Uji Toksisitasekstrak Etanol dan Fraksi n-Heksana, Etilasetat Dan Air Daun Titanus (Leea aequata L.) Terhadap Artemia salina Leach Dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test

Lampiran 2. Gambartumbuhan dan daun titanus (Leea aequata L.)

Tumbuhan titanus

P1 = 27,3 P2 = 26,2 P3 = 23,1 P4 = 21,2 L = 8,2 L = 8,0 L = 7,9 L = 6,9

Lampiran 3.Gambar simplisia dan serbuk simplisia daun titanus

P1 = 21,9P2 = 21,2 P3 = 16,3 P4 = 16,0

L = 4,3 L = 5,0 L = 4,0 L = 3,0

Simplisia daun titanus

Lampiran 4.Gambarmikroskopik serbuk daun titanus (Leea aequata L.)

1 2 3

4

Keterangan :

1. Rambut kelenjar 2. Rambut penutup

3. Kristal kalsium oxalat bentuk jarum 4. Stomata tipe parasitik

Lampiran 5. Perhitungan kadar air dan hasil statistik standar deviasi simplisia daun titanus

5.1 Kadar air simplisia = Volume akhir − Volume awal

Beratsampel x 100%

No Berat sampel (g) Volume awal (ml)

Volume akhir (ml)

1. 5,0063 0,95 1,2

2. 5,0100 1,2 1,45

3. 5,150 1,45 1,7

a. Kadar air = 0,25 mL

5,006 3 gx 100 mL

=

4,99%

b. Kadar air = 0,25 mL

5,0105 g x 100 mL

=

4,98%

c. Kadar air = 0,25 mL

5,0150 g x 100 mL

=

4,98%

d. % Rata-rata kadar air = 4,99% + 4,98% + 4,98%

Lampiran 6.Perhitungan % rendemen ekstrak dan fraksi

 % Rendemen ekstrak etanol = ekstrak etanol

simplisia awalx 100 ml

= 69 g

500 gx 100 ml

=

13,8%

 % Rendemen fraksi n-heksana = fraksi −heksana

simplisia awal x 100 ml

= 2,1 g

500 gx 100 ml

=

0,42%

 % Rendemen fraksi etilasetat = fraksi etilasetat

simplisia awal x 100 ml

= 2,5 g

500 gx 100 ml

=

0,5%

 % Rendemen fraksi air = fraksi air

simplisia awalx 100 ml

= 2,7 g

500 gx 100 ml

44 Karakterisasi simplisia:

1. Pemeriksaan Makroskopik 2. Pemeriksaan Mikroskopik 3. Penetapan Kadar Air

Skrining Fitokimia: 1. Alkaloid

2. Flavonoid 3. Glikosida

4. Glikosida antrakinon 5. Tanin

6. Saponin Lampiran 7. Bagan kerja penelitian

7.1 Bagan pengolahan daun titanus (Leea aequata L.) dan ekstraksi serbuk simplisisa secara maserasi dan ekstraksi cair-cair (ECC).

Dicuci dari pengotor hingga bersih, ditiriskan

Ditimbang berat basah

Dirajang dan dikeringkan dalam lemari pengering

Sortasi kering

Ditimbang berat kering

Dihaluskan Daun titanus segar

Simplisia

Serbuk simplisia

Ekstraksi

Lampiran 7 (lanjutan)

7.2 Bagan pembuatan ekstrak etanol

Dimasukkan kedalam wadah kaca Ditambahkan 75 bagian etanol 96% Ditutup

Dibiarkan selama 5 hari terlindung dari cahaya sambil sering diaduk

Diperas

Dicuci dengan etanol 96%, disaring hingga diperoleh 100 bagian

Dipindahkan kedalam bejana tertutup

Dibiarkan ditempat sejuk dan terlindung cahaya selama 2 hari

Dienap tuangkan atau disaring

Dipekatkan dengan evaporator berputar pada suhu tidak lebih dari 400 C

Di keringkan 500 g serbuk simplisia

Maserat Ampas

Maserat

Ekstrak kental etanol Maserat

Lampiran 7 (lanjutan)

Dilarutkan dengan 10ml etanol Dimasukkan dalam corong pisah

Ditambahkan 50 ml air dan 50 ml n-heksana Digojok

Didiamkan hingga memisah sempurna Ditampung bagian atasnya

Dilakukan sampai tidak berwarna

Dimasukkan dalam corong pisah

Ditambahkan 50 ml etilasetat Diuapkan Digojok

Didiamkan

Ditampung bagian atasnya Dilakukan sampai tidak berwarna

Diuapkan Diuapkan

Pemeriksaan senyawa Ekstraksi cair-cair

10 g ekstrak kental etanol

Lapisan etanol-air

Lapisan n-heksana

Fraksi n-heksana

Lapisan air Lapisan etilasetat

Lampiran 7 (lanjutan)

7.4 Bagan penyiapan air laut buatan

Dilarutkan terlebih dahulu dalam beaker glass

Dimasukkan dalam labu tentukur 1000 ml Ditambahkan air suling sampai 1000 ml 38 g gram non-yodium

Lampiran 7 (lanjutan)

7.5 Bagan pengujian toksisitas

Dilarutkan dengan Na-CMC 0,5% 0,1 ml

Ditambah dengan air laut buatan 5 mL

Dipipet 0,5 ml

Dicukupkan sampai 5 ml (diulang 5 kali)

Dipipet 0,5 ml

Dicukupkan sampai 5 ml

Dipipet 0,5ml

Dicukupkan sampai 5 ml

Dimasukkan 10 ekor Artemia salina Leach

Ditambahkan air laut buatan sampai 5 ml

50 mg ekstrak/fraksi

Larutan konsentrasi 10.000 µg/ml

Larutan konsentrasi 1000 µg/ml

Larutan konsentrasi 100 µg/ml

Larutan konsentrasi 10 µg/ml Larutan konsentrasi

1000 µg/ml

Larutan konsentrasi 1000 µg/ml

Larutan konsentrasi 100 µg/ml

Larutan konsentrasi 100 µg/ml

Larutan konsentrasi 10 µg/ml

Larutan konsentrasi 10

Dibiarkan dibawah sinar lampu pijar 5 watt selama 24 jam

Dihitung jumlah Artemia salina Leach yang mati

Lampiran 8. Hasil dan perhitungan persamaan regresi linier daun titanus

Tabel hasil pengujian BSLT ekstrak etanol No Konsentr

asi (µg/ml)

Jumlahnauplii

yang mati % Kematian

P1 P2 P3 P4 P5 P1 P2 P3 P4 P5

1. 10 3 4 3 3 4 30 40 30 30 40

2. 100 10 8 9 8 7 100 80 90 80 70

3.

1000 10 10 10 10 9 100 10

0 100 100 90 Rata-rata 7,6

7 7,3 3 7,3 3 7,0 0 6,6 7 76,6 7 73, 33 73,3 3 70,0 0 66,6 7

Kontrol 0 0

Rumus % kematian: % kematian = � −

� x 100 %

Tes = Jumlah kematian nauplii larutan uji Kontrol = Jumlah kematian nauplii larutan kontrol Total = Jumlah nauplii yang digunakan

 % kematian (10 µ g/ml) P1 =3−0

10 x 100 % = 30 % P2 =4−0

10 x 100% = 40 % P3 =3−0

10 x 100 % = 30 % P4 =3−0

10 x 100 % = 30 % P5 =4−0

10 x 100 % = 40 % % Kematian nauplii

% kematian rata-rata: P1+ P2+P3+P4+P5 5

30+ 40+30+30+40

5 = 34%

 % kematian (100 µ g/ml) P1 =10−0

10 x 100 % = 100 %

Lampiran 8 (lanjutan)

P2 =8−0

10 x 100% = 80 % P3 =9−0

10 x 100 % = 90 % P4 =8−0

10 x 100 % = 80 % P5 =7−0

10 x 100 % = 70 %

% kematian rata-rata: P1+ P2+P3+P4+P5 5

100+ 80+90+80+70

5 = 84%

 % kematian (1000µ g/ml) P1 =10−0

10 x 100 % = 100 % P2 =10−0

10 x 100% = 100 % P3 =10−0

10 x 100 % = 100 % P4 =10−0

10 x 100 % = 100 % P5 =9−0

10 x 100 % = 90 %

% kematian rata-rata: P1+ P2+P3+P4+P5 5

100+ 100+100+100+90

5 = 98%

Lampiran 8(lanjutan)

Tabel perhitungan persamaan garis pengulangan pertama X

(Log konsentrasi)

Y

( % kematian) XY X

2

1 30 30 1

2 100 200 4

3 100 300 9

∑X = 6 ∑Y = 230 _{∑XY =}

530 ∑ X2= 14 X = 2 Y = 76,66

a =

∑XY−∑X .∑Y/n ∑X²− ∑X 2_/n

= 530−6.230 /3 14− 6 ²/3

= 530−460

14−12 = 35 b = y – ax

= 76,66 – 35 (2) = 6,66

Jadi, persamaan garis yang diperoleh adalah: y = ax + b

y = 35x + 6,66

Perhitungan LC50 dengan nilai y adalah 50: y = ax + b

50 = 35x + 6,66 35x = 43,34 x = 1,2382 LC50 = anti log x LC50 = anti log 1,2382

LC50 = 17,3061µg/ml

Lampiran 8(lanjutan)

Tabel perhitungan persamaan garis pengulangan kedua X

(Log konsentrasi)

Y

( % kematian) XY X

2

1 40 40 1

2 80 160 4

3 100 300 9

∑X = 6 ∑Y = 220 _{∑XY = 500 ∑}

X2= 14 X = 2 Y = 73,33

a =

∑XY−∑X .∑Y/n ∑X²− ∑X 2_/n

= 500−6.220 /3 14− 6 ²/3

= 500−440

14−12 = 30 b = y – ax

= 73,33– 30 (2) = 13,33

Jadi, persamaan garis yang diperoleh adalah: y = ax + b

y = 30x + 13,33

Perhitungan LC50 dengan nilai y adalah 50: y = ax + b

50 = 30x + 13,33 30x = 36,67 x = 36,67 LC50 = anti log x

LC50 = anti log 1,2223 LC50 = 16,6839µg/ml

Lampiran 8(lanjutan)

Tabel perhitungan persamaan garis pengulangan ketiga X

(Log konsentrasi)

Y

( % kematian) XY X

2

1 30 30 1

2 90 180 4

3 100 300 9

∑X = 6 ∑Y = 220 _{∑XY = 510 ∑ X}2

= 14 X = 2 Y = 73,33

a =

∑XY−∑X .∑Y/n ∑X²− ∑X 2_/n

= 510−6.220 /3 14− 6 ²/3

= 510−440

14−12 = 30 b = y – ax

= 73,33– 35 (2) = 3,33

Jadi, persamaan garis yang diperoleh adalah: y = ax + b

y = 35x + 3,33

Perhitungan LC50 dengan nilai y adalah 50: y = ax + b

50 = 35x + 3,33 35x = 46,67 x = 1,3334 LC50 = anti log x

LC50 = anti log 1,3334 LC50 = 21,5476µg/ml

Lampiran 8(lanjutan)

Tabel perhitungan persamaan garis pengulangan keempat X

(Log konsentrasi)

Y

( % kematian) XY X

2

1 30 30 1

2 80 160 4

3 100 300 9

∑X = 6 ∑Y = 210 _{∑XY = 490 ∑ X}2

= 14

X = 2 Y = 70

a =

∑XY−∑X .∑Y/n ∑X²− ∑X 2/n = 490−6.210 /3

14− 6 ²/3

= 490−420

14−12 = 35 b = y – ax

= 70– 35 (2) = 0

Jadi, persamaan garis yang diperoleh adalah: y = ax + b

y = 35x + 0

Perhitungan LC50 dengan nilai y adalah 50: y = ax + b

50 = 35x + 0 35x = 50 x = 1,4285 LC50 = anti log x

LC50 = anti log 1,4285 LC50 = 26,8225µg/ml

Lampiran 8(lanjutan)

Tabel perhitungan persamaan garis pengulangan kelima X

(Log konsentrasi)

