihat kenormalan data yang diperoleh menggunakan uji Shapiro Wilk. Bila data yang didapat terdistribusi normal maka dilanjutkan dengan uji parametrik menggunakan Levene test, sedangkan bila data terdistribusi tidak normal digunakan uji non parametrik yaitu Kruskal-Wallis. Analisis data yang telah diperoleh dilanjutkan dengan menggunakan uji Wilcoxon untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan di antara data-data yang diperoleh.

27 BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Identifikasi Daun Kemangi

Daun kemangi yang digunakan dalam penelitian ini diperoleh dari Pasar

Tradisional Beringharjo, Yogyakarta dalam bentuk tanaman kemangi segar.

Untuk mengetahui kebenaran tentang tanaman kemangi yang digunakan

dilakukan determinasi tanaman berdasarkan Steenis (1975) (Lampiran 1).

Gambar 3. Daun kemangi

B. Penyiapan Bahan Daun Kemangi

Penyiapan bahan daun kemangi dilakukan dengan memilih daun kemangi

yang masih segar serta memisahkan daun kemangi dari batang dan bunga. Daun

kemangi kemudian dicuci untuk menghilangkan pengotor yang kemungkinan

terdapat di daun.

C. Destilasi Minyak Atsiri Daun Kemangi

Pengambilan minyak atsiri dari daun kemangi dilakukan menggunakan

destilasi metode uap dan air. Destilasi uap dan air digunakan karena daun

Minyak atsiri daun kemangi dan air yang telah menguap kemudian akan melewati

pendingin dan akan tertampung di tempat penampung, yaitu tabung berskala.

Tempat penampung minyak atsiri daun kemangi ditutup dengan alumunium foil

karena minyak atsiri bersifat fotosensitif. Pada penampung akan terbentuk 2 fase,

yaitu minyak atsiri daun kemangi di bagian atas dan air di bagian bawah karena

bobot jenis air lebih tinggi daripada minyak atsiri.

Minyak atsiri daun kemangi dipisahkan dari fase air, kemudian diberi

natrium sulfat anhidrat untuk menarik air yang kemungkinan masih tertinggal di

dalam minyak atsiri, sehingga minyak atsiri yang didapat adalah murni minyak

atsiri daun kemangi. Minyak atsiri daun kemangi yang didapatkan dari hasil

destilasi berwarna kuning muda kemerahan dan berbau aromatis kemangi.

Gambar 3. Minyak Atsiri Daun Kemangi

Rendemen minyak atsiri daun kemangi yang dihasilkan berdasarkan tiga

kali replikasi adalah 0,23 ± 0,038 %v/b (Lampiran 4). Rendemen minyak atsiri

daun kemangi adalah berada di rentang 0,18% - 0,32% (Kardinan, 2005), dari

hasil penelitian jumlah rendemen yang didapatkan sudah masuk ke dalam rentang

D. Karakterisasi Minyak Atsiri Daun Kemangi

Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui karakteristik minyak atsiri daun

kemangi dengan menggunakan pemeriksaan organoleptis, bobot jenis, indeks bias,

dan KLT.

1. Pemeriksaan organoleptis minyak atsiri daun kemangi

Pemeriksaan ini dilakukan dengan melihat bau, warna dan kejernihan.

Pada penelitian Hadipoentyanti dan Sri (2008), minyak atsiri daun kemangi

memiliki warna kuning, seperti warna minyak atsiri yang dihasilkan pada

penelitian ini. Aroma dari minyak atsiri daun kemangi adalah berbau khas

aromatik seperti aroma dari daunnya. Minyak atsiri yang dihasilkan tampak

jernih.

2. Pemeriksaan bobot jenis minyak atsiri daun kemangi

Dari hasil penelitian didapatkan bobot jenis minyak atsiri daun

kemangi adalah 0,8877 ± 0,00174 g/mL (Lampiran 5). Menurut Anon (cit., Hadipoentyanti dan Sri, 2008), berdasarkan EOA (Essential Oil Association of

USA) bobot jenis minyak atsiri daun kemangi yaitu sekitar 0,952 - 0,973 g/mL.

Hal ini dapat dimungkinkan karena adanya perbedaan tempat tumbuh tanaman

kemangi yang digunakan dan perbedaan kemurnian dari minyak atsiri yang

dihasilkan.

