22
3.9 Penyiapan Hewan Percobaan
Hewan percobaan yang digunakan dalam penelitian ini adalah tikus putih jantan dengan berat 150 - 200 g. Sebelum pengujian dikondisikan terlebih dahulu
selama satu minggu dengan kondisi lingkungan, makanan, dan minuman yang sama. Setelah satu minggu, dipilih tikus yang sehat ditandai dengan berat badan
yang stabil atau meningkat.
3.10 Pengujian Efek Diuretik pecut kuda
Hewan yang digunakan sebanyak 25 ekor tikus putih jantan yang setiap
kelompok terdiri dari 5 ekor tikus. Tikus dipuasakan tidak diberi makan selama ± 12 jam dengan tetap diberi minum, kemudian bobot tikus ditimbang. Tikus
diberikan NaCl 0,9 secara oral dengan dosis 20 mlkg bb. Masing-masing tikus diberi perlakuan yang dibagi menjadi 5 kelompok yaitu kelompok kontrol negatif
diberikan CMC-Na 0,5, kontrol positif diberikan furosemid 10 mgkg bb, dan pemberian bahan obat ekstrak etanol pecut kuda dosis 100, 150, 200 mgkg bb.
Tikus diletakkan di dalam kandang metabolik yang telah dimodifikasi. Volume urin yang diekskresikan dicatat setiap jam dan akumulasinya selama 5 jam sebagai
urin total dan cek pH urin serta ditentukan kadar elektrolit natrium dan kalium dalam urin Parmar dan Prakash, 2006.
3.10.1 Pengukuran pH urin
Pengukuran pH urin dilakukan dengan menggunakan alat pH meter.
Caranya: Alat terlebih dahulu dikalibrasi dengan menggunakan larutan dapar
standart netral pH 7,0 dan larutan dapar pH asam 4,0 hingga alat menunjukkan harga pH tersebut. Kemudian elektroda dicuci dengan air suling, lalu dikeringkan
dengan tissu. Sampel yang dalam bentuk cairan urin dibuat dalam konsentrasi
23 1 yaitu ditimbang 1 gram sampel dan dilarutkan dalam 100 ml air suling.
Kemudian elektroda dicelupkan dalam larutan tersebut. Dibiarkan alat menunjukkan harga pH konstan. Angka yang ditunjukkan pH meter merupakan
pH sampel Rawlins, 2003. 3.10.2 Pembuatan Kurva Kalibrasi Kalium
Larutan baku kalium konsentrasi 1000 µgml dipipet sebanyak 2,5 ml,
dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 ml dan dicukupkan hingga garis tanda dengan akuabides konsentrasi 50 µgml.
Larutan untuk kurva kalibrasi kalium dibuat dengan memipet 1; 2; 3; 4; dan 5 ml dari larutan baku 50 µgml, masing-masing dimasukkan ke dalam labu
tentukur 25 ml dan dicukupkan hingga garis tanda dengan akuabides larutan ini mengandung 2,0; 4,0; 6,0; 8,0; 10,0 µgml dan diukur absorbansinya pada
panjang gelombang 766,5 nm dengan nyala udara-asetilen.
3.10.3 Pembuatan Kurva Kalibrasi Natrium
Larutan baku natrium konsentrasi 1000 µgml dipipet sebanyak 2,5 ml, dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 ml dan dicukupkan hingga garis tanda
dengan akuabides konsentrasi 50 µgml.
Larutan untuk kurva kalibrasi natrium dibuat dengan memipet 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 ml dari larutan baku 50 µgml, masing-masing dimasukkan ke dalam
labu tentukur 25 ml dan dicukupkan hingga garis tanda dengan akuabides larutan ini mengandung 1,00; 2,00; 3,00; 4,00; 5,00 µgml dan diukur absorbansinya
pada panjang gelombang 589,0 nm dengan nyala udara asetilen.
24
3.10.4 Penentuan Kadar Natrium dan Kalium dengan Spektrofotometer Serapan Atom
Sebanyak 1 ml urin dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 ml kemudian
dicukupkan dengan akuades sampai 50 ml. Dipindahkan ke dalam erlemeyer dan ditambahkan 5 ml HNO
3
pekat dan beberapa batu didih. Didihkan secara perlahan-lahan kemudian diuapkan dengan hotplate hingga volume urin total
tinggal 20 ml, saring. Filtrat dimasukkan ke dalam labu tentukur 100 ml dicukupkan dengan akuades sampai garis tanda. Faktor pengenceran untuk
penentuan kadar natrium pada urin adalah 5 kali, faktor pengenceran untuk penentuan kadar kalium pada urin adalah 2,5 kali. Selanjutnya diukur
menggunakan alat SSA SNI, 2004.
3.11 Analisis Data
Kategori