Uji Aktivitas Hepatoprotektor Ekstrak Etanol Kulit Bawang Merah (Allium cepa L. Corium) terhadap Mencit Jantan yang Diinduksi Parasetamol

63

Lampiran 1. Hasil identifikasi sampel penelitian

Lampiran 2. Gambar simplisia kulit bawang merah

Sebelum dikeringkan

65

Lampiran 3. Gambar serbuk simplisia kulit bawang merah

Lampiran 4. Bagan alur penelitian Serbuk simplisia (534,8 g) Ampas Maserat dimaserasi menggunakan etanol 96%yang telah didestilasi Ekstrak kental diuapkan menggunakan rotary evaporator

• Hasil skrining fitokimia simplisia

• Penetapan kadar air simplisia

• Penetapan kadar sari larut dalam air simplisia

• Penetapan kadar sari larut dalam etanol simplisia

• Penetapan kadar abu total simplisia

• Penetapan kadar abu tidak larut asam simplisia

dilakukan skrining

fitokimia dan karakterisasi simplisia

dilakukan skrining

fitokimia dan karakterisasi ekstrak

• Hasil skrining fitokimia ekstrak • Penetapan kadar air ekstrak • Penetapan kadar abu total

ekstrak

• Penetapan kadar abu tidak larut asam esktrak

dilakukan uji aktivititas hepatoprotektor

(lihat di halaman selanjutnya) Aktivitas

67

Lampiran 4 (lanjutan). Bagan alur penelitian

24 ekor mencit jantan

Normal : tanpa perlakuan

(4 ekor)

EEKBM : • Dosis 300 mg/kg

bb (4 ekor) • Dosis 450 mg/kg

bb (4 ekor) • Dosis 600 mg/kg

bb (4 ekor)

Kontrol negatif : Na-CMC 0,5% (4 ekor) Kontrol positif: rutin 20 mg/kg bb

(4 ekor)

diberikan perlakuan selama 14 hari secara per oral

diberikan parasetamol 1 g/kg bb secara per oral 6 jam setelah pemberian perlakuan terakhir

Darah _Hati

dilakukan pengamatan makroskopik

dibuat preparat histologi dilakukan pengamatan mikroskopik

disentrifuge

Serum

diukur ALT dan AST

Hasil

didislokasi di leher pada hari ke 15 diambil darah dan organ hati

Lampiran 5. Gambar mikroskopik serbuk simplisia kulit bawang merah pada

perbesaran 10 x 40

Mikroskopik serbuk simplisia kulit bawang merah pada perbesaran 10 x 40

Keterangan : 1 = serabut sklerenkim

2 = parenkim berisi tetesan minyak 3 = kristal kalsium oksalat bentuk prisma 4 = trakea dengan penebalan bentuk tangga

1

2

3

69

Lampiran 6. Perhitungan karakterisasi simplisia kulit bawang merah dan

EEKBM

Perhitungan Penetapan Kadar Air dari Simplisia Kulit Bawang Merah dan EEKBM

No Simplisia Ekstrak

Berat (g) Kadar Air (mL) Berat (g) Kadar Air (mL)

1 5,003 0,05 5,007 0,05

2 5,008 0,5 5,018 0,10

3 5,010 0,05 5,012 0,10

Simplisia

1. % Kadar Air I = 0,05

5,003x100% = 1,00%

2. % Kadar Air II = 0,5

5,008x100% = 9,98%

3. % Kadar Air III = 0,05

5,010x100% = 1,00%

% Kadar Air Rata-Rata = 0,99+ 9,98+ 0,99

3 = 4,00%

Ekstrak

1. % Kadar Air I = 0,05

5,007x100% = 1,00%

2. % Kadar Air II = 0,10

5,018x100% = 2,00%

3. % Kadar Air III = 0,10

5,012x100% = 2,00%

4. % Kadar Air Rata-Rata = 3,94+ 3,99 + 3,99

3 = 1,67%

% Kadar air= volume air (mL)

berat sampel (gram)

x

100

%

Lampiran 6.(lanjutan)

Perhitungan penetapan kadar sari larut air dari simplisia kulit bawang merah

No Berat Sampel (g) Berat Sari (g)

1.

2.

3.

5,002

5,002

5,001

0,060

0,067

0,072

% Kadar Sari Larut Etanol = Berat Sari Berat Sampel x

100

20 x100%

1. % Kadar Sari I = 0,060 5,002x

100

20 x100% = 6,00%

2. % Kadar Sari II = 0,067 5,002x

100

20 x100% = 6,70%

3. % Kadar Sari III = 0,072 5,001x

100

20 x100% = 7,20%

% Kadar Sari Larut Air Rata-Rata = 6,00%+7,00% + 7,19% 3

71

Lampiran 6.(lanjutan)

Perhitungan penetapan kadar sari larut etanol dari simplisia kulit bawang merah

No Berat Sampel (g) Berat Sari (g) 1.

2. 3.

5,001 5,002 5,001

0,126 0,127 0,131

% Kadar Sari Larut Air = Berat Sari Berat Sampel x

100

20 x100%

1. % Kadar Sari I = 0,126 5,001 x

100

20 x100% = 12,60%

2. % Kadar Sari II = 0,127 5,002 x

100

20 x100% = 12,70%

3. % Kadar Sari III = 0,131 5,001x

100

20 x100% = 13,09%

% Kadar Sari Larut Etanol Rata-Rata = 12,60%+ 12,70% + 13,09% 3

= 12,80%

Lampiran 6. (lanjutan)

Perhitungan penetapan kadar abu total dari serbuk simplisia kulit bawang merah dan EEKBM

No Simplisia Ekstrak

Berat (g) Kadar Abu (g) Berat (g) Kadar Abu (g)

1 2,041 0,228 2,022 0,080

2 2,030 0,300 2,035 0,081

3 2,015 0,255 2,038 0,065

Simplisia

1. % Kadar Abu Total I = 0,028

2,041 x100% = 4,75%

2. % Kadar Abu Total II = 0,300

2,030 x100% = 14,78%

3. % Kadar Abu Total I = 0,255

2,015x100% = 12.65%

% Kadar Abu Total Rata-Rata = 4,75%+ 3,46% +4,12%

3 = 12,66%

Ekstrak

1. % Kadar Abu Total I = 0,080

2,022 x100% = 3,40%

2. % Kadar Abu Total II = 0,081

2,035 x100% = 3,80%

3. % Kadar Abu Total I = 0,065

2,038x100% = 3,19%

% Kadar Abu Total Rata-Rata = 3,40%+3,80% +3,19%

3 = 3,47%

% kadar abu total = berat abu (g)

73

% Kadar abu tidak larut asam = berat abu tidak larut asam

berat sampel x 100 %

Lampiran 6. (lanjutan)

Perhitungan penetapan kadar abu tidak larut asam dari serbuk simplisia kulit bawang merah dan EEKBM

No Simplisia Ekstrak

Berat (g) Kadar Abu (g) Berat (g) Kadar Abu (g)

1 2,041 0,071 2,022 0,002

2 2,030 0,070 2,035 0,008

3 2,015 0,057 2,038 0,005

Simplisia

1. % Kadar Abu Total I = 0,071

2,041 x100% = 3,47%

2. % Kadar Abu Total II = 0,070

2,030x100% = 3,45%

3. % Kadar Abu Total I = 0,057

2,015 x100% = 2,83%

% Kadar Abu tidak Larut Asam Rata-Rata = 3,47%+3,45% + 2,83%

3 = 3,25%

Ekstrak

1. % Kadar Abu Total I = 0,002

2,022 x100% = 0,10%

2. % Kadar Abu Total II = 0,008

2,035 x100% = 0,39%

3. % Kadar Abu Total I = 0,005

2,038 x100% = 0,24%

% Kadar Abu tidak Larut Asam Rata-Rata = 0,10%+0,39% + 0,24%

3 = 0,24%

75

Lampiran 8. Gambar mencit jantan dan proses pengambilan darah dari jantung

dan organ hati mencit jantan

kiri: organ hati yang normal, kanan: organ hati yang mengalami nekrosis akibat induksi parasetamol

Mencit jantan Pengambilan darah dari jantung mencit

Lampiran 9. Volume maksimum sesuai jalur pemberian dan konversi dosis.

