Uji Aktivitas Hepatoprotektor Ekstrak Etanol Rimpang Temu Giring (Curcuma heyneana Val) Terhadap Tikus Putih Jantan yang Dinduksi Parasetamol

Lampiran 3. Gambar Karakteristik Tumbuhan Temu Giring

Lampiran 3. (lanjutan)

Lampiran 3. (lanjutan)

Simplisia Rimpang Temu Giring

Lampiran 4. Bagan alur penelitian

Serbuk simplisia (500 g)

Ampas Perkolat

Diperkolasi menggunakanetanol 96%yang telah didestilasi

Ekstrak kental 95,32 g

Diuapkan menggunakan rotavapour

Karakterisasi ekstrak

• Penetapan kadar air

• Penetapan kadar abu total

• Penetapan kadar abu tidak larut asam Pengujian aktivitas hepatoprotektor

Pengukuran parameter biokimia ALT dan AST

Pemeriksaan kerusakan organ

hepar

• Makroskopik

Lampiran 5. Gambar mikroskopik serbuk simplisia rimpang temu giring pada perbesaran 10 x 40

Mikroskopik serbuk simplisia rimpang temu giring pada perbesaran 10 x 40

Keterangan : 1 = fragmen jaringan gabus 2 = butir pati (diperbesar) 3 = rambut penutup

4 = fragmen pembuluh kayu 5 = butir minyak atsiri 6 = fragmen parenkim

1

2

3

4

5 6

Lampiran 6. Perhitungan karakterisasi simplisia rimpang temu giring

Perhitungan Penetapan Kadar Air dari Serbuk Simplisia rimpang temu giring

% Kadar Air = Volume air

Berat Sampel x 100%

1. % Kadar Air I = 0,4

5,094x100% = 7,85%

2. % Kadar Air II = 0,5

5,075x100% = 9,85%

3. % Kadar Air III = 0,5

5,148x100% = 9,71%

% Kadar Air Rata-Rata = 7,85+ 9,85 + 9,71

3 = 9,14%

No Berat Sampel (g) Volume Air (ml) 1.

2. 3.

5,094 5,075 5,148

0,4 0,5 0,5

Lampiran 6. (lanjutan)

Perhitungan Penetapan Kadar Sari Larut Air dari Serbuk Simplisia rimpang temu giring (Lanjutan)

No Berat Sampel (g) Berat Sari (g)

1. 2. 3.

5,005 5,006 5,007

0,17 0,172 0,174

% Kadar Sari Larut Etanol = Berat Sari Berat Sampel x

100

20 x100%

1. % Kadar Sari I = 0,17

5,005 x 100

20 x100% = 16,95%

2. % Kadar Sari II = 0,172

5,006 x 100

20 x100% = 17,18%

3. % Kadar Sari III = 0,174

5,007 x 100

20 x100% = 17,38%

% Kadar Sari Larut Etanol Rata-Rata = 16,95%+ 17,18% + 11,38%

3

Lampiran 6. (lanjutan)

Perhitungan Penetapan Kadar Sari Larut Etanol dari Serbuk Simplisia rimpang temu giring (Lanjutan)

No Berat Sampel (g) Berat Sari (g) 1.

2. 3.

5,001 5,004 5,007

0,246 0,249 0,250

% Kadar Sari Larut Air = Berat Sari Berat Sampel x

100

20 x100%

1. % Kadar Sari I = 0,246

5,001 x 100

20 x100% = 24,79%

2. % Kadar Sari II = 0,249

5,004 x 100

20 x100% = 24,88%

3. % Kadar Sari III = 0,250

5,007 x 100

20 x100% = 24,96%

% Kadar Sari Larut Air Rata-Rata = 24,79%+ 24,88% + 24,96%

3

Lampiran 6. (lanjutan)

Perhitungan Penetapan Kadar Abu Total dari Serbuk Simplisia rimpang temu giring (Lanjutan)

No Berat Sampel (g) Berat Abu (g) 1.

2. 3.

2,0116 2,0069 2,0104

0,0920 0,0910 0,0909

% Kadar Abu Total = Berat Abu

Berat Sampel x100%

1. % Kadar Abu Total I = 0,0902

2,0116 x100% = 4,57%

2. % Kadar Abu Total II = 0,0910

2,0069 x100% = 4,53%

3. % Kadar Abu Total I = 0,0909

2,0104x100% = 4,52%

% Kadar Abu Total Rata-Rata = 4,57%+ 4,53% +4,52%

Lampiran 6. (lanjutan)

Perhitungan Penetapan Kadar Abu tidak Larut Asam dari Serbuk Simplisia rimpang temu giring (Lanjutan)

No Berat Sampel (g) Berat Abu (g) 1.

2. 3.

2,0116 2,0069 2,0104

0,0335 0,0352 0,0316

% Kadar Abu tidak Larut Asam = Berat Abu

Berat Sampel x100%

1. % Kadar Abu Total I = 0,0335

2,0116 x100% = 1,67%

2. % Kadar Abu Total II = 0,0352

2,0069 x100% = 1,75%

3. % Kadar Abu Total I = 0,0316

2,0104 x100% = 1,57%

% Kadar Abu tidak Larut Asam Rata-Rata

= 1,67%+ 1,75% + 1,57%

Lampiran 7. Perhitungan karakterisasi EERTG Perhitungan Penetapan Kadar Air dari EERTG

No Berat Sampel (g) Volume Air (ml) 1.

2. 3.

5,007 5,018 5,012

0,2 0,2 0,2

% Kadar Air = Volume air

Berat Sampel x 100% 1. % Kadar Air I = 0,2

5,007x100% = 3,94%

2. % Kadar Air II = 0,2

5,018x100% = 3,99%

3. % Kadar Air III = 0,2

5,012x100% = 3,99%

% Kadar Air Rata-Rata = 3,94+ 3,99 + 3,99

Lampiran 7. (lanjutan)

Perhitungan Penetapan Kadar Abu Total dari EERTG (Lanjutan)

No Berat Sampel (g) Berat Abu (g) 1.

2. 3.

2,0003 2,0004 2,0004

0,0080 0,0081 0,0088

% Kadar Abu Total = Berat Abu

Berat Sampel x100%

1. % Kadar Abu Total I = 0,0080

2,0003 x100% = 0,40%

2. % Kadar Abu Total II = 0,0081

2,0004 x100% = 0,41%

3. % Kadar Abu Total I = 0,0088

2,0004x100% = 0,44%

% Kadar Abu Total Rata-Rata = 0,40%+0,41% +0,44%

Lampiran 7. (lanjutan)

Perhitungan Penetapan Kadar Abu tidak Larut Asam dari EERTG (Lanjutan)

No Berat Sampel (g) Berat Abu (g) 1.

2. 3.

2,0003 2,0004 2,0004

0,0020 0,0022 0,0020

% Kadar Abu tidak Larut Asam = Berat Abu

Berat Sampel x100%

1. % Kadar Abu Total I = 0,0020

2,0003 x100% = 0,10%

2. % Kadar Abu Total II = 0,0022

2,0004 x100% = 0,11%

3. % Kadar Abu Total I = 0,0020

2,0004 x100% = 0,10%

% Kadar Abu tidak Larut Asam Rata-Rata

= 0,10%+0,11% + 0,10%

Lampiran 8. Gambar proses pengambilan sampel darah

Pengambilan darah melalui ekor

Lampiran 8. (lanjutan).

Serum setelah sentrifuge

Lampiran 9. Volume maksimum sesuai jalur pemberian dan konversi dosis. 1. Tabel volume maksimum larutan sediaan uji yang dapat diberikan pada hewan

uji (Harmita dan Radji, 2008)

Jenis hewan uji

Volume maksimal (ml) sesuai jalur pemberian

iv. im. ip. sc. po.

Mencit (20-30 g) Tikus (100 g) Hamster (50 g) Marmut (250 g) Merpati (300 g) Kelinci (2,5 kg) Kucing (3 kg) Anjing (5 kg)

0,5 0,1 - - 2 5-10, 5-10 10-20 0,05 0,1 0,1 0,25 0,5 0,5 1 5 1 2-5 1-2 2-5 2 10-20 10-20 20-30 0,5-1 2-5 2,5 5 2 5-10 5-10 10 1 5,0 2,5 10 10 20 50 100

2. Tabel konversi dosis antara jenis hewan dengan manusia (Harmita dan Radji, 2008 Mencit 20 g Tikus 200 g Marmut 400 g Kelinci 1,2 kg Kera 4 kg Anjing 12 kg Manusia 70 kg Mencit

20g 1,0 7,0 12,25 27,8 64,1 124,2 387,9 Tikus

200g 0,14 1,0 1,74 3,9 9,2 17,8 56,0

Marmut

400 g 0,08 0,57 1,0 2,25 5,2 10,2 31,5

Kelinci

1,2 kg 0,04 0,25 0,44 1,0 2,4 4,5 14,2

Kera

4 kg 0,016 0,11 0,19 0,42 1,0 1,9 6,1 Anjing

12 kg 0,008 0,06 0,10 0,22 0,52 1,0 3,1

Manusia

Lampiran 10. Perhitungan volume pemberian EERTG dosis 5 mg/kg bb, 25 mg/kg bb, 125 mg/kg bb dan 625 mg/kg bb serta parasetamol dosis 2 g/kg bb (serbuk), dan katekin dosis 2 mg/kg bb.

1. EERTG dosis 5 mg/kg bb Berat badan tikus = 200 g

Dosis pemberian = 200 g � 5 mg

1000 = 1 mg

Konsentrasi ekstrak = 10 mg/ml

Volume pemberian = 1 mg

10 mg x 1 ml = 0,1 ml.

2. EERTG dosis 25 mg/kg bb Berat badan tikus = 200 g

Dosis pemberian = 200 g � 25 mg

1000 = 5 mg

Konsentrasi ekstrak = 10 mg/ml

Volume pemberian = 5 mg

10 mg x 1 ml = 0,5 ml.

3. EERTG dosis 125 mg/kg bb Berat badan tikus = 200 g

Dosis pemberian = 200 g � 125 mg

1000 = 25 mg

Konsentrasi ekstrak = 10 mg/ml

Volume pemberian = 25 mg

10 mg x 1 ml = 2,5 ml.

4. EERTG dosis 625 mg/kg bb Berat badan tikus = 200 g

Dosis pemberian = 200 g � 625 mg

1000 = 125 mg

Konsentrasi ekstrak = 50 mg/ml

Volume pemberian = 125 mg

50mg x 1 ml = 2,5 ml.

5. Dosis parasetamol yang digunakan 2 g/kg bb, maka volume pemberiannya adalah:

Dosis untuk 200 g tikus = 2000 mg

1000 x 200 g = 400 mg

Konsentrasi parasetamol = 200 mg/ml

Volume pemberian = 400mg

200mg x 1 ml = 2 ml

6. Dosis katekin yang digunakan 2 mg/kg bb, maka volume pemberiannya adalah:

Dosis untuk 200 g tikus = 2 mg

1000 x 200 g = 0,4 mg

Konsentrasi lar. katekin = 1 mg/ml

Volume pemberian = 0,4 mg

1 mg x 1 ml = 0,4 ml

7. Konversi dosis efektif EERTG 25 mg/kg bb pada manusia 25 mg/kg bb 25 mg/1000 g bb

25 mg/1000g bb 5 mg/200 g tikus

Konversi dosis dari tikus 200 g untuk manusia 70 kg adalah 56,0, maka: 5 mg/200 g tikus x 56,0 = 280 mg/70 kg manusia.

Lampiran 15. Data analisis statistik SPSS

Oneway

Descriptives

KADAR_SGP T

N Mean

Std. Deviation

Std. Error

95% Confidence Interval for Mean

Minimu m Maximu m Lower Bound Upper Bound dosis 5 mg/kg

bb 5 93.00 9.747 4.359 80.90 105.10 81 104 dosis 25

mg/kg bb 5 62.40 8.678 3.881 51.63 73.17 51 72 dosis 125

mg/kg bb 5 49.60 13.939 6.234 32.29 66.91 28 64 dosis 625

mg/kg bb 5 35.80 12.112 5.417 20.76 50.84 19 48 cmc Na 0,5% 5 334.40 217.567 97.299 64.26 604.54 112 671 katekin 2

mg/kg bb 5 42.60 16.876 7.547 21.65 63.55 28 71 tanpa

perlakuan 5 46.00 6.928 3.098 37.40 54.60 39 55 Total 35 94.83 125.812 21.266 51.61 138.05 19 671

Test of Homogeneity of Variances

KADAR_SGPT Levene

Statistic df1 df2 Sig.

10.178 6 28 .000

ANOVA

KADAR_SGPT

Sum of

Squares df Mean Square F Sig. Between Groups 345457.371 6 57576.229 8.365 .000 Within Groups 192717.600 28 6882.771

Lampiran 15. (lanjutan)

KADAR_SGPT Tukey HSD

(I) KELOMPOK (J) KELOMPOK

Mean Difference

(I-J)

Std.

Error Sig.