Y

( % kematian) XY X

2

1 40 40 1

2 70 140 4

3 90 270 9

∑X = 6 ∑Y = 200

∑XY = 450 ∑ X2= 14

X = 2 Y = 66,66

a =

∑XY−∑X .∑Y/n ∑X²− ∑X 2/n = 450−6.210 /3

14− 6 ²/3

= 450−400

14−12 = 25 b = y – ax

= 66,66 – 25 (2) = 16,66

Jadi, persamaan garis yang diperoleh adalah: y = ax + b

y = 25x + 16,66

Perhitungan LC50 dengan nilai y adalah 50: y = ax + b

50 = 25x + 16,66 25x = 50 + 16,66 x = 1,3336 LC50 = anti log x

LC50 = anti log 1,3336 LC50 = 21,5575µg/ml

Rata-rata LC50 : P1+ P2+P3+P4+P5 5

: 17,3061 + 16,6839 + 21,5476 + 46,4087 + 21,5575

5 = 24,7007 µg/ml

Lampiran 8(lanjutan)

Tabel hasil pengujian BSLT fraksi n-heksana No

Konsentr asi (µg/ml)

Jumlahnauplii

yang mati % Kematian nauplii P1 P2 P3 P4 P5 P1 P2 P3 P4 P5

1. 10 4 3 3 3 2 40 30 30 30 20

2. 100 8 8 7 7 8 80 80 70 70 80

3. 1000 10 10 9 10 9 100 100 90 100 90 Rata-rata 7,3

3 7,0 0 6,3 3 6,6 6 6,3 3 73,3 3 70,0 0 63,3 3 66,6 6 63, 33

Kontrol 0 0

Rumus % kematian:

% kematian : � −

� x 100 %

Tes = Jumlah kematian nauplii larutan uji Kontrol = Jumlah kematian nauplii larutan kontrol Total = Jumlah nauplii yang digunakan

 % kematian (10 µ g/ml) P1 =4−0

10 x 100 % = 40 % P2 =3−0

10 x 100% = 30 % P3 =3−0

10 x 100 % = 30 % P4 =3−0

10 x 100 % = 30 % P5 =2−0

% kematian rata-rata: P1+ P2+P3+P4+P5 5

40+30+30+30+20

5 = 30%

 % kematian (100 µ g/ml) P1 =8−0

10 x 100 % = 80 % P2 =8−0

10 x 100% = 80 %

Lampiran 8 (lanjutan)

P3 =7−0

10 x 100 % = 70 % P4 =7−0

10 x 100 % = 70 % P5 =2−0

10 x 100 % = 20 %

% kematian rata-rata: P1+ P2+P3+P4+P5 5

80+ 80+70+70+20

5 = 76%

 % kematian (1000µ g/ml) P1 =10−0

10 x 100 % = 100 % P2 =10−0

10 x 100% = 100 % P3 =9−0

10 x 100 % = 90 % P4 =10−0

10 x 100 % = 100 % P5 =9−0

10 x 100 % = 90 %

% kematian rata-rata: P1+ P2+P3+P4+P5 5

100+ 100+90+100+90

5 = 96%

Lampiran 8(lanjutan)

Tabel perhitungan persamaan garis pengulangan pertama X

(Log konsentrasi)

Y

( % kematian) XY X

2

1 40 40 1

2 80 160 4

3 100 300 9

∑X = 6 ∑Y = 220 _{∑XY = 500 ∑ X}2

= 14 X = 2 Y = 73,33

a =

∑XY−∑X .∑Y/n ∑X²− ∑X 2/n = 500−6.220 /3

14− 6 ²/3

= 500−440

14−12 = 30 b = y – ax

= 73,33– 30 (2) = 13,33

Jadi, persamaan garis yang diperoleh adalah: y = ax + b

y = 30x + 13,33

Perhitungan LC50 dengan nilai y adalah 50: y = ax + b

50 = 30x + 13,33 30x = 36,67 x = 36,67

LC50 = anti log x LC50 = anti log 1,2223 LC50 = 16,6839µg/ml

Lampiran 8(lanjutan)

Tabel perhitungan persamaan garis pengulangan kedua X

(Log konsentrasi)

Y

( % kematian) XY X

2

1 30 30 1

2 80 160 4

3 100 300 9

∑X = 6 ∑Y = 210 _{∑XY = 490 ∑ X}2

= 14

X = 2 Y = 70

a =

∑XY−∑X .∑Y/n ∑X²− ∑X 2/n = 490−6.210 /3

14− 6 ²/3

= 490−420

14−12 = 35 b = y – ax

= 70– 35 (2) = 0

Jadi, persamaan garis yang diperoleh adalah: y = ax + b

y = 35x + 0

Perhitungan LC50 dengan nilai y adalah 50: y = ax + b

50 = 35x + 0 35x = 50 x = 1,4285 LC50 = anti log x

LC50 = anti log 1,4285 LC50 = 26,8225µg/ml

Lampiran 8(lanjutan)

Tabel perhitungan persamaan garis pengulangan ketiga X

(Log konsentrasi)

Y

( % kematian) XY X

2

1 30 30 1

2 70 140 4

3 90 270 9

∑X = 6 ∑Y = 190 _{∑XY = 440 ∑}

X2= 14 X = 2 Y = 63,33

a =

∑XY−∑X .∑Y/n ∑X²− ∑X 2_/n

= 440−6.210 /3 14− 6 ²/3

= 440−380

14−12 = 30 b = y – ax

= 63,33 – 30 (2) = 3,33

Jadi, persamaan garis yang diperoleh adalah: y = ax + b

y = 30x + 3,33

Perhitungan LC50 dengan nilai y adalah 50: y = ax + b

50 = 30x + 3,33 30x = 50 + 3,33 x = 1,5556

LC50 = anti log x LC50 = anti log 1,5556 LC50 = 35,9418µg/ml

Lampiran 8(lanjutan)

Tabel perhitungan persamaan garis pengulangan keempat X

(Log konsentrasi)

Y

( % kematian) XY X

2

1 30 30 1

2 70 140 4

3 100 300 9

∑X = 6 ∑Y = 200 _{∑XY = 470 ∑}

X2= 14 X = 2 Y = 66,66

a =

∑XY−∑X .∑Y/n ∑X²− ∑X 2_/n

= 470−6.200 /3 14− 6 ²/3

= 470−400

14−12 = 35 b = y – ax

= 66,66 – 35 (2) = - 3,34

Jadi, persamaan garis yang diperoleh adalah: y = ax + b

y = 35x – 3,34

Perhitungan LC50 dengan nilai y adalah 50: y = ax + b

50 = 35x – 3,34 35x = 50 + 3,34

x = 1,524 LC50 = anti log x LC50 = anti log 1,524 LC50 = 33,4195µg/ml

Lampiran 8(lanjutan)

Tabel perhitungan persamaan garis pengulangan kelima X

(Log konsentrasi)

Y

( % kematian) XY X

2

1 20 20 1

2 80 160 4

3 90 270 9

∑X = 6 ∑Y = 190

∑XY = 450 ∑ X2= 14 X = 2 Y = 63,33

a =

∑XY−∑X .∑Y/n ∑X²− ∑X 2_/n

= 450−6.190 /3 14− 6 ²/3

= 450−380

14−12 = 35 b = y – ax

= 63,33 – 35 (2) = - 6,67

Jadi, persamaan garis yang diperoleh adalah: y = ax + b

y = 35x – 6,67

Perhitungan LC50 dengan nilai y adalah 50: y = ax + b

50 = 35x – 6,67 35x = 50 – 6,67

x = 1,6191 LC50 = anti log x LC50 = anti log 1,6191 LC50 = 41,6006µg/ml

Rata-rata LC50 : P1+ P2+P3+P4+P5 5

: 16,6839 +26,8225 + 35,9418 + 33,4195 + 41,6006

5 = 30,8936 µg/ml

Lampiran 8 (lanjutan)

Tabel hasil pengujian BSLT fraksi etilasetat No

Konsentr asi (µg/ml)

Jumlahnauplii

yang mati % Kematian nauplii P1 P2 P3 P4 P5 P1 P2 P3 P4 P5

1. 10 2 3 3 2 2 20 30 30 20 20

2. 100 8 7 7 8 7 80 70 70 80 70

3. 1000 9 9 8 7 8 90 90 80 70 80

Rata-Rata 6,3

3 6,33 6,0 0 5,6 6 5,6 6 63,3 3 63,3 3 60, 00 56, 66 56, 66

Kontrol 0 0

Rumus % kematian: % kematian : � −

� x 100 %

Tes = Jumlah kematian nauplii larutan uji Kontrol = Jumlah kematian nauplii larutan kontrol Total = Jumlah nauplii yang digunakan

 % kematian (10 µ g/ml) P1 =2−0

10 x 100 % = 20 % P2 =3−0

10 x 100% = 30 % P3 =3−0

10 x 100 % = 30 % P4 =2−0

P5 =2−0

10 x 100 % = 20 %

% kematian rata-rata: P1+ P2+P3+P4+P5 5

20+30+30+20+20

5 = 24%

 % kematian (100 µ g/ml) P1 =8−0

10 x 100 % = 80 % P2 =7−0

10 x 100% = 70 %

Lampiran 8 (lanjutan)

P3 =7−0

10 x 100 % = 70 % P4 =8−0

10 x 100 % = 80 % P5 =7−0

10 x 100 % = 70 %

% kematian rata-rata: P1+ P2+P3+P4+P5 5

80+ 70+70+80+70

5 = 74%

 % kematian (1000µ g/ml) P1 =9−0

10 x 100 % = 90 % P2 =9−0

10 x 100% = 90 % P3 =8−0

10 x 100 % = 80 % P4 =7−0

10 x 100 % = 70 % P5 =8−0

% kematian rata-rata: P1+ P2+P3+P4+P5 5

90+ 90+80+70+80

5 = 82%

Lampiran 8(lanjutan)

Tabel perhitungan persamaan garis pengulangan pertama X

(Log konsentrasi)

Y

( % kematian) XY X

2

1 20 20 1

2 80 160 4

3 90 270 9

∑X = 6 ∑Y = 190 _{∑XY = 450 ∑}

X2= 14 X = 2 Y = 63,33

a =

∑XY−∑X .∑Y/n ∑X²− ∑X 2_/n

= 450−6.190 /3 14− 6 ²/3

= 450−380

14−12 = 35 b = y – ax

= 63,33 – 35 (2) = - 6,67

Jadi, persamaan garis yang diperoleh adalah: y = ax + b

y = 35x – 6,67

Perhitungan LC50 dengan nilai y adalah 50: y = ax + b

35x = 50 – 6,67 x = 1,6191 LC50 = anti log x LC50 = anti log 1,6191 LC50 = 41,6006µg/ml

Lampiran 8(lanjutan)

Tabel perhitungan persamaan garis pengulangan kedua X

(Log konsentrasi)

Y

( % kematian) XY X

2

1 30 30 1

2 70 140 4

3 90 270 9

∑X = 6 ∑Y = 190

∑XY = 450 ∑ X2= 14 X = 2 Y = 63,33

a =

∑XY−∑X .∑Y/n ∑X²− ∑X 2/n = 450−6.190 /3

14− 6 ²/3

= 450−380

14−12 = 35 b = y – ax

= 63,33 – 35 (2) = - 6,67

Jadi, persamaan garis yang diperoleh adalah: y = ax + b

y = 35x – 6,67

Perhitungan LC50 dengan nilai y adalah 50: y = ax + b

50 = 35x – 6,67 35x = 50 – 6,67 x = 1,6191 LC50 = anti log x LC50 = anti log 1,6191 LC50 = 41,6006µg/ml

Lampiran 8(lanjutan)

Tabel perhitungan persamaan garis pengulangan ketiga X

(Log konsentrasi)