3. Nilai indeks bias minyak atsiri daun kemangi

Pemeriksaan ini bertujuan untuk mengetahui nilai indeks bias

minyak atsiri daun kemangi, dengan prinsip penggunaan alat adalah bahwa

masuk mempunyai sudut pembelokkan yang lebih pendek dibandingkan

dengan sudut kritis yang melewati cairan sampel yang kemudian akan

diabsorbsi. Hal ini akan menimbulkan perbedaan warna gelap dan terang yang

dapat dibaca menggunakan skala yang tertera pada alat (Varcoe, 2001).

Berdasarkan hasil penelitian didapatkan nilai indeks bias minyak

atsiri daun kemangi adalah 1,4819 ± 0,001 (Lampiran 5). Nilai ini mendekati

nilai indeks bias hasil penelitian Hadipoentyanti dan Sri (2008), yaitu sekitar

1,5176.

4. Profil kromatografi lapis tipis minyak atsiri daun kemangi

Pemeriksaan ini bertujuan untuk membuktikan adanya kandungan

eugenol dalam minyak atsiri daun kemangi yang diduga menjadi salah satu

senyawa aktif yang dapat menghambat bakteri penyebab bau di kaki. Menurut

Chairul (2005), fase gerak yang dapat digunakan adalah n-heksana - etilasetat

dengan perbandingan 10 : 1 (v/v). Fase diam yang digunakan adalah silika gel

GF254. Penampak bercak yang digunakan adalah vanilin asam sulfat dan

standar yang digunakan adalah eugenol. Sampel yang akan digunakan terlebih

dahulu dilakukan pengenceran dengan perbandingan 1:20 yang berfungsi agar

konsentrasi minyak atsiri tidak terlalu pekat yang dapat mengakibatkan

terjadinya tailing.

Plat yang telah ditotolkan standar dan sampel dimasukkan ke dalam

chamber berisi fase gerak yang telah dijenuhkan terlebih dahulu. Jarak pengembangan yang digunakan adalah 10 cm. Setelah itu, dilakukan

dilakukan pemanasan 100ºC. Didapatkan bercak dengan warna ungu (Gambar

4). Namun, pada gambar, warna ungu pada standar eugenol tidak dapat jelas

terlihat. Dari hasil penelitian didapatkan nilai Rf standar eugenol, yaitu 0,5.

Nilai Rf sampel minyak atsiri daun kemangi dari dua kali replikasi

berturut-turut adalah 0,44 dan 0,45. Nilai Rf standar eugenol dan sampel minyak atsiri

daun kemangi mempunyai nilai Rf yang hampir sama dan warna yang mirip,

sehingga dapat dikatakan bahwa minyak atsiri daun kemangi hasil destilasi

kemungkinan besar memiliki kandungan eugenol.

a. Profil KLT di 254 nm b. Profil KLT setelah disemprot vanilin asam sulfat

Keterangan: (1) Penotolan standar eugenol; (2) penotolan sampel minyak atsiri daun kemangi replikasi I; (3) penotolan sampel minyak atsiri daun kemangi replikasi II.

Gambar 4. Profil Kromatografi Lapis Tipis

1 2 3 1 2 3

Rf: 0,5

Rf: 0,44

E. Uji Daya Antibakteri Minyak Atsiri Daun Kemangi terhadap

Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis

Salah satu penyebab bau pada kaki yaitu bakeri Staphylococcus epidermidis yang merupakan flora normal di kulit dan Bacillus subtilis. Minyak kemangi dapat menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus epidermidis dan

Bacillus subtilis (Khare, 2004). Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis

dapat mengubah asam amino leusin di keringat menjadi asam isovalerat dengan

bantuan enzim leucine dehydrogenase yang mampu menimbulkan bau tidak enak di kaki. Untuk mengetahui daya antibakteri minyak kemangi digunakan metode

difusi sumuran dengan membuat lubang sumuran pada media padat menggunakan

pelubang nomor 4 (8mm). Kontrol yang digunakan pada metode ini adalah

kontrol sterilitas media, kontrol pertumbuhan bakteri uji (Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis), kontrol negatif (etanol 96%) dan minyak atsiri 100% (kontrol positif).

Kontrol sterilitas media berfungsi untuk pengamatan keaseptisan langkah

penelitian dan mengetahui tingkat sterilitas media yang digunakan. Kontrol

sterilitas media dibuat dengan menuang media MHA steril pada cawan petri

dengan metode double layer dan dibuat sumuran. Hasil pengamatan, tidak ditemukan adanya pertumbuhan bakteri atau kontaminan pada media, sehingga

dapat disimpulkan bahwa media dalam keadaan steril dan pengerjaan juga steril.

