Dosis III : 360 mgkg BB x 1,78 = 640,8 mgkg BB
Dosis IV : 640,8 mgkg BB x 1,78 = 1140,6 mgkg BB
7. Penetapan dosis aquadest sebagai kontrol negatif
Untuk menentukan dosis aquadest sebagai kontrol negatif maka digunakan rumus :
D x BB = C x V
D x 350 g BB = 1 gml x 5 ml D
= 5 g350g BB = 0,014285 gg BB
= 14.285 mgkg BB
8. Penyiapan dan pemeliharaan hewan uji
Hewan uji yang digunakan berjumlah 50 ekor tikus 25 ekor jantan dan 25 ekor betina dari galur Sprague Dawley yang ditempatkan dalam
metabolic cage . Pada setiap metabolic cage ditempatkan satu tikus sesuai
kelompok dosis, jantan dan betina dipisahkan. Sebelum perlakuan hewan uji diadaptasikan dengan lingkungan selama 3 hari.
Hewan uji diberikan asupan pakan berupa pelet AD-2 setiap hari sebanyak 30 g selama 28 hari masa perlakuan dan 14 hari masa uji
reversibilitas. Hewan uji diberikan minum berupa air reverse osmosis RO setiap hari sebanyak 100 ml selama 28 hari masa perlakuan dan 14 hari masa
perlakuan reversibilitas. Penelitian ini telah mendapatkan Ethical Clearance dari Komisi Etik Fakultas Kedokteran Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta
Lampiran 10.
9. Pengelompokkan dan prosedur pelaksanaan toksisitas subakut
Lima puluh ekor tikus dibagi secara acak menjadi 5 kelompok, tiap kelompok terdapat 5 ekor tikus jantan dan 5 ekor tikus betina. Kelompok I
sampai kelompok IV diberi perlakuan infusa biji P. americana Mill. dengan peringkat dosis berturut-turut yaitu 202,24; 360; 640,8 dan 1140,6 mgkg BB.
Kelompok V adalah kelompok kontrol negatif yang diberi aquadest dengan dosis 1142,86 mgkg BB.
Uji toksisitas subakut dilakukan dengan cara pemberian infusa biji P. americana
Mill. satu kali sehari selama 28 hari pada hewan uji sesuai dosis pemberian di mana tikus tetap diberi makan dan minum. Pada hari ke-1,
semua tikus yang sudah dipuasakan selama 5 jam diambil darahnya melalui sinus orbital mata dan ditampung pada eppendorf, lalu dilakukan pengukuran
kadar glukosa dalam darah di Laboratorium Penelitian dan Pengujian Terpadu UGM, Yogyakarta. Pada hari ke-29, dibuat perlakuan yang sama
seperti hari pertama. Setelah itu dilanjutkan dengan pembedahan pada sebagian dari jumlah hewan uji dan dilihat histopatologis pankreas. Hewan
uji yang tersisa dipelihara selama 14 hari tanpa diberi perlakuan infusa biji P. americana
Mill. untuk melihat sifat efek toksik terbalikkan reversible atau tak terbalikkan irreversible. Pada hari ke-15 dilakukan pembedahan
terhadap hewan uji.
10. Prosedur pemusnahan hewan percobaan