Y

( % kematian) XY X

2

1 30 30 1

2 70 140 4

3 80 240 9

∑X = 6 ∑Y = 180 _{∑XY = 410 ∑ X}2

= 14

X = 2 Y = 60

a =

∑XY−∑X .∑Y/n ∑X²− ∑X 2/n = 410−6.180 /3

14− 6 ²/3

= 410−360

14−12 = 25 b = y – ax

= 60 – 25 (2) = 10

Jadi, persamaan garis yang diperoleh adalah: y = ax + b

y = 25x + 10

y = ax + b 50 = 25x + 10 25x = 50 – 10 x = 1,6 LC50 = anti log x LC50 = anti log 1,6 LC50 = 39,8107µg/ml

Lampiran 8(lanjutan)

Tabel perhitungan persamaan garis pengulangan keempat X

(Log konsentrasi)

Y

( % kematian) XY X

2

1 20 20 1

2 80 160 4

3 70 210 9

∑X = 6 ∑Y = 170 _{∑XY = 390 ∑ X}2

= 14 X = 2 Y = 56,66

a =

∑XY−∑X .∑Y/n ∑X²− ∑X 2_/n

= 390−6.170 /3 14− 6 ²/3

= 390−340

14−12 = 25 b = y – ax

= 56,66 – 25 (2) = 6,66

Jadi, persamaan garis yang diperoleh adalah: y = ax + b

Perhitungan LC50 dengan nilai y adalah 50: y = ax + b

50 = 25x + 6,66 25x = 50 – 6,66 x = 1,7336 LC50 = anti log x LC50 = anti log 1,7336 LC50 = 54,1501µg/ml

Lampiran 8(lanjutan)

Tabel perhitungan persamaan garis pengulangan kelima X

(Log konsentrasi)

Y

( % kematian) XY X

2

1 20 20 1

2 70 120 4

3 80 240 9

∑X = 6 ∑Y = 170 _{∑XY = 400 ∑}

X2= 14 X = 2 Y = 56,66

a =

∑XY−∑X .∑Y/n ∑X²− ∑X 2_/n

= 400−6.170 /3 14− 6 ²/3

= 400−340

14−12 = 30 b = y – ax

= 56,66 – 30 (2) = - 3,34

Jadi, persamaan garis yang diperoleh adalah: y = ax + b

Perhitungan LC50 dengan nilai y adalah 50: y = ax + b

50 = 30x – 3,34 30x = 50 + 3,34 x = 1,7786 LC50 = anti log x LC50 = anti log 1,7786 LC50 = 59,9979 µg/ml

Rata-rata LC50 : P1+ P2+P3+P4+P5 5

: 41,6006 + 41,6006 + 39,8107 + 54,1501 + 59,9979

5 = 47,4319 µg/ml

Lampiran 8 (lanjutan)

Tabel hasil pengujian BSLT fraksi air No

Konsentrasi (µg/ml)

Jumlahnauplii

yang mati % Kematian nauplii P1 P2 P3 P4 P5 P1 P2 P3 P4 P5

1. 10 2 2 2 1 3 20 20 20 10 30

2. 100 5 6 6 7 7 50 60 60 70 70

3. 1000 9 8 7 7 8 90 80 70 70 80

Rata-Rata 5,33 5,33 5 5 6 53,33 53,33 50 50 60

Kontrol 0 0

Rumus % kematian:

% kematian : � −

� x 100 %

Tes = Jumlah kematian nauplii larutan uji Kontrol = Jumlah kematian nauplii larutan kontrol Total = Jumlah nauplii yang digunakan

 % kematian (10 µ g/ml) P1 =2−0

10 x 100 % = 20 % P2 =2−0

P3 =2−0

10 x 100 % = 20 % P4 =1−0

10 x 100 % = 10 % P5 =3−0

10 x 100 % = 30 %

% kematian rata-rata: P1+ P2+P3+P4+P5 5

20+20+20+10+30

5 = 20%

 % kematian (100 µ g/ml) P1 =5−0

10 x 100 % = 50 % P2 =6−0

10 x 100% = 60 %

Lampiran 8 (lanjutan)

P3 =6−0

10 x 100 % = 60 % P4 =7−0

10 x 100 % = 70 % P5 =7−0

10 x 100 % = 70 %

% kematian rata-rata: P1+ P2+P3+P4+P5 5

50+60+60+70+70

5 = 62%

 % kematian (1000µ g/ml) P1 =9−0

10 x 100 % = 90 % P2 =8−0

10 x 100% = 80 % P3 =7−0

P4 =7−0

10 x 100 % = 70 % P5 =8−0

10 x 100 % = 80 %

% kematian rata-rata: P1+ P2+P3+P4+P5 5

90+80+70+70+80

5 = 78%

Lampiran 8 (Lanjutan)

Tabel perhitungan persamaan garis pengulangan pertama X

(Log konsentrasi)

Y

( % kematian) XY X

2

1 20 20 1

2 50 100 4

3 90 270 9

∑X = 6 ∑Y = 160 _{∑XY = 390 ∑ X}2

= 14 X = 2 Y = 53,33

a =

∑XY−∑X .∑Y/n ∑X²− ∑X 2/n = 390−6.160 /3

14− 6 ²/3

= 450−380

14−12 = 35 b = y – ax

= - 16,67

Jadi, persamaan garis yang diperoleh adalah: y = ax + b

y = 35x – 16,67

Perhitungan LC50 dengan nilai y adalah 50: y = ax + b

50 = 35x – 16,67 35x = 50 + 16,67 x = 1,9048 LC50 = anti log x LC50 = anti log 1,9048 LC50 = 80,3156µg/ml

Lampiran 8 (lanjutan)

Tabel perhitungan persamaan garis pengulangan kedua X

(Log konsentrasi)

Y

( % kematian) XY X

2

1 20 20 1

2 60 120 4

3 80 240 9

∑X = 6 ∑Y = 160 _{∑XY = 380 ∑ X}2

= 14 X = 2 Y = 53,33

a =

∑XY−∑X .∑Y/n ∑X²− ∑X 2/n = 380−6.160 /3

14− 6 ²/3

= 380−320

14−12 = 30 b = y – ax

= 53,33 – 30 (2) = - 6,67

Jadi, persamaan garis yang diperoleh adalah: y = ax + b

y = 30x + 6,67

Perhitungan LC50 dengan nilai y adalah 50: y = ax + b

50 = 30x + 6,67 30x = 50 + 6,67 x = 1,889 LC50 = anti log x LC50 = anti log 1,889 LC50 = 77,4461µg/ml

Lampiran 8 (lanjutan)

Tabel perhitungan persamaan garis pengulangan kedua X

(Log konsentrasi)

Y

( % kematian) XY X

2

1 20 20 1

2 60 120 4

3 80 240 9

∑X = 6 ∑Y = 160

∑XY = 380 ∑ X2= 14 X = 2 Y = 53,33

a =

∑XY−∑X .∑Y/n ∑X²− ∑X 2_/n

= 380−6.160 /3 14− 6 ²/3

= 380−320

14−12 = 30 b = y – ax

= 53,33 – 30 (2) = - 6,67

Jadi, persamaan garis yang diperoleh adalah: y = ax + b

y = 30x + 6,67

Perhitungan LC50 dengan nilai y adalah 50: y = ax + b

50 = 30x + 6,67 30x = 50 + 6,67 x = 1,889 LC50 = anti log x LC50 = anti log 1,889 LC50 = 77,4461µg/ml

Lampiran 8 (lanjutan)

Tabel perhitungan persamaan garis pengulangan ketiga X

(Log konsentrasi)

Y

( % kematian) XY X

2

1 20 20 1

2 60 120 4

3 70 210 9

∑X = 6 ∑Y = 150 _{∑XY = 350 ∑}

X2= 14

X = 2 Y = 50

a =

∑XY−∑X .∑Y/n ∑X²− ∑X 2_/n

= 350−6.150 /3 14− 6 ²/3

= 350−300

b = y – ax = 50 – 25 (2) = 0

Jadi, persamaan garis yang diperoleh adalah: y = ax + b

y = 25x + 0

Perhitungan LC50 dengan nilai y adalah 50: y = ax + b

50 = 25x + 0 25x = 50 x = 2

LC50 = anti log x LC50 = anti log 2 LC50 = 100 µg/ml

Lampiran 8 (lanjutan)

Tabel perhitungan persamaan garis pengulangan keempat X

(Log konsentrasi)

Y

( % kematian) XY X

2

1 10 10 1

2 70 140 4

3 70 210 9

∑X = 6 ∑Y = 150 _{∑XY = 360 ∑ X}2

= 14

X = 2 Y = 50

a =

∑XY−∑X .∑Y/n ∑X²− ∑X 2_/n

= 360−6.150 /3 14− 6 ²/3

= 360−300

b = y – ax = 50 –30 (2) = - 10

Jadi, persamaan garis yang diperoleh adalah: y = ax + b

y = 30x –10

Perhitungan LC50 dengan nilai y adalah 50: y = ax + b

50 = 30x –10 30x = 50 + 10 x = 2

LC50 = anti log x LC50 = anti log 2 LC50 = 100 µg/ml

Lampiran 8(lanjutan)

Tabel perhitungan persamaan garis pengulangan kelima X

(Log konsentrasi)

Y

( % kematian) XY X

2

1 30 30 1

2 70 140 4

3 80 240 9

∑X = 6 ∑Y = 180 _{∑XY = 410 ∑}

X2= 14

X = 2 Y = 60

a =

∑XY−∑X .∑Y/n ∑X²− ∑X 2_/n

= 410−6.180 /3 14− 6 ²/3

= 410−360

b = y – ax = 60 – 25 (2) = 10

Jadi, persamaan garis yang diperoleh adalah: y = ax + b

y = 25x + 10

Perhitungan LC50 dengan nilai y adalah 50: y = ax + b

50 = 25x + 10 25x = 50 – 10 x = 1,6 LC50 = anti log x LC50 = anti log 1,6 LC50 = 39,8107µg/ml

Rata-rata LC50 : P1+ P2+P3+P4+P5 5

: 80,3156 + 77,4461 + 100 + 100 + 39,8107

5 = 79,5144 µg/ml

Lampiran 9. Data rerata dan SD jumlah kematian nauplii

Tabel hasil perhitungan rerata dan SD dari kematian nauplii Ekstrak/Fraksi Rerata kematian nauplii

Etanol P1 P2 P3 P4 P5

7,66 7,33 7,33 7,00 6,66 SD (±) 4.041 3.055 3.786 3.606 2.517

n-Heksana 7,33 7,00 6,33 6,66 6,33 SD (±) 3.055 3.606 3.055 3.512 3.786 Etilasetat 6,33 6,33 6,00 5,66 5,66

SD (±) 3.786 3.055 2.646 3.215 3.215

Air 5,33 5,33 5,00 5,00 6,00

Lampiran 10. Hasil perhitungan statistik standar deviasi

Tabel perhitungan statistik ekstrak etanol pengulangan pertama Descriptives

N Mean

Std. Deviation

Std. Error

95% Confidence Interval for Mean

Minimu m

Maxim um Lower

Bound

Upper Bound

10 µg/ml 1 3.00 . . . . 3 3

1000 µg/ml 1 10.00 . . . . 10 10 Total 3 7.67 4.041 2.333 -2.37 17.71 3 10

Tabel perhitungan statistik ekstrak etanol pengulangan kedua Descriptives

N Mean Std. Deviation

Std. Error

95% Confidence Interval for Mean

Minimu m Maxim um Lower Bound Upper Bound

10µg/ml 1 4.00 . . . . 4 4

100µg/ml 1 8.00 . . . . 8 8

1000µg/ml 1 10.00 . . . . 10 10

Total 3 7.33 3.055 1.764 -.26 14.92 4 10

Tabel perhitungan statistik ekstrak etanol pengulangan ketiga Descriptives

N Mean Std. Deviation

Std. Error

95% Confidence Interval for Mean

Minimu m Maxim um Lower Bound Upper Bound

10µg/ml 1 3.00 . . . . 3 3

100µg/ml 1 9.00 . . . . 9 9

Total 3 7.33 3.786 2.186 -2.07 16.74 3 10

Tabel perhitungan statistik ekstrak etanol pengulangan keempat Descriptives

N Mean Std. Deviation

Std. Error

95% Confidence Interval for Mean

Minimu m

Maxim um Lower

Bound

Upper Bound

10µg/ml 1 3.00 . . . . 3 3

100µg/ml 1 8.00 . . . . 8 8

1000µg/ml 1 10.00 . . . . 10 10

Total 3 7.00 3.606 2.082 -1.96 15.96 3 10

Lampirn 10 (lanjutan)

