31
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
lebih kurang 2 jam dan disemprotkan dengan alkohol 70 sebelum digunakan. Sterilisasi Laminar ini dilakukan sebelum dan sesudah bekerja didalamnya
Pertiwi, 2010.
b. Sterilisasi Bahan
Seluruh media pembenihan NA dan BHI disterilisasi dengan autoklaf pada temperatur 121
C selama 15 menit Pertiwi, 2010.
3.4.2 Pembuatan Medium 1.
Nutrient Agar NA
Serbuk NA sebanyak 24 gram dilarutkan dalam 1 L akuades dan dipanaskan sampai mendidih sehingga semuanya larut. Lalu disterilkan dalam
autoklaf pada suhu 121 C selama 15 menit. Setelah agak dingin dapat disimpan
dalam lemari pendingin dan dapat digunakan jika diperlukan dengan memanaskannya kembali menggunakan hot plate Pertiwi, 2010.
2. Brain Heart Infussion BHI
Serbuk BHI sebanyak 37 gram dilarutkan dalam 1 liter akuades dan dipanaskan sampai mendidih sehingga semuanya larut. Lalu disterilkan dalam
autoklaf pada suhu 121 C selama 15 menit. Setelah agak dingin dapat disimpan
dalam lemari pendingin dan dapat digunakan.
3.4.3 Karakterisasi Bakteri Uji
Karakterisasi bakteri uji dilakukan dengan cara metode pewarnaan Gram, yaitu menyiapkan preparat uji dengan mengoleskan bakteri setipis mugkin di atas
kaca objek yang kemudian difiksasi dengan cara dilewatkan di atas nyala api sebentar untuk melekatkan bakteri. Preparat tersebut diwarnai dengan larutan
kristal violet dan dibiarkan selama 1 menit, dicuci dengan air mengalir selama 5 detik, diteteskan larutan lugol diatas preparat dan dibiarkan selama 1 menit, dicuci
kembali dengan air mengalir kemudian dicuci dengan alkohol 96 selama 10 - 30 detik sampai tidak ada lagi zat warna lugol lalu dicuci kembali dengan air
mengalir. Diteteskan larutan safranin selama 10-30 detik kemudian dicuci kembali dengan air mengalir, dikeringkan dengan cara diletakan diatas kertas saring dan
diperiksa preparat dibawah mikroskop Handayani, 2007.
32
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
3.4.4 Peremajaan Bakteri
Stok bakteri dalam agar miring nutrient diremajakan kembali pada media NA miring dengan cara menggoreskan masing-masing bakteri menggunakan ose
yang telah disterilkan dengan cara memijarkan pada api bunsen kedalam 5 ml media agar miring NA, kemudian diinkubasi pada suhu 37
o
C selama 24 jam Pertiwi, 2010.
3.4.5 Pembuatan Suspensi Bakteri