Kontrol pertumbuhan bakteri digunakan untuk mengetahui pertumbuhan normal

bakteri uji pada media yang dituang secara steril dengan pour plate. Hasil penelitian menunjukkan bakteri dapat tumbuh dengan baik.

Kontrol negatif berfungsi untuk melihat pelarut minyak atsiri yaitu etanol

96% mempunyai kemampuan menghambat pertumbuhan bakteri atau tidak.

Pelarut yang digunakan adalah etanol 96% karena minyak kemangi dapat larut

sempurna. Kontrol positif berfungsi sebagai pembanding untuk melihat

aktivitasnya sama atau tidak dengan berbagai variasi konsentrasi yang lain.

Kontrol positif sebagai pembanding karena minyak atsiri dengan konsentrasi 100%

tidak dimungkinkan menjadi dosis terapi karena dikhawatirkan dapat mengiritasi

kulit di tempat pengaplikasian. Daya antibakteri ditunjukkan dengan diameter

zona hambat jernih yang sudah dikurangi dengan diameter sumuran. Zona hambat

berupa zona jernih di sekitar sumuran yang menandakan tidak adanya

pertumbuhan bakteri.

Hasil pengukuran rerata diameter zona hambat minyak atsiri daun

kemangi terhadap bakteri Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis secara berturut-turut (Lampiran 6 dan 7) adalah sebagai berikut.

Tabel II. Hasil uji � ± SD diameter zona hambat minyak atsiri daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis

Konsentrasi minyak atsiri daun kemangi

(%)

Diameter zona hambat (mm)

Staphylococcus

epidermidis Bacillus subtilis 2,5 4,0 ± 0,0 9,0 ± 1,0

5 7,7 ± 0,6 9,7 ± 1,6

10 11,7 ± 0,6 10,0 ± 1,0

15 13,7 ± 1,2 12,3 ± 1,0

20 12,0 ± 3,0 11,7 ± 1,5

50 11,7 ± 0,6 12,0 ± 0,0

100 10,3 ± 1,2 10,3 ± 0,6

Kontrol pelarut (etanol 96%)

Gambar 5. Grafik konsentrasi vs diameter zona hambat minyak atsiri daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis

Menurut Junior and Zanil (cit., Gupta, Amar, Ramesh, Archana, 2008), tingkatan keaktifan suatu antibakteri dilihat dari diameter zona hambatnya adalah

golongan inaktif (diameter zona hambat < 9 mm); cukup aktif (diameter zona

hambat 9-12 mm); aktif (diameter zona hambat 13-18 mm); dan sangat aktif

(diameter zona hambat >18 mm).

Hasil penelitian mengenai diameter zona hambat minyak atsiri daun

kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis, didapatkan kenaikan berkala dari variasi konsentrasi terendah (2,5%) sampai pada konsentrasi 15%, kemudian

mengalami penurunan kembali pada konsentrasi 20% - 100%. Konsentrasi

minyak kemangi 10%, 15% dan 20% adalah konsentrasi yang dijadikan

pertimbangan untuk dapat dimasukkan ke dalam formula gel. Diameter zona

hambat minyak atsiri daun kemangi antara konsentrasi 10% dan 15%; dan

konsentrasi 15% dan 20% tidak mengalami perbedaan bermakna (Tabel IV). Hal

0 2 4 6 8 10 12 14 16

Konsentrasi vs diameter zona hambat

Staphylococcus epidermidis Bacillus subtilis

ini menandakan bahwa daya antibakteri minyak atsiri daun kemangi antara tiga

konsentrasi tersebut hampir sama.

Begitu pula dengan diameter zona hambat minyak atsiri daun kemangi

terhadap Bacillus subtilis, terjadi kenaikan diameter zona hambat dari konsentrasi 2,5% sampai 15%, mengalami penurunan pada konsentrasi 20% dan mengalami

kenaikan kembali pada konsentrasi 50%. Kenaikan yang dialami hampir sama

dengan diameter konsentrasi 15% yang mempunyai diameter paling besar.