Tabel perhitungan statistik ekstrak etanol pengulangan kelima Descriptives

N Mean Std. Deviation

Std. Error

95% Confidence Interval for Mean

Minimu m

Maxim um Lower

Bound

Upper Bound

Tabel hasil perhitungan statistik fraksi n-heksana pengulangan pertama

Lampirn 10 (lanjutan)

Tabel hasil perhitungan statistik fraksi n-heksana pengulangan kedua

Descriptives

N Mean Std. Deviation

Std. Error

95% Confidence Interval for Mean

Minimu m Maxim um Lower Bound Upper Bound

100µg/ml 1 7.00 . . . . 7 7

1000µg/ml 1 9.00 . . . . 9 9

Total 3 6.67 2.517 1.453 .42 12.92 4 9

Descriptives

N Mean Std. Deviation

Std. Error

95% Confidence Interval for Mean

Minimu m Maxim um Lower Bound Upper Bound

10 µg/ml 1 4.00 . . . . 4 4

100 µg/ml 1 8.00 . . . . 8 8

1000 µg/ml 1 10.00 . . . . 10 10

10µg/ml 1 3.00 . . . . 3 3

100µg/ml 1 8.00 . . . . 8 8

1000µg/ml 1 10.00 . . . . 10 10

Total 3 7.00 3.606 2.082 -1.96 15.96 3 10

Tabel hasil perhitungan statistik fraksi n-heksana pengulangan ketiga Descriptives

N Mean Std. Deviation

Std. Error

95% Confidence Interval for Mean

Minimu m

Maxim um Lower

Bound

Upper Bound

10 µg/ml 1 3.00 . . . . 3 3

100 µg/ml 1 7.00 . . . . 7 7

1000 µg/ml 1 9.00 . . . . 9 9

Total 3 6.33 3.055 1.764 -1.26 13.92 3 9

Lampirn 10 (lanjutan)

Tabel hasil perhitungan statistik fraksi n-heksana pengulangan kelima

Lampiran 10 (lanjutan)

Tabel hasil perhitungan statistik fraksi etilasetat pengulangan pertama Descriptives

N Mean Std. Deviation

Std. Error

95% Confidence Interval for Mean

Minimu m Maxim um Lower Bound Upper Bound

10µg/ml 1 3.00 . . . . 3 3

100µg/ml 1 7.00 . . . . 7 7

1000µg/ml 1 10.00 . . . . 10 10

Total 3 6.67 3.512 2.028 -2.06 15.39 3 10

Descriptives

N Mean Std. Deviation

Std. Error

95% Confidence Interval for Mean

Minimu m Maxim um Lower Bound Upper Bound

10 1 2.00 . . . . 2 2

100 1 8.00 . . . . 8 8

1000 1 9.00 . . . . 9 9

Tabel hasil perhitungan statistik fraksi etilasetat pengulangan kedua

Descriptives

N Mean Std. Deviation

Std. Error

95% Confidence Interval for Mean

Minimu m

Maxi mum Lower

Bound

Upper Bound

10 µg/ml 1 3.00 . . . . 3 3

100 µg/ml 1 7.00 . . . . 7 7

1000 µg/ml 1 9.00 . . . . 9 9

Total 3 6.33 3.055 1.764 -1.26 13.92 3 9 Descriptives

N Mean Std. Deviation

Std. Error

95% Confidence Interval for Mean

Minimu m

Maxim um Lower

Bound

Upper Bound

10 1 2.00 . . . . 2 2

100 1 8.00 . . . . 8 8

1000 1 9.00 . . . . 9 9

DAFTAR PUSTAKA

Amelia, S. (2015). KarakterisasiSimplisia DanUjiToksisitasEkstrak Etanol Serta Fraksin-Heksana dan Etilasetat TeripangPearsonothuria graeffei (Semper) TerhadapArtemia salina Leach. Skripsi. Program Studi Sarjana Farmasi. Medan: Universitas Sumatera Utara. Halaman 26.

Anderson. J.E. (1991). A Blind Comparison of Simple Bench-Top Bioassays and Human Tumour Cell Cytotoxities as Antitumor Prescreens. Phytochem J

Anal. Vol. 2. Halaman 59.

Arbiastuti, Y., dan Muflihati. (2008). Isolasi dan Uji Aktivitas Kandungan Kimia Bioaktif dari Biji Duku (Lasium domesticum Corr). Jurnal Penelitian

Universitas Tanjung Pura. 10(2): 74.

Cahyadi, R. (2009). Uji Toksisitas Akut Ekstrak Etanol Buah Pare (Momordica

charantia L.) Terhadap Larva Artemia salina Leach Dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Skripsi. Semarang: Fakultas

Kedokteran Universitas Diponegoro.Halaman 54-58.

Depkes, RI. (1978). Materia Medika Indonesia. Jilid II. Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Halaman 150-156, 165-167.

Depkes, RI. (1979). Materia Medika Indonesia. Jilid III. Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Halaman 33-34, 696.

Depkes, RI. (1980). Materia Medika Indonesia. Jilid IV. Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Halaman 152.

Depkes, RI. (1989). Materia Medika Indonesia. Jilid V. Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Halaman 151-154.

Depkes, RI. (1995). Materia Medika Indonesia. Jilid VI. Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Halaman 7, 896-898. 1112.

Depkes, RI. (2001).Inventaris Tanaman Obat Indonesia. Jilid II. Jakarta: Departemen Kesehatan dan Kesejahteraan SosialRI Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan. Halaman 195.

Depkes, RI. (2007). Kebijakan Obat Tradisional. Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Halaman 321-325.

Dey, P.M. (2012). Methods in Plant Biochemistry. Volume I. USA: Academic Press. Halaman 81-82.

Ditjen, POM. (2000). Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Cetakan Pertama.Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Halaman 10-11, 14, 16, 17, 31-32.

Ditjen, POM. (1979). Farmakope Indonesia. Edisi III. Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Halaman 9, 12, 33.

Ditjen POM. (1985). Cara Pembuatan Simplisia. Jakarta: Depkes RI. Halaman 11-13.

Fanani, R. (2009). Uji Toksisitas Akut Ekstrak Etanol Daun Dewandaru (Eugenia

uniflora L,) Per Oral Pada Tikus Sprague Dawley. Skripsi. Surakarta:

Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta. Halaman 56. Farnsworth, N.R. (1966). Biologycal And Phytochemical Screening of Plants.

Chicago: Reheis Chemical Company. Journal of Pharmaceutical Science 55(3): 263-264.

Harborne, J.B. (1987). Metode Fitokimia. Penerjemah: Kosasih Padmawinata dan Iwang Soediro. Bandung: Penerbit ITB. Halaman 76, 147-149.

Heyne, K. (1950). De Nuttige Planten Van Nederlandsch Indie. Penerjemah: Badan Litbang Departemen Kehutanan. (1987). Tumbuhan Berguna Indonesia. Jilid III. Jakarta: Halaman 1279.

Inayah, Ningsih, dan Kustono. (2012). Uji Toksisitas dan Identifikasi Awal Golongan Senyawa Aktif Ekstrak Etanol dan n-Heksana Teripang Pasir (Holothuria scabra) Kering Pantai Kenjeran Surabaya. Alchemy. Vol. 2 No. 1. Halaman 93.

Indiastuti, D.N., Purwaningsih, S., Setiawati, Y., dan Cholies, N. (2008). Skrining Pendahuluan Toksisitas Beberapa Tumbuhan Benalu Terhadap Larva

Artemia salina Leach. Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia. Universitas

Airlangga. Halaman 81-85.

Kemala, S. (2012). Efek Toksisitas Akut Ekstrak Etanol Dan Fraksi Daun Bangun-Bangun (Plectranthus amboinicus (Lour.) Terhadap Larva

Artemia salina Leach Dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test. Skripsi. Program Studi Sarjana Farmasi. Medan: Universitas Sumatera

Utara. Halaman 18-19.

Kurniawan, H. (2012). Uji Toksisitas Akut Ekstrak Metanol Daun Kesum (Polygonum minus Huds)Terhadap Larva Artemia salina Leach Dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Skripsi. Program Studi Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan. Pontianak: Universitas Tanjungpura.Halaman 19-23.

Khare, C.P. (2007). Indian Medicinal Plants. New Delhi: Springe Science + Business Media, LCC. Halaman 211-249.

Kristianti, A.N., Aminah,N.S., Tanjung, M., dan Kurniadi, B. (2008). Buku Ajar

Fitokimia.Jurusan Kimia Laboratorium Kimia Organik FMIPA.

Surabaya: Universitas Airlangga. Halaman 14.

LIPI. (2015). Hasil Identifikasi/Determinasi Tumbuhan. Cibinong: Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia.

Malinda, I. (2015). Skrining Fitokimia dan Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Obat Antitetanus Pengobatan Tradisional Karo. Skripsi. Medan: Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara. Halaman 1-3, 35. Marliana, S.D., Suryanti, V. dan Suyono. (2005). Skrining Fitokimia dan Analisis

Kromatografi Lapis Tipis Komponen Kimia Buah Labu Siam (Sechium

edule Jacq. Swartz.) Dalam Ekstrak Etanol Biofarmasi. Volume 3.

Nomor 1. Halaman 26-31.

Meyer, U.N., N.R. Ferigni, J.E., Putnam, L.B., Ja Cobsen, D.E. Nichols, dan J.L. McLaughlin. (1982). Brine Shrimp: A Convenient General Bioassay For Active Plant Constituents. Planta Medica.Halaman45: 31-34.

Muaja, A.D., Kolengan, H.S.J., dan Runtuwene, M.R.J. (2013). Uji Toksisitas Dengan Metode BSLT dan Analisis Kandungan Fitokimia Ekstrak Daun Soyogik (Saurauia bracteosa DC) dengan Metode Soxhletasi. Jurnal

MIPAUNSRAT. Hal. 117.

Mudjiman, A. (1989). Udang Renik Air Asin (Artemia salina). Jakarta: Penerbit Bhratara. Halaman 17-21.

Mutia, D. (2010). Uji Toksisitas Akut Ekstrak Etanol Buah Anggur (Vitis vinifera) Terhadap Larva Artemia salina Leach Dengan Metode Brine Shrimp

Lethality Test (BSLT). Skripsi. Semarang: Fakultas Kedokteran

Universitas Diponegoro.Halaman 20-23.

Panjaitan, R. B. (2011). Uji Toksisitas Akut Ekstrak Kulit Batang Pulasari (Alyxiae Cortex) Dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT).

Skripsi.Yogyakarta: Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma.Halaman 20-23.

Rahman, M., Habib, R., Hasan, R., Islam, A.M.T., dan Khan, I.N. (2012). Comparative Antioxidant Potential Of Different Extracts Of Flacourtia Jangomas Lour Fruits.Asian Journal of Pharmaceutical and Clinical

Research. Halaman 5(1):73-75.

Reddy, B.S., Reddy, R.K.K., Reddy, B.P., Ramakrishna, S., dan Diwan, P.V. (2008). Potential in vitro antioxidant and protective effects of Soymida

febrifuga on ethanol induced oxidative damage in HepG2 cells. Food Chem. Toxicol. Halaman 46:3429–3442.

Runia, Y.A. (2008). Faktor-Faktor Yang Berhubungan Dengan Keracunan Pestisida Organofosfat, Karbanat, dan Kejadian Anemia Pada Petani Holikultura di Desa Terojasari Kecamatan Ngablak Kabupaten Magelang. Tesis. Semarang: Universitas Diponegoro. Halaman 77. Robinson, Trevor. (1995). Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi. Bandung:

Penerbit ITB. Hal. 157.

Suharmiati dan Handayan, Lestari.(2005). Phenolic Content Antioxidant Effect and Cytotoxic Activity Of Leea indica Leaves. Malaysia: University Of Malaya. Halaman 55.