1. Tabel volume maksimum larutan sediaan uji yang dapat diberikan pada hewan uji (Harmita dan Radji, 2008)

Jenishewanuji Volume maksimal (ml) sesuai jalurpemberian

iv. im. ip. sc. po.

Mencit (20-30 g) Tikus (100 g) Hamster (50 g) Marmut (250 g) Merpati (300 g) Kelinci (2,5 kg) Kucing (3 kg)

Anjing (5 kg)

0,5 0,1 - - 2 5-10, 5-10 10-20 0,05 0,1 0,1 0,25 0,5 0,5 1 5 1 2-5 1-2 2-5 2 10-20 10-20 20-30 0,5-1 2-5 2,5 5 2 5-10 5-10 10 1 5,0 2,5 10 10 20 50 100

2. Tabel konversi dosis antara jenis hewan dengan manusia (Harmita dan Radji, 2008 Mencit 20 g Tikus 200 g Marmut 400 g Kelinci 1,2 kg Kera 4 kg Anjing 12 kg Manusia 70 kg Mencit

(20g) 1,0 7,0 12,25 27,8 64,1 124,2 387,9 Tikus

(200g) 0,14 1,0 1,74 3,9 9,2 17,8 56,0

Marmut

(400 g) 0,08 0,57 1,0 2,25 5,2 10,2 31,5 Kelinci

(1,2 kg) 0,04 0,25 0,44 1,0 2,4 4,5 14,2

Kera (4

kg) 0,016 0,11 0,19 0,42 1,0 1,9 6,1 Anjing

(12 kg) 0,008 0,06 0,10 0,22 0,52 1,0 3,1

Manusia

77

Lampiran 10. Perhitungan Dosis

1. EEKBM 300 mg/kg bb

Berat badan mencit = 20 g

Dosis pemberian = 20 g � 300 mg

1000 = 6 mg

Dosis EEKBM 300 mg/kg bb adalah dosis yang terkandung dalam 1 kg berat badan sebanyak 300 mg. Volume dosis maksimum untuk mencit adalah 10 mL/kg (Laboratory Animal Resources Center of Oregon State University, 2011) atau 1 mL/100 g (BPOM., RI., 2014), maka 300 ��

10 mL

=

30 ��

1 mL

,

sehingga volume yang diberikan secara per oral : 6 ��

30 mgx 1 mL

=

0,2 mL.

2. EEKBM 450 mg/kg bb

Dosis pemberian = 20 g � 450 mg

1000 = 9 mg

450 �� 10 mL

=

45 ��

1 mL

,

makavolume yang diberikan secara per oral :

9 ��

45 mgx 1 mL

=

0,2 mL.

3. EEKBM 600 mg/kg bb

Dosis pemberian = 20 g � 600 mg

1000 = 12 mg

600 �� 10 mL

=

60 ��

1 mL

,

makavolume yang diberikan secara per oral :

12 ��

60 mgx 1 mL

=

0,2 mL.

4. Rutin 20 mg/kg bb

Dosis pemberian = 20 g � 20 mg

1000 = 0,4 mg

20 �� 10 mL

=

2 ��

1 mL

,

maka volume yang diberikan secara per oral :

0,4 ��

2 mg x 1 mL

=

0,2 mL.

5. Parasetamol 1000 mg/kg bb

Dosis pemberian = 20 g � 1000 mg

1000 = 20 mg

1000 �� 10 mL

=

100 ��

1 mL

,

makavolume yang diberikan secara per oral :

20 ��

100 mgx 1 mL

=

0,2 mL.

6. Volume pemberian suspensi Na CMC 0,5%

Na CMC 0,5% merupakan suspensi pembawa untuk suspensi EEKBM, parasetamol dan rutin yang berfungsi untuk menjaga suspensi tetap stabil dan homogen, sehingga Na CMC 0,5% berfungsi sebagai kontrol pelarut. Larutan uji diberikan kepada hewan dalam suspensi Na CMC 0,5% sebanyak 0,2 mL, sehingga Na CMC 0,5% juga diberikan dengan volume yang sama.

79

Lampiran 11. Hasil pemeriksaan ALT dan AST

Lampiran 12. Data analisis ALT secara statistik SPSS One WayANOVA

ANOVA

Nilai ALT

Sum of Squares df Mean Square F Sig.

Between Groups 4202870.423 5 840574.085 114.926 .000

Within Groups 131652.770 18 7314.043

Total 4334523.193 23

Descriptives

Nilai ALT

N Mean

Std. Deviation

Std. Error

95% Confidence Interval for Mean

Minimum Maximum Lower Bound Upper Bound tanpa

perlakuan 4

139.775 34.3022 17.1511 85.193 194.357 97.2 179.4

kontrol negatif (Na CMC 0,5%) 4

1369.875 202.4000 101.2000 1047.812 1691.938 1201.6 1664.2

(kontrol positif) rutin 20 mg/kg BB

4

193.775 18.1953 9.0977 164.822 222.728 175.2 215.3

EEKBM 300 mg/kg BB 4

715.175 30.4978 15.2489 666.646 763.704 675.3 748.0

EEKBM 450 mg/kg BB 4

528.000 12.1318 6.0659 508.696 547.304 518.7 545.7

EEKBM 600 mg kg BB 4

313.700 18.2622 9.1311 284.641 342.759 300.4 339.8

81

Post Hoc Test

Multiple Comparisons Nilai ALT Tukey HSD (I) Kelompok Perlakuan (J) Kelompok Perlakuan Mean

Difference (I-J) Std. Error Sig.

95% Confidence Interval Lower

Bound

Upper Bound tanpa perlakuan kontrol

negatif (Na CMC 0,5%)

-1230.1000* 60.4733 .000 -1422.286 -1037.914

(kontrol positif) rutin 20 mg/kg BB

-54.0000 60.4733 .943 -246.186 138.186

EEKBM 300

mg/kg BB -575.4000

*

60.4733 .000 -767.586 -383.214

EEKBM 450

mg/kg BB -388.2250

*

60.4733 .000 -580.411 -196.039

EEKBM 600

mg kg BB -173.9250 60.4733 .090 -366.111 18.261 kontrol negatif

(Na CMC 0,5%)

tanpa

perlakuan 1230.1000

*

60.4733 .000 1037.914 1422.286

(kontrol positif) rutin 20 mg/kg BB

1176.1000* 60.4733 .000 983.914 1368.286

EEKBM 300

mg/kg BB 654.7000

*

60.4733 .000 462.514 846.886

EEKBM 450

mg/kg BB 841.8750

*

60.4733 .000 649.689 1034.061

EEKBM 600

mg kg BB 1056.1750

*

60.4733 .000 863.989 1248.361

(kontrol positif) rutin 20 mg/kg BB

tanpa

perlakuan 54.0000 60.4733 .943 -138.186 246.186 kontrol

negatif (Na CMC 0,5%)

-1176.1000* 60.4733 .000 -1368.286 -983.914

EEKBM 300

mg/kg BB -521.4000

*

60.4733 .000 -713.586 -329.214

EEKBM 450

mg/kg BB -334.2250

*

60.4733 .000 -526.411 -142.039

EEKBM 600

mg kg BB -119.9250 60.4733 .389 -312.111 72.261

*. The mean difference is significant at the 0.05 level.