Berdasarkan perhitungan statistik (Tabel V), diameter zona hambat pada

konsentrasi 10% dan 15% mengalami perdedaan bermakna, konsentrasi 15 % dan

20% tidak mengalami perbedaan bermakna, begitu pula dengan konsentrasi 15%

dan 50% tidak mengalami perbedaan bermakna. Perbedaan tidak bermakna ini

dapat dikarenakan nilai diameter zona hambat yang dihasilkan tidak terlalu jauh

berbeda (Lampiran 6 dan 7). Konsentrasi 2,5% tidak mengalami perbedaan

bermakna dengan konsentrasi 10%, 20%, dan 100%, dan tampak bahwa

konsentrasi 20% juga mengalami perbedaan tidak bermakna dengan konsentrasi

yang lain kecuali dengan kontrol negatif (Tabel V).

Pengaruh afinitas minyak atsiri daun kemangi dalam sediaan dapat

mempengaruhi pelepasan minyak dari sediaan, sehingga konsentrasi yang akan

diformulasikan ke bentuk sediaan adalah konsentrasi 15%. Hal ini dikarenakan

konsentrasi 15% memiliki nilai zona hambat yang paling besar, baik terhadap

bakteri Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis, serta tingkat keaktifan daya antibakterinya termasuk golongan cukup aktif sampai aktif, sehingga

maksmial. Minyak atsiri daun kemangi dengan konsentrasi yang kecil, yaitu 2,5%

mampu memberikan aktivitas daya hambat terhadap bakteri Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis dengan rata-rata diameter secara berturut-turut adalah 4 mm dan 9 mm. Kontrol negatif yaitu kontrol pelarut etanol 96% tidak

ditemukan adanya zona hambat di sekitar sumuran, ini menandakan bahwa pelarut

minyak atsiri daun kemangi tidak memiliki daya hambat terhadap bakteri

Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis, sehingga tidak mempengaruhi hasil daya hambat minyak kemangi.

Tabel III. Hasil uji distribusi normal data diameter zona daya hambat variasi konsentrasi minyakatsiri daun kemangi terhadap Staphylococcus

epidermidis dan Bacillus subtilis

Variasi Konsentrasi Staphylococcus epidermidis Bacillus subtilis

2,5% - N

5% TN N

10% TN N

15% TN TN

20% N N

50% TN -

100% TN TN

Kontrol (-) - -

Keterangan: N: Data normal; TN: Data tidak normal (-): Not available

Berdasarkan tabel di atas, terlihat bahwa terdapat distribusi data yang tidak

normal. Pengukuran analisis statistik kemudian dilakukan dengan menggunakan

uji Kruskal-Wallis untuk melihat terdapat perbedaan antar kelompok konsentrasi, dan didapatkan nilai p-value < 0,05. Hal ini menandakan bahwa antara kelompok konsentrasi terdapat kelompok yang berbeda. Untuk mengetahui kelompok yang

mengalami perbedaan analisis dilanjutkan dengan test post hoc menggunakan uji

Wilcoxon.

Tabel IV. Hasil post hoctest diameter zona daya hambat variasi konsentrasi minyak atsiri daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis

Konsentrasi (%) 2,5 5 10 15 20 50 100 K -

2,5 - BB BB BB BB BB BB BB

5 BB - BB BB BB BB BB BB

10 BB BB - BB BTB BTB BTB BB

15 BB BB BB - BTB BB BB BB

20 BB BB BTB BTB - BTB BTB BB

50 BB BB BTB BB BTB - BTB BB

100 BB BB BTB BB BTB BTB - BB

K - BB BB BB BB BB BB BB -

Keterangan: BTB (Berbeda Tidak Bermakna); BB (Berbeda Bermakna); K- (Kontrol negatif: etanol 96%).

Tabel V. Hasil post hoctest diameter zona daya hambat variasi konsentrasi minyak atsiri daun kemangi terhadap Bacillus subtilis

Konsentrasi (%) 2,5 5 10 15 20 50 100 K -

2,5 - BTB BTB BB BTB BB BB BB

5 BTB - BTB BB BTB BB BTB BB

10 BTB BTB - BB BTB BB BTB BB

15 BB BB BB - BTB BTB BB BB

20 BTB BTB BTB BTB - BTB BTB BB

50 BB BB BB BTB BTB - BB BB

100 BB BTB BTB BB BTB BB - BB

K - BB BB BB BB BB BB BB -

Keterangan: BTB (Berbeda Tidak Bermakna); BB (Berbeda Bermakna); K- (Kontrol negatif: etanol 96%).