95% Confidence Interval Lower

Bound

Upper Bound dosis 5 mg/kg

bb

dosis 25 mg/kg

bb 30.600 52.470 .997 -135.84 197.04 dosis 125 mg/kg

bb 43.400 52.470 .980 -123.04 209.84 dosis 625 mg/kg

bb 57.200 52.470 .926 -109.24 223.64 cmc Na 0,5% -241.400* 52.470 .001 -407.84 -74.96 katekin 2 mg/kg

bb 50.400 52.470 .958 -116.04 216.84 tanpa perlakuan 47.000 52.470 .970 -119.44 213.44 dosis 25 mg/kg

bb

dosis 5 mg/kg

bb -30.600 52.470 .997 -197.04 135.84 dosis 125 mg/kg

bb 12.800 52.470 1.000 -153.64 179.24 dosis 625 mg/kg

bb 26.600 52.470 .999 -139.84 193.04 cmc Na 0,5% -272.000* 52.470 .000 -438.44 -105.56 katekin 2 mg/kg

bb 19.800 52.470 1.000 -146.64 186.24 tanpa perlakuan 16.400 52.470 1.000 -150.04 182.84 dosis 125 mg/kg

bb

dosis 5 mg/kg

bb -43.400 52.470 .980 -209.84 123.04 dosis 25 mg/kg

bb -12.800 52.470 1.000 -179.24 153.64 dosis 625 mg/kg

bb 13.800 52.470 1.000 -152.64 180.24 cmc Na 0,5% -284.800* 52.470 .000 -451.24 -118.36 katekin 2 mg/kg

tanpa perlakuan 3.600 52.470 1.000 -162.84 170.04 dosis 625 mg/kg

bb

dosis 5 mg/kg

bb -57.200 52.470 .926 -223.64 109.24 dosis 25 mg/kg

bb -26.600 52.470 .999 -193.04 139.84 dosis 125 mg/kg

bb -13.800 52.470 1.000 -180.24 152.64 cmc Na 0,5% -298.600* 52.470 .000 -465.04 -132.16 katekin 2 mg/kg

bb -6.800 52.470 1.000 -173.24 159.64 tanpa perlakuan -10.200 52.470 1.000 -176.64 156.24 cmc Na 0,5% dosis 5 mg/kg

bb 241.400

*

52.470 .001 74.96 407.84 dosis 25 mg/kg

bb 272.000

*

52.470 .000 105.56 438.44 dosis 125 mg/kg

bb 284.800

*

52.470 .000 118.36 451.24 dosis 625 mg/kg

bb 298.600

*

52.470 .000 132.16 465.04 katekin 2 mg/kg

bb 291.800

*

52.470 .000 125.36 458.24 tanpa perlakuan 288.400* 52.470 .000 121.96 454.84 katekin 2 mg/kg

bb

dosis 5 mg/kg

bb -50.400 52.470 .958 -216.84 116.04 dosis 25 mg/kg

bb -19.800 52.470 1.000 -186.24 146.64 dosis 125 mg/kg

bb -7.000 52.470 1.000 -173.44 159.44 dosis 625 mg/kg

bb 6.800 52.470 1.000 -159.64 173.24 cmc Na 0,5% -291.800* 52.470 .000 -458.24 -125.36 tanpa perlakuan -3.400 52.470 1.000 -169.84 163.04 tanpa perlakuan dosis 5 mg/kg

bb -47.000 52.470 .970 -213.44 119.44 dosis 25 mg/kg

KADAR_SGPT

Tukey HSD

KELOMPOK N

Subset for alpha = 0.05

1 2

dosis 625 mg/kg bb 5 35.80 katekin 2 mg/kg bb 5 42.60 tanpa perlakuan 5 46.00 dosis 125 mg/kg bb 5 49.60 dosis 25 mg/kg bb 5 62.40 dosis 5 mg/kg bb 5 93.00

cmc Na 0,5% 5 334.40

Sig. .926 1.000

Means for groups in homogeneous subsets are displayed. dosis 125 mg/kg

bb -3.600 52.470 1.000 -170.04 162.84 dosis 625 mg/kg

bb 10.200 52.470 1.000 -156.24 176.64 cmc Na 0,5% -288.400* 52.470 .000 -454.84 -121.96 katekin 2 mg/kg

bb 3.400 52.470 1.000 -163.04 169.84 *. The mean difference is significant at the 0.05

Lampiran 15. (lanjutan).

Oneway

Descriptives

KADAR_SGO T

N Mean

Std. Deviation

Std. Error

95% Confidence Interval for Mean

Minimu m Maximu m Lower Bound Upper Bound dosis 5 mg/kg

bb 5 121.60 49.202 22.004 60.51 182.69 72 200 dosis 25

mg/kg bb 5 75.60 8.355 3.736 65.23 85.97 66 85 dosis 125

mg/kg bb 5 59.60 12.033 5.381 44.66 74.54 41 71 dosis 625

mg/kg bb 5 45.60 12.973 5.802 29.49 61.71 30 62 cmc Na 0.5% 5 296.80 78.017 34.890 199.93 393.67 208 417 katekin 2

mg/kg bb 5 52.00 9.110 4.074 40.69 63.31 43 67 tanpa

perlakuan 5 35.20 4.324 1.934 29.83 40.57 30 40 Total 35 98.06 92.398 15.618 66.32 129.80 30 417

Test of Homogeneity of Variances

KADAR_SGOT

Levene Statistic df1 df2 Sig.

ANOVA

KADAR_SGOT

Sum of

Squares df Mean Square F Sig. Between Groups 254301.486 6 42383.581 32.994 .000 Within Groups 35968.400 28 1284.586

Total 290269.886 32

Dependent Variable:KADAR_SGOT (I) KELOMPOK (J) KELOMPOK Mean Difference (I-J) Std. Error Sig.

95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound Tukey HSD

dosis 5 mg/kg bb

dosis 25

mg/kg bb 46.000 22.668 .420 -25.91 117.91 dosis 125

mg/kg bb 62.000 22.668 .126 -9.91 133.91 dosis 625

mg/kg bb 76.000 *

22.668 .033 4.09 147.91

cmc Na 0.5% -175.200* 22.668 .000 -247.11 -103.29 katekin 2

mg/kg bb 69.600 22.668 .063 -2.31 141.51 tanpa

perlakuan 86.400 *

22.668 .011 14.49 158.31

dosis 25 mg/kg bb

dosis 5 mg/kg

bb -46.000 22.668 .420 -117.91 25.91 dosis 125

mg/kg bb 16.000 22.668 .991 -55.91 87.91 dosis 625

mg/kg bb 30.000 22.668 .835 -41.91 101.91 cmc Na 0.5% -221.200* 22.668 .000 -293.11 -149.29 katekin 2

mg/kg bb 23.600 22.668 .940 -48.31 95.51 tanpa

perlakuan 40.400 22.668 .570 -31.51 112.31 dosis 125

mg/kg bb

dosis 5 mg/kg

bb -62.000 22.668 .126 -133.91 9.91 dosis 25

mg/kg bb -16.000 22.668 .991 -87.91 55.91 dosis 625

mg/kg bb 14.000 22.668 .996 -57.91 85.91 cmc Na 0.5% -237.200* 22.668 .000 -309.11 -165.29

katekin 2

mg/kg bb 7.600 22.668 1.000 -64.31 79.51 tanpa

perlakuan 24.400 22.668 .930 -47.51 96.31 dosis 625

mg/kg bb

dosis 5 mg/kg

bb -76.000

*

22.668 .033 -147.91 -4.09

dosis 25

mg/kg bb -30.000 22.668 .835 -101.91 41.91 dosis 125

mg/kg bb -14.000 22.668 .996 -85.91 57.91 cmc Na 0.5% -251.200* 22.668 .000 -323.11 -179.29 katekin 2

mg/kg bb -6.400 22.668 1.000 -78.31 65.51 tanpa

perlakuan 10.400 22.668 .999 -61.51 82.31 cmc Na 0.5% dosis 5 mg/kg

bb 175.200

*

22.668 .000 103.29 247.11

dosis 25

mg/kg bb 221.200 *

22.668 .000 149.29 293.11

dosis 125

mg/kg bb 237.200 *

22.668 .000 165.29 309.11

dosis 625

mg/kg bb 251.200 *

22.668 .000 179.29 323.11

katekin 2

mg/kg bb 244.800 *

22.668 .000 172.89 316.71

tanpa

perlakuan 261.600 *

22.668 .000 189.69 333.51

katekin 2 mg/kg bb

dosis 5 mg/kg

bb -69.600 22.668 .063 -141.51 2.31 dosis 25

mg/kg bb -23.600 22.668 .940 -95.51 48.31 dosis 125

mg/kg bb -7.600 22.668 1.000 -79.51 64.31 dosis 625

cmc Na 0.5% -244.800* 22.668 .000 -316.71 -172.89 tanpa

perlakuan 16.800 22.668 .989 -55.11 88.71 tanpa

perlakuan

dosis 5 mg/kg

bb -86.400

*

22.668 .011 -158.31 -14.49

dosis 25

mg/kg bb -40.400 22.668 .570 -112.31 31.51 dosis 125

mg/kg bb -24.400 22.668 .930 -96.31 47.51 dosis 625

mg/kg bb -10.400 22.668 .999 -82.31 61.51 cmc Na 0.5% -261.600* 22.668 .000 -333.51 -189.69 katekin 2

mg/kg bb -16.800 22.668 .989 -88.71 55.11 Bonferro

ni

dosis 5 mg/kg bb

dosis 25

mg/kg bb 46.000 22.668 1.000 -29.72 121.72 dosis 125

mg/kg bb 62.000 22.668 .225 -13.72 137.72 dosis 625

mg/kg bb 76.000 *

22.668 .048 .28 151.72 cmc Na 0.5% -175.200* 22.668 .000 -250.92 -99.48 katekin 2

mg/kg bb 69.600 22.668 .099 -6.12 145.32 tanpa

perlakuan 86.400 *

22.668 .015 10.68 162.12 dosis 25

mg/kg bb

dosis 5 mg/kg

bb -46.000 22.668 1.000 -121.72 29.72 dosis 125

mg/kg bb 16.000 22.668 1.000 -59.72 91.72 dosis 625

mg/kg bb 30.000 22.668 1.000 -45.72 105.72 cmc Na 0.5% -221.200* 22.668 .000 -296.92 -145.48 katekin 2

tanpa

perlakuan 40.400 22.668 1.000 -35.32 116.12 dosis 125

mg/kg bb

dosis 5 mg/kg

bb -62.000 22.668 .225 -137.72 13.72 dosis 25

mg/kg bb -16.000 22.668 1.000 -91.72 59.72 dosis 625

mg/kg bb 14.000 22.668 1.000 -61.72 89.72 cmc Na 0.5% -237.200* 22.668 .000 -312.92 -161.48 katekin 2

mg/kg bb 7.600 22.668 1.000 -68.12 83.32 tanpa

perlakuan 24.400 22.668 1.000 -51.32 100.12 dosis 625

mg/kg bb

dosis 5 mg/kg

bb -76.000

*

22.668 .048 -151.72 -.28 dosis 25

mg/kg bb -30.000 22.668 1.000 -105.72 45.72 dosis 125

mg/kg bb -14.000 22.668 1.000 -89.72 61.72 cmc Na 0.5% -251.200* 22.668 .000 -326.92 -175.48 katekin 2

mg/kg bb -6.400 22.668 1.000 -82.12 69.32 tanpa

perlakuan 10.400 22.668 1.000 -65.32 86.12 cmc Na 0.5% dosis 5 mg/kg

bb 175.200

*

22.668 .000 99.48 250.92 dosis 25

mg/kg bb 221.200 *

22.668 .000 145.48 296.92 dosis 125

mg/kg bb 237.200 *

22.668 .000 161.48 312.92 dosis 625

mg/kg bb 251.200 *

22.668 .000 175.48 326.92 katekin 2

mg/kg bb 244.800 *

tanpa

perlakuan 261.600 *

22.668 .000 185.88 337.32 katekin 2

mg/kg bb

dosis 5 mg/kg

bb -69.600 22.668 .099 -145.32 6.12 dosis 25

mg/kg bb -23.600 22.668 1.000 -99.32 52.12 dosis 125

mg/kg bb -7.600 22.668 1.000 -83.32 68.12 dosis 625

mg/kg bb 6.400 22.668 1.000 -69.32 82.12 cmc Na 0.5% -244.800* 22.668 .000 -320.52 -169.08 tanpa

perlakuan 16.800 22.668 1.000 -58.92 92.52 tanpa

perlakuan

dosis 5 mg/kg

bb -86.400

*

22.668 .015 -162.12 -10.68 dosis 25

mg/kg bb -40.400 22.668 1.000 -116.12 35.32 dosis 125

mg/kg bb -24.400 22.668 1.000 -100.12 51.32 dosis 625

mg/kg bb -10.400 22.668 1.000 -86.12 65.32 cmc Na 0.5% -261.600* 22.668 .000 -337.32 -185.88 katekin 2

mg/kg bb -16.800 22.668 1.000 -92.52 58.92 *. The mean difference is significant at

Homogeneous Subsets

KADAR_SGOT

KELOMPOK N

Subset for alpha = 0.05

1 2 3

Tukey HSDa tanpa perlakuan 5 35.20 dosis 625 mg/kg bb 5 45.60

katekin 2 mg/kg bb 5 52.00 52.00 dosis 125 mg/kg bb 5 59.60 59.60 dosis 25 mg/kg bb 5 75.60 75.60

dosis 5 mg/kg bb 5 121.60

cmc Na 0.5% 5 296.80

Sig. .570 .063 1.000

Means for groups in homogeneous subsets are displayed. a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 5,000.