Multiple Comparisons Nilai ALT Tukey HSD (I) Kelompok Perlakuan (J) Kelompok Perlakuan Mean

Difference (I-J) Std. Error Sig.

95% Confidence Interval Lower

Bound

Upper Bound EEKBM 300 mg/kg

BB

tanpa

perlakuan 575.4000

*

60.4733 .000 383.214 767.586

kontrol negatif (Na CMC 0,5%)

-654.7000* 60.4733 .000 -846.886 -462.514

(kontrol positif) rutin 20 mg/kg BB

521.4000* 60.4733 .000 329.214 713.586

EEKBM 450

mg/kg BB 187.1750 60.4733 .059 -5.011 379.361 EEKBM 600

mg kg BB 401.4750

*

60.4733 .000 209.289 593.661

EEKBM 450 mg/kg BB

tanpa

perlakuan 388.2250

*

60.4733 .000 196.039 580.411

kontrol negatif (Na CMC 0,5%)

-841.8750* 60.4733 .000 -1034.061 -649.689

(kontrol positif) rutin 20 mg/kg BB

334.2250* 60.4733 .000 142.039 526.411

EEKBM 300

mg/kg BB -187.1750 60.4733 .059 -379.361 5.011 EEKBM 600

mg kg BB 214.3000

*

60.4733 .024 22.114 406.486

EEKBM 600 mg kg BB

tanpa

perlakuan 173.9250 60.4733 .090 -18.261 366.111 kontrol

negatif (Na CMC 0,5%)

-1056.1750* 60.4733 .000 -1248.361 -863.989

(kontrol positif) rutin 20 mg/kg BB

119.9250 60.4733 .389 -72.261 312.111

EEKBM 300

mg/kg BB -401.4750

*

60.4733 .000 -593.661 -209.289

EEKBM 450

mg/kg BB -214.3000

*

60.4733 .024 -406.486 -22.114

83 Homogeneous Subsets

Nilai ALT

Tukey HSDa

Kelompok Perlakuan N

Subset for alpha = 0.05

1 2 3

tanpa perlakuan 4 139.775

(kontrol positif) rutin 20 mg/kg BB 4 193.775

EEKBM 600 mg kg BB 4 313.700

EEKBM 450 mg/kg BB 4 528.000

EEKBM 300 mg/kg BB 4 715.175

kontrol negatif (Na CMC 0,5%) 4 1369.875

Sig. .090 .059 1.000

Means for groups in homogeneous subsets are displayed.

a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 4.000.

Lampiran 13. Data analisis AST secara statistik SPSS One WayANOVA

Descriptives

Nilai AST

N Mean

Std.

Deviation Std. Error

95% Confidence Interval for Mean

Minimum Maximum Lower

Bound

Upper Bound

Tanpa perlakuan 4 210.850 29.9527 14.9763 163.189 258.511 187.2 252.5

Kontrol negatif

(Na CMC 0,5%) 4 2086.350 354.7269 177.3635 1521.900 2650.800 1826.0 2609.4

kontrol positif (rutin 20 mg/kg bb)

4 354.225 34.5524 17.2762 299.244 409.206 313.2 390.7

EEKBM 300

mg/kg bb 4 1051.000 47.1434 23.5717 975.984 1126.016 991.5 1105.5

EEKBM 450

mg/kg bb 4 803.400 39.9008 19.9504 739.909 866.891 745.0 832.0

EEKBM 600

mg/kg bb 4 472.950 19.6544 9.8272 441.675 504.225 449.0 496.6

Total 24 829.796 654.6488 133.6296 553.362 1106.230 187.2 2609.4

ANOVA

Nilai AST

Sum of Squares df Mean Square F Sig.

Between Groups 9460627.632 5 1892125.526 85.926 .000

Within Groups 396369.277 18 22020.515

85

Post Hoc Tests Multiple Comparisons

Nilai AST Tukey HSD

(I) Kelompok Perlakuan

(J) Kelompok Perlakuan

Mean Difference

(I-J) Std. Error Sig.

95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound Tanpa perlakuan Kontrol negatif

(Na CMC 0,5%)

-1875.5000 104.9298 .000 -2208.970 -1542.030

kontrol positif (rutin 20 mg/kg bb)

-143.3750 104.9298 .745 -476.845 190.095

EEKBM 300

mg/kg bb -840.1500

*

104.9298 .000 -1173.620 -506.680

EEKBM 450

mg/kg bb -592.5500

*

104.9298 .000 -926.020 -259.080

EEKBM 600

mg/kg bb _{-262.1000 104.9298 .176 -595.570 71.370}

Kontrol negatif (Na CMC 0,5%)

Tanpa

perlakuan 1875.5000

*

104.9298 .000 1542.030 2208.970

kontrol positif (rutin 20 mg/kg bb)

1732.1250* 104.9298 .000 1398.655 2065.595

EEKBM 300

mg/kg bb 1035.3500

*

104.9298 .000 701.880 1368.820

EEKBM 450

mg/kg bb 1282.9500

*

104.9298 .000 949.480 1616.420

EEKBM 600

mg/kg bb 1613.4000

*

104.9298 .000 1279.930 1946.870

kontrol positif (rutin 20 mg/kg bb)

Tanpa

perlakuan 143.3750 104.9298 .745 -190.095 476.845 Kontrol negatif

(Na CMC 0,5%)

-1732.1250* 104.9298 .000 -2065.595 -1398.655

EEKBM 300

mg/kg bb -696.7750

*

104.9298 .000 -1030.245 -363.305

EEKBM 450

mg/kg bb -449.1750

*

104.9298 .005 -782.645 -115.705

EEKBM 600

mg/kg bb -118.7250 104.9298 .862 -452.195 214.745

Multiple Comparisons

Nilai AST Tukey HSD

(I) Kelompok Perlakuan

(J) Kelompok Perlakuan

Mean

Difference (I-J) Std. Error Sig.

95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound EEKBM 300 mg/kg bb Tanpa

perlakuan 840.1500

*

104.9298 .000 506.680 1173.620

Kontrol negatif (Na CMC 0,5%)

-1035.3500* 104.9298 .000 -1368.820 -701.880

kontrol positif (rutin 20 mg/kg bb)

696.7750* 104.9298 .000 363.305 1030.245

EEKBM 450

mg/kg bb 247.6000 104.9298 .222 -85.870 581.070 EEKBM 600

mg/kg bb 578.0500

*

104.9298 .000 244.580 911.520

EEKBM 450 mg/kg bb Tanpa

perlakuan 592.5500

*

104.9298 .000 259.080 926.020

Kontrol negatif (Na CMC 0,5%)

-1282.9500* 104.9298 .000 -1616.420 -949.480

kontrol positif (rutin 20 mg/kg bb)

449.1750* 104.9298 .005 115.705 782.645

EEKBM 300

mg/kg bb -247.6000 104.9298 .222 -581.070 85.870 EEKBM 600

mg/kg bb 330.4500 104.9298 .053 -3.020 663.920 EEKBM 600 mg/kg bb Tanpa

perlakuan 262.1000 104.9298 .176 -71.370 595.570 Kontrol negatif

(Na CMC 0,5%)

-1613.4000* 104.9298 .000 -1946.870 -1279.930

kontrol positif (rutin 20 mg/kg bb)

118.7250 104.9298 .862 -214.745 452.195

EEKBM 300

mg/kg bb -578.0500

*

104.9298 .000 -911.520 -244.580

EEKBM 450

mg/kg bb -330.4500 104.9298 .053 -663.920 3.020 *. The mean difference is significant at the 0.05 level.