F. Penentuan nilai KHM dan KBM Minyak Atsiri Daun Kemangi

Berdasarkan hasil zona hambat yang sudah diperoleh dari uji difusi

sumuran, dilakukan penelitian lebih lanjut untuk mengetahui nilai KHM dan

KBM dari minyak kemangi. Langkah awal untuk melakukan uji KHM dan KBM

adalah dengan menentukan variasi konsentrasi minyak atsiri daun kemangi yang

akan digunakan. Hal ini dilihat dari konsentrasi terkecil pada uji difusi sumuran

yang menunjukkan aktivitas penghambatan terhadap Staphylococcus epidermidis

dan Bacillus subtilis. Berdasarkan hasil uji difusi sumuran, konsentrasi terkecil yang menunjukkan aktivitas penghambatan adalah 2,5%, baik dalam menghambat

Staphylococcus epidermidis maupun Bacillus subtilis. Oleh karena itu, variasi konsentrasi yang digunakan adalah 1%; 1,5%; 2%; 2,5%; 3%; 3,5% dan 4%.

Pengamatan yang dilakukan adalah dengan melihat tingkat kekeruhan media yang

telah diberi bakteri uji dan variasi konsentrasi.

Tabel VI. Hasil uji KHM dan KBM minyak atsiri daun kemangi terhadap

Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis

Konsentrasi

Kekeruhan Staphylococcus epidermidis

Kekeruhan Bacillus subtilis

Replikasi I Replikasi II Replikasi III Replikasi I Replikasi II Replikasi III

1% ++ + ++ + + +

1,5% + - + + + +

2% - - - -

2,5% - - - -

3% - - - -

3,5% - - - -

4% - - - -

Kontrol negatif (etanol 96%)

+++ +++ +++ +++ +++ +++

Dari hasil pengamatan (Tabel VI), pada bakteri Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis tampak memiliki hasil yang sama, yaitu pada konsentrasi 1% dan 1,5% tampak kekeruhan media yang menandakan masih

adanya pertumbuhan bakteri. Sedangkan pada konsentrasi 2% - 4% media

menunjukkan kejernihan. Kemudian untuk menentukan nilai KHM dan KBM,

dari media yang mempunyai kejernihan dilakukan streak plate pada media yang steril. Apabila hasil inkubasi dari streak plate pada konsentrasi 2%; 2,5%; 3%; 3,5% dan 4% tersebut pada konsentrasi terkecil menunjukkan masih terdapat

pertumbuhan bakteri, maka konsentrasi tersebut ditentukan sebagai konsentrasi

KHM. Sedangkan bila hasil inkubasi menunjukkan tidak terdapat lagi

pertumbuhan bakteri, maka konsentrasi tersebut adalah konsentrasi KBM.

Dari hasil penelitian, nilai KHM dan KBM minyak atsiri daun kemangi

terhadap bakteri Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis menunjukkan kesamaan, yaitu dengan nilai KHM adalah 2% v/v dan nilai KBM adalah 2,5%

v/v (Tabel VI). Hasil yang menunjukkan kesamaan ini dikarenakan karakteristik

bakteri Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis yaitu sama-sama merupakan bakteri gram positif. Oleh karena itu, minyak atsiri daun kemangi ini

mampu menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus epidermidis dan

Bacillus subtilis yang memegang peranan utama menyebabkan bau di kaki. Kontrol pelarut (etanol 96%) menunjukkan media tampak keruh, yang

menandakan bahwa terjadi pertumbuhan bakteri. Hal ini menandakan bahwa

Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis, sama seperti pada uji difusi sumuran.

Bakteri Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis adalah bakteri gram positif yang mempunyai dinding sel lebih tebal dibandingkan dengan bakteri

gram negatif. Tekanan osmotik yang tinggi dari lingkungan bakteri dapat

menyebabkan pecahnya sel apabila dinding sel tidak kuat menahannya. Dinding

sel bakteri gram positif yang 90% terdiri dari peptidoglikan cukup kuat untuk

menahan tekanan osmotik tersebut (Maryati, Ratna, dan Triastuti, 2007).

