2,5 ml dan dimasukkan ke dalam labu ukur 10 ml kemudian diencerkan dengan akuades hingga tanda.
e. Larutan TCA 5
Sebanyak 1,25 g TCA ditimbang saksama dan dilarutkan dalam akuades hingga 25,0 ml.
f. Larutan TBA 1
Sebanyak 0,25 g TBA ditimbang saksama, dimasukkan ke dalam beaker glass 100 ml, ditambah akuades secukupnya kemudian dipanaskan di atas hot
plate pada suhu 50-55°C hingga larut. Larutan dimasukkan ke dalam labu ukur 25,0 ml dan ditambah akuades hingga tanda.
5. Pembuatan larutan deoksiribosa 2,5 mM
Sebanyak lebih kurang 20,12 mg deoksiribosa ditimbang saksama dan dilarutkan dalam akuades hingga 10,0 ml. Dari larutan tersebut diambil sebanyak
4,2 ml dan dimasukkan ke dalam labu ukur 25 ml kemudian diencerkan dengan akuades hingga tanda.
6. Pembuatan larutan ekstrak etanol teh hijau dan teh hitam 1 mgml
Sebanyak lebih kurang 25 mg ekstrak etanol teh hijau atau hitam ditimbang saksama dan dilarutkan dalam akuades hingga 25,0 ml.
7. Optimasi metode
a. Penentuan operating time waktu operasional
Pada tabung reaksi bertutup dimasukkan sebanyak 600 μl larutan
deoksiribosa 2,5 mM, 300 μl FeCl
3
1 mM, 300 μl EDTA 1 mM, 300 μl H
2
O
2
20 mM, 4500
μl bufer fosfat pH 7,4, dan 300 μl vitamin C 1 mM. Inkubasi pada suhu 37 ºC selama 30 menit. Setelah itu, larutan ditambah 1 ml TCA 5 dan 1 ml
TBA 1 kemudian dipanaskan dengan waterbath pada suhu 80ºC selama 30 menit. Tabung reaksi yang berisi campuran didinginkan di bawah air mengalir
selama 5 menit. Larutan dibaca absorbansinya pada panjang gelombang maksimum teoritis 532 nm selama 1 jam.
b. Penentuan panjang gelombang serapan maksimum
Pada tabung reaksi bertutup dimasukkan sebanyak 600 μl larutan
deoksiribosa 2,5 mM, 300 μl FeCl
3
1 mM, 300 μl EDTA 1 mM, 300 μl H
2
O
2
20 mM, 4500
μl bufer fosfat pH 7,4, dan 300 μl vitamin C 1 mM. Inkubasi pada suhu 37 ºC selama 30 menit. Setelah itu, larutan ditambah 1 ml TCA 5 dan 1 ml
TBA 1 kemudian dipanaskan dengan waterbath pada suhu 80ºC selama 30 menit. Tabung reaksi yang berisi campuran didinginkan di bawah air mengalir
selama 5 menit. Larutan dibaca absorbansinya dari panjang gelombang 400-600 nm.
8. Uji aktivitas penangkapan radikal hidroksil oleh ekstrak etanol teh hijau
dan teh hitam
Pada tabung reaksi bertutup dimasukkan sebanyak 600 μl larutan
deoksiribosa 2,5 mM dan ekstrak etanol teh hijau atau teh hitam sebanyak 200; 400; 600; 800; dan 1000
μl, kemudian pada masing-masing tabung ditambahkan 300
μl FeCl
3
1 mM, 300 μl EDTA 1 mM, 300 μl H
2
O
2
20 mM, bufer fosfat pH 7,4 penambahan bufer fosfat disesuaikan dengan volume ekstrak etanol yang
ditambahkan sehingga volume akhir larutan adalah 6 ml dan 300 μl vitamin C 1
mM. Inkubasi pada suhu 37 ºC selama 30 menit. Setelah itu, larutan ditambah 1 ml TCA 5 dan 1 ml TBA 1 . kemudian dipanaskan dengan waterbath pada
suhu 80ºC selama 30 menit. Larutan kemudian didinginkan di bawah air mengalir selama 5 menit. Larutan dibaca absorbansinya pada panjang gelombang
maksimum hasil optimasi. Buat larutan kontrol.
G. Analisis