87 Homogeneous Subsets

Nilai AST

Tukey HSDa

Kelompok Perlakuan N

Subset for alpha = 0.05

1 2 3 4

Tanpa perlakuan 4 210.850

kontrol positif (rutin 20 mg/kg bb)

4 354.225

EEKBM 600 mg/kg bb 4 472.950 472.950

EEKBM 450 mg/kg bb 4 803.400 803.400

EEKBM 300 mg/kg bb 4 1051.000

Kontrol negatif (Na CMC 0,5%) 4 2086.350

Sig. .176 .053 .222 1.000

Means for groups in homogeneous subsets are displayed.

a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 4.000.

DAFTAR PUSTAKA

Adlia, F. (2014). Uji Aktivitas Hepatoprotektor Ekstrak Etanol Rimpang Temu Giring (Curcuma heyneana Val) terhadap Tikus Putih Jantan yang Diinduksi Parasetamol. Skripsi. Medan: Program Ekstensi Sarjana Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara. Hal. 2.

Induced Hepatotoxicity in Mice Occurs with Inhibition of Activity and Nitration of Mitochondrial Manganese Superoxide Dismutase. Journal of

Pharmacology and Experimental Therapeutic. 337 (1): 110-118.

Barret, K., Brooks, H., Boitano, S., dan Barman, S. (2010). Ganong’s Review of

Medical Physiology. 23rd Edition. New York: McGraw Hill Companies, Inc. Hal. 479, 481-482.

Brunetti, C., Ferdinando, M.D., Fini, A. Pollastri, S., dan Tattini, M. (2013). Flavonoid as Antioxidants and Developmental Regulators: Relative

Significance in Plants and Humans. International Journal of Molecular Sciences. 14: 3540-3555.

Bunchorntavakul, C., dan Reddy, K.R. (2013). Acetaminophen-related Hepatotoxicity. Clinical Liver Disease. 17(13): 590.

Christ, B., dan Brückner, S. (2012). Rodent Animal Models for Surrogate Analysis of Cell Therapy in Acute Liver Failure. Frontiers in Physiology. 3(78): 1.

Depkes RI. (1989). Materia Medika Indonesia. Jilid V. Jakarta: Direktorat Jenderal Pengawas Obat dan Makanan. Hal. 302-306, 321-325, 336.

Depkes RI. (1995). Materia Medika Indonesia. Edisi VI. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Hal. 323-325.

Depkes RI. (2014). Farmakope Indonesia. Edisi V. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Hal. 984-985.

Domitrović, R., Jakovac, H., Marchesi, V.V., Vladimir-Knežević,S., Cvijanović, O., Tadić, Z., Romić, Z., dan Rahelić, D. (2012). Differential Hepatoprotective Mechanisms of Rutin and Quercetin in CCl4-Intoxicated

BALB/Cn Mice. Acta Pharmacologica Sinica. 33: 1260–1270.

Durgo, K., Vukovic, L., Rusak, G., Osmak, M., dan Colic, J.K. (2007) . Effect of Flavonoids on Glutathione Level, Lipid Peroxidation and Cytochrome P450 CYP1A1 Expressionin Human Laryngeal Carcinoma Cell Lines.

60

Featherstone, B. (2008).Causes of Liver Disease and Dysfunction. Dalam: Drugs and the Liver. Illinois: Pharmaceutical Press. Hal. 5-15.

Filho, M. (2006). Bioactive Phytocompunds: New Approaches in the

Phytosciences. Dalam: Modern Phytomedicine. Editor: Iqbal Ahmad,

Farrukh Aqil and Mohammad Owais. Wilheim: Wiley-VCH. Hal. 9-10. Furst, D.E., Ulrich, R.W., dan Prakash, S. (2012). Nonsteroidal Anti-Inflammatory

Drugs,Disease-Modifying, Antirheumatic Drugs, Nonopioid Analgesics, & Drugs Used in Gout. Dalam: Katzung’s Basic Clinical Pharmacology..

New York : Mc Graw Hill Companies Inc. Hal. 650.

Graefe, E.U., Wittig, J., Silke Mueller, S., Riethling, A.K., Uehleke, B., Drewelow, B., Pforte, H., Jacobasch, Derendorf, H., dan Veit, M. (2001). Pharmacokinetics and Bioavailability of Quercetin Glycosides in Humans.

Journal of Clinical Pharmacology. 41(5): 492-499.

Gregorio, R.M., Falcòn M.S.G., Gándara , J.S., Rodrigues, A.S., Almeida, D.P.F. (2010). Identification and Quantification of Flavonoids in Traditional Cultivars of Red and White Onions at Harvest. Journal of Food

Composition and Analysis. 23: 592-598.

Hall, R. (2007). Clinical Pathology of Laboratory Animals. Dalam: Animal Models of Toxicology. Edisi II. Florida: CRC Press. Hal. 815.

Harborne, J.B. (1987). Metode Fitokimia. Bandung : Penerbit ITB. Hal. 151.

Hinson, J.A., Roberts, D.W., dan James, L.P. (2010). Mechanisms of Acetaminophen-Induced Liver Necrosis. Handbook of Experimental

Pharmacology. 196(12): 373-374.

Hodgson, E., dan Levi, P. E. (2000). A Textbook of Modern Toxicology. Edisi II. Boston: Mc Graw Hill Co. Hal: 203-204.

Holt, A. dan Smith, A. (2008). An Introduction to The Anatomy of The Liver. In: Drugs and the Liver. Illinois: Pharmaceutical Press. Hal. 5-15.

Iyanda, A.A., dan Adeniyi, F.A.A. (2011). Biochemical and Histologic Presentations of Female Wistar Rats Administered with Different Doses of Paracetamol/Methionine. Nigeria Journal of Physiology and Science. 26: 155-156.

Jaeschke, H., Williams, C.D., McGill, MR., Xie, Y., dan Ramchandran, A. (2013). Models of Drug-induced Liver Injury for Evaluation of Phytotherapeutics and Other Natural Products. Food Chemistry

Toxicology. 5(55): 279-289.

James, L.P, Mayeux, P.R., dan Hinson, J.A. (2003). Acetaminophen-Induced Hepatotoxicity. Drug Metabolism and Disposition. 23(13): 1490-1506. Lewis, P. N. (2008). Drugs and The Liver. London: Pharmaceutical Press.

Hal.59-60.

Kenward, R., dan Tan, C.K. Penggunaan Obat pada Gangguan Hati. Dalam: Farmasi Klinis. Jakarta : Gramedia Elex Computindo. Hal. 160-161.

Klaasen, Curtis, D., Watkins, John, B. (2003). Casarett dan Doull’s Essentials Of

Toxicology. USA: Mc Graw Hill Co. Hal: 199 – 366.

Kumar, V., Abbas, A.K., dan Aster, J.C. (2013). Robbin’s Basic Pathology. Philadelphia: Elsevier. Hal. 6-9.

Kumar, V., Abbas, A.K., Fausto, N. (2005). Pathologic Basis Of Disease. Edisi VII. Philadelphia: Elsevier Saunders. Hal. 12 – 16.

Materska, M. (2008). Quercetin And Its Derivatives: Chemical Structure And Bioactivity – A Review. Polish Journal Of Food And Nutrition Sciences. 58 (4): 407-413.

Murli, K. (2013). Microscopic Anatomy of the Liver. Clinical Liver Disease. 2 (1): 4-6.

Murray, R.K. (2000). Harper Ilustrated Biochemistry. Edisi XX. Boston: Mc Graw Hill Co. Hal. 416

Nirmala, M., Girija, K., Lakshman, K., dan Divya, T. (2012). Hepatoprotective Activity of Musa Paradisiaca on Experimental Animal Models. Asian

Pasific Journal of Tropical Biomedicine; 2(1): 11.

Ozougwu, J.C., dan Eyo, J.E. (2014). Hepatoprotective Effects of Allium cepa (Onion) Extracts Against Paracetamol-Induced Liver Damage in Rats.