Sangi, M., Runtuwene, M.R.J., Simbala, H.E.I., dan Makang, V.M.A. (2008).Analisis Fitokimia Tumbuhan Obat di Kabupaten Minahasa Utara.Skripsi. Manado: Fakultas MIPA UNSRAT. Halaman 57.

Saifuzzaman, Md., Awlad Hossaina, Md., Hossain, Anwar., Ali Eunus Sheemul and Amirul Islama, Md. (2008). Evaluation Of Analgesic Activity Of Ethanolic Extract Of Leea Indica Leaves. Bangladesh: Khulna University. Halaman. 51-59.

Srinivasan. (2009). Chemicalcomposition and antimicrobial activity of the essential oil of Leea indica(Burm. F.) Merr. flowers. Nat Prod Rad. Halaman 8:488–493.

Venn, R.F. (2008. Principles and Practices of Bioanalysis. Edisi kedua. Prancis: Taylor and Francis Group Ltd. Halaman 23-25.

Wagner. (1984). Plant Drug Analysis a Thin Layer Chromatography

Atlas.Springer-Verlag. Halaman 164.

Widyastuti, S. (2008). Uji Toksisitas Ekstrak Daun Iprih (Ficus glabella Blume) Terhadap Artemia salina Leachdan Profil Kromatografi Lapis Tipis.

Skripsi. Surakarta: Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah

Surakarta. Halaman 15.

WHO. (1998). WHO. (1998). Quality Control Methods For Medicinal Plant Materials. Switzerland. Hal. 31-33.

Wong, Y.H., dan Kadir, H.A. (2012). Biossay-guided isolation of cytotoxic cycloartane triterpenoid glycosides from the traditionally used medicinal plant Leea indica. Evid-Based Alt. Halaman 164-689

BAB III

METODE PENELITIAN

Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental dengan menguji efek toksisitas dari ekstrak etanol, fraksi n-heksana, fraksi etilasetat dan fraksi air daun titanus (Leea aequata L.) terhadap Artemia salina Leachmenggunakan metode

Brine Shrimp Lethality Test

yang

dilakukan di Laboratorium FarmakognosiFakultas Farmasi, Universitas Sumatera Utara.

3.1Alat

Alat–alat yang digunakandalampenelitianiniadalah alat-alat gelas laboratorium, aluminium foil,bejanamaserasi, bejana penetasan telur Artemia

salina Leach, blender (Panasonic, Jerman), bola karet, cawan porselin, desikator,

inkubator, krus porselin, kaca objek, kaca penutup, kertassaring, kertas label, batang pengaduk, lampu pijar 5 watt (Hannochs, China),lemari pengering, mikroskop (Boeco, Jerman),mortirdanstamfer, neraca analitik (Vibra AJ, Jepang),penangas air (Stuart, Inggris), evaporator berputar(Stuart, Inggris), seperangkatalatdestilasi, spatula, statif,seperangkat alat penetapan kadar air (Stuart, Inggris)danvial 10 ml.

3.2 Bahan

Bahan-bahan yang digunakan pada penelitian ini adalah daun titanus, telur

Artemia salina Leach, air laut buatan (ALB), ragi, garam non-yodium, Na-CMC

(Natrium-Carboxy Methyl Cellulose) dan akuades.Bahan kimia yang digunakan kecuali dinyatakan lain adalah berkualitas pro analisis yaitu: α-naftol,amonium hidroksida, asam asetat anhidrida, asam sulfat 2N, asam asetat pekat, asam klorida

2 N, asam klorida pekat, asam nitrat pekat, asam sulfat pekat, asam nitrat 0,5 N, benzena, besi (III) klorida, bismuth (III) nitrat, etanol (destilasi), etilasetat (destilasi),n-heksana (destilasi), eter,isopropanol, kalium iodida, kloroform, metanol, natrium hidroksida, amil alkohol, natrium sulfat anhidrat, petrolum eter, raksa (II) klorida, serbuk magnesium, serbuk zinkum, timbal (II) asetat dan toluena.

3.1Pembuatan Pereaksi 3.3.1 Pereaksi Kloralhidrat

Sebanyak 50 g kloralhidrat dilarutkan dalam 20 mLl air suling (Depkes, RI., 1979).

3.3.2 Pereaksi Dragendroff

Sebanyak 8 g bismut (III) nitrat dilarutkan dalam 20 ml asam nitrat pekat. Pada wadah lain dilarutkan 27,2 g kalium iodida dalam 50 ml air suling, kemudian kedua larutan dicampurkan dan didiamkan sampai memisah sempurna. Diambil lapisan jernih dan diencerkan dengan air suling hingga 100 ml (Depkes, RI., 1980).

3.3.3 Pereaksi Bouchardat

Sebanyak 4 g kalium iodida dilarutkan dalam air suling secukupnya, ditambahkan 2 g iodium dicukupkan dengan air suling hingga 100 mL (Depkes, RI., 1978).

3.3.4Pereaksi natrium hidroksida 2 N

Sebanyak 8,002 g kristal natrium hidroksida ditimbang, kemudian dilarutkan dalam air suling hingga 100 ml (Depkes RI, 1978).

Sebanyak 15,17 g timbal (II) asetat dilarutkan dalam air suling bebas CO2 hingga 100 ml(Depkes, RI., 1978).

3.3.6 Pereaksi besi (III) klorida 1% b/v

Sebanyak 1 g FeCl3 dilarutkan dalam air 100 ml (Depkes, RI., 1978). 3.3.7 Pereaksi asam nitrat 0,5 N

Sebanyak 3,4 ml asam nitrat pekat diencerkan dengan air suling 100 mL (Depkes, RI., 1979).

3.3.8 Pereaksi asam klorida 2 N

Sebanyak 17 ml HCl pekat diencerkan dalam air suling 100 ml (Depkes RI, 1978).

3.3.9 Pereaksi asam sulfat 2 N

Sebanyak 9,8 ml H2SO4 pekat ditambahkan air suling 100 ml (Depkes, RI., 1978).

3.3.10 Pereaksi Lieberman-Burchard

Sebanyak 5 ml asam asetat anhidrat dicampurkan perlahan dengan 5 ml H2SO4 pekat, ditambahkan 50 ml etanol ke dalam campuran tersebut (wagner, 1984).

3.3.11 Pereaksi Mayer

Sebanyak 1,3596 g raksa (II) klorida ditimbang, dilarutkan dalam air suling 60 ml. Wadah lain ditimbang 5 g kalium iodida, dilarutkan dalam 10 ml air suling, dicampurkan dan ditambahkan air suling 100 ml (Depkes RI, 1980).

3.3.12 Pereaksi Molisch

Sebanyak 3 g α-naftol ditimbang, kemudian dilarutkan dalam asam nitrat

0,5 N hingga 100 ml (Depkes, RI., 1978). 3.4 Penyiapan Sampel

Penyiapan sampel meliputi pengambilan sampel, identifikasi sampel serta pengolahan sampel (Malinda, 2015).

3.4.1Pengambilan sampel

Pengambilan sampel dilakukan secara purfosif tanpa membandingkan tumbuhan yang sama dari daerah lain. Sampel yang digunakan adalah daun titanus segar yang berwarna hijau (tidak terlalu tua dan tidak terlalu muda) yang diambil dari Desa Suka Nalu, Kecamatan Barus Jahe, Kabupaten Karo, Provinsi Sumatera Utara.

3.4.2Identifikasi sampel

Identifikasisampeldilakukandi HerbariumBogoriense, Bidang BotaniPusatPenelitianBiologiLembagaIlmuPengetahuan Indonesia (LIPI) Bogor. 3.4.3 Pengolahan sampel

Sebanyak 4 kg daun titanus dibersihkan dari pengotor dengan cara mencuci dibawah kran air yang mengalir hingga bersih, ditiriskan, ditimbang, dikeringkan dengan rak pengering selama 5 hari, disortasi kering, ditimbang berat kering. Sampel dianggap kering apabila sudah rapuh bila diremas, kemudian diserbukkan, disimpan dalam wadah plastik dan ditimbang (Malinda, 2015).Bagan pengolahan sampel dapatdilihatpada Lampiran 7, halaman 49.

3.5 Hewan Percobaan

Hewan percobaan yang digunakan pada penelitian ini adalah telur udang

Artemia salina Leach kering yang diproduksi oleh Amerika Serikat yang

diperoleh dari salah satu toko penjual ikan hias di dekat Plaza Thamrin. Jalan Mohammad Husni Thamrin No. 73B Medan.

Pemeriksaan karakteristik simplisia meliputi pemeriksaan makroskopik, mikroskopik dan penetapan kadar air.

3.6.1 Pemeriksaan makroskopik

Pemeriksaan makroskopik dilakukan dengan mengamati bentuk luar, ukuran, bau, rasa serta warna dari simplisia(Depkes, RI., 2007).

3.6.2 Pemeriksaan mikroskopik

Pemeriksaan mikroskopik dilakukan terhadap serbuk simplisia daun titanus. Sejumlah serbuk simplisia ditaburkan diatas objek glass yang telah ditetesi dengan larutan kloralhidrat, ditutupi dengan kaca penutup kemudian diamati dibawah mikroskop (Depkes, RI., 2007).

3.6.3 Penetapan kadar air

Penetapan kadar air dilakukan dengan metode Azeotropi (destilasi toluena). Cara kerja: Dimasukkan 200 ml toluena dan 2 mL air suling ke dalam labu alas bulat, lalu didestilisasi selama 2 jam. Toluena dibiarkan mendingin selama 30 menit, dan dibaca volume air pada tabung penerima dengan ketelitian 0,05 ml. Dimasukkan 5 g serbuk simplisia ke dalam labu tersebut yang telah ditimbang seksama, labu dipanaskan hati-hati selama 15 menit. Toluena mendidih, kecepatan tetesan diatur lebih kurang 2 tetes perdetik sampai sebagian besar air terdestilasi, kemudian kecepatan tetesan destilasi dinaikkan hingga 4 tetes perdetik. Semua air terdestilasi, bagian dalam pendingin dibilas dengan toluen. Destilasi dilanjutkan selama 5 menit, kemudian tabung penerima dibiarkan mendingin sampai suhu kamar. Air dan toluena memisah sempurna, volume air dibaca dengan ketelitian 0,05 ml. Selisih kedua volume air dibaca sesuai dengan kandungan air yang terdapat dalam bahan yang diperiksa. Kadar air dihitung dalam % (WHO, 1998). 3.7 Skirining Fitokimia

Skrining fitokimia fraksi n-heksana, etilasetat dan air dilakukan dengan cara yang sama dengan skrining fitokimia serbuk simplisia/ekstrak etanol sebanyak 0,1 g tiap-tiap fraksi meliputi pemeriksaan golongan alkaloid, flavonoid, glikosida, glikosida antrakinon, saponin, tanin dan steroid/triterpenoid.

3.7.1 Pemeriksaan alkaloid

Sebanyak 0,1 g fraksi n-heksana ditambahkan 1 ml asam klorida 2 N dan 9 ml air suling, dipanaskan diatas penangas air selama 2 menit, didinginkan dan disaring. Filtrat yang diperoleh dipakai untuk uji alkaloid sebagai berikut:

a. Filtrat 3 tetes ditambah 2 tetes pereaksi Mayer, maka akan terbentuk endapan menggumpal berwarna putih atau putih kekuningan.

b. Filtrat 3 tetes ditambah 2 tetes peraksi Bouchardat, maka terbentuk endapan berwarna coklat sampai hitam.

c. Filtrat 3 tetes ditambah 2 tetes peraksi Dragendorff, maka akan terbentuk endapan warna merah atau jingga.

Alkaloida positif jika ada endapan atau keruhan paling sedikit dua dari 3 percobaan diatas (Depkes, RI., 1995).