DAFTAR PUSTAKA

Aggarwal, B.B., Sundaram, C., dan Malani, N. (2006). Curcumin: The Indian Solid Gold. J. Sciences. Vacte. 5(1): 332.

Aluko, B.T., Oloyede, O.I., dan Afolayan, A.J. (2013). Hepatoprotective Activity Of Ocimum americanum L Leaves Against Paracetamol-Induced Liver Damage In Rats.American Journal of the Sciences. 1(2): 37-42.

Anyasor, G.H., Matthew, O.T., dan Fadairo, O. (2013). Costus Afer Stem Extracs Protected Aganist Paracetamol Induced Oxidative Stress And Liver Damage In Rats.Spatula DD. 3(4): 147-154.

Arhoghro, E.M., Ekpo, K.E., Anosike, E.O., dan Ibeh, G.O. (2009). Effect of Aqueos Extract of Bitter Leaf (Vernonia amygdalina Del) on Carbon Tetrachlorida (CCl4) Induced Liver Damaged in Albino Wistar Rats. European J. ScientificRes. 26(1): 122 – 130.

Armansyah, T.R., Sutriana, A., Aliza, D., Vanda, H.,dan Rahmi, E. (2010). Aktivitas Hepatoprotektif Ekstrak Etanol Daun Kucing-kucingan (Acalypha indica L.) pada Tikus Putih (Rattus novergicus) yang Diinduksi Parasetamol.Jurnal Ilmiah Ilmu-Ilmu Peternakan. 13(6): 292 – 297.

Baron, D.N. (1992). Kapita Selekta Patologi Klinik. Edisi Keempat. Penerjemah. Pilur Andrianto, dan Joko Gunawan. Terjemahan dari: A Short Textbook of Chemical Pathology. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC. Hal. 113-231.

Blum, A.L., Dolle, W., dan Kortum, K. (1977). Treatment of Acute Viral Hepatitis with (+)-cyanidol 3. Lancet. 2(12): 1153 – 1155.

Citrosupomo, G. (1991). Taksonomi Tumbuhan (Spermatophyta). Cetakan 3. Yogyakarta: Gadjah Mada University Press. Hal. 444-445.

Damjanov, I. (2000). Buku Teks dan Atlas Berwarna Histologi. Alih Bahasa Valen Brahm. Jakarta: Penerbit Widya Medika. Hal. 213 – 217.

Departemen Kesehatan dan Kesejahteraan Sosial RI. (2001). Inventaris Tanaman Obat Indonesia. Jilid I. Jakarta: Departemen Kesehatan dan Kesejahteraan Sosial RI. Hal. 105 – 106.

Depkes R.I. (1979). Farmakope Indonesia. Edisi Ketiga. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Hal. 9- 33.

Ditjen POM. (1989). Materia Medika Indonesia. Jilid V. Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Hal. 169 – 171.

Ditjen POM. (1995). Materia Medika Indonesia. Edisi VI. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Hal. 323-325.

Ditjen POM. (2000). Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Cetakan pertama. Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Hal. 5, 10-11.

Donatus, I.A., Suyjipto, N.S.,dan Wahyono, D. (1983). Pengaruh Cairan Yang Keluar Dari Batang Bambusa vulgaris Schard Terhadap Regenerasi Sel-Sel Hepar Tikus Putih Jantan. Risalah Simposium Penelitian Tumbuhan Obat III. Skripsi. Yogyakarta: Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada.

Edward, Z. (2009). The Function Utilization of Gambier (Uncaria gambir) as The Hepatoprotector. Riset Kimia. 1(14): 25 – 28.

Eroschenko, V.P. (2004). Atlas Histologi. Edisi ke-9. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC. Hal. 249 – 253.

Fawceet, D.W. (2002). Buku Ajar Histologi. Edisi VII. Alih BahasaJaren Tambayong. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC. Hal. 145 – 151.

Flore, M.S.H. (1998). Atlas of Human Histology. Edisi V. Philadelphia: Lea and Febiger. Hal. 93 – 100.

Gaze, D.C. (2007). The Role of Existing and Novel Cardiac Biomarkers for Cardioprotection. Curr Opin Invest Drugs. 8(9): 711 – 712.

Goodman, A., dan Gilman, H. (2007). Dasar Farmakologi Terapi. Edisi kesepuluh. Volume 1. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC. Hal. 682 – 684.

Hartono, Nurwati, I., Ikasari, F., dan Wiryanto. (2005). Pengaruh Ekstrak Rimpang Kunyit (Curcuma domestica Val) Terhadap Peningkatan Kadar AST dan ALT Tikus Putih (Rattus novergicus) Akibat Pemberian Parasetamol. Biofarmasi. 3(2): 57 – 60.

Hurkadale, P.J., Shelar, P.A., Palled, S.G., Mandavkar, Y.D., dan Khedkar, A.S. (2012). Hepatoprotevtive Activity Of Amorphophallus Paeoniifolius Tubers Against Paracetamol-Induced Liver Damage In Rats. Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine. 21(2): S238-S242.

Husadha, Y. (1996). Fisiologi dan Pemeriksaan Hepar. Dalam: Buku Ajar Ilmu Penyakit Dalam. Jilid 1. Edisi ketiga. Jakarta: Balai Penerbit FKUI. Hal. 224 – 226.

Ibrahim, M., Khaja, M.N.,dan Aara, A. (2008).Hepatoprotective Activity of Sapindus mukorossi and Rheum emodi extracts: In Vitro and In VivoStudies. World J. Gastroenterology. 14(16): 2566 – 2571.

Jaeschke, H., dan Bajt, M.L. (2006). Intracelluler Signaling Mechanism Of Acetaminophen-Induced Liver Cell Death. Toxicology Sciences. 89(1): 31-41.

James, L.P., Mayenix, P.R., dan Hinson, J.A. (2003). Acetaminophen-Induced Hepatotoxicity. Journal Of Drug Metabolism and Dispotition. 13(12): 1499-1506.

Junqueira, L.C.J., dan Kelley, R.O. (1992). Histologi Dasar. Edisi III. Alih bahasa Jack Tambayong. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC. Hal. 85 – 99. Katzung, B.G. (2014). Farmakologi Dasar dan Klinik. Penerjemah dan Editor:

Bagian Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Erlangga. Edisi XII. Jakarta: Penerbit Salemba Medika. Hal.53 - 64.

Kristina, N.N., Noveriza, R., Syahid, S.F., dan Rizal, M. (2006). Peluang Peningkatan Kadar Kurkumin Pada Tanaman Kunyit dan Temulawak. Jakarta. Dalam

Lin, S.C., Chung, T.C., Ueng, T.H., Lin, Y.H., Hsu, L., Chiang, C.L., dan Lin, C.C. (2000). The Hepatoprotective Effects of Solanum alatum Moench. on Acetaminophen-Induced Hepatotoxicity in Mice. World Scientific. 15(149): 123- 126.

Diakses tanggal 1November 2009.

Lu, F.C. (1994). Toksikologi Dasar Asas, Organ Sasaran, dan Penilaian Risiko. Edisi ke-2. Jakarta: UIP. Hal. 206 – 217.

Luft, R. (1995). The Development of Mitochondrial Medicine Biochimia et Biophysica Acta. Clinical Pathology. 9(1271): 1-6.

Muhlisah, F. (1999). Temu-temuan dan Empon-empon: Budi Daya dan Manfaatnya. Yogyakarta: Penerbit Kanisius. Hal. 53 – 54.

Mursito, B. (2003). Ramuan Tradisional Untuk Pelangsing Tubuh. Jakarta: Penerbit Penebar Swadaya. Hal. 82-83.

Mycek, M.J., Haevery, R.A., dan Champe, P.C. (2001). Farmakologi: Ulasan Bergambar. Penerjemah: Amru Agoes. Edisi II. Jakarta: Penerbit Widya Medika. Hal. 209.

National Agency of Drug and Food Control The Republic of Indonesia. (2004). Monograph of Indonesian Medisinal Plant Extracts. Volume 1. Jakarta: NADFC RI. Hal. 29 – 31.

Neal, M.J (2006). At a Galance Farmakologi Medis. Edisi kelima. Jakarta: Penerbit Erlangga. Hal. 14 – 15.

Pal, D., dan Nindhi, M. (2005). CNS Activities of Celesia coromandeliane Vahl. in Mice. Acta Poloniae Pharmaceutica. 62(5): 355-261.

Parmar, N.S., dan Prakash, S. (2006). Screening Methods in Pharmacology. Ahmedadab: Alpha Science International. Hal. 297.

Pradita, D. (2010). Uji Efek Ekstrak Rimpang Temu Giring (Curcuma heyneana

Valeton & Zijp.) Sebagai Penurun Kadar Kolesterol Darah Marmot Jantan

(Cavia porcellus). Skripsi. Medan:Fakultas Farmasi Universitas Sumatera

Utara.

Prasetya, R.B. (2011). Pengaruh Ekstrak Rimpang Temu Giring (Curcuma heyneana Valeton & zijp.) Terhadap Aktivitas Fagositosis pada mencit Jantan. Skripsi. Medan: Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara.

Price, S.A., dan Wilson, L.M. (1997). Patofisiologi Konsep Klinis Proses-proses Penyakit. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC. Hal. 426 – 433.

Rahmi, E.P. (2011). Efek Immunodulator Ekstrak Rimpang Temu Giring (Curcuma

heyneana Valeton & Zijp.) Terhadap Respon Hipersensitivitas Tipe Lambat

DAN Titer Antibodi Sel Imun Mencit Jantan. Skripsi. Medan: Fakultas Farmasi

Universitas Sumatera Utara.

Sacher, L., dan Person, M. (2002). Tinjauan Klinis atas Hasil Pemeriksaan Laboratorium. Edisi 11. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC. Hal. 369 – 370.

Sherlock, S. (1990). Diseases of The Liver and Biliary System. London: Blackwell Scientific Publication. Hal. 380.

Sodsai, A. (2006). Study of Immunomodulatory Effect of Curcuma comosa Roxb. Thesis for the Degree of Doctor of Philosophy. Bangkok: Mahidol University.

Sudiana, K. (2005). Teknologi Ilmu Jaringan dan Immunohistokimia. Jakarta: CV. Sagung Seto. Hal. 2.

Suyatna, F.D., Syamsudin, G.S., dan Sadikin, M. (2010). Efek Kurkumin Terhadap Aktivitas Enzim Glutation Peroksidase Mitokondria Hati Tikus Yang Diinduksi Dengan Butilhidroksiperoksida-Tersier. Sains Medika. 1(1): 16 – 23.

Thomas, C. (1998). Histologi Buku Tes dan Atlas untuk Pelajaran Patologi Umum dan Khusus. Edisi 10. Alih Bahasa, Harinja Tonang, Liliana Widjaya, dan Ismi Libertus. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC. Hal. 145 – 151.

Underwood, J.C.E. (1997). Patologi Umum dan Sistemik. Vol II. Edisi 2. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC. Hal. 224 – 230.

Vandivu, R., Krithika, A., Biplab, C., Dedeepya, P., Shoeb, N., dan Lakshmi, K.S. (2008). Evaluation of Hepatoprotective Activity of the Fruits of Coccinia grandis Linn. International Journal of Health Research. 1(3): 163-168. Widmann. (1995). Tinjauan Klinis atas Hasil Pemeriksaan Laboratorium.

Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC. Hal. 325 – 400.

Wijayakusuma, H.M. (2006). Sehat Bersama Temu Giring. Dalam http://suarakarya-online.com. Diakses tanggal 13 Agustus 2008.

Wijayakusuma,H.M. (2005). Kunyit dan Temulawak Untuk Mencegah Flu Burung.Dikutip tanggal 01 Juli 2008.

Wilmana, P.F. (1995). Analgesik-antipiretik Analgesik Anti-inflamasi Nonsteroid dan Obat Pirai. Dalam: Farmakologi dan Terapi. Edisi keempat. Jakarta: FK UI Press. Hal. 214 – 215.

Windono, T., Bos, R., Woerdenbag, H.J., Boersma, Y.L., Koulman, A., dan Kayser, O. (2007). HPLC - Photodiode Array Detection Analysis of Curcuminoids in Curcuma Species Indigenous to Indonesia. Department of Pharmaceutical Biology, Groningen Research Institute of Pharmacy. Belanda:University of Groningen.

Woodhead, J.L., Howell, B.A., Yang, Y., Harril, A.H., Clewell, H.J., Andersen, M.E., Siler, S.Q., dan Watkins, P.B. (2012). An Analysis of N-Acetylcystein Treatment for Acetaminophen Overdose Using a Systems Model of Drug-Induced liver Injury. The Journal of Pharmacology and Experimental Theurapeutics. 342(2): 529 – 540.

Yellia, M. (2003). Cara Bijak Menaklukan Kanker. Jakarta: Agromedia Pustaka. Hal. 25 – 31.