Mekanisme antibakteri dari komponen minyak kemangi belum diketahui

secara pasti. Namun, eugenol yang menjadi senyawa antibakteri yang merupakan

turunan dari golongan senyawa fenol mempunyai efek dalam merusak membran

sel. Ikatan antara fenol dengan dinding sel bakteri akan mengganggu

permeabilitas membran sel dan proses transportasi, sehingga sel bakteri akan

kehilangan kation dan makromolekul sehingga mengakibatkan pertumbuhan sel

terganggu dan mengalami kematian. Senyawa fenol dengan konsentrasi yang

rendah akan menyebabkan denaturasi protein sel bakteri, sehingga protein akan

menjadi keras dan beku, pori-pori mengecil sehingga hanya sedikit senyawa

eugenol yang mampu menembus dinding sel, sedangkan dalam konsentrasi tinggi

akan menyebabkan koagulasi protein sehingga sel bakteri mengalami kematian

G. Formulasi Sediaan Gel Anti Bau Kaki Minyak Atsiri Daun Kemangi

Dasar pemilihan pembuatan sediaan gel adalah karena sediaan gel untuk

pemakaian di kaki masih sangat jarang. Selain itu, gel dapat memberikan sensasi

dingin sehingga dapat memberikan kenyamanan kepada pasien saat diaplikasikan

di kulit kaki. Sediaan gel mempunyai aliran tiksotropik dan pseudoplastik, yaitu

gel akan berbentuk padat saat penyimpanan dan akan segera mencair bila

diberikan shear stress yaitu pengocokan. Untuk membentuk suatu massa gel yang baik dibutuhkan bahan pembentuk gel yang tidak terlalu banyak, dan tidak

mengalami perubahan viskositas yang drastis saat penyimpanan, sehingga mudah

dioleskan dan dicuci (Boesro, dkk, 2007 dan Christina, dkk, 2007).

Penggunaan sediaan topikal untuk aplikasi yang meluas pada orang

dewasa adalah maksimum terdiri dari 25% minyak atsiri di sediaan, namun bila

minyak mengandung fenol atau aldehid yang kaya akan minyak, konsentrasi tidak

boleh melebihi 20%. Konsentrasi dosis tinggi hanya dapat digunakan pada jangka

pendek tidak pada jangka panjang, karena akan menimbulkan resistensi dari

bakteri, sehingga yang dapat digunakan adalah konsentrasi dengan dosis rendah

pada penggunaan jangka panjang (Bensouilah and Philippa, 2006). Konsentrasi

minyak kemangi yang dimasukkan dalam sediaan adalah 15% terhadap jumlah

total sediaan. Dalam formula sediaan gel dipilih konsentrasi minyak kemangi 15%

karena berdasarkan hasil uji difusi sumuran konsentrasi minyak atsiri daun

kemangi 15% memiliki zona hambat yang paling besar terhadap bakteri

Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis. Selain itu, berdasarkan karakteristik tingkat keaktifan suatu diameter bakteri dan jumlah maksimal

konsentrasi minyak atsiri yang dapat diformulasikan ke dalam sediaan, maka

dipilihlah konsentrasi 15% yang akan dimasukkan ke dalam formulasi gel anti bau

pada kaki. Berdasarkan diameter zona hambat minyak atsiri daun kemangi 15%

termasuk ke dalam golongan yang cukup aktif sampai aktif, dan gel anti bau pada

kaki ini bukan untuk membunuh bakteri penyebab bau, tetapi hanya untuk

menghambat pertumbuhan bakteri, mengingat kedua bakteri ini merupakan flora

normal di kulit.

Gelling agent yang digunakan adalah Carbopol 940® untuk membatasi

pergerakan minyak daun kemangi sehingga pelepasan obat dapat secara

perlahan-lahan. Carbomer saat didispersikan ke dalam air akan membentuk larutan asam

yang keruh dan dapat dinetralkan dengan basa kuat, contohnya trietanolamin atau

anorganik lemah, contohnya ammonium hidroksida. Kemudian akan

meningkatkan konsistensi dan mengurangi kekeruhan (Barry, cit., Yuliani, 2005). Netralisasi berlebihan pada Carbopol® menyebabkan turunnya viskositas dari

karbomer (Voigt, 1995).

Propilenglikol merupakan suatu humektan yang berfungsi untuk

mempertahankan kandungan air di sediaan sehingga selama penyimpanan sediaan

dapat stabil dan tidak terjadi perubahan sifat fisik (Allen, 2002). Makin banyak

propilenglikol dalam suatu formula gel maka sediaan gel viskositasnya tinggi

(Yuliani, 2005).

Trietanolamin berfungsi sebagai penetral Carbopol 940® yang bersifat

asam dengan mengionisasi gugus karboksil dari Carbopol® ketika terpapar cahaya

Carbopol®. Trietanolamin juga berfungsi sebagai bahan penstabil dan

pengembang Carbopol® serta mencegah rusaknya dispersi Carbopol® yang

menyebabkan gel menjadi keruh karena terpapar cahaya (Hasyim, Faradiba, dan

Gina, 2011).