3.7.2 Pemeriksaan glikosida

Sebanyak 0,1 g fraksi n-heksana disari dengan 30 ml campuran etanol 95% dengan air (7:3) dan 10 ml asam sulfat 2 N, direfluks selama 10 menit, didinginkan dan disaring. Diambil 20 ml filtrat, ditambahkan 25 ml air suling dan 25 ml timbal (II) asetat 0,4 M, dikocok, dididamkanselama 5 menit lalu disaring. Filtrat disari dengan 20 ml campuran isopropanol dan kloroform (2:3), dilakukan sebanyak 3 kali menghasilkan 2 lapisan. Dikumpulkan masing-masing sari (sari air dan sari pelarut organik). Sari pelarut organik dikumpulkan dan ditambahkan natrium sulfat anhidrat, disaring kemudian diuapkan pada suhu tidak lebih dari

50oC. Sisanya dilarutkan dalam 2 ml metanol. Larutan sari air digunakan untuk percobaan berikut: 0,1 ml larutan percobaan dimasukkan dalam tabung reaksi, diuapkan di atas penangas air. Pada larutan ditambahkan 2 ml air dan 5 tetes pereaksi Molisch, lalu ditambahkan dengan hati-hati 2 ml asam sulfat pekat melalui dinding tabung, terbentuk cincin ungu pada batas kedua cairan, menunjukkan adanya ikatan gula (glikon) (Depkes, RI., 1995).

3.7.3 Pemeriksaan glikosida antrakinon

Sebanyak 0,1 g fraksi n-heksana ditambahkan 5 ml asam sulfat 2 N, dipanaskan sebentar, setelah dingin ditambahkan 10 ml benzena, dikocok dan didiamkan. Lapisan benzen dipisahkan dan disaring. Filtrat berwarna kuning menunjukkan adanya antrakinon. Kocok lapisan benzena dengan 2 ml NaOH 2 N, lalu didiamkan. Lapisan air berwarna merah dan lapisan benzena tidak berwarna menunjukkan adanya senyawa antrakinon (Depkes RI, 1995).

3.7.4 Pemeriksaan saponin

Sebanyak 0,1 g fraksi n-heksana dimasukkan ke dalam tabung reaksi, ditambahkan 10 ml air panas, didinginkan kemudian dikocok kuat-kuat selama 10 detik. Terbentuk busa setinggi 1-10 cm yang stabil tidak kurang dari 10 menit dan tidak hilang dengan penambahan asam klorida 2 N menunjukkan adanya saponin (Depkes, RI., 1995).

3.7.5 Pemeriksaan tanin

Sebanyak 0,1 g fraksi n-heksana disari dengan 10 ml dalam air suling lalu disaring. Filtratnya diencerkan dengan air sampai tidak berwarna. Larutan diambil sebanyak 2 ml dan ditambahkan 1-2 tetes pereaksi besi (III) klorida 1%. Jika terjadi warna biru atau kehitaman menunjukkan adanya tanin (Farnsworth, 1966). 3.7.6 Pemeriksaan steroid/triterpenoid

Sebanyak 0,1 g fraksi n-heksana dimaserasi dengan 20 ml n-heksana selama 2 jam lalu disaring. Filtrat diuapkan dalam cawan penguap. Sisa ditambahkan 2 tetes pereaksi Liebermann-Burchard, diteteskan pada saat akan mereaksikan sampel uji melalui dinding cawan. Timbulnya warna biru atau biru hijau menunjukkan adanya steroid, sedangkaan warna merah, merah muda atau ungu menunnjukkan adanya triterpenoid (Harbone, 1987).

3.7.7 Pemeriksaan flavonoida

Sebanyak 0,1 g fraksi n-heksana ditambahkan 10 ml air panas, didihkan selama 5 menit dan disaring dalam keadaan panas. Filtrat yang diperoleh diambil 5 ml, ditambahkan 0,1 g sebuk magnesium, 1 ml asam klorida pekat, 2 ml amil alkohol, dikocok dan dibiarkan memisah. Flavonoid positif jika terjadi warna merah atau kuning atau jingga pada lapisan amil alkohol (Farnsworth, 1966).

3.8 Pembuatan Ekstrak dan Fraksinasi 3.8.1 Pembuatan ekstrak etanol

Pembuatanekstrak etanol dilakukan secara maserasi dengan perbandingan serbuk simplisia dan cairan penyari adalah 1:10 yaitu sebanyak 500 g serbuk simplisisa dimasukkan kedalam wadah gelas berwarna gelap, dituangi 75 bagian cairan penyari (etanol 96%), ditutup, dibiarkan selama 5 hari terlindung dari cahaya sambil sering diaduk. Disaring dan dicuci ampas dengan cairan penyari secukupnya hingga diperoleh 100 bagian. Pindahkan kedalam bejana tertutup, biarkan ditempat sejuk dan terlindung dari cahaya selama 2 hari, dienaptuangkan atau saring. Maserat diuapkan menggunakan evaporator berputar pada suhu 400C sampai diperoleh ekstrak kental, kemudian dikeringkan (Ditjen POM, 1979). 3.8.2 Pembuatan fraksi

Fraksinasi dilakukan dengan metode ekstraksi cair-cair (ECC). 10 g ekstrak kental daun titanus dilarutkan dalam 10 ml etanol, ditambahkan 50 ml air suling, kemudian ditambahkan dengan n-heksana sebanyak 50 ml menggunakan corong pisah, digojok dan biarkan sampai memisah, kemudian dipisahkan, selanjutnya di fraksinasi kembali dengan menggunakan pelarut n-heksana hingga diperoleh fraksi yang jernih (tidak memberikan hasil positif dengan penambahan pereaksi Liebermann-Buchard), kemudian fraksi air ditambahkan 50 ml etilasetat, di gojok dan dibiarkan memisah. Lapisan etilasetat dipisahkan dan fraksinasi dilanjutkan sampai diperoleh fraksi etilasetat yang jernih (tidak memberikan hasil positif dengan penambahan pereaksi FeCl3 1%). Kumpulan hasil fraksi n-heksana, fraksi etilasetat dan fraksi air masing-masing diuapkan dengan evaporator berputar pada temperatur 400C sampai diperoleh ekstrak kental, kemudian dikeringkan dan disimpan pada tempat yang sesuai (Amelia, 2015). Bagan pembuatan fraksi dapat dilihat pada Lampiran 7, halaman 50.

3.9 Perhitungan Rendemen

Perhitungan rendemen dilakukan dengan menghitung jumlah ekstrak yang diperolehdengan simplisia awal kemudian dikalikan 100 % (Ditjen, POM., 2000).

3.10 Uji Toksisitas

Uji toksisitas dilakukan terhadap ekstrak etanol, fraksi n-heksana, fraksi etilasetat dan fraksi air menggunakan larvaArtemia salina Leach, yaitu sebagai berikut: Disiapkan air laut buatandengan melarutkan 38 g garam non-yodium dengan air suling, dicukupkan hingga 1 L kemudian disaring. Bejana penetasan disekat menjadi dua bagian, yaitu bagian yang besar dan bagian yang kecil, lalu diberi

lubang pada sekatnya. Dimasukkan air laut buatan ke dalam bejana, ditaburkan telur Artemia salina Leach ke dalam bagian yang kecil kemudian bagian atasnya ditutup dengan aluminium foil sedangkan bagian yang besar dibiarkan terbuka menghadap lampu pijar 5 watt selama 48 jam, telur akan menetas menjadi larva dan siap digunakan untuk hewan uji (Meyer, et al., 1982).

Sebanyak 0,5 g Na-CMC ditaburkan dalam lumpang yang berisi 20 ml air suling panas, didiamkan selama 15 menit lalu digerus hingga diperoleh massa yang transparan, diencerkan dengan air suling, dihomogenkan, dimasukkan ke dalam labu tentukur 100 mL dan dicukupkan volumenya dengan air suling hingga 100 ml.

Disiapkan larutan uji yang terdiri dari ekstrak etanol, fraksi n-heksana, fraksi etilasetat dan fraksi air dengan konsentrasi 1000, 100 dan 10 µg/ml. Disiapkan 5 vial untuk setiap konsentrasi larutan uji sehingga semuanya menjadi 60 vial dan vial untuk kontrol. Larutan induk I dibuat dengan menimbang50 mg ekstrak lalu ditambahkan 0,1 ml suspensi Na-CMC 0,5%, dicukupkan dengan air laut buatan sampai 5 ml sehingga diperoleh konsentrasi 10.000 µg/ml. Larutan induk I dipipet 0,5mL lalu diencerkan sampai 5 mL sehingga diperoleh larutan induk II dengan konsentrasi 1000 µg/mL. Larutan induk II dipipet 0,5 ml lalu diencerkan sampai 5 ml sehingga diperoleh konsentrasi 100 µg/ml. Konsentrasi 100 µg/ml dipipet 0,5ml lalu diencerkan sampai 5 ml sehingga diperoleh konsentrasi 10 µg/ml. Kontrol dilakukan tanpa penambahan sampel, hanya ditambahkan suspensi Na-CMC 0,5% sebanyak 0,1 ml sesuai jumlah yang digunakan untuk melarutkan ekstrak. Dimasukkan masing-masing larutan uji ke dalam vial ditambahkan 10 ekor larva, lalu dicukupkan dengan air laut buatan

sampai 5ml, lalu semua vial diletakkan dibawah cahaya lampu pijar 5 watt selama 24 jam, dihitung jumlah larvayang mati tiap dosis dan kontrol.

Data dihitung menggunakan rumus Abbott: Kematian = tes − kontrol

kontrol x 100

%. Data hasildianalisis dengan menggunakan analisis regresi linear untuk menentukan LC50 (Meyer, et al., 1982).

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Identifikasi Tumbuhan

Hasil identifikasi tumbuhan yang dilakuakan di Pusat Penelitian dan Pengembangan LIPI Bogor, menunjukkan bahwa tumbuhan yang diteliti adalah

Leea aequata L., suku Leeaceae. Hasil identifikasi dapat dilihat pada Lampiran 1,

halaman 38.

4.2 Pemeriksaan Makroskopik

Hasil pemeriksaan makroskopik simplisia daun titanus yaitu daun berwarna hijau, berbentuk lonjong, tepi daun bergerigi, ujung daun meruncing, berasa pahit dan bau aromatik. Hasil pemeriksaan dapat dilihat pada Lampiran 2 halaman 39-40.

4.3 Pemeriksaan Mikroskopik

Hasil pemeriksaan mikroskopik serbuk daun titanus memperlihatkan adanya stomata tipe parasitik, kristal kalsium oxalat bentuk jarum, rambut kelenjar dan rambut penutup. Hasil pemeriksaan dapat dilihat pada Lampiran 4, halaman 41.

4.4 Karakteristik

Menurut hasil penelitian yang telah dilakukan oleh Malinda (2015) tentang pemeriksaan karakteristik dari serbuk simplisadaun titanus diperoleh kadar air 4%, kadar sari larut air 8,11%, kadar sari larut etanol 9,61%, kadar abu total

7,58% dan kadar abu tidak larut asam 0,65%. Disebabkan telah adanya pemerikasaan karakteristik serbuk simplisia dari daun titanus sehingga peneliti tidak melakukan pemeriksaan karakteristik yang tertera diatas kecuali pemeriksaan kadar air.

Hasil pemeriksaan karakteristik simplisia daun titanus diperoleh kadar air 4,98%. Kadar air ini memenuhi persyaratan yaitu tidak lebih dari 10% (Depkes, RI., 1995). Penetapan kadar air dilakukan untuk memberi batasan atau rentang besarnya kandungan air didalam simplisia karena tingginya kandungan air dapat mempercepat pertumbuhan jamur (Ditjen, POM., 2000). Perhitungan kadar air simplisia daun titanus dilihat pada Lampiran 5, halaman 42.

4.5 Ekstraksi dan Fraksinasi

Hasil ekstraksi yang diperoleh dari simplisia daun titanus sebanyak 500 g yang dimaserasi dengan pelarut etanol 96% diperoleh ekstrak etanol daun titanus sebanyak 69 g dengan rendemen 13,8%. Hasil fraksinasi ekstrak etanol sebanyak 10 g menggunakan pelarut heksana, etilasetat dan air, diperoleh fraksi n-heksana 2,1 g dengan rendemen 0,42%, fraksi etilasetat 2,5 g dengan rendemen 0,5% dan fraksi air 2,7 g dengan rendemen 0,54%. Perhitungan % rendemen ekstrak dan fraksi dapat dilihat pada Lampiran 6, halaman 43.