Yerizel, E. (2002). Pengaruh Katekin Teh Hijau (Camellia sinensis) Terhadap Malondialdehida (MDA) Darah dan MDA Hepar Tikus. Jurnal Penelitian Andalas. 14(37): 1102 – 1115.

BAB III

METODE PENELITIAN

Penelitian ini menggunakan metode eksperimental yaitu untuk mengetahui pengaruh hubungan antara variabel bebas dan variabel terikat (aktivitas hepatoprotektor) dengan tahapan penyiapan sampel, identifikasi sampel, pembuatan ekstrak, pemeriksaan karakterisasi simplisia, pemeriksaan skrinning fitokimia serbuk simplisia, penyiapan hewan uji, pengujian aktivitas hepatoprotektor pada tikus putih jantan yang meliputi pemeriksaan aktivitas alanin aminotransferase (ALT), aspartat aminotranferase (AST), dan histopatologi hepar seperti (Tabel 3.1) dan pengolahan data. Data hasil penelitian dianalisis dengan program SPSS 22.0 menggunakan uji ANAVA.

Tabel 3.1 Matriks penelitian uji aktivitas hepatoprotektor (AH) EERTG terhadap aktivitas katalisatoralanin aminotransferase (ALT), aspartat aminotransferase(AST) dan histopatologi hepar tikus putih jantan yang diinduksi parasetamol.

Subjek EERTG 5 mg/kg bb EERTG 25 mg/kg _bb EERTG 125 mg/kg _bb EERTG 625 mg/kg _bb CMC Na 0,5 % Katekin 2 mg/kg bb Tanpa perlakuan

ALT AST HH ALT AST HH ALT AST HH ALT AST HH ALT AST HH ALT AST HH ALT AST HH

S1 A11 B11 C11 A21 B21 C21 A31 B31 C31 A41 B41 C41 A51 B51 C51 A61 B61 C61 A71 B71 C71

S2 A12 B12 C12 A22 B22 C22 A32 B32 C32 A42 B42 C42 A51 B52 C52 A62 B62 C61 A72 B72 C72

S3 A13 B13 C13 A23 B23 C23 A33 B33 C33 A43 B43 C43 A53 B53 C53 A63 B63 C63 A73 B73 C73

S4 A14 B14 C14 A24 B24 C24 A34 B34 C34 A44 B44 C44 A54 B54 C54 A64 B64 C64 A74 B74 C74

S5 A15 B15 C15 A25 B25 C25 A35 B35 C35 A45 B45 C45 A55 B55 C55 A65 B65 C65 A75 B75 C75

Jumlah ∑A1 ∑B ∑C 1 ∑A 1 ∑B 2 ∑C 2 ∑A 2 ∑B 3 ∑C 3 ∑A 3 ∑B 4 ∑C 4 ∑A 4 ∑B 5 ∑C 5 ∑A 5 ∑B 6 ∑B 6 ∑A 7 ∑B 7 ∑C 7 7

Mean A�R1= ∑ �1

��1=

∑ �

1

/5

C�R1= ∑ �

1

/5

A �R2= ∑ � 2 /5 ��2= ∑ � 2 /5

C�R2= ∑ �

2

/5

A �R3= ∑ � 3 /5 ��3= ∑ � 3 /5

C�R3= ∑ �

3

/5

A�R4= ∑ � 4 /5 ��4= ∑ � 4 /5

C�R4= ∑ �

4

/5

A�R5= ∑ � 5 /5 ��5= ∑ � 5 /5

C�R5= ∑ �

5

/5

A �R6= ∑ � 6 /5 ��6= ∑ � 6 /5

C�R6= ∑ �

6

/5

A �R7= ∑ � 7 /5 ��7= ∑ � 7 /5

C�R7= ∑ �

7

/5 /5 Keterangan :

A : Aktivitas katalisator ALT serum darah tikus HH : Histopatologi Hepar tikus B : Aktivitaskatalisator AST serum darah tikus

C :Gambaran histopatologi hepar tikus

A B C xy yaitu AH tikus dari kelompok x subjek y

Contoh :

3.1 Alat-alat

Timbangan hewan, neraca analitik, lemari pengering, perkolator, rotary evaporator, alat-alat gelas laboratorium (pyrex), aluminium foil, micropipette (thermoscientific), spuit injeksi (terumo), sonde lambung, centrifuge(velocity), incubator (thermoscientific), mikroskop cahaya (boeco), objek glass, tabung reaksi (pyrex), rak tabung reaksi, spektrofotometer UV (Thermoscientific).

3.2 Bahan-bahan

Sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah serbuk simplisia rimpang temu giring (Curcuma heyneana). Bahan-bahan kimia yang digunakan adalah etanol 96%, air suling, CMC Na 0,5%, parasetamol, katekin, reagen kit ALT Dyasis®, reagen kit AST Dyasis®, buffer formalin 10%, dan zat warna (hematoksilin dan eosin).

3.3Hewan Percobaan

Hewan percobaan yang digunakan dalam penelitian ini adalah tikus putih jantan (Rattus novergicus)galur Wistar, berat badan 150-200 gram sebanyak 35 ekor dengan kondisi sehat. Hewan diaklimatisasi selama 1 minggu dengan tujuan untuk menyeragamkan makanan dan hidupnya dengan kondisi yang serba sama sehingga dianggap memenuhi syarat penelitian.

3.4Pengambilan sampel

Pengambilan sampel berupa serbuk simplisiadilakukan secara purposif yaitu tanpa membandingkan dengan tumbuhan yang sama dari daerah lain. Sampel diperoleh dari kebun PT. Sumatera Busan yang terletak didesa Sei Mencirim,kecamatan Diski Deli Serdang.

3.5 Pemeriksaan Karakterisasi Simplisia

Pemeriksaan karakteristik simplisia meliputi pemeriksaan organoleptik, makroskopik dan mikroskopik, penetapan kadar air, penetapan kadar abu total, penetapan kadar abu tidak larut asam, penetapan kadar sari larut dalam air, dan penetapan kadar sari larut dalam etanol (Ditjen POM, 1989).

3.5.1 Pemeriksaan Organoleptis dan Makroskopik

Pemeriksaan organoleptis dilakukan terhadap simplisia meliputi pemeriksaan warna, bau, dan rasa. Pemeriksaan makroskopik terhadap simplisia meliputi pemeriksaan bentuk, diameter, ketebalan, dan tekstur.

3.5.2 Pemeriksaan Mikroskopik

Pemeriksaan mikroskopik terhadap serbuk simplisia dilakukan dengan cara meneteskan larutan kloralhidrat di atas kaca objek, kemudian di atasnya diletakkan serbuk simplisia, lalu ditutup dengan kaca penutup dan dilihat di bawah mikroskop.

3.5.3 Penetapan Kadar Air

Penetapan kadar air dilakukan dengan metode Azeotropi (destilasi toluen). Alat terdiri dari labu alas bulat 500 ml, alat penampung, pendingin, tabung penyambung, dan tabung penerima 5 ml.

Cara kerja: toluen sebanyak 200 ml dan air suling sebanyak 2 ml dimasukkan ke dalam labu alas bulat. Kemudian didestilasi selama 2 jam, toluen didinginkan selama 30 menit, dan dibaca volume air dengan ketelitian 0,05 ml (volume awal). ke dalam labu alas bulat tersebut kemudian dimasukkan 5 g serbuk simplisia yang telah ditimbang dengan seksama, kemudian labu dipanaskan dengan hati-hati selama 15 menit. Setelah toluen mulai mendidih,

didestilasi dengan kecepatan 2 tetes tiap detik hingga sebagian besar air terdestilasi, kemudian kecepatan destilasi ditingkatkan hingga 4 tetes tiap detik. Setelah semua air terdestilasi, bilas bagian dalam pendingin dengan toluen. Destilasi dilanjutkan selama 5 menit, kemudian labu penerima dibiarkan mendingin pada suhu kamar dan dibersihkan tetesan air yang mungkin masih terdapat pada dinding tabung penerima. Setelah air dan toluen memisah sempurna, dibaca volume air dengan ketelitian 0,05 ml (Volume I). Selisih kedua volume air yang dibaca sesuai dengan kandungan air yang terdapat dalam bahan yang diperiksa, dan destilasi dilanjutkan lagi sebagi volume II.Lakukan pengulangan sekali lagi (Volume III). Hitung kadar air dalam persen.

3.5.4 Penetapan Kadar Abu Total

Caranya: sebanyak 2 g serbuk yang telah digerus dan ditimbang seksama dimasukkan dalam krus porselin yang telah dipijar dan ditara, kemudian diratakan. Krus porselin dipijar perlahan-lahan sampai arang habis, pemijaran dilakukan pada suhu 600°C selama 3 jam kemudian didinginkan dan ditimbang sampai diperolehbobot tetap. Kadar abu dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan di udara (Ditjen POM, 1989).

3.5.5 Penetapan Kadar Abu Tidak Larut Dalam Asam

Caranya: Abu yang telah diperoleh dalam penetapan kadar abu dididihkan dalam 25 ml asam klorida encer selama 5 menit, bagian yang tidak larut dalam asam dikumpulkan, disaring melalui kertas saring, dipijar sampai bobot tetap, kemudian didinginkan dan ditimbang. Kadar abu yang tidak larut dalam asam dihitung terhadap bahan yang dikeringkan di udara (Ditjen POM, 1989).

3.5.6 Penetapan Kadar Sari Larut Air

Caranya: sebanyak 5 g serbuk yang telah dikeringkan di udara, dimaserasi selama 24 jam dalam 100 ml air-kloroform (2,5 ml kloroform dalam air suling sampai 1 liter) dalam labu bersumbat sambil sesekali dikocok selama 6 jam pertama, kemudiam dibiarkan selama 18 jam, kemudian disaring. Sejumlah 20 ml filtratpertama diuapkan sampai kering dalam cawan penguap yang berdasar rata yang telah dipanaskan dan ditara. Sisa dipanaskan pada suhu 105°C sampai bobot tetap. Kadar dalam persen sari yang larut dalam air dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan di udara (Ditjen POM, 1989).

3.5.7 Penetapan Kadar Sari Larut Etanol

Caranya: sebanyak 5 g serbuk yang telah dikeringkan di udara, dimaserasi selama 24 jam dalam 100 ml etanol 95% dalam labu bersumbat sambil dikocok sesekali selama 6 jam pertama, kemudian dibiarkan selama 18 jam. Kemudian disaring cepat untuk menghindari penguapan etanol. Sejumlah 20 ml filtrat diuapkan sampai kering dalam cawan penguap yang berdasar rata yang telah dipanaskan danditara. Sisa dipanaskan pada suhu 105°C sampai bobot tetap. Kadar dalam persen sari larut dalam etanol 95% dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan di udara (Ditjen POM, 1989).

3.6 Skrining Fitokimia

3.6.1 Pemeriksaan Alkaloida

Serbuk simplisia ditimbang sebanyak 0,5 g kemudian ditambah 1 ml asam klorida 2 N dan 9 ml air suling, dipanaskan di atas penangas air selama 2 menit. Dingin dan disaring. Filtrat digunakan untuk percobaan berikut:

a. Filtrat sebanyak 3 tetes ditamabah dengan 2 tetes larutan peraksi Mayer, akan terbentuk endapan menggumpal berwarna putih atau kuning

b. Filtrat sebanyak 3 tetes ditambah pereaksi Bouchardat, akan terbentuk endapan berwarna coklat sampai hitam.

c. Filtrat sebanyak 3 tetes ditambah dengan 2 tetes pereaksi Dragendorff, akan terbentuk warna merah atau jingga.

Alkaloida positif jika terjadi endapan atau kekeruhan paling sedikit dua dari ketiga percobaan di atas (Ditjen POM, 1989).

3.6.2 Pemeriksaan Flavonoida

Sebanyak 0,5 g simplisia disari dengan 10 ml metanol, lau direfluks selama 10 menit. Kemudian disaring panas-panas melalui kertas saring kecil berlipat. Filtrat diencerkan dengan 10 ml air. Setelah dingin ditambahkan 5 ml eter, dikocok hati-hati dan didiamkan. Lapisan methanol diambil, lalu diuapkan pada suhu 40°C, sisanya dilarutkan dalam 5 ml etil asetat, disaring. Filtrat digunakan untuk uji flavonoida dengan cara berikut:

a. Sebanyak 1 ml larutan percobaan diuapkan hingga kering, sisa dilarutkan dalam 1 sampai 2 ml etanol 95%, lalu ditambahkan 0,5 g serbuk seng dan 2 ml HCl 2 N, didiamkan selama 1 menit. Ditambahnkan 10 ml HCl(p), dalam

waktu 2 sampai 5 menit terjadi warna merah intensif, menunjukkan adanya flavonoida.

b. Sebanyak 1 ml larutan percobaan diuapkan hingga kering, sisa dilarutkan dalam 1 ml etanol 95%, lalu ditambahkan 0,1 g serbuk magnesium dan 10 ml HCl (p)

3.6.3 Pemeriksaan Saponin

, terjadi warna merah jingga, menunjukkan adanya flavonoida (Ditjen POM, 1989).