African Journal of Biotechnology. 13(26): 2679-2688.

Rahayu, E., dan Berlian, N. (1999). Bawang Merah. Jakarta: Penebar Swadaya Hal. 4-8; 8-13.

Robbins, S.L. dan Kumar, V. (1995). Buku Ajar Patologi. Edisi IV. Jakarta: EGC. Hal. 9 – 14.

Rukmana, R. (1994). Bawang Merah: Budidaya & Pengolahan Pascapanen. Yogyakarta: Penerbit Kanisius. Hal. 11-13; 15-20; 29-31.

Sahid, M., dan Subhan, F. (2014). Comparative Histopathology of

Acetaminophen Induced Hepatotoxicity in Animal Models of Mice and Rats. Pharmacology Online. 3(33):32-43.

62

Skerget, M., Majheniè, L., Bezjak, M., dan Knez, Z. (2009). Antioxidant, Radical Scavenging and Antimicrobial Activities of Red Onion (Allium cepa L.) Skin and Edible Part Extracts. Chemical and Biochemical Engineering

Quarterly. 23(4): 435–444.

Thapa, B.R., dan Walia, A. (2007). Liver Function Tests and Their Interpretation.

Indian Journal of Pediatrics.74(7): 665-667.

Venkatesh P., Dinakar A., dan Senthilkumar, N. (2011). Hepatoprotective Activity of An Ethanolic Extract of Stems of Anisochilus Carnosus Against Carbon Tetrachloride Induced Hepatotoxicity in Rats.

International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences. 3(1):

243-245.

Wibowo, S. (2008). Budidaya Bawang. Jakarta : Penebar Swadaya. Hal. 88-95. Wiczkowski, W., Nèmeth, N., Buciñski, A., dan Piskula, M.K. (2003).

Bioavailability of Quercetin from Flesh Scales and Dry Skin of Onion in Rats. Polish Journal of Food and Nutrition Sciences. 12(53): 95-99.

Wilbraham, A.C., dan Matta, M.S. (1992). Pengantar Kimia Organik. Penerjemah Suminar Achmadi. Penyunting Sofia dan Nik Solihin. Bandung: ITB. Hal. 100-105.

Wilmana, P., dan Gan, S. (2013), Analgesik-Antipiretik, Analgesik Antiinflamasi

Nonsteroid dan Obat Gangguan Sendi Lainnya. Dalam: Farmakologi dan

Terapi. Edisi V. Jakarta: Badan Penerbit FK UI. Hal. 237-239. Smith, E.Y. (2002). Terapi Sayuran. Jakarta: Prestasi Pustaka. Hal. 61-65.

BAB III

METODE PENELITIAN

Penelitian ini menggunakan metode eksperimental yaitu untuk mengetahui pengaruh hubungan antara variabel bebas dan variabel terikat (aktivitas hepatoprotektor) dengan tahapan penyiapan sampel, identifikasi sampel, karakterisasi serbuk simplisia, skrining fitokimia serbuk simplisia, pembuatan ekstrak, karakterisasi ekstrak, skrining fitokimia ekstrak, penyiapan hewan uji, pengujian aktivitas hepatoprotektor pada mencit jantan yang meliputi pemeriksaan aktivitas alanin transferase (ALT), aspartat transferase (AST) dan histopatologi hati dan pengolahan data. Na CMC 0,5% diberikan sebagai kontrol pelarut di kelompok kontrol negatif dan kelompok kontrol positif diberikan rutin dosis 20 mg/kg bb sebagai perbandingan efek hepatopotektor kelompok ekstrak Data hasil penelitian dianalisis dengan program SPSS 22.0 menggunakan uji ANOVA.

3.1 Alat-alat

Alat-alat bedah, alat-alat gelas laboratorium, alumunium foil, blender (Miyako), cawan porselin, desikator, inkubator, kaca objek, kaca penutup, krus porselin, lemari pengering, microtube, mikroskop cahaya, neraca analitik (Vibra AJ), oral sonde, oven listrik (Stork), penangas air (Yenaco), penjepit tabung, rak tabung reaksi, rotary evaporator, sentrifugator, seperangkat alat penetapan kadar air, spektrofotometer UV (Microlet 3000), spuit injeksi, tanur (Nabertherm), tabung reaksi, timbangan hewan (Presica).

28

3.2 Bahan

Akuades, α-naftol, asam nitrat pekat, asam asetat anhidrida, asam sulfat pekat, Etanol (destilasi), merkuri (II) klorida, kalium iodida, iodium, bismut (III) nitrat, asam klorida pekat, timbal (II) asetat, besi (III) klorida , buffer formalin 10%, isopropanol, kloroform, metanol, n-heksana, parasetamol, Na CMC 0,5%, reagen kit ALT Dialab®, reagen kit AST Dialab®, rutin (Sigma Aldrich), serbuk seng, toluen, zat warna (hematoksilin dan eosin).Sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah simplisia kulit bawang merah (Allium cepa L.).

3.3 Hewan Percobaan

Hewan percobaan yang digunakan dalam penelitian ini adalah mencit (Mus

musculus) jantan dengan berat badan 20-30 gram sebanyak 24 ekor dengan

kondisi sehat. Hewan diaklimatisasi selama 2 minggu dengan tujuan untuk menyeragamkan makanan dan hidupnya dengan kondisi yang serba sama sehingga dianggap memenuhi syarat penelitian.

3.4 Pengumpulan dan Pembuatan Simplisia Kulit Bawang Merah 3.4.1 Pengumpulan kulit bawang merah

Pengambilan sampel dilakukan secara purposif yaitu tanpa membandingkan dengan tumbuhan yang sama dari daerah lain. Sampel diperoleh dari penyuplai bawang merah di Jalan Kemenangan No. 164, Kelurahan Sidorejo Hilir, Kecamatan Tuasan, Medan Sumatera Utara.

3.4.2 Identifikasi bawang merah

Identifikasi bawang merah dilakukan di Herbarium Medanense (MEDA) Universitas Sumatera Utara.

3.4.3 Pembuatan simplisia

Sampel kulit bawang merah yang digunakan dikumpulkan beberapa jam setelah dikupas dari umbinya. Kulit dipisahkan dari pengotor lain lalu dicuci hingga bersih kemudian ditiriskan dan ditimbang (diperoleh berat basah sebesar 894,2 g). Selanjutnya, sampel dikeringkan selama 7 hari dalam lemari pengering dengan temperatur 40oC sampai daun kering (ditandai bila diremas rapuh). Simplisia yang telah kering diblender menjadi serbuk kasar lalu dimasukkan ke dalam wadah plastik bertutup dan disimpan pada suhu kamar. Kemudian serbuk ditimbang (diperoleh berat kering sebesar 534,8 g).

3.5 Pembuatan Pereaksi 3.5.1 Pereaksi Mayer

Sebanyak 5 g kalium iodida dalam 10 mL air suling kemudian ditambahkan larutan 1,358 g merkuri (II) klorida dalam 60 mL air suling. Larutan dikocok dan ditambahkan air suling hingga 100 ml (Depkes, RI., 1995).

3.5.2 Larutan pereaksi Dragendorff

Sebanyak 8 g bismut nitrat dilarutkan dalam asam nitrat pekat 20 mL kemudian dicampur dengan larutan kalium iodida sebanyak 27,2 g dalam 50 mL air suling. Campuran didiamkan sampai memisah sempurna. Larutan jernih diambil dan diencerkan dengan air secukupnya hingga 100 ml (Depkes, RI., 1995).

30

3.5.3 Pereaksi Bouchardat

Sebanyak 4 g kalium iodida dilarutkan dalam 20 mL air suling kemudian ditambah 2 g iodium sambil diaduk sampai larut, lalu ditambah air suling hingga 100 mL (Depkes, RI., 1995).