4.6 Skrining Fitokimia

Hasil skrining fitokimia yang telah dilakukan oleh Malinda (2015) terhadap serbuk dan ekstrak daun titanus memiliki kandungan metabolit sekunder yang sama yaitu alkaloid, flavonoid, glikosida, saponin, tanin dan steroid/triterpenoid. Disebabkan telah adanya skirining fitokimia dari daun titanus

tersebut sehingga peneliti hanya melakukan skrining fitokima terhadap fraksi-fraksi saja. Skrining fitokimia dilakukan terhadap fraksi-fraksi n-heksana, fraksi-fraksi etilasetat dan fraksi air. Hasil skrining fitokimia dapat dilihat pada Tabel berikut: Tabel 4.1 Hasil skrining fitokimia fraksi-fraksi

No

Skrining

Hasil Fraksi

n-heksana

Fraksi etilasetat

Fraksi Air

1. Alkaloid - + +

2. Flavonoid - + +

3. Glikosida - - +

4. Glikosida antrakinon - - -

5. Saponin - + +

6. Tanin - + +

7. Steroid/Triterpenoid + - -

Keterangan : (+) = mengandung golongan senyawa (-) = tidak mengandung golongan senyawa

Pengujian alkaloid tidak terbentuk endapan putih pada uji Mayer, tetapi terbentuk endapan pada uji Dragendorff dan Bourchardat berarti dalam fraksi terdapat alkaloid yaitu fraksi etilasetat dan fraksi air. Tujuan penambahan HCl sebelumditambahkan pereaksi adalah karena alkaloidbersifat basa sehingga diekstrak denganpelarut yang mengandung asam (Harborne, 1987). Hasil positif alkaloid pada uji Dragendorff ditandai dengan terbentuknya endapan berwarna merah. Hasil positif alkaloid pada uji Bourchardatditandai dengan terbentuknya endapan berwarna coklat. Uji Mayer menunjukkan hasil alkaloid negatifkarenatidak terbentuknya endapan putih.

Uji flavonoid menghasilkan larutan berwarna kuning sehingga dikatakan positif. Menurut Robinson (1995) warna kuning yang dihasilkan menandakan

adanya flavonoid akibat dari reduksi oleh asam klorida pekat dan magnesium.Skrining glikosida ditunjukkan dengan penambahan pereaksi Molisch dan asam sulfat pekat dimana terbentuk cincin ungu. Pereaksi Molisch merupakan pereaksi umum yang digunakan untuk identifikasi karbohidrat, dalam hal ini adalah gula (Kemala, 2012).

Saponin merupakan bentuk glikosida dari sapogenin sehingga akan bersifat polar. Saponin adalah senyawa yang bersifat aktif permukaan dan dapat menimbulkan busa jika dikocok dalam air (Kristanti dkk., 2008). Timbulnya busa pada uji saponin menunjukkan adanya glikosida yang mempunyai kemampuan untuk membentuk buih dalam air yang terhidrolisis menjadi glukosa dan senyawa lainnya. Senyawa saponin tersebut akan cenderung tertarik oleh pelarut yang bersifat semi polar (Marliana, et al., 2005). Hasil skrining fitokimia positif saponin pada fraksi etilasetat dan fraksi air.

Identifikasi taninmenggunakan pereaksi besi(III)klorida. Hasilyang diperoleh pada fraksi etilasetat dan fraksi airadalah positif mengandung tanin denganmemberikan warna hijaukehitaman.Penambahan ekstrak dengan FeCl31%dalam air menimbulkan warna hijua, merah, ungu atau hitam yang kuat. Terbentuknyawarna hijau kehitaman pada ekstrak setelahditambahkan FeCl31%karena tanin akanbereaksi dengan ion Fe3+membentuksenyawa kompleks (Harborne, 1987).

Senyawa triterpenoid/steroid akan mengalami dehidrasi dengan penambahan asam kuat dalam pelarut asam asetat anhidratdan membentuk garam yang memberikan sejumlah reaksi warna (Sangi, 2008). Hasil yang diperoleh menunjukkan hasil positif dengan terbentuknya warna biru kehijauan yang menunjukkan adanya steroid dan tidak terbentuk warna merah, merah muda atau

ungu sehingga negatif mengandung triterpenoid. Menurut Harbone (1987) triterpenoid menunjukkan warna merah, merah muda atau ungu sedangkan steroid akan menghasilkan warna biru kehijauan.

4.7 Uji Toksisitas

Uji toksisitas dimaksudkan untuk memaparkan adanya efek toksik dalam kaitannya dengan penggunaan senyawa yang terdapat dalam tumbuhan tersebut (Widyastuti, 2008). Brine Shrimp Lethality Test merupakan salah satu metode untuk menguji bahan-bahan yang bersifat toksik dan digunakan sebagai uji hayati yang pertama untuk penelitian bahan alam karena cepat, murah, sederhana (tidak memerlukan teknik aseptik), untuk melakukannya tidak memerlukan peralatankhusus dan membutuhkan sampel yang relatif sedikit dalam pengujian BSLT ini.

Nilai LC50 nilai LC50. LC50 (LethalConcentration 50%) adalah tingkat konsentrasi ekstrak yang dibutuhkan untuk mematikan50% dari hewan yang diuji. Sehingga, apabila jumlah mortalitas lebih dari 50% dapatdipastikan nilai LC50 ˂

1000 μg/ml atau 1000 ppm. Metode ini menggunakan larva Artemia salina Leach

sebagai hewan uji. Uji toksisitas dengan metode ini merupakan uji toksisitas akut dimana efek toksik dari suatu senyawa ditentukan dalam waktu singkat, yaitu rentang waktu selama 24 jam setelah pemberian dosisi uji. Prosedurnya dengan menentukan nilai LC50 dari aktivitas komponen aktif tanaman terhadap larva

Artemia salina Leach (Kemala, 2012). Suatu ekstrak dikatakan toksik berdasarkan

metode BSLT jika harga LC50< 1000 µg/ml (Meyer, et al., 1982). Kematian larva

yang terkandung di dalam larutan uji yang telah kita teliti tersebut (Cahyadi, 2009; Mutia, 2010).

Berdasarkan hasil perhitungan regresi linier pengujian toksisitas larutan uji terhadap larva Artemia salina Leach dapat dilihat pada Tabelberikut:

Tabel 4.2 Hasil pengukuran LC50 dengan metode BSLT

Menurut Meyer, et al., (1982), jika ekstrak mempunyai nilai LC50< 1000 µg/ml maka ekstrak tersebut bersifat toksik pada larva Artemia salina Leach. Berdasarkan hasil tersebut dapat disimpulkan bahwa ekstrak dan fraksi memiliki aktivitas toksik terhadap larva Artemia salina Leach karena nilai LC50nya masih dibawah 1000 µg/ml.

Tabel 4.3 Tingkat nilai toksisitas LC50 (Anderson, 1991)

No Nilai LC50(µg/ml) Tingkat Toksisitas 1

2 3 4

0 – 250 250 – 500 500 – 750 750 – 1000

Sangat toksik Toksik Sedang Tidak toksik

Berdasarkan pembagian tingkat toksisitas LC50 menurut Anderson (1991) diatas, maka nilai LC50 yang diperoleh dari ekstrak dan fraksi termasuk kedalam tingkat sangat toksik dengan rentang nilai antara 0 – 250 µ g/ml. Perbedaan toksisitas antara ekstrak dan fraksi ini dapat disebabkan oleh senyawa yang terkandung pada masing-masing ekstrak dan fraksi. Pada ekstrak etanol nilai LC50 yang diperoleh lebih rendah dibandingkan dengan fraksi n-heksana yaitu 24,7007 µg/ml, diduga karena senyawa yang terkandung di dalamnya yaitu flavonoid, steroid/triterpenoid, saponin, glikosida dan tanin yang apabila masuk kedalam

No Ektrak/Fraksi LC50µg/ml

1. Etanol 24,7007

2. n-Heksana 30,8936

3. Etilasetat 47,4319

saluran pencernaan larva dapat mengganggu proses fisiologis sel (Cahyadi, 2009). Pada fraksi n-heksana memiliki nilai LC5030,8936 µg/ml. Hal ini disebabkan karena pelarut n-heksana merupakan pelarut non polar sehingga dapat menarik enyawa-senyawa yang bersifat non polar seperti steroid/triterpenoid. Steroid/triterpenoid dalam kadar tertentu dapat menyebabkan kematian terhadap larva dengan cara menghambat daya makan (Cahyadi, 2009). Fraksi etilasetat memiliki nilai LC5047,4319 µg/ml. Aktivitas toksiknya diduga disebabkan oleh flavonoid, saponin, tanin dan alkaloid yang memiliki aktivitas toksik pada larva

Artemia salina Leach. Nilai LC50paling tinggi dibandingkan larutan uji lainnya adalah fraksi air yaitu 79,5144 µg/ml. Diduga karena adanya senyawa saponin yang memiliki efek menghemolisa darah. Walaupun demikian LC50nya masih dapat dikatakan toksik karena kurang dari 1000 µ g/ml. Suatu ekstrak memiliki aktivitas toksik yang kuat dapat dilihat dari rendahnya nilai LC50. Pada manusia, senyawa metabolit sekunder yang bersifat toksik pada kadar tertentu, dapat mengakibatkan gangguan pada sistem metabolisme tubuh, dimana senyawa aktif tersebut dapat menjadi inhibitor pada enzim sehingga mengganggu proses replikasi DNA. Menurut Cahyadi (2009) Apabila suatu ekstrak tanaman besifat toksik menurut nilai LC50dengan metode BSLT, maka tanaman tersebut dapat dikembangkan sebagai obat dan dilakukan isolasi terhadap zat aktif.

BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan

Berdasarkan hasil penelitian diatas, maka dapat disimpulkan bahwa ekstrak etanol daun titanus memiliki efek toksik terhadap larva Artemia salina Leach yang ditunjukkan dengan nilai LC5024,7007 µg/ml,sedangkanpadafraksin-heksana, fraksi etilasetat dan fraksi air memiliki efek toksik yang ditunjukkan dengan nilai LC50 30,8936 µg/ml, 47,4319 µg/ml dan 79,5144 µg/ml.

5.2 Saran

Disarankan kepada peneliti selanjutnya, agar dilakukan isolasi senyawa kimia yang diduga memiliki aktivitas biologi untuk mendukung hasil penelitian ini.

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Uraian Tumbuhan 2.1.1 Sistematika tumbuhan

Klasifikasi tumbuhan titanus sebagai berikut (Depkes, RI., 2001; LIPI, 2015):

Kingdom : Plantae

Divisi : Spermatophyta Kelas : Dicotyledonae Bangsa : Rhamnales Suku : Leeacea Marga : Leea

Jenis : Leea aequata L. 2.1.2 Nama asing

Leea aequata L. memiliki nama lain seperti: ginggiyang (Sunda), girang

(Jawa Tengah), jirang (Madura), kayu ajer perempuan (Melayu), mali-mali (Makassar), uka (Maluku) (Depkes, RI., 2001).

2.1.3 Morfologi tumbuhan

Tumbuhan Leea aequata L. merupakan tumbuhan perdu, tahunan. Batang berkayu, bercabang, bentuk bulat, masih muda berambut dan hijau. Daun majemuk, anak daun lanset, bertangkai pendek, tepi daun bergerigi, ujung daun runcing, pangkal membulat, panjangnya 6-25 cm, lebarnya 3-8 cm, berambut dan berwarna hijau. Bunga majemuk, bentuk malai, kelopak bulat telur, panjang 2-5 cm dan kuning keputih-putihan. Buahnya berbentuk bulat, diameter ± 12 mm,

masih muda hijau dan setelah tua ungu kehitaman dengan biji kecil berbentuk segitiga dan berwana putih kekuningan. Tumbuhan ini termasuk tumbuhan berakar tunggal dengan warna coklat muda (Depkes, RI., 2001).