Sebanyak 0,5 g serbuk simplisia, dimasukkan ke dalam tabung reaksi. Ditambahkan air panas, didinginkan kemudian dikocok kuat-kuat selama 10 detik. Jika terbentuk buih yang mantap setinggi 1 sampai 10 cm, tidak kurang dari 10 menit dan tidak hilang dengan penambahan asam klorida 2 N menunjukkan adanya saponin (Ditjen POM, 1989).

3.6.4 Pemeriksaan Glikosida

Disari 3 g serbuk simplisia dengan 30 ml campuran etanol 95% dengan air (7:3) dan 10 ml asam sulfat 2 N. Direfluks selama 1 jam, didinginkan dan disaring. Pada 20 ml filtrat ditambahkan 25 ml timbal (II) asetat 0,4 M, dikocok dan didiamkan selama 5 menit, disaring. Disaring filtrat 3 kali, tiap kali dengan 20 ml campuran kloroform-isopropanol (3:2). Sari air digunakan untuk percobaan berikutnya yaitu 0,1 ml larutan percobaan dimasukkan ke dalam tabung reaksi, duapkan di atas penangasair, sisa ditambahkan 2 ml air dan 5 tetes pereaksi Molish. Tambahkan 2 ml dengan hati-hati asam sulfat pekat melalui dinding tabung, terbentuknya cincin ungu pada batas kedua cairan menunjukkan adanya glikosida (Ditjen POM, 1995).

3.6.5 Pemeriksaan Tanin

Sebanyak 0,5 g serbuk simplisia, disari dengan 10 ml air suling lalu dipanaskan, disaring. Filtratnya diencerkan dengan air sampai ridak berwarna. Larutan diambil sebanyak 2ml dan ditambahkan 1-2 tetes pereaksi besi (III) klorida 1%. Jika terjadi warna biru atau hijau kehitaman, menunjukkan adanya tannin (Ditjen POM, 1989).

3.6.6 Pemeriksaan Steroida dan Triterpenoida

Sejumlah 1 g serbuk dimaserasi dengan 20 ml eter selama 2 jam, disaring, filtrat diuapkan di cawan penguap. Sisanya ditambahkan asam asetat anhidrat dan asam sulfat pekat (Pereaksi Liebermann-Burchard). Apabila terbentuk warna ungu atau merah yang berubah menjadi biru ungu atau biru hijau menunjukkan adanya steroida/triterpenoida (Ditjen POM, 1989).

3.7 Pembuatan Ekstrak Etanol Rimpang Temu giring (EERTG)

Pembuatan ekstrak etanol rimpang temu giring dilakukan secara perkolasi dengan pelarut etanol 96%. Sebanyak 500 g serbuk simplisia temu giring dimasukkan kedalam bejana tertutup, cairan penyari dituangi sampai semua simplisia terendam, biarkan sekurang-kurangnya selama 3 jam. Pindahkan massa sedikit demi sedikit kedalam perkolator sambil tiap kali ditekan hati-hati, tuangi cairan penyari secukupnya sampai cairan mulai menetes dan diatas simplisia masih terdapat selapis cairan penyari, tutup perkolator, biarkan selama 24 jam. Biarkan cairan menetes dengan kecepatan 1 ml per menit, tambahkan berulang-ulang cairan penyari hingga diatas simplisia masih terdapat selapis cairan penyari, tutup perkolator, biarkan selama 24 jam. Perkolasi dihentikan jika perkolat yang keluar telah jernih (Ditjen POM, 1979). Perkolat yang diperoleh dipekatkan

dengan alat penguap vakum putar (rotary evaporator) sampai sebagian besar pelarutnya menguap, dan dilanjutkan proses penguapan di atas penangas air sampai diperoleh ekstrak kental.

3.8Pemeriksaan Karakterisasi Ekstrak

Pemeriksaan karakterisasi ekstrak meliputi penetapan kadar air, penetapan kadar abu total, penetapan kadar abu tidak larut dalam asam (Ditjen POM, 2000).

3.8.1 Penetapan kadar air

Penetapan kadar air dilakukan menurut metode Azeotropi (destilasi toluen). Alat terdiri dari labu alas bulat 500 ml, pendingin, tabung penyambung dan tabung penerima 5 ml berskala 0,05 ml, alat penampung dan pemanas listrik. Cara kerja:

Dimasukkan 200 mltoluen dan 2 ml air suling ke dalam labu alas bulat, lalu didestilasi selama 2 jam. Setelah itu, toluen dibiarkan mendingin selama 30 menit, dan dibaca volume air pada tabung penerima dengan ketelitian 0,05 ml (volume awal). Kemudian ke dalam labu alas bulat tersebut dimasukkan 5 g ekstrak yang telah ditimbang seksama, labu dipanaskan hati-hati selama 15 menit. Setelah toluen mendidih, kecepatan tetesan diatur lebih kurang 2 tetes tiap detik sampai sebagian besar air terdestilasi, kemudian kecepatan tetesan dinaikkan hingga 4 tetes tiap detik.Setelah 2 jam didestilasi (semua air terdestilasi), bagian dalam pendingin dibilas dengan toluen yang telah dijenuhkan. Destilasi dilanjutkan selama 5 menit, kemudian tabung penerima dibiarkan mendingin pada suhu kamar. Setelah air dan toluen memisah sempurna, volume air dibaca dengan ketelitian 0,05 ml (volume I), dilakukan pengulangan dua kali lagi. Selisih kedua

volume air yang dibaca sesuai dengan kandungan air yang terdapat dalam bahan yang diperiksa. Kadar air dihitung dalam persen (Ditjen POM, 1995).

3.8.2 Penetapan kadar abu total

Sebanyak 2 g ekstrak dimasukkan dalam krus porselin yang telah dipijar dan ditara, kemudian diratakan. Krus dipijar perlahan-lahan sampai arang habis, jika arang masih tidak dapat dihilangkan, ditambahkan air panas, saring melalui kertas saring bebas abu. Pijarkan sisa dan kertas saring dalam krus yang sama. Masukkan filtrat ke dalam krus, uapkan, pijarkan hingga bobot tetap, timbang. Kadar abu dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan (Ditjen POM, 1995).

3.8.3 Penetapan kadar abu tidak larut dalam asam

Abu yang diperoleh dalam penetapan kadar abu dididihkan dalam 25 ml asam klorida encer selama 5 menit, bagian yang tidak larut dalam asam dikumpulkan, disaring melalui kertas saring bebas abu, cuci dengan air panas, dipijarkan, kemudian didinginkan dan ditimbang sampai bobot tetap. Kadar abu yang tidak larut dalam asam dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan.

3.9Pembuatan CMC 0,5%

Pembuatan suspensi CMC 0,5% (b/v) dilakukan dengan cara sebagai berikut: sebanyak 0,5 gram CMC ditaburkan kedalam lumpang yang berisi air suling panas sebanyak 10 ml. Didiamkan selama 15 menit hingga diperoleh masa yang transparan, digerus hingga terbentuk gel dan diencerkan dengan sedikit air suling, kemudian dituang ke dalam labu tentukur 100 ml, ditambah air suling sampai batas tanda. Larutan ini digunakan sebagai pembawa parasetamol dan ekstrak.

3.10 Pembuatan suspensi Ekstrak Etanol Rimpang Temu Giring (EERTG)

Pembuatan suspensi EERTG 5% (b/v) dilakukan dengan cara sebagai berikut: sebanyak 1,25 gram EERTG dimasukkan kedalam lumpang, kemudian ditambahkan sedikit demi sedikit CMC 0,5% sambil digerus sampai homogen. Masukkan suspensi EERTG kedalam labu tentukur, tambahkan CMC 0,5% sampai 25 ml.

3.11 Pembuatan Suspensi dan Penentuan Dosis Parasetamol 20%

Suspensi parasetamol dalam CMC 0,5% dibuat dengan cara melarutkan 10 gram serbuk parasetamol yang telah ditimbang ke dalam CMC 0,5% di dalam lumpang, digerus hingga homogen, kemudian di encerkan dengan sebagian larutan CMC 0,5%. Masukkan ke dalam labu tentukur 50 ml, cukupkan volumenya dengan larutan CMC 0,5% sampai garis tanda. Dosis parasetamol dipilih berdasarkan dosis hepatotoksiknya terhadap tikus yaitu 2g/kg bb (Donatus et al., 1983; Parmar, 2006).

3.12 Pembuatan Larutan Katekin 0,01%

Larutan katekin dibuat dengan cara melarutkan 5 mg serbuk katekin yang telah ditimbang dengan sedikit akuades di dalam lumpang, gerus hingga larut, kemudian masukkan ke dalam labu tentukur 50 ml, cukupkan volumenya dengan akuades sampai garis tanda. Pemilihan dosis katekin berdasarkan dosis hepatoprotektornya terhadap tikus yang tercantum pada acuan sediaan herbal, badan POM RI., (2002).

3.13Pembuatan Larutan Buffer Formalin 10%

Pembuatan larutan buffer formalin 10% dilakukan dengan cara sebagai berikut: sebanyak 4,0 gram sodium hidrogen fosfat mono basik (NaH2PO4), 6,5 gram sodium hidrogen fosfat dibasik (Na2HPO4) dilarutkan dalam 900 ml akuadest. Setelah larut, tambahkan 100 ml formaldehyde 37-40%, aduk sampai homogen (Sudiana, 2005).

3.14 Pengujian Aktivitas Hepatoprotektor

Hewan percobaan dibagi atas 7 kelompok dan masing-masing terdiri dari 5 hewan percobaan. Aktivitas hepatoprotektif ekstrak diuji dengan menggunakan parasetamol sebagai kontrol negatif. Tikus kelompok I tanpa perlakuan (normal) tikus kelompok II diberi CMC – Na 0,5% 1 kali/hari selama 7 hari berturut-turut (Aluko, et al., 2013)dan diikuti pemberian suspensi parasetamol 2 g/kg bb (Parmar dan Prakash, 2006)6 jamsetelah pemberian CMC 0,5% hari ke-7 (kontrol negatif). Tikus kelompok III diberi katekin 2 mg/kg bb(BPOM RI, 2002)1 kali/hari selama 7 hari berturut-turut dan diikuti dengan pemberian suspensi parasetamol dosis 2g/kg bb6 jam setelah pemberian katekin hari ke-7 (kontrol positif). Tikus kelompokk IV – VII diberi EERTG berturut-turut dengan dosis 5mg/kg bb, 25mg/kg bb, 125mg/kg bb dan 625mg/kg bb1 kali/hari selama 7 hari dan diikuti dengan pemberian suspensi parasetamoldosis 2 g/kg bb6 jam setelah pemberian ekstrak pada hari ketujuh. Parmar dan Parkash, (2006), menyatakan bahwa pengambilan sampel darah dilakukan setelah 24 jam pemberian parasetamol(Tabel 2.2).

Tabel 2.2 Pengujian aktivitas hepatoprotektor

Kelompok Perlakuan

I Tanpa perlakuan (normal)

II CMC – Na 0,5% + Parasetamol 2 g/kg bb (kontrol negatif) III Katekin 2 mg/kg bb/hari + Parasetamol 2 g/kg (kontrol positif) IV EERTG 5mg/kg bb/hari + Parasetamol 2 g/kg bb

V EERTG 25mg/kg bb/hari + Parasetamol 2 g/kg bb VI EERTG 125mg/kg bb/hari + Parasetamol 2 g/kg bb VII EERTG 625mg/kg bb/hari + Parasetamol 2 g/kg bb

Catatan: EERTG, katekin,dan CMC – Na 0,5%diberikan selama 7 hari secara peroral

3.15 Pengukuran Parameter Biokimia ALT dan AST

Pengambilan darah dilakukan dengan cara penarikan langsung dari jantung tikus sebanyak 1 ml. Dimasukkan ke dalam microtube dan didiamkan ± 20 menit. Kemudian darah disentrifuge dengan kecepatan 300 rpm selama 15 menit untuk mendapatkan serum darah tikus. Penetapan aktivitas katalisator ALT dan AST adalah berdasarkan reaksi enzimatik menggunakan reagen kit Dyasis® (R1 dan R2). Larutan sampel berisi campuran reagen 1 dan reagen 2 dengan perbandingan 4:1. Sebanyak 1000µ l reagen kit ALT dan AST masing-masing direaksikan dengan 100µ l sampel, dan divortexdan diinkubasi pada suhu kamar selama 1 menit selanjutnya absorban sampel dibaca setelah 1,2 dan 3 menit menggunakan spektrofotometer UV (thermoscientific)pada panjang gelombang 340 nm dan suhu 370C. Prosedur penetapan aktivitas katalisator ALT dan AST berdasarkan prosedur kerja dari Dyasis®. Kemudian dibandingkan rata-rata aktivitas katalisator enzim ALT dan AST antar kelompok. Dikatakan adanya

aktivitas hepatoprotektor apabila aktivitas katalisatorALT dan AST dari EERTG lebih rendah dibandingkan kelompok kontrol negatif (CMC Na 0,5% + parasetamol). Pemeriksaan ALT dan AST dilakukan di Laboratorium Kesehatan, Dinas Kesehatan Provinsi Sumatera Utara.