3.5.4 Pereaksi asam klorida 2 N

Sebanyak 17 mL larutan asam klorida pekat ditambahkan air suling hingga 100 mL (Depkes, RI., 1978).

3.5.5 Pereaksi Liebermann-Burchard

Sebanyak 20 bagian asam asetat anhidrat dicampurkan dengan 1 bagian asam sulfat pekat. Larutan penyemprotnya dibuat dengan 20 bagian asam asetat anhidrida dengan 1 bagian asam sulfat pekat dan 50 bagian kloroform. Larutan penyemprot ini harus dibuat baru (Harborne, 1987).

3.5.6 Pereaksi Molish

Sebanyak 3 g α-naftol dilarutkan dalam asam nitrat 0,5 N hingga diperoleh volume 100 mL (Depkes, RI., 1989).

3.5.7 Larutan air kloroform

Sebanyak 2,5 mL kloroform dikocok dengan 900 mL air suling, encerkan dengan air suling hingga 1000 mL (Depkes, RI., 1989).

3.5.8 Larutan kloralhidrat

Sebanyak 50 g kloralhidrat ditimbang dan dilarutkan dalam mL ml air suling (Depkes RI, 1989).

3.5.9 Pereaksi timbal (II) asetat 0,4 N

Sebanyak 15,17 g timbal (II) asetat dilarutkan dalam air suling bebas karbondioksida secukupnya hingga 100 mL (Depkes, RI., 1989).

3.6 Pemeriksaan Karakteristik Simplisia

Pemeriksaan karakteristik simplisia meliputi pemeriksaan makroskopik dan mikroskopik, penetapan kadar air, penetapan kadar sari larut air, penetapan kadar sari larut etanol, penetapan kadar abu total, dan penetapan kadar abu tidak larut asam.

3.6.1 Pemeriksaan makroskopik

Pemeriksaan makroskopik dilakukan terhadap kulit bawang merah dengan cara mengamati bentuk, ketebalan, diameter, permukaan simplisia. Pemeriksaan organoleptis meliputi warna, bau dan rasa dari kulit bawang merah.

3.6.2 Pemeriksaan mikroskopik

Pemeriksaan mikroskopik dilakukan terhadap serbuk simplisia tumbuhan dengan cara menaburkan serbuk simplisia di atas kaca objek yang telah ditetesi dengan kloralhidrat dan ditutupi dengan kaca penutup kemudian dilihat dibawah mikroskop.

3.6.3 Penetapan kadar air

Penetapan kadar air dilakukan dengan metode Azeotropi (destilasi toluen). Sebanyak 200 mL toluen dan 2 mL air suling dimasukkan ke dalam labu alas bulat, didestilasi selama 2 jam. Kemudian toluen didinginkan selama 30 menit dan volume air pada tabung penerima dibaca dengan 0,05 mL. Sebanyak 5 g serbuk simplisia yang telah ditimbang seksama dimasukkan kedalam labu yang berisi toluen tersebut, lalu dipanaskan hati-hati selama 15 menit. Setelah toluen mendidih, kecepatan tetesan diatur lebih kurang 2 tetesan perdetik, sampai sebagian air terdestilasi, kemudian kecepatan destilasi dinaikkan hingga 4 tetes perdetik. Setelah semua air terdestilasi, bagian dalam pendingin dibilas dengan

32

toluen. Destilasi dilanjutkan selama 5 menit, kemudian tabung penerima dibiarkan dingin sampai suhu kamar. Setelah air dan toluen memisah sempurna, volume air dibaca dengan ketelitian 0,05 mL. Selisih kedua volume air dibaca sesuai dengan kandungan air yang terdapat dalam bahan yang diperiksa (WHO, 1998).

3.6.4Penetapan kadar sari larut air

Sebanyak 5 g serbuk yang telah dikeringkan diudara dimaserasi selama 24 jam dengan 100 mL air-kloroform dalam labu bersumbat sambil berkali-kali dikocok selama 6 jam pertama kemudian dibiarkan selama 18 jam lalu disaring. Sejumlah 20 mL filtrat diuapkan hingga kering dalam cawan penguap berdasar rata yang telah ditara. Residu dipanaskan pada suhu 105o C sampai bobot tetap. Kadar sari larut dalam air dihitung dengan persen terhadap bahan yang telah kering (Depkes, RI., 1995).

3.6.5 Penetapan kadar sari larut etanol

Sebanyak 5 g serbuk yang telah dikeringkan di udara dimaserasi selama 24 jam dengan 100 mL etanol 95% dalam labu bersumbat sambil dikocok selama 18 jam, disaring cepat untuk menghindari penguapan etanol 96 %, sejumlah 20 mL filtrat diuapkan sampai kering dalam cawan penguap berdasar rata yang telah ditara dan sisanya dipanaskan pada suhu 105o C sampai bobot tetap. Kadar sari larut dalam etanol dihitung dalam persen terhadap bahan yang telah kering (Depkes, RI., 1995).

3.6.5 Penetapan kadar abu total

Sebanyak 2 g serbuk simplisia yang telah digerus dan ditimbang seksama dimasukkan kedalam krus silikat yang telah dipijar dan ditara, kemudian diratakan. Krus dipijar perlahan-lahan sampai arang menjadi putih, pemijaran

dilakukan pada suhu 500-600o C selama 3 jam kemudian didinginkan di desikatordan ditimbang sampai diperoleh bobot tetap. Kadar abu dihitung terhadap bahan yang telah kering (WHO, 1998).

3.6.6 Penetapan kadar abu tidak larut asam

Abu yang telah diperoleh dalam penetapan kadar abu dididihkan dalam 25 mL asam klorida encer selama 5 menit, Bagian yang tidak larut dalam asam dikumpulkan, disaring melalui kertas saring bebas abu, dan cuci dengar air pans sampai filtrat berwarna netral. Keringkan di hot plate lalu dipija sampai bobot tetap, kemudian didinginkan di desikator selama 30 menit dan ditimbang. Kadar abu yang tidak larut dalam asam dihitung terhadap bahan yang kering (WHO, 1998).

3.7 Skrining Fitokimia 3.7.1 Pemeriksaan alkaloida

Serbuk simplisia ditimbang sebanyak 0,5 g kemudian ditambah 1 mL asam klorida 2 N dan 9 mL air suling, dipanaskan di atas penangas air selama 2 menit. Ditunggu dingin dan disaring. Filtrat digunakan untuk percobaan berikut:

a. filtrat sebanyak 3 tetes ditambah dengan 2 tetes larutan pereaksi Mayer, akan terbentuk endapan menggumpal berwarna putih atau kuning

b. filtrat sebanyak 3 tetes ditambah pereaksi Bouchardat, akan terbentuk endapan berwarna cokelat sampai hitam

c. filtrat sebanyak 3 tetes ditambah dengan 2 tetes pereaksi Dragendorff, akan terbentuk warna merah atau jingga

34

Alkaloida positif jika terjadi endapan atau kekeruhan paling sedikit dua dari ketiga percobaan di atas (Depkes, RI., 1989).