2.1.4 Habitat

Tumbuhan ini tumbuh tersebar di seluruh pulau Jawa pada ketinggian kurang dari 1000 m di atas permukan laut, sebagai semak yang tidak berduri yang tumbuh di tepi sungai-sungai dan dibawah semak belukar lain di lembah-lembah (Heyne, 1950).

2.1.5 Kandungan kimia

Biji Leea aequata L. mengandung saponin, flavonoid dan polifenol (Depkes, RI., 2001). Suharmiati (2005) menyatakan bahwa daun, buah dan akar

Leea indica yang memiliki famili yang sama dengan Leea aequata L.

mengandung flavonoid. Daunnya mengandung flavonoid, alkaloid, glikosida, steroid/terpenoid, tanin dan polifenol. Buahnya mengandung tanin dan flavonoid. Kulit batangnya mengandung alkaloid, flavonoid dan steroid. Akarnya mengandung saponin, flavonoid, steroid dan tanin. Bijinya mengandung saponin, flavonoid dan polifenol (Rahman,et al., 2012).

2.1.6 Manfaat tumbuhan

Daun Leea aequata L. berkhasiat sebagai antiseptik dan anti pegal linu (Depkes, RI., 2001). Suharmiati (2005) menyatakan bahwa Leea indica yang memiliki famili yang sama dengan Leea aequata L memilki manfaat yaitu daunnya bermanfaat sebagai psikoneurotik,analgetik, mengobati jantung berdebar, mengobati bisul, mengobati sakit kepala dan perawatan nifas. Bunganya berguna mengobati bisul di jari. Akarberguna sebagai obat antifungi,antimalaria dan antidiare. Kayunyasebagai antiseptik, mengobati batu karang, mengobati sakit

kepala. Kulit batangnya berguna sebagai antiracun ular, antidiare, analgetik dan antimalaria.

2.3 Ekstraksi

Ekstrak adalah sediaan kering, kental atau cair dibuat dengan menyari simplisisa nabati atau hewani menurut cara yang cocok, di luar pengaruh cahaya matahari langsung. Ekstrak kering harus mudah digerus menjadi serbuk (Ditjen POM, 1985). Ekstraksi adalah penyarian komponen aktif dari suatu tumbuhan atau hewan dengan menggunakan pelarut yang cocok (Handa, 2008). Metode yang dapat digunakan dalam proses ekstraksi antara lain maserasi, perkolasi, refluks, sokletasi, digesti dan infus. Pemilihan metode tersebut disesuaikan dengan kepentingan dalam memperoleh sari yang baik (Harborne, 1987). Pelarut yang digunakan dalam proses ekstraksi tersebut harus dipilih berdasarkan kemampuannya dalam melarutkan kandungan zat aktif yang semaksimal mungkin dari unsur-unsur yang tidak diinginkan (Ansel, 1989).

Beberapa metode ekstraksi yang sering digunakan dalam berbagai penelitian adalah:

A.Cara panas 1.Digesti

Digesti adalah maserasi kinetik (dengan pengadukan kontinu) pada temperatur yang lebih tinggi daripada temperatur ruangan, yaitu secara umum dilakukan pada temperatur 40-500C (Ditjen, POM., 2000).

2. Refluks

Refluks adalah ekstraksi dengan pelarut pada temperatur titik didihnya, selama waktu tertentu dan jumlah pelarut yang terbatas yang relatif konstan dengan adanya pendingin balik (Ditjen, POM., 2000).

3.Sokletasi

Proses pemisahan suatu komponen yang terdapat dalam zat padat dengan cara penyaringan berulang ulang dengan menggunakan pelarut tertentu dan alat tertentu (soxlet) sehingga semua komponen yang diinginkan akan

terisolasi (Voigt, 1994).

4.Infus

Infus adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperatur penangas air terukur 96-980C selama 15-20 menit (Ditjen, POM., 2000).

5. Dekok

Dekok adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperatur > 900C selama 30 menit(Harborne, 1987).

A.Cara dingin 1. Maserasi

Maserasi adalah proses pengekstrakan simplisia menggunakan pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur ruangan (Ditjen, POM., 2000).

2. Perkolasi

Perkolasi adalah ekstraksi dengan menggunakan pelarut yang selalu baru hingga semua pelarut tertarik dengan sempurna umunya dilakukan pada suhu kamar. Tahapan perkolasi penetesan pelarut serta penampungan perkolat nya hingga didapat volume 1 sampai 5 kali jumlah bahan.

2.3 Fraksinasi (Ekstraksi Cair-Cair)

Fraksinasi dikenal dengan nama ekstraksi cair-cair atau partisi adalah proses untuk memisahkan golongan kandungansenyawa yang satu dengan

golongan yang lainnya dari suatu ekstrak. Prosedur pemisahan dengan fraksinasi ini didasarkan pada perbedaankepolaran kandungan senyawanya (Harborne, 1987). Teknik pemisahan ini biasanya dilakukan dengan menggunakan corong pisah. Kedua pelarut yang saling tidak bercampur tersebut dimasukkan ke dalam corong pisah, kemudian digojok dan didiamkan. Solut atau senyawa organik akan terdistribusi ke dalam fasenya masing-masing tergantung pada kelarutannya terhadap fase tersebut dan kemudian akan terbentuk dua lapisan, yaitu lapisan atas dan lapisan bawah yang dapat dipisahkan dengan membuka kunci pipa corong pisah (Dey, 2012).

Ekstrak dipartisi dengan menggunakan peningkatan polaritas pelarut seperti petrolum eter, n-heksana, klorofom, dietil eter, etilasetat dan etanol. Pemilihan pelarut pada ekstraksi umumnya tergantung pada sifat analitnya dimana pelarut dan analit harus memiliki sifat yang sama, contohnya analit yang bersifat nonpolar akan terekstraksi pada pelarut yang relatif nonpolar seperti n-heksana sedangkan analit yang semipolar terlarut pada pelarut yang semipolar seperti etilasetat atau diklorometana (Venn, 2008).

Pemilihan pelarut menjadi sangat penting, pelarut yang dipilih memiliki sifat antara lain: solut mempunyai kelarutan yang besar dalam solven, tetapi solven sedikit, tidak mudah menguap pada saat ekstraksi, mudah dipisahkan dari solut, sehingga dapat dipergunakan kembali, tersedia, tidak mahal,mempunyai titik didih yang rendah (jika digunakan untuk evaporasi), sebaiknya memiliki densitas yang lebih rendah daripada air (untuk membentuk lapisan atas sehingga pemisahan lebih mudah dilakukan) dan pelarut harus aman dan tidak merusak lingkungan jika digunakan. Pelarut yang dapat digunakan untuk ekstraksi ini cukup banyak, tetapi pelarut yang dapat digunakan hanya n-heksana, metil tertier

butil eter (MTBE) dan etilasetat. Hasil dariproses partisi yang diperoleh masing-masing dapat diuji aktivitas biologisnya untuk mengidentifikasi keaktifan komponen bioaktif yang terkandung (Venn, 2008).

2.4 Artemia salina Leach

Artemia merupakan zooplankton yang diklasifikasikan ke dalam filum

Arthropoda dan kelas Crustaceae dari suku Artemidae. Organisme sejenis udang-udangan berukuran kecil. Artemia salina Leach sebelumnya telah digunakan untuk berbagai macam uji hayati, seperti uji pestisida dan ketoksikan dalam air laut (Meyer, et al., 1982; Widyastuti, 2008).

Secara lengkap sistematika Artemia salina Leachmenurut Mudjiman (1989) dapat dijelaskan sebagai berikut:

Filum : Arthropoda Kelas : Crustacea Subkelas : Branchiopoda Ordo : Anostraca Famili : Artemidae Genus : Artemia

Spesies : Artemia salina Leach. 2.4.1 Habitat dan morfologi

Artemia salinaLeachmerupakan jenis udang-udangan yang hidup dalam

air yang berkadar garam tinggi. Artemia salina Leachtumbuh baik pada temperatur 25-300C. Keistimewaan Artemia salina Leachadalah memiliki toleransi (kemampuan beradaptasi dan mempertahankan diri) dari kisaran kadar garam yang sangat luas. Beberapa ditemukan di rawa asin hanya pada pedalaman

2.1.4 Habitat ... 6

2.1.5Kandungan kimia ... 6

2.1.6 Manfaat tumbuhan.. ... 6

2.2 Ekstraksi ... 7

2.3Fraksinasi (Ekstraksi Cair-Cair) ... 8

2.4 Artemiasalina Leach ... 9

2.4.1 Habitat dan morfologi ... 10

2.4.2 PenggunaanArtemiasalina Leach pada metode BSLT ... 12

2.5 Toksisitas ... 12

2.6 Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) ... 14

BAB III METODE PENELITIAN ... 15

3.1 Alat ... 15

3.2 Bahan ... 15

3.3 Pembuatan Pereaksi ... 16

3.3.1 Pereaksi asam klorida 2 N ... 16

3.3.2 Pereaksi asam nitrat 0,5 N ... 16

3.3.3 Pereaksi asam sulfat 2 N ... 16

3.3.4 Pereaksi Bouchardat ... 16

3.3.5 Pereaksi besi (III) klorida 1% b/v ... 17

3.3.6 Pereaksi Dragendroff ... 17

3.3.7 Pereaksi Kloralhidrat ... 17

3.3.8 Pereaksi Lieberman-Burchard ... 17

3.3.9 Pereaksi Meyer ... 17

3.3.10 Pereaksi Molisch ... 17

3.3.12 Pereaksi timbal (II) asetat 0,4 M ... 18

3.4 Penyiapan Sampel ... 18

3.4.1 Pengambilan sampel ... 18

3.4.2 Identifikasi sampel ... 18

3.4.3 Pengolahan sampel ... 18

3.5 Hewan Percobaan ... 19

3.6 Pemeriksaan Karakteristik Simplisia ... 19

3.6.1 Pemeriksaan makroskopik ... 19

3.6.2 Pemeriksaan mikroskopik ... 19

3.6.3 Penetapan kadar air ... 19

3.7Skirining Fitokimia ... 20

3.7.1 Pemeriksaan alkaloid ... 20

3.7.2 Pemeriksaan flavonoida ... 21

3.7.3 Pemeriksaan glikosida ... 21

3.7.4 Pemeriksaan glikosida antrakinon ... 22

3.7.5 Pemeriksaan saponin ... 22

3.7.6 Pemeriksaan tanin ... 22

3.7.7 Pemeriksaan steroid/triterpenoid ... 22

3.8 Pembuatan Ekstrak dan Fraksinasi ... 23

3.8.1 Pembuatan ekstrak etanol ... 23

3.8.2 Pembuatan fraksi ... 23

3.9 Perhitungan Rendemen ... 24

3.10 Uji Toksisitas ... 24

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ... 27

4.2 Pemeriksaan Makroskopik ... 27

4.3 Pemeriksaan Mikroskopik ... 27

4.4 Karakteristik ... 27

4.5 Ekstraksi dan Fraksinasi ... 28

4.6 Skrining Fitokimia ... 28

4.7 Uji Toksisitas ... 31

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ... 34

5.1 Kesimpulan ... 34

5.2 Saran ... ... 34

DAFTAR TABEL

Tabel Halaman

4.1 Tabel hasil skrining fitokimia fraksi-fraksi ... 29 4.2 Tabel hasilpengukuran LC50 denganmetode BSLT ... 32 4.3 Tabel tingkat nilai toksisitas LC50 ... 32

DAFTAR GAMBAR

Gambar Halaman

1 Skema kerangka pikir penelitian ... 4 2 Tahap pertumbuhan Artemia salina ... 12

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran Halaman

1 Hasil identifikasi tumbuhan ... 39

2 Gambar tumbuhandan daun titanus ... 40

3 Gambar simplisia dan serbuk simplisia ... 41

4 Gambar mikroskopik serbuk daun titanus ... 42

5 Perhitungan kadar air simplisia daun titanus ... 43

6 Perhitungan % rendemen ekstrak dan fraksi ... 45

7 Bagan kerja penelitian... 46

8 Hasil dan perhitungan persamaan regresi linier daun titanus ... 51