3.16 Pemeriksaan Kerusakan Organ Hepar

3.16.1 Pemeriksaan Makroskopik Organ Hepar

Tikus dibedah kemudian diambil organ hepar, kemudian dicuci dengan larutan NaCl 0,9% untuk membersihkan dari sisa darah yang menempel. Pengamatan dilakukan dengan mengamati warna dan tekstur permukaan hepar tikus.

3.16.2 Pemeriksaan Mikroskopik Organ Hepar (Histopatologi Hepar)

Hepar hewan percobaan diambil dan dimasukkan ke dalam larutan buffer formalin 10%. Lalu dibuat preparat dengan ketebalan 4-6 mm, diwarnai dengan hekmatosilin dan eosin dan dilihat di bawah mikroskop.

Cara kerja: Organ hepar yang telah diambil kemudian dicuci dengan NaCl 0,9% selanjutnya dimasukkan ke dalam pot yang berisi larutan buffer formalin 10%. Selanjutnya organ hepar dipotong dengan ketebalan 4 – 6 mm. Jaringan yang telah difiksasi kemudian didehidrasi dengan alkohol mulai dari konsentrasi 70%, 80%, 90%, 95% masing-masing selama 24 jam dilanjutkan dengan alkohol 100% selama 1 jam yang diulang tiga kali. Setelah didehidrasi dilanjutkan dengan penjernihan dengan menggunakan xilol sebanyak tiga kali masing-masing selama 1 jam dilanjutkan dengan infiltrasi parafin. Jaringan kemudian ditanam dalam media parafin. Berikutnya dilakukan penyayatan dengan ketebalan 4 - 5 mikron. Hasil sayatan dilekatkan pada kaca objek, kemudian diwarnai dengan pewarnaan

hematoksilin-eosin (HE). Pemeriksaan histopatologi dilakukan dan berdasarkan prosedur kerja yang diterapkan di laboratorium patologi anatomi Fakultas Kedokteran Universitas Sumatera Utara.

3.17Analisis Data

Data hasil penelitian dianalisis menggunakan program SPSS 22.0. Data hasil penelitian ditentukan homogenitas dan normalitasnya untuk menentukan analisis statistik yang digunakan. Data dianalisis menggunakan uji ANAVA untuk menentukan perbedaan rata-rata diantara kelompok. Jika terdapat perbedaan, dilanjutkan dengan uji Post Hoc Tukey HSD untuk melihat perbedaan nyata antar perlakuan.

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Pemeriksaan Bahan Tumbuhan

Sampel yang digunakan berupa serbuk simplisia tumbuhan rimpang temu giring (Curcuma heyneana Val) yang diperoleh dari PT. Sumatera Busan (Lampiran 1 halaman 70).

4.1.1 Karakterisasi simplisia dan ekstrak

Hasil pemeriksaan makroskopik simplisia rimpang temu giring diperoleh bentuk keping pipih, ringan, diameter 2-4 cm dan ketebalan 1-4 mm, bagian tepi berombak atau keriput, warna kuning terang, bau khas aromatik, rasa sedikit pedas dan lama kelamaan menimbulkan rasa tebal (Lampiran 3 halaman 72). Hasil pemeriksaan mikroskopik serbuk simplisia rimpang temu giring terlihat adanya butir pati, tetes minyak atsiri, parenkim, rambut penutup, pembuluh kayu dan fragmen gabus(Lampiran 5 halaman 76).

Menurut Kemenkes RI (2008), suatu simplisia dan ekstrak yang akan digunakan sebagai bahan baku obat harus memenuhi persyaratan mutu yang tercantum dalam monografi. Hasil pemeriksaan karakterisasi serbuk simplisia rimpang temu giring dapat dilihat pada Tabel 4.1.

Tabel 4.1 Hasil karakterisasi serbuk simplisiarimpang temu giring

Hasil karakterisasi serbuk simplisia memenuhi syarat berdasarkan persyaratan pada (MMI) Materia Medika Indonesia (1989), karena kadar air tidak lebih dari 10%, sedangkan kadar air simplisia yang diperoleh adalah 9,14%.

Penetapan kadar sari larut air untuk mengetahui banyaknya sari larut dalam pelarut air. Senyawa yang dapat larut dalam air adalah glikosida, gula, gom, protein, enzim, zat warna, dan asam organik. Kadar sari larut air diperoleh 17,18%. Kadar sari larut etanol yang diperoleh 24,87%, kadar tersebut sesuai dengan persyaratan yang tercantum di dalam MMI.Penetapan kadar sari dilakukan untuk mengetahui kandungan senyawa kimia yang larut dalam air maupun dalam etanol. Senyawa yang dapat larut dalam etanol adalah glikosida, antrakinon, steroida, flavonoida, klorofil, dan dalam jumlah sedikit yaitu lemak dan saponin (Depkes, 1979). Penetapan kadar abu total bertujuan untuk mengetahui kadar senyawa-senyawa anorganik seperti oksida logam Mg, Ca, Pb, dan Si. Pada penetapan kadar abu tidak larut asam, senyawa anorganik yang tidak larut adalah silika. Besarnya kandungan logam tersebut, dapat membahayakan kesehatan. Hasil yang didapat untuk kadar abu total adalah 4,54% dan kadar abu tidak larut asam adalah 1,4%, kadar tersebut juga memenuhi persyaratan yang tercantum di dalam MMI.Hasil pemeriksaan karakterisasi ekstrak etanol rimpang temu giringdapat dilihat pada Tabel 4.2.

No Karakteristik serbuk simplisia Simplisia

Kadar (%) Persy. MMI

1 Kadar air 9,14 < 10

2 Kadar sari larut dalam air 17,18 > 16 3 Kadar sari larut dalam etanol 24,87 > 6

4 Kadar abu total 4,54 < 9

Tabel 4.2 Hasil karakterisasi ekstrak etanol rimpang temu giring (EERTG)

Hasil karakterisasi ekstrak etanol rimpang temu giring memenuhi syarat berdasarkan persyaratan pada Materia Medika Indonesia. Kadar air yang diperoleh pada hasil karakterisasi ekstrak adalah 3,97% sehingga ekstrak yang diperoleh merupakan ekstrak kental karena masih mengandung sedikit air.

Hasil penyarian 500 gram serbuk simplisia rimpang temu giring dengan pelarut etanol 96% diperoleh ekstrak kental 95,32 gram (rendemen 19,06%).

4.1.2 Skrining fitokimia serbuk simplisia dan ekstrak rimpang temu giring

Hasil skrining fitokimia serbuk simplisia dan ekstrak etanol rimpang temu giring menunjukan hasil yang sama, dapat dilihat pada Tabel 4.3 berikut ini.

Tabel 4.3 Hasil skrining fitokimia serbuk simplisia dan ekstrak rimpang temu giring

4.2 Hasil pengukuran Parameter biokimia ALT dan AST

4.2.1 Aktivitas Alanin Aminotransferase (ALT)

Pengukuran aktivitas katalisator ALT dilakukan pada hari ke-8 setelah 24 jam penginduksian parasetamol. Pada pengukuran, aktivitas enzim ALT mengkatalisis reaksi alanin + 2-oxoglutarat glutamat + piruvat, menunjukkan

No Karakteristik ekstrak Simplisia

Kadar (%) Persy. MMI

1 Kadar air 3,97 < 9,6

2 Kadar abu total 0,42 < 0,5

3 Kadar abu yang tidak larut dalam asam 0,10 < 0,2

No Pemeriksaan Serbuk simplisia Ekstrak

1 Alkaloida - -

2 Flavonoida + +

3 Saponin + +

4 Tanin + +

5 Glikosida + +

46 334,4 42,6 93 62,4 49,6 _35,8 0 50 100 150 200 250 300 350 400 tanpa perlakuan

kontrol - kontrol + dosis 5 mg/kg bb dosis 25 mg/kg bb dosis 125 mg/kg bb dosis 625 mg/kg bb P e n gu k u r an ak ti v itas A LT ae te lah 8 har i U/ L Kelompok perlakuan

kadar enzim tersebut di dalam darah. Hasil pengukuran secara rinci dapat dilihat pada Tabel 4.4 dan Gambar 4.1.

Tabel 4.4 AktivitasALT tikus putih yang diinduksi parasetamol pada pengukuran hari ke-8 (Mean ± SD)

Ket : a berbeda signifikan dengan kelompok perlakuan lain (p < 0,05)

Hasil orientasi pada tikus jantan yang diberi EERTG dosis 5, 25, dan 125 mg/kg bb menunjukkan penghambatan peningkatan aktivitas ALT dibandingkan dengan CMC-Na 0,5% sebagai kontrol negatif. Pada perlakuan, dosis EERTG ditingkatkan menjadi 625 mg/kg bb sehingga ada 4 variasi dosis yang digunakan yaitu: 5, 25, 125, dan 625 mg/kg bb (Gambar 4.1).

Gambar 4.1 Grafik pengukuran aktivitas ALT

Kelompok Perlakuan Jumlah

Subjek

Aktivitas ALT (U/L)

I Tanpa perlakuan 5 46,00 ± 6,93

II CMC - Na 0,5% + parasetamol 5 334,40 ± 217,57a III Katekin + parasetamol 5 42,60 ± 16,88 IV EERTG 5 mg/kg bb + parasetamol 5 93 ± 9,75

V EERTG 25 mg/kg bb + parasetamol 5 62,40 ± 8,68 VI EERTG 125 mg/kg bb +

parasetamol

5 49,60 ± 13,94 VII EERTG 625 mg/kg bb +

parasetamol

Berdasarkan Gambar 4.1 di atas, menunjukkan bahwa aktivitasALT pada kelompok tanpa perlakuan adalah 46 U/L, pada kelompok kontrol positif (katekin 2 mg/kg bb) ditemukan aktivitas ALT adalah 42,6 U/L. Dengan nilai tersebut menunjukkan bahwa aktivitas ALT yang diperoleh sesuai dengan aktivitasnormal ALT pada tikus yaitu berkisar antara 19,3 – 68,9 U/L (Baron, 1992). Sedangkan yang diperoleh pada kelompok kontrol negatif (CMC-Na 0,5%) dan suspensi parasetamol dosis 2 g/kg bb adalah 334,4 U/L; ini jauh lebih tinggi dibandingkan kelompok tanpa perlakuan dan menunjukkan perbedaan yang signifikan antar kelompok perlakuan ekstrak uji (p < 0,05). Peningkatan aktivitas enzim ALT ini menjadi petunjuk bahwa telah terjadi kerusakan hepar, karena sangat sedikit kondisi selain hepar yang berpengaruh terhadap kadar enzim ini dalam serum (Widmann, 1995). Hal ini mengisyaratkan bahwa pemberian suspensi parasetamol dosis 2 g/kg bb menyebabkan kerusakan hepar yang ditandai dengan peningkatan aktivitasALT dan sesuai dengan hasil penelitian Aluko, et al., (1999) tentang aktivitas hepatoprotektor Ocimum americanum L pada tikus putih jantan yang diinduksi parasetamol; Anyasor, et al., (2013) tentang aktivitas hepatoprotektor Costus afer S pada tikus putih jantan yang diinduksi parasetamol; dan Lin,et al., (2000) tentang aktivitas hepatoprotektor Solanum alatum M pada mencit yang diinduksi parasetamol.

AktivitasALT pada kelompok perlakuan dosis 5, 25, 125, dan 625 mg/kg bb EERTG berturut-turut adalah 93 U/L; 62,4 U/L; 49,6 U/L; dan 35,8 U/L. Pada dosis 5 mg/kg bb aktivitas ALT lebih tinggi dari aktivitas ALT pada kelompok tanpa perlakuan dan kelompok kontrol positif,walaupun aktivitasnyaberbeda signifikan (p< 0,05) dengan kontrol negatif. Hal ini disebabkan dosis yang

diberikan terlalu kecil. Aktivitas ALT yang tidak berbeda signifikan (p > 0,05) dengan kelompok tanpa perlakuan dan kontrol positif, namun berbeda signifikan (p < 0,05) dengan kontrol negatifmulai terlihat pada dosis 25, 125 dan 625 mg/kg bb. Secara keseluruhan dapat dilihat adanya penghambatan peningkatan aktivitasALT menuju normal seiring dengan peningkatan dosis EERTG, jadi fenomena ini petunjuk terjadinya hubungan dosis-daya hambat peningkatan. Hasil pengujian aktivitas hepatoprotektor kemudian dianalisis dengan uji perbedaan rata-rata antar kelompok (Uji ANAVA) dan hasil analisis data dilanjutkan dengan ujipost hoc dengan Tukey HSD.

Berdasarkan hasil analisis statistik diperoleh F hitung aktivitas ALT (8.365) > F Tabel (2,71); ini menunjukkan adanya hubungan yang bermakna (P<0,05) berarti terdapat perbedaan rata-rata antara variabel yang diuji.

4.2.2 Aktivitas Aspartat Aminotransferase (AST)

Pengukuran aktivitasAST dilakukan pada hari ke-8 setelah 24 jam penginduksian dengan parasetamol. Pada pengukuran, aktivitas enzim AST mengakatalisis reaksi aspartat + 2-oxoglutarat glutamat + oxaloacetic, menunjukkan kadar enzim tersebut di dalam darah. Hasil pengukuran secara rinci dapat dilihat pada Tabel 4.5 dan Gambar 4.2.