Minyak kemangi yang terjebak di dalam matriks tidak mengalami

pergerakan di dalam matriks. Pelepasan minyak ke luar dari sediaan adalah

dengan berdifusi keluar seperti polimer yang mengembang. Pelepasan minyak ini

bergantung pada dua proses simultan, yaitu perpindahan air ke matriks atau obat

yang berdifusi keluar dari gel karena adanya pengembangan dari gel. Gel yang

mengembang terus-menerus akan meningkatkan berdifusinya minyak keluar

mencapai tempat terapi (Ratner, 2004), sehingga gel yang viskositasnya semakin

tinggi, susunan matriksnya juga akan semakin rigid sehingga pelepasan obat dapat

perlahan-lahan dan lama tinggal di tempat aplikasi.

Gel minyak kemangi ini agak berminyak, berbeda dengan gel pada

umumnya. Berikut ini adalah hasil formulasi sediaan gel anti bau pada kaki

(Lampiran 9):

Penetapan pH sediaan gel penting dilakukan untuk menghindari terjadinya

iritasi di kulit saat pengaplikasian. pH yang diharapkan adalah berada pada range

4,5 – 6,5 yang merupakan pH normal kulit. Pengukuran pH dilakukan dengan menggunakan pH stick, dengan mencocokkan pada warna indikator pH.

Berdasarkan hasil pengukuran pH (Lampiran 11), diketahui bahwa rerata

pH gel anti bau kaki, yaitu 6 dan berada pada rentang pH kulit sehingga dapat

meminimalkan iritasi pada kulit.

H. Uji Sifat Fisik Sediaan Gel Anti Bau Kaki

Sifat fisik yang diuji pada penelitian ini meliputi uji viskositas dan daya

sebar. Pengukuran sifat fisik viskositas dan daya sebar sediaan gel dilakukan pada

48 jam setelah pembuatan. Dipilih waktu 48 jam karena diharapkan gel sudah

dapat membentuk sistem dengan sempurna tanpa adanya pengaruh energi geser

akibat pencampuran.

Viskositas adalah suatu sifat cairan yang berhubungan dengan hambatan

untuk mengalir, semakin besar viskositas maka semakin besar pula hambatan

untuk mengalir. Viskositas mempengaruhi pelepasan zat aktif dalam sediaan.

Viskositas yang terlalu tinggi akan menghambat minyak untuk terlepas ke tempat

aksi, sedangkan bila viskositas terlalu rendah akan susah saat pengaplikasian dan

obat tidak akan bertahan lama di kulit. Oleh karena itu, diperlukan viskositas yang

sesuai sehingga minyak dapat bergerak dan berdifusi ke luar sistem matriks

menuju tempat aksi, namun dapat tinggal lama di kulit sehingga pelepasan obat

oleh Carbopol® dan propilenglikol dengan pengaruh berbanding lurus. Viskositas

yang dapat digunakan berada di range 240-300 d.Pa.s.

Pengukuran daya sebar berpengaruh pada pengaplikasian gel di kulit.

Daya sebar dan viskositas berpengaruh pada penetrasi zat aktif ke kulit.

Pengukuran daya sebar diambil berdasarkan diameter terbesar pada double plate. Daya sebar yang diharapkan adalah 3-6 cm. Hasil pengukuran uji sifat fisik gel

anti bau pada kaki adalah sebagai berikut.

Tabel VII. Data hasil pengukuran viskositas dan daya sebar

Parameter Fisik

Sediaan Gel

Nilai parameter

� ± SD

Replikasi I Replikasi II Replikasi III

Viskositas (d.Pa.S) 250 245 250 248,330 ± 2,887

Daya sebar (cm) 5,2 4,8 4,3 4,767 ± 0,451

Dari hasil analisis statistik, data viskositas tidak terdistribusi normal

dengan nilai p-value <0,05; sedangkan hasil analisis statistik untuk uji daya sebar data terdistribusi secara normal, nilai p-value >0,05.

I. Uji Daya Antibakteri Sediaan Gel Anti Bau Kaki Minyak Atsiri Daun Kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis Pengujian daya antibakteri gel anti bau kaki ini bertujuan untuk

mengetahui apakah minyak atsiri daun kemangi yang diformulasikan ke dalam

sediaan mampu menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus epidermidis

dan Bacillus subtilis penyebab bau pada kaki, sehingga dapat menjadi alternatif pembuatan sediaan obat yang baru.