3.7.2 Pemeriksaan flavonoida

Sebanyak 0,5 g simplisia disari dengan 10 mL metanol, lalu direfluks selama 10 menit. Kemudian disaring panas-panas melalui kertas saring kecil berlipat. Filtrat diencerkan dengan 10 mL air. Setelah dingin ditambahkan 5 mL eter, dikocok hati-hati dan didiamkan. Lapisan metanol diambil, lalu diuapkan pada suhu 40oC, sisanya dilarutkan dalam 5 mL etil asetat, disaring. Filtrat digunakan untuk uji flavonoida dengan cara sebagai berikut :

a. sebanyak 1 mL larutan percobaan diuapkan hingga kering, sisa dilarutkan dalam 1 sampai 2 ml etanol 96%, lalu ditambahkan 0,5 g serbuk seng dan 2 mL asam klorida 2 N, didiamkan selama 1 menit. Ditambahkan 10 mL asam klorida pekat, dalam waktu 2 sampai 5 menit terjadi warna merah intensif menunjukkan adanya flavonoida.

b. sebanyak 1 mL larutan percobaan diuapkan hingga kering, sisa dilarutkan dalam 1 mL etanol 96%, lalu ditambahkan 0,1 g serbuk magnesium dan 10 mL asam klorida pekat, terjadi warna merah jingga, menunjukkan adanya flavonoida, (Depkes RI, 1989).

3.7.3 Pemeriksaan saponin

Sebanyak 0,5 g serbuk simplisia, dimasukkan ke dalam tabung reaksi. Ditambahkan air panas, didinginkan kemudian dikocok kuat-kuat selama 10 detik. Jika terbentuk buih yang mantap setinggi 1 sampai 10 cm tidak kurang dari 10 menit dan tidak hilang dengan penambahan asam klorida 2 N menunjukkan adanya saponin (Depkes, RI., 1989).

3.7.4 Pemeriksaan glikosida

Disari 3 g serbuk simplisia dengan 30 mL campuran etanol 95% dengan air (7:3) dan 10 mL asam sulfat 2 N. Direfluks selama 1 jam, didinginkan dan disaring. Pada 20 ml filtrat ditambahkan 25 mL timbal (II) asetat 0,4 M, dikocok dan didiamkan selama 5 menit, disaring. Disaring filtrat 3 kali, tiap kali dengan 20 mL campuran kloroform-isopropanol (3:2). Sari air digunakan untuk percobaaan berikutnyaa yaitu 0,1 mL larutan percobaan dimasukkan ke dalam tabung reaksi, diuapkan di atas penangas air, sisa ditambahkan 2 mL air dan 5 tetes pereaksi Molish. Tambahkan 2 mL dengan hati-hati asam sulfat pekat melalui dinding tabung, terbentuknya cincin ungu pada kedua batas cairan menunjukkan adanya glikosida (Depkes, RI., 1995).

3.7.5 Pemeriksaan tanin

Sebanyak 0,5 g serbuk simplisia, disari dengan 10 mL air suling lalu dipanaskan, lalu disaring. Filtratnya diencerkan dengan air sampai tidak berwarna. Larutan diambil sebanyak 2 mL dan ditambahkan 1-2 tetes pereaksi besi (III) klorida 1 %. Jika terjadi warna biru atau hijau kehitaman, menunjukkan adanya tanin (Depkes, RI., 1989).

3.7.6 Pemeriksaan steroida dan triterpenoida

Sejumlah 1 g serbuk dimaserasi dengan 20 mL eter selama 2 jam, disaring, filtrat diuapkan di cawan penguap. Sisanya ditambahkan asam asetat anhidrat dan asam sulfat pekat (pereaksi Liebermann-Burchard). Apabila terbentuk warna ungu atau merah yang berubah menjadi biru ungu atau biru hijau menunjukan adanya steroida/triterpenoida (Depkes, RI., 1989).

36

3.8 Pembuatan Ekstrak Etanol Kulit Bawang Merah

Pembuatan ekstrak etanol kulit bawang merah dilakukan secara maserasi dengan pelarut etanol 96%. Sebanyak 500 g serbuk simplisia kulit bawang merah dimasukkan ke dalam wadah kaca, ditambahkan etanol 96% sebanyak 3,75 L, tutup, biarkan selama 5 hari terlindung dari cahaya sambil sering diaduk, serkai, peras, cuci ampas dengan cairan penyari secukupnya hingga diperoleh 4 L. Pindahkan ke dalam bejana tertutup, biarkan di tempat sejuk, terlindung dari cahaya selama 2 hari. Dienaptuangkan atau disaring. Hasil yang diperoleh dipekatkan dengan rotary evaporator sampai sebagian besar pelarutnya menguap dan dilanjutkan proses penguapan di atas penangas air sampai diperoleh ekstrak kental (Depkes, RI., 1979).

3.9 Pemeriksaaan Karakterisasi Ekstrak

Pemeriksaan karakteristik EEKBM meliputi penetapan kadar air, penetapan kadar abu total, dan penetapan kadar abu tidak larut dalam asam. Prosedur pemeriksaan ekstrak sama seperti prosedur karakterisasi simplisia.

3.10 Skrining Fitokimia Ekstrak

Prosedur pemeriksaan golongan senyawa kimia EEKBM dilakukan sama seperti prosedur skrining fitokimia serbuk simplisia yaitu pemeriksaan flavonoid, alkaloid, saponin, tanin, glikosida dan steroid/triterpenoid.

3.11 Uji Aktivitas Hepatoprotektor

3.11.1 Pembuatan suspensi Na CMC 0,5%

Pembuatan suspensi Na CMC 0,5% dilakukan dengan cara sebagai berikut: sebanyak 0,5 gram Na CMC ditaburkan kedalam lumpang yang berisi air suling panas sebanyak 10 mL. Didiamkan selama 15 menit hingga diperoleh masa yang transparan, digerus hingga terbentuk gel dan diencerkan dengan sedikit air suling, kemudian dituang ke dalam labu tentukur 100 mL, ditambah air suling sampai batas tanda. Suspensi ini digunakan sebagai pembawa EEKBM, parasetamol dan rutin.

3.11.2 Pembuatan suspensi EEKBM

Sebanyak 300 mg EEKBM dimasukkan ke dalam lumpang dan ditambahkan suspensi Na CMC 0,5% sedikit demi sedikit sambil digerus sampai homogen lalu dimasukkan ke labu tentukur 10 mL. Volume dicukupkan dengan suspensi Na CMC 0,5% sampai garis tanda. Prosedur yang sama dilakukan untuk pembuatan suspensi EEKBM 450 dan 600 mg/kg bb.

3.11.3 Pembuatan suspensi parasetamol

Suspensi parasetamol dalam suspensi Na CMC 0,5% dibuat dengan cara melarutkan 1 gram serbuk parasetamol yang telah ditimbang ke dalam suspensi Na CMC 0,5% di dalam lumpang, digerus hingga homogen lalu dimasukkan ke dalam labu tentukur 10 mL. Volume dicukupkan dengan suspensi Na CMC 0,5% sampai garis tanda.

3.11.4 Pembuatan suspensi rutin

Suspensi rutin dibuat dengan cara memasukkan 20 mg serbuk rutin yang telah ditimbang ke dalam lumpang kemudian ditambahkan tween 80 tetes demi

38

tetes sambil digerus hingga homogen, ditambahkan suspensi Na CMC 0,5% lalu dimasukkan ke dalam labu tentukur 10 mL. Volume dicukupkan dengan suspensi Na CMC 0,5% sampai garis tanda.

3.11.5 Pembuatan larutan buffer formalin 10%

Larutan buffer formalin 10 % dibuat dengan penambahan 4 g NaH2PO4 dn

6,5 g Na2HPO4 ke dalam formalin 10 % (100 mL larutan formaldehid 40%

ditambah akuades 900 mL) kemudian dicukupkan dengan akuades sampai 1000 mL.