Tabel 4.5 Aktivitas AST tikus putih yang diinduksi parasetamol pada pengukuran hari ke-8 (Mean ± SD)

Kelompok Perlakuan Jumlah

Subjek

Aktivitas AST (U/L)

I Tanpa perlakuan 5 35,20 ± 4,32

II CMC - Na 0,5% + parasetamol 5 296,80 ± 78,02a III Katekin + parasetamol 5 52,00 ± 9,11 IV EERTG 5 mg/kg bb + parasetamol 5 121,60 ± 49,20 a

V EERTG 25 mg/kg bb + parasetamol 5 75,60 ± 8,36 VI EERTG 125 mg/kg bb + parasetamol 5 59,60 ± 12.03 VII EERTG 625 mg/kg bb + parasetamol 5 45,60 ±12,97

Hasil orientasi yang dilakukan pada tikus jantan yang diberikan EERTG dosis 5, 25, dan 125 mg/kg bb menunjukkan penghambatan peningkatan aktivitas AST dibandingkan dengan CMC-Na 0,5% sebagai kontrol negatif. Hal ini menunjukkan bahwa semakin tinggi dosis EERTG semakin besar aktivitas hepatoprotektor yang dihasilkan. Pada perlakuan, dosis EERTG ditingkatkan menjadi 625 mg/kg bb sehingga ada 4 variasi dosis yang digunakan yaitu 5, 25, 125, dan 625 mg/kg bb (Gambar 4.2).

Gambar 4.2 Grafik pengukuran aktivitas AST 35,2 296,8 52 121,6 75,6 59,6 45,6 0 50 100 150 200 250 300 350 tanpa perlakuan

kontrol - kontrol + dosis 5 mg/kg bb dosis 25 mg/kg bb dosis 125 mg/kg bb dosis 625 mg/kg bb P e ng uk ur a n a k ti v it a s A S T s e te la h 8 ha ri U/ L Kelompok perlakuan

Berdasarkan Gambar 4.2 di atas, aktivitas AST pada kelompok normal adalah 35,2 U/L, pada kelompok kontrol positif (katekin 2 mg/kg bb) ditemukan aktivitas AST adalah 52 U/L. Dengan nilai tersebut menunjukkan bahwa aktivitas AST yang diperoleh sesuai dengan aktivitas normal pada tikus, yaitu berkisar antara 29,8 – 77,0 U/L (Baron, 1992). Sedangkan yang diperoleh pada kelompok kontrol negatif (CMC Na 0,5%) dan suspensi parasetamol dosis 2 g/kg bb adalah 296,8 U/L; ini jauh lebih tinggi dibandingkan kelompok tanpa perlakuan dan menunjukkan perbedaan yang signifikan (p < 0,05) antar kelompok perlakuan EERTG. Dengan demikian disimpulkan bahwa pemberian suspensi parasetamol dosis 2 g/kg bb dapat merusak hepar yang ditandai dengan peningkatan aktivitasAST dan ini sesuai dengan hasil penelitian Aluko, et al., (1999) tentang aktivitas hepatoprotektor Ocimum americanum L pada tikus putih jantan yang diinduksi parasetamol; Anyasor, et al., (2013) tentang aktivitas hepatoprotektor Costus afer S pada tikus putih jantan yang diinduksi parasetamol; dan Lin,et al., (2000) tentang aktivitas hepatoprotektor Solanum alatum M pada mencit yang diinduksi parasetamol.

Aktivitas AST pada kelompok perlakuan dosis 5, 25, 125, dan 625 mg/kg bb berturut-turut adalah 121,60 U/L; 75,60 U/L; 59,60 U/L; dan 45,60 U/L. Pada dosis 5 mg/kg bb, aktivitasAST berbeda signifikan (p < 0,05) dengan kelompok tanpa perlakuan, kontrol positif, dan EERTG dosis 625 mg/kg bb. Hal ini disebabkan dosis yang diberikan terlalu kecil sehingga tidak menimbulkan efek hepatoprotektor. Aktivitas AST yang tidak berbeda signifikan (p > 0,05) dengan kelompok tanpa perlakuan dan kontrol positif, namun berbeda signifikan (p < 0,05) dengan kontrol negatif mulai terlihat pada dosis 25, 125 dan 625 mg/kg bb.

Ini menunjukkan adanya aktivitas kurkumin sebagai antioksidan yang terkandung di dalam EERTG, sehingga mampu menghambat pembentukan metabolit NAPQIdari parasetamol dengan cara meningkatkan aktivitas glutation untuk mengkonjugasi metabolit NAPQI tersebut, yang dapat dilihat dari penghambatan peningkatan aktivitas enzim ALT dan AST menuju aktivitas normal seiring dengan peningkatan dosis EERTG yang diberikan. Pada enzim AST, aktivitas normal sedikit lebih tinggi dibandingkan enzim ALT, hal ini disebabkan karena peningkatan enzim AST bukan merupakan indikasi utama kerusakan hepar. AST banyak terdapat di jantung, otot rangka, ginjal dan pankreas (Husadha, 1996). Hal tersebut yang menyebabkan AST bukan parameter utama pada kerusakan hepar tanpa didukung pemeriksaan ALT yang lebih spesifik untuk kerusakan hepar. Beberapa enzim lain juga dapat dijadikan parameter pada kerusakan hepar, seperti alkalin pospatase (AP) yang lebih dominan bila terjadinya obstruksi pada saluran empedu dan meningkat bila ada gangguan pada tulang, gamma glutamil transpeptidase (GGT) yang meningkat pada obtruksi pada saluran empedu dan hepatitis, 5 – nukleotidase yang interpretasinya sama dengan alkali pospatase, hanya saja enzim ini lebih spesifik pada obstruksi bilier. Enzim-enzim tersebut merupakan parameter pendukung pada kerusakan hepar (Baron, 1992).

Hasil pengujian aktivitas hepatoprotektor kemudian dianalisis dengan uji perbedaan rata-rata antar kelompok (Uji ANAVA) dan hasil analisis data dilanjutkan dengan ujipost hoc menggunakan Tukey HSD.

Berdasarkan hasil analisis statistik diperoleh F hitung aktivitasAST (32.994) > F Tabel (2,71) menunjukkan hubungan yang bermakna (P<0,05) berarti terdapat perbedaan rata-rata antara variabel yang diuji.

P1

P2

P3

P4

P5

P6

P7

4.3 Gambaran Kerusakan Organ Hepar

4.3.1 Gambaran makroskopik organ hepar

Setelah pembedahan dan pengamatan organ hepar, secara makroskopik dapat dilihat perbedaan organ hepar antara kelompok tanpa perlakuan, kontrol negatif, kontrol positif dan kelompok EERTG dosis 5, 25, 125, dan 625 mg/kg bb yaitu meliputi warna dan tekstur hepar (Gambar 4.3 dan Tabel 4.6).

Gambar 4.3 Makroskopik hepar tikus Keterangan :

P1 : Hepar tikus kelompok normal

P2 : Hepar tikus kelompok kontrol negatif P3 : Hepar tikus kelompok kontrol positif

P4 : Hepar tikus kelompok EERTG dosis 5 mg/kg bb P5 : Hepar tikus kelompok EERTG dosis 25 mg/kg bb P6 : Hepar tikus kelompok EERTG dosis 125 mg/kg bb P7 : Hepar tikus kelompok EERTG dosis 625 mg/kg bb

Tabel 4.6 Pengamatan secara morfologi organ hepar tikus padahari ke-8

4.3.2 Gambaran mikroskopik hepar (Histopatologi hepar)

Pengamatan histopatologi dilakukan pada hari ke-8 setelah 24 jam pemberian parasetamol. Tikus yang masih hidup dikorbankan dengan cara dislokasi leher kemudian dibedah untuk diambil heparnya. Hasil pengamatan ini digunakan untuk menentukan derajat kerusakan sel-sel hepar akibat pemberian parasetamol dan efek hepatoprotektor dari ekstrak uji yang diberikan yaitu EERTG. Melalui pengamatan histopatologi ini dapat dilihat kerusakan organ pada tingkat yang tidak terlihat bila hanya diamati secara makroskopik (Tabel 4.7).

Tabel 4.7 Hasil histopatologi jaringan hepar tikus pada hari ke-8 berdasarkan kerusakan hepatosit

Kelompok Jenis Kerusakan Hepatosit Degenerasi Hidropik Nekrosis

P1 - -

P2 + +

P3 - -

Perlakuan Hepar

Warna Tekstur

Normal (P1) Merah Licin

Kontrol negatif (P2) Merah pucat sekali, bercak hitam

Licin, bintik-bintik hitam Kontrol positif (P3) Merah pekat Licin

Dosis 5 mg/kg bb (P4) Merah pekat Licin, bintik-bintik coklat kehitaman Dosis 25 mg/kg bb (P5) Merah pekat Licin, bintik-bintik

merah Dosis 125 mg/kg bb (P6) Merah Licin Dosis 625 mg/kg bb (P7) Merah Licin

P4 - -

P5 - -

P6 - -

P7 - -

Keterangan : P=perlakuan; 1=tanpa perlakuan;2=kontrol negatif;3=kontrol positif;4,5, 6, dan 7 = dosis 5, 25, 125, dan 625 mg/kg bb; (-) = normal;(+) = terjadi kerusakan.

Pada Tabel 4.7 terlihat pada kelompok tanpa perlakuan, kontrol positif, EERTG dosis 5, 25, 125, dan 625 mg/kg bb tidak terjadi kerusakan hepatosit, sedang pada kelompok kontrol negatif terjadi kerusakan hepatosit yaitu degenerasi hidropik dan nekrosis.

Hal ini menunjukkan bahwa pemberian paresetamol dosis 2 g/kg bb dapat menyebabkan kerusakan hepar melalui mekanisme pembentukan metabolit NAPQI dan penurunan muatan glutation hepar sehingga terjadi pengikatan makrmolekul sel hepar oleh metabolit NAPQI yang dapat menyebabkan kerusakan sel hepar (Gambar 4.4).

Gambar 4.4 Histopatologi jaringan hepar tikus (perbesaran 10x10)

Keterangan : (a) vena sentralis normal; (b) hepatosit normal; (c) sinusoid normal P1 : Hepar tikus kelompok normal

P2 : Hepar tikus kelompok kontrol negatif P3 : Hepar tikus kelompok kontrol positif

P4 : Hepar tikus kelompok EERTG dosis5 mg/kg bb P5 : Hepar tikus kelompok EERTG dosis 25 mg/kg bb P6 : Hepar tikus kelompok EERTG dosis 125 mg/kg bb P7 : Hepar tikus kelompok EERTG dosis 625 mg/kg bb

(b) (c) (a)

Gambar 4.4 (lanjutan)

Keterangan : (a) vena sentralis yang mengalami kongesti; (b) hepatosit yang mengalami nekrosis yang dilihat dari inti sel piknotik, karyolisis dan karyoreksis; terjadi degenerasi hidropik pada hepatosit; (c) sinusoid tidak teratur; (d) terjadi infiltrasi sel radang; (e) terjadi hemorrage

(b) (e)

(d)

(a)

P2a

(c)

P2a

Keterangan: (a) vena sentralis normal; (b) hepatosit normal, namun beberapa mengalami piknotik; (c) sinusoid normal.

Gambar 4.4 (lanjutan)

Keterangan: (a) vena sentralis normal; (b) hepatosit normal; (c) sinusoid normal.

(c)

(a)

(b)

P3

P4

(a)

(c) (b)

Keterangan: (a) vena sentralis normal; (b) hepatosit normal; (c) sinusoid normal

Gambar 4.4 (lanjutan)

Keterangan : (a) vena sentralis normal; (b) hepatosit normal; (c) sinusoid normal P5

(a)

(b)

(c)

P6

(c) (b) (a)

c

Gambar 4.4 (lanjutan)

Keterangan : (a) vena sentralis normal; (b) hepatosit normal; (c) sinusoid normal

Berdasarkan Gambar 4.4 di atas, pada keadaan normal (P1), vena sentralis merupakan sebuah pembuluh vena yang dikelilingi oleh sel endothelium yang tersusun rapat (Flore, 1981) dan terletak pada pusat lobulus dengan hepatosit tersusun secara teratur ke arah vena sentralis (Price, 1997). Di dalam hepatosit terdapat sitoplasma yang masih utuh dengan nukleus yang bulat. Di sepanjang hepatosit terdapat sinusoid tempat mengalirkan darah yang akan ditampung oleh vena sentralis (Junqueira, 1992; Fawcett, 2002). Pada kelompok kontrol negatif (P2) terlihat adanya indikasi kerusakan struktur hepar yang ditandai dengan kongesti vena sentralis yang diakibatkan oleh lisisnya sel endothelium sehingga lingkaran tidak utuh dan akhirnya lingkaran menjadi tidak jelas. Vena sentralis menerima darah dari sinusoid sebanyak 25% yang berasal dari arteri hepatika,

P7

((a) ((b) ((c)

sedangkan 75% berasal dari vena porta yang mengalirkan darah dari saluran cerna hasil absorbsi usus. Jadi, vena sentralis akan banyak menampung zat-zat hasil metabolisme yang dapat bersifat toksik maupun nontoksik. Banyaknya darah yang ditampung oleh vena sentralis akan menyebabkan konsentrasi zat yang bersifat toksik jauh lebih besar sehingga hal inilah yang memperjelas kerusakan vena sentralis (Price dan Wilson, 1997; Underwood, 1997). Pada inti sel hepatosit nampak sel hepar juga mengalami nekrosis ditandai dengan inti sel mengecil dan berwarna kehitaman (inti piknotik), inti sel pecah (karyoreksis) dan inti sel menghilang (karyolisis) (Price dan Wilson, 1997). Pada gambar (P2) menunjukkan adanya sel yang mengalami degenerasi hidropik. Di sini terlihat sel membengkak dan vakuola membesar. Hal ini sesuai dengan teori yang menyatakan bahwa degenerasi hidropik merupakan pertanda awal kerusakan sel akibat terganggunya permeabilitas membran sel akibat penurunan jumlah ATP, sehingga memudahkan molekul air masuk dari ekstrasel ke intrasel secara berlebihan akibatnya terjadi pembengkakan sel dan vakuola membesar (Underwood, 1997). Adanya infiltrasi sel radang berupa monosit dan limfosit akibat peradangan sel hepar sebagai respon imun sel kuppfer yang terdapat di sepanjang sinusoid.