Post hoc tes

 Kontrol (-) dan sediaan gel

 Kontrol (-) dan minyak atsiri 15%

 Kontrol (-) dan kontrol basis gel

 Kontrol (-) dan kontrol (+)

 Sediaan gel dan minyak atsiri 15%

 Sediaan gel dan kontrol basis gel

 Minyak atsiri 15% dan kontrol basis gel

 Minyak atsiri 15% dan kontrol (+)

 Kontrol basis gel dan kontrol (+)

j. Statistik uji fisik gel minyak atsiri Viskositas

BIOGRAFI PENULIS

Marsela Lotjita Parahita. Penulis lahir pada tanggal 30 Oktober 1991 di Pringsewu, Lampung, merupakan anak ketiga dari pasangan suami-istri Ignatius Sukasworo (Alm.) dan Caecilia Sartini. Penulis memiliki dua kakak perempuan bernama Melania Chrisma Widyawarantini dan Agatha Piscesia Paskalin; dan satu adik perempuan Theresia Galuh Wandita. Penulis telah menempuh pendidikan di TK Xaverius Pringsewu tahun 1995-1997, SD Fransiskus Asisi tahun 1997-2003, SMP Xaverius Pringsewu tahun 2003-2006, SMA Xaverius Pringsewu tahun 2006-2009, dan kuliah di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta pada tahun 2009 sampai dengan tahun 2013. Selama menjadi mahasiswa penulis menjadi koordinator sie konsumsi panitia paskah tahun 2010, sie DDU panitia PPnEC tahun 2010, dan sie humas panitia PP tahun 2011. Penulis mendapatkan pengalaman sebagai asisten praktikum Farmasi Fisika dan praktikum Biofarmasetika pada tahun 2013.

xviii INTISARI

Minyak kemangi (Ocimum basilicum L.) memiliki daya antibakteri terhadap bakteri penyebab bau pada kaki. Eugenol adalah senyawa di daun kemangi yang mempunyai aktivitas sebagai antibakteri. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui daya antibakteri minyak kemangi dan gel minyak kemangi dalam menghambat bakteri Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis.

Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental murni dengan rancangan penelitian acak lengkap pola searah. Tahapan penelitian meliputi uji daya antibakteri minyak atsiri daun kemangi terhadap beberapa variasi konsentrasi dengan difusi sumuran; dilanjutkan dengan penentuan nilai KHM dan KBM dengan dilusi padat, dan pengujian daya antibakteri gel minyak kemangi. Data yang diperoleh dianalisis menggunakan uji normalitas Shapiro Wilk, dilanjutkan dengan uji Kruskal-Wallis dan uji Wilcoxon menggunakan program R 2.14.1.

Berdasarkan hasil penelitian, minyak kemangi mempunyai kemampuan menghambat bakteri Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis. Nilai KHM dan KBM minyak atsiri daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis berturut-turut adalah 2% v/v dan 2.5% v/v, dan terhadap Bacillus subtilis, yaitu berturut-turut 2%v/v dan 2.5% v/v. Daya antibakteri gel minyak kemangi dan minyak kemangi 15% tidak berbeda bermakna.

Kata kunci: minyak kemangi, Staphylococcus epidermidis, Bacillus subtilis, gel, antibakteri

xix ABSTRACT

Basil oil (Ocimum basilicum L.) has antibacterial power against odor-causing bacteria on the feet. Eugenol in basil leaves is compound that has an activity as an antibacterial antibacterial activity. The aim of this study was to determine the antibacterial gel basil oil and basil oil in inhibiting the bacteria Staphylococcus epidermidis and Bacillus subtilis.

This study was an experimental study design which had one way complete random design. Research began with a study of antibacterial activity of essential oils of basil leaves on some variation of the concentration with diffusion wells; followed by determination of MIC and MBC values with solid dilution; gel of basil leave oils has also tested in terms of antibacterial activity against Staphylococcus epidermidis and Bacillus subtilis. Data were analyzed using the Shapiro Wilk normality test, followed by Kruskal-Wallis test and Wilcoxon test by using R 2.14.1 program.

The research result of basil oil had the ability to inhibit the bacteria Staphylococcus epidermidis and Bacillus subtilis. MIC and MBC values of basil essential oils against Staphylococcus epidermidis that are 2% v/v and 2.5% v/v, and against Bacillus subtilis that are 2% v/v and 2.5% v/v. Antibacterial activity of gel basil oil and 15% basil oil was not significantly different.

Keywords: basil oil, Staphylococcus epidermidis, Bacillus subtilis, gel, antibacteria