Alat dan bahan Identifikasi Tumbuhan

BAB III METODE PENELITIAN

Penelitian ini bersifat eksperimentaluntuk mengetahui apakah ekstrak yang diperoleh dari n-heksan buah andaliman ENHBA, etil asetat buah andaliman EEABA, dan etanolbuah andaliman EEBA memiliki aktivitas sebagai antikanker dan mengetahui efek kombinasi ekstrak aktif buah andaliman dan doxorubicin terhadap sel kanker.pengujian apoptosisekstrak terpilih dan doxorubicin terhadap sel MCF-7, dan pengujian selektivitas ekstrak terpilih terhadap sel vero. Penelitian ini meliputi identifikasi bahan, pengumpulan dan pengolahan bahan, pembuatan pereaksi, karakterisasi simplisia dan ekstrak, skrining fitokimia simplisia dan ekstrak, pembuatan ekstrak n-heksan, ekstrak etilasetat, dan ekstrak etanol dari buah andaliman, pengujian efek sitotoksik ekstrak n-heksan buah andaliman ENHBA, ekstrak etilasetat buah andalimanEEABA dan ekstrak etanol buah andaliman EEBA terhadap sel MCF-7 dan sel T47D. Pengujian Combination index CI ekstrak aktif buah andaliman dan doxorubicin, pengujian apoptosis dan selectivity index SI.

3.1 Alat dan bahan

3.1.1 Alat-alat

Alat-alat yang digunakan pada penelitian ini adalah alat-alat gelas, autoclave Hirayama, blender Philips, conical tube, eksikator, elisa reader BenMark Biorad, inkubator CO 2 Heraceus, inverted microscope Olympus, krus porselin, laminar air flow Labconco, mikropipet, neraca kasar Home Line, neraca listrik Vibra AJ, oven Memmert, penangas air Yenaco, rotary Universitas Sumatera Utara evaporator Haake D1, sentrifugator, seperangkat alat penetapan kadar air,seperangkat alat destilasi, cawan porsele alas rata, krus porselen bertutup, desikator tanur, vortex, 12-well plate. dan 96-well plate.

3.1.2 Bahan-bahan

Bahan-bahan yang digunakan pada penelitian ini adalah buah andaliman yang sudah matang yang berwarna hijau kemerahan sampai merah tua kecoklatan, etanol 96, etilasetat dan n-heksan hasil destilasi dan bahan kimia yang digunakan kecuali dinyatakan lain adalah berkualitas pro analisis, yaitu: α-naftol, amonium hidroksida, asam asetat anhidrida, asam asetat pekat, asam klorida pekat, asam nitrat pekat, asam sulfat pekat, benzen, besi III klorida, bismut III nitrat, etanol, hepes Sigma, iodium, isopropanol, kalium iodida, kloroform, metanol, natrium hidroksida, natrium sulfat anhidrat, petroleum eter, raksa II klorida, serbuk magnesium, serbuk zinkum, sodium hidrogen karbonat Macalai tesque, timbal II asetat dan toluena.Air suling, dimethyl sulfoxide DMSO Sigma. Sel kanker payudara MCF-7 merupakan koleksi Laboratorium Parasitologi Fakultas Kedokteran UGM.Media penumbuh DMEM, Media M 199, Fetal Bovine Serum FBS 10. vv Gibco, penisillin-streptomisin 2 vv Gibco, dan Fungizone amphoterisin B 0,5. Selain bahan-bahan di atas juga digunakan 0,25. trypsin-EDTA Gibco, PBS. MTT [3-4,5-dimetiltiazol-2- il-2,5 difeniltetrazolium bromida] Sigma, dengan konsentrasi 5 mgmL. Stopper yang digunakan adalah natrium dodesil sulfat dalam 0,01 N HCl.

3.2 Identifikasi Tumbuhan

Identifikasi tumbuhan dilakukan di Herbarium Bogoriense, Bidang Botani Pusat Penelitian Biologi, Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia LIPI, Bogor. Universitas Sumatera Utara 3.3 Pengumpulan dan Pengolahan Bahan 3.3.1 Pengumpulan bahan Tumbuhan