Gambaran histopatologi hepar pada kelompok kontrol positif (P3), EERTG dosis 5, 25, 125, dan 625 mg/kg bb (P4, P5, P6, P7) tidak menunjukkan kerusakan yang signifikan dengan kelompok kontrol negatif. Hal ini membuktikan bahwa dengan pemberian EERTG dapat melindungi hepar dari kerusakan dan EERTG mempunyai aktivitas hepatoprotektor terhadap hepar tikus yang diinduksi

parasetamol dengan cara peningkatan glutation di hepar sehingga mampu mengkonjugasi metabolit NAPQI yang terbentuk akibat pemberian parasetamol.

Berdasarkan uraian diatas, pemberian parasetamol dosis tinggi dapat menyebabkan kerusakan hepar dengan cara penurunan proses konjugasi dengan asam glukoronat dan asam sulfat hepar sehingga menigkatkan oksidasi yang dikatalisis Sitokrom P-450 sehingga terjadi peningkatan pembentukan NAPQI dan simpanan glutation hepar menjadi berkurang (James, et al., 2003).Terbentuknya metabolit NAPQI dalam jumlah banyak dan penurunan jumlah glutathion hepar, akan berakibat terbentuknya ikatan kovalen antara metabolit dengan makromolekul sel-sel hepar sehingga terjadi nekrosis atau kerusakan hepar (Husadha, 1996). Nekrosis dapat dilihat dengan berkurangnya jumlah inti pada sel atau hilangnya inti sama sekali dan pengeruhan pada sitoplasma (Thomas, 1998). Hepatosit yang rusak melepaskan faktor-faktor penarik yang mengaktivasi makrofag hepar, menyebabkan nekrosis dengan melepaskan enzim proteolitik dan oksigen reaktif. Sel-sel hepar yang rusak akan melepaskan enzim-enzim yang menandai kerusakan tersebut di antaranya peningkatan aktivitas ALT dan AST (Damjanov, 2000).

Pemberian EERTG sebelum tikus diinduksi dengan parasetamol dosis tinggi, dapat mencegah kerusakan hepar yang diakibatkan oleh metabolit NAPQI dari pemberian parasetamol dosis tinggi. Rimpang temu giring mengandung senyawa yang berkhasiat obat yaitu kurkuminoid, terdiri atas kurkumin, desmetoksikurkumin dan bisdesmetoksikurkumin. Senyawa kurkumin yang terkandung pada rimpang temu giring sekitar 0,98 – 3,21% (Windono, 2007). Senyawa ini yang diduga melindungi sel-sel hepar dari bahan toksik (Aggarwal, et

al., 2006). Kurkumin yang terkandung di dalam EERTG melindungi hepar dengan cara peningkatan aktivitas enzim glutation peroksidase yang merupakan antioksidan endogen yang mengkatalisis reaksi konjugasi glutation dengan sejumlah besar xenobiotika endogen maupun eksogen, sehingga kebutuhannya untuk mengkonjugasi NAPQI akan tercapai, dengan demikian NAPQI tidak berikatan dengan makromolekul hepatosit dengan demikian terhindar dari kerusakan (Suyatna, dkk., 2010).

BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan

Kesimpulan di dalam penelitian ini adalah:

a. Pemberian EERTG dapat mengurangi efek hepatotoksik dari parasetamol yang diinduksi, dengan menghambat peningkatan aktivitasALT dan AST. AktivitasALT pada kelompok kontrol negatif 334,4 U/L, AST 296,80 U/L.Aktivitas tersebut berbeda signifikan (P < 0,05) dengan kelompok EERTG dosis 5, 25, 125, dan 625 mg/kg bb pada serum tikus yang diperiksa.

b. Dosis efektif dari EERTG sebagai hepatoprotektor adalah pada dosis 25 mg/kg bb, dengan aktivitasALT = 62,4 U/L, AST = 75,6 U/L yang mencapai kadar normal dan menunjukkan perbedaan yang signifikan (P < 0,05) dari kontrol negatif dan tidak berbeda signifikan (P > 0,05)dari kontrol positif dan kelompok tanpa perlakuan.

c. Pemberian EERTG dosis 5, 25, 125, dan 625 mg/kg bb tidak menunjukkan adanya kerusakan jaringan hepar pada pemeriksaan histopatologi jaringan.

5.2 Saran

Saran di dalam penelitian ini adalah:

a. Kepada peneliti selanjutnya dengan memeriksa parameter lain kerusakan hepar seperti ALP, GGT, 5-nukleotidase dan bilirubin.

b. Kepada peneliti selanjutnya dengan menggunakan agen hepatotoksik lain sebagai penginduksi kerusakan hepar seperti CCl4 dan alkohol.

c. Kepada peneliti selanjutnya dengan meneliti toksisitas dari EERTG dan terhadap organ lain.

d. Kepada peneliti selanjutnya dengan meneliti lebih lanjut tentang isolasi dan identifikasi zat aktif (kurkumin) di dalam rimpang temu giring.

2.2 Ekstraksi ... 10

2.3 Parasetamol ... 11

2.3.1 Uraian Kimia ... 11

2.3.2 Farmakokinetik Parasetamol ... 12

2.3.3 Farmakodinamik Parasetamol ... 14

2.3.4 Toksisitas Parasetamol ... 14

2.4 Katekin ... 16

2.5 Metabolisme Obat ... 17

2.6 Hepar ... 18

2.6.1 Anatomi Hepar ... 18

2.6.2 Fungsi Hepar ... 19

2.6.3 Biokimia Hepar ... 20

2.6.4 Gangguan Fungsi Hepar Akibat Zat Toksik ... 22

2.6.5 Mekanisme Kerusakan Hepar yang Diakibatkan oleh Parasetamol dan Mekanisme Hepatoprotektor Rimpang Temu Giring ... 24

BAB III METODE PENELITIAN ... 27

3.1 Alat-alat ... 29

3.2Bahan-bahan ... 29

3.3 Hewan percobaan ... 29

3.4 Pengambilan sampel ... 29

3.5 Pemeriksaan Karakterisasi Simplisia... 30

3.5.1 Pemeriksaan Organoleptis Dan Makroskopik ... 30

3.5.2 Pemeriksaan Mikroskopik ... 30

3.5.4 Penetapan kadar abu total ... 31

3.5.5 Penetapan kadar Abu Tidak Larut Asam... 31

3.5.6 Penetapan kadar Sari Larut Air ... 32

3.5.7 Penetapan kadar Sari Larut Etanol ... 32

3.6 Skrining Fitokimia ... 33

3.6.1 Pemeriksaan Alkaloida ... 33

3.6.2 Pemeriksaan Flavonoida ... 33

3.6.3 Pemeriksaan Saponin ... 34

3.6.4 Pemeriksaan Glikosida ... 34

3.6.5 Pemeriksaan Tanin ... 35

3.6.6 Pemeriksaan steroid/triterpenoid ... 35

3.7 Pembuatan Ekstrak ... 35

3.8 Pemeriksaan Karakterisasi Ekstrak ... 36

3.8.1 Penetapan kadar air ... 36

3.8.2 Penetapan kadar abu total ... 37

3.8.3 Penetapan kadar abu tidak larut dalam asam ... 37

3.9 Pembuatan CMC Na 0,5% ... 37

3.10 Pembuatan Suspensi EERTG ... 38

3.11 Pembuatan Suspensi dan Penentuan Dosis Parasetamol .... 38

3.12 Pembuatan Larutan katekin 0,1% ... 38

3.13 Pembuatan Larutan Buffer Formalin ... 18

3.14 Pengujian Aktivitas Hepatoprotektor ... 39

3.15 Pengukuran Parameter Biokimia ALT dan AST ... 40

3.16.1 Pemeriksaan Makroskopik Organ Hepar ... 41

3.16.2 Pemeriksaan Mikroskopik Organ Hepar ... 41

3.17 Analisis Data ... 42

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ... 43

4.1 Pemeriksaan Bahan Tumbuhan ... 43

4.1.1 Karakterisasi Simplisia dan Ekstrak ... 43

4.1.2 Skrining Fitokimia Serbuk Simplisa dan Ekstrak ... 454.2 Hasil Pengukuran Parameter Biokimia ... 45

4.2.1 Aktivitas Alanin aminotransferase (ALT) ... 45

4.2.2 Aktivitas Aspartat aminotransferase (AST) ... 48

4.3 Gambaran kerusakan Organ Hepar ... 52

4.3.1 Gambaran Makroskopik Organ Hepar ... 52

4.3.2 Gambaran Mikroskopik Organ Hepar ... 53

BAB VKESIMPULAN DAN SARAN... 63

5.1 Kesimpulan ... 63

5.2 Saran ... 63DAFTAR PUSTAKA ... 64

DAFTAR TABEL

Halaman Tabel 3.1 Matriks penelitian uji aktivitas hepatoprotektor

EERTG terhadap aktivitas alanin aminotransferase (ALT), aspartat aminotransferase (AST), dan histopatologi organ hepar tikus putih jantan yang

diinduksi parasetamol ... 28 Tabel 3.2 Pengujian aktivitas hepatoprotektor ... 40 Tabel 4.1 Hasil karakterisasi serbuk simplisia rimpang temu

giring ... ₄₄ Tabel 4.2 Hasil karakterisasi ekstrak etanol rimpang temu

giring (EERTG) ... 45 Tabel 4.3 Hasil skrinning fitokimia serbuk simplisia dan

ekstrak rimpang temu giring ... 45 Tabel 4.4 Aktivitas katalisator ALT (U/L) tikus putih yang

diinduksi parasetamol pada pengukuran hari ke-8

(Mean ± SD) ... 46 Tabel 4.5 Aktivitas katalisator AST (U/L) tikus putih yang

diinduksi parasetamol pada pengukuran hari ke-8

(Mean ± SD) ... 49 Tabel 4.6 Pengamatan secara morfologi terhadap organ hepar

tikus pada hari ke-8 ... 53 Tabel 4.7 Hasil histopatologi jaringan hepar tikus pada

DAFTAR GAMBAR

Halaman Gambar 1.1 Kerangka pikir penelitian ...

Gambar 2.1 Struktur Kurkuminoid ... 9 Gambar 2.2 Struktur Parasetamol ... 12 Gambar 2.3 Skema yang menggambarkan jalur metabolisme

parasetamol ... 13 Gambar 2.4 Jalur Toksisitas Parasetamol ...

16 Gambar 2.5 Mekanisme penghambatan kurkumin terhadap

toksisitas NAPQI ...

26 Gambar 4.1 Grafik pengukuran aktivitas katalisator ALT ... Gambar 4.2 Grafik pengukuran aktivitas katalisator AST ... Gambar 4.3 Makroskopik hepar tikus ... Gambar 4.4 Histopatologi jaringan hepar tikus (perbesaran 10x10) ....

52 55 6

46 49

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman

Lampiran 1Surat keterangan sampel ... 70

Lampiran 2 Hasil identifikasi sampel penelitian ... 71

Lampiran 3 Gambar karakterisasi tumbuhan temu giring ... 72

Lampiran 4 Bagan alur penelitian ... 75

Lampiran 5 Gambar mikroskopik serbuk simplisia rimpang temu giring ... 76

Lampiran 6 Perhitungan karakterisasi simplisia rimpang temu giring ... 77

Lampiran 7 Perhitungan karakterisasi EERTG ... 82

Lampiran 8 Gambar proses pengambilan sampel darah ... 85

Lampiran 9 Volume maksimum pemberian dan konversi dosis. ... 87

Lampiran 10 Perhitungan volume pemeberian EERTG dosis 5, 25, 125, dan 625 mg/kg bb serta parasetamol dosis 2 mg/kg bb ... 88

Lampiran 11 Hasil pemeriksaan aktivitas ALT dan AST ... 90

Lampiran 12 Cara kerja Reagen kit ALT danAST ... 92

Lampiran 13 Rekomendasi persetujuan etik penelitian kesehatan ... 96

Lampiran 14 Tabel distribusi F ... 97