UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
kromatografi kolom atau kromatografi cair kinerja tinggi. Analisis dari KLT dapat membantu menentukan pelarut terbaik apa yang akan
dipakai dan berapa perbandingan antar pelarut yang akan digunakan sebagai fase gerak pada kromatografi kolom Gritter, 1991.
Prinsip KLT yaitu perpindahan analit pada fase diam karena pengaruh fase gerak. Proses ini biasa disebut elusi. Semakin kecil
ukuran rata-rata partikel fase diam dan semakin sempit kisaran ukuran fase diam, maka semakin baik kinerja KLT dalam hal efisiensi dan
resolusinya Gritter, 1991. KLT mempunyai beberapa keuntungan, diantaranya : waktu
yang dibutuhkan tidak lama 2-5 menit dan sampel yang dipakai hanya sedikit sekali 2-
20 g. Kerugiannya dengan menggunakan KLT adalah tidak efektif untuk skala industri. Walaupun lembaran
KLT yang digunakan lebih lebar dan tebal, pemisahannya sering dibatasi hanya sampai beberapa miligram sampel saja Gritter, 1991.
a. Fase Diam
Silika gel adalah yang paling banyak digunakan sebagai adsorben dan fase diam yang dominan untuk KLT. Sebagian besar
analisis KLT dilakukan dengan menggunakan fase normal lapisan silika gel.
Fase diam ini dapat digunakan sebagai fase polar maupun nonpolar. Untuk fase polar, merupakan silika yang dibebaskan dari
air dan bersifat sedikit asam. Silika gel perlu ditambah gips kalsium sulfat untuk memperkuat pelapisannya pada pendukung.
Sebagai pendukung biasanya lapisan tipis digunakan kaca dengan ukuran 20x20 cm, 10x20 cm, atau 5x10 cm. pendukung yang lain
berupa lembaran alumunium atau plastik seperti ukuran di atas yang umumnya dibuat oleh pabrik.
Silika gel kadang-kadang ditambah senyawa fluoresensi, agar bila disinari dengan sinar UV dapat berfluoresensi atau
berpendar, sehingga dikenal dengan silika gel GF
254
yang berarti silika gel dengan fluoresen yang berpendar pada 254 nm. Silika gel
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
untuk fase non polar terbuat dari silika yang dilapisi dengan senyawa non polar misalnya, lemak, parafin, minyak silikon raber
gom, atau lilin, dengan fase gerak air yang bersifat polar dapat digunakan sebagai eluen. Fase diam ini dapat memisahkan banyak
senyawa namun elusinya sangat lambat dan keterulangannya kurang bagus Sumarno, 2001.
b. Fase Gerak
Fase gerak adalah medium angkut, terdiri dari satu atau beberapa pelarut, yang bergerak di dalam fase diam, yaitu suatu
lapisan berpori karena adanya gaya kapiler Stahl, 1985. Pemilihan sistem pelarut yang dipakai didasarkan atas prinsip like
dissolves like, artinya untuk memisahkan sampel yang bersifat nonpolar digunakan sistem pelarut yang bersifat nonpolar juga.
Campuran dilarutkan dan ditotolkan pada garis mulai berupa titik atau pita. Penotolan berupa titik sebaiknya mempunyai diameter
antara 2 mm dan paling besar 5 mm Stahl, 1969. Polaritas fase gerak perlu diperhatikan pada analisa dengan
KLT, sebaiknya digunakan campuran pelarut organik yang mempunyai polaritas serendah mungkin. Campuran yang baik
memberikan fase gerak yang mempunyai kekuatan bergerak sedang. Secara umum dikatakan bahwa fase diam yang polar akan
mengikat senyawa polar dengan kuat sehingga bahan yang kurang sifat kepolarannya akan bergerak lebih cepat dibandingkan bahan-
bahan polar Gritter, et al., 1991. Fase gerak harus memiliki kemurnian yang tinggi. Hal ini
dikarenakan KLT merupakan teknik yang sensitif. Fase gerak yang digunakan adalah pelarut organik yang memiliki tingkat polaritas
tersendiri, melarutkan senyawa contoh, dan tidak bereaksi dengan penjerap Gritter, et al., 1991.
Pelarut yang ideal harus melarutkan linarut dan harus cukup baik sebagai pelarut yang bersaing dengan daya serap penjerap.
Keadaan yang ideal tersebut mungkin terjadi jika pelarut tidak
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
berproton seperti hidrokarbon, eter dan senyawa karbonil dipakai sebagai pelarut pengembang Gritter, et al., 1991.
Proses pengembangan akan lebih baik bila ruangan pengembangan tersebut telah jenuh dengan uap sistem pelarut
Adnan, 1997. Pelarut dalam ruangan pengembang dihindarkan dari atmosfer luar untuk menghindari penguapan komponen-
komponen Sastrohamidjojo, 1985 dan campuran pelarut dianjurkan hanya dipakai untuk sekali pengembangan saja karena
susunannya mudah berubah akibat salah satu komponennya menguap Gritter, 1991.
c. Metode Deteksi