3.11.6 Pengujian hewan uji

Hewan uji dibagi atas 6 kelompok dan masing-masing terdiri dari 4 hewan percobaan. Pengujian aktivitas hepatoprotektor dijelaskan sebagai berikut:

a. kelompok I: normal, hewan uji tidak diberi perlakuan apapun. Makanan dan minuman diberikan secara ad libitum.

b. kelompok II: kontrol negatif, hewan uji diberikan suspensi Na CMC 0,5% sekali sehari selama 14 hari berturut-turut diikuti pemberian parasetamol dosis tunggal 1 g/kg bb 6 jam setelah pemberian suspensi Na CMC 0,5% pada hari ke-14. Makanan dan minuman diberikan secara ad libitum.

c. kelompok III: kontrol positif, hewan uji diberikan suspensi rutin dosis 20 mg/kg bb sekali sehari selama 14 hari berturut-turut diikuti pemberian parasetamol dosis tunggal 1 g/kg bb 6 jam setelah pemberian ekstrak pada hari ke-14. . Makanan dan minuman diberikan secara ad libitum.

d. kelompok IV: hewan uji diberikan EEKBM dosis 300 mg/kg bb sekali sehari selama 14 hari berturut-turut diikuti pemberian parasetamol dosis tunggal 1

g/kg bb 6 jam setelah pemberian ekstrak pada hari ke-14. . Makanan dan minuman diberikan secara ad libitum.

e. kelompok V : hewan uji diberikan EEKBM dosis 450 mg/kg bb sekali sehari selama 14 hari berturut-turut diikuti pemberian parasetamol dosis tunggal 1 g/kg bb 6 jam setelah pemberian ekstrak pada hari ke-14. . Makanan dan minuman diberikan secara ad libitum.

f. kelompok VI: hewan uji diberikan EEKBM dosis 600 mg/kg bb sekali sehari selama 14 hari berturut-turut diikuti pemberian parasetamol dosis tunggal 1 g/kg bb 6 jam setelah pemberian ekstrak pada hari ke-14. . Makanan dan minuman diberikan secara ad libitum.

3.11.7 Pengukuran ALT dan AST

Pengambilan darah dilakukan 24 jam setelah pemberian parasetamol. Mencit didislokasi di leher kemudian dibedah dan darah diambil menggunakan jarum suntik langsung dari jantung mencit sebanyak 0,5 mL, setelah itu dimasukkan ke dalam microtube dan didiamkan ± 20 menit. Darah disentrifuge dengan kecepatan 3000 rpm selama 20 menit untuk mendapatkan serum darah mencit. Pengukuran ALT dan AST berdasarkan reaksi enzimatik menggunakan reagen kit Dialab® (R1 dan R2). Larutan sampel berisi campuran reagen 1 dan reagen 2 dengan perbandingan 4:1. Sebanyak 1000µL reagen kit ALT dan AST masing-masing direaksikan dengan 100µL sampel, divortex dan diinkubasi pada suhu kamar selama 1 menit selanjutnya absorban sampel dibaca setelah 1,2 dan 3 menit menggunakan Microlet 3000 pada panjang gelombang 340 nm dan suhu 37oC. Prosedur penetapan aktivitas katalisator ALT dan AST berdasarkan prosedur kerja dari Dialab®. Kemudian dibandingkan rata-rata ALT dan AST antar kelompok.

40

Dikatakan adanya aktivitas hepatoprotektor apabila ALT dan AST dari EEKBM lebih rendah dibandingkan kelompok kontrol negatif (Na CMC 0,5% + parasetamol). Pemeriksaan ALT dan AST dilakukan di Laboratorium Kesehatan Dinas Kesehatan Provinsi Sumatera Utara.

3.11.8 Pemeriksaan kerusakan organ hati mencit 3.11.8.1 Pemeriksaan makroskopik

Mencit dibedah kemudian diambil organ hati dan dicuci dengan larutan NaCl 0,9% untuk membersihkan sisa darah yang menempel. Pengamatan dilakukan dengan mengamati warna dan tekstur permukaan hepar mencit.

3.11.8.2 Pembuatan preparat histologi (tissue processing) dan pemeriksaan mikroskopik

Jaringan yang akan dibuat preparat histologi difiksasi dalam larutan buffer formalin 10% minimal 4 jam hingga mengeras (matang). Sampel organ yang terfiksasi dengan sempurna ditrimming setebal ± 0,5 cm. Potongan kemudian dimasukkan dalam tissue cassette untuk dimasukkan dalam automatic tissue

processor. Di dalam tissue processor jaringan melalui beberapa tahap pemrosesan

preparat. Jaringan yang dipilih akan direndam secara berurutan ke dalam 12 tabung berisi berbagai reagen sebagai berikut:

a. tabung I dan II berisi formalin 10 % masing-masing selama 2 jam. Proses ini dinamakan fiksasi (fixation), tujuannya untuk mengurangi efek penyusutan sel selama proses dehidrasi.

b. tabung III berisi alkohol 70% selama 1 jam, tabung IV berisi alkohol 96% selama 1 jam dan tabung V, VI dan VII berisi etanol absolut, masing-masing selama 1 jam. Proses ini disebut dehidrasi (dehydration) yang bertujuan untuk menarik cairan yang berasal dari jaringan yang telah difiksasi.

c. tabung VIII, IX dan X berisi xylene, masing –masing selama 1,5 jam. Proses ini disebut pembeningan (clearing), bertujuan mengeluarkan alkohol sehingga parafin bisa masuk ke dalam jaringan.

d. tabung XI dan XII berisi paraffin masing-masing selama 2 jam. Proses pengisian paraffin ke dalam pori-pori jaringan ini dinamakan infiltrasi, bertujuan mengeraskan jaringan agar mudah dipotong dengan microtome.

Tissue cassette berisi jaringan dikeluarkan dan dilakukan proses embedding,

yaitu jaringan diletakkan di mould dan ditambahkan paraffin bersuhu 56oC dan dibiarkan membeku di cold area dari embedding centre. Penyayatan jaringan (sectioning) dilakukan setelah sebelumnya dibentuk (trimming) menggunakan

microtome dengan ketebalan 3-4 μm, hasil sayatan dipindahkan ke kaca objek dan dipindahkan ke penangas air agar ukuran sayatan mendekati ukuran sebenarnya dengan bantuan air hangat. Jaringan diwarnai dengan metode Hematoxylin-Eosin sebagai berikut :

a. xylol I selama 5 menit b. xylol II selama 5 menit c. etanol I selama 5 menit d. etanol II selama 5 menit e. alkohol 96% selama 5 menit f. alkohol 80% selama 5 menit g. alkohol 70% selama 5 menit h. air mengalir selama 5 menit i. hematoxylin 5 menit

42 k. HCl 0,1% selama 2 menit

l. eosin selama 5 menit

m. air mengalir selama 5 menit

Jaringan yang sudah diwarnai ditutup dengan kaca penutup dengan penambahan Entellan sebagai perekat. Pembuatan preparat histologi dilakukan di laboratorium patologi anatomi RS Murni Teguh Medan. Hasil kemudian diamati di bawah mikroskop.

3.11.9 Analisis data

Data hasil penelitian dianalisis menggunakan program SPSS 22.0.Data hasil penelitian ditentukan homogenitas dan normalitasnya untuk menentukan analisis statistik yang digunakan. Data dianalisis menggunakan uji One WayANOVA untuk menentukan perbedaan rata-rata di antara kelompok dengan uji Post Hoc Tukey untuk melihat perbedaan nyata antar perlakuan.

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Karakterisasi Simplisia dan Ekstrak Kulit Bawang Merah

4.1.1 Pemeriksaan makroskopik dan karakterisasi simplisia dan ekstrak

Hasil identifikasi yang dilakukan oleh Herbarium Medanense Universitas Sumatera Utara terhadap sampel yang diteliti adalah tumbuhan bawang merah (Allium cepa L.) suku Liliaceae (Lampiran 1).

Hasil pemeriksaan secara makroskopik yang dilakukan terhadap kulit tumbuhan bawang merah (Allium cepa L.) yaitu berwarna merah, berbentuk tidak beraturan dan lembaran tipis, panjang ± 6 cm dan lebar ± 5 cm, mempunyai bau dan rasa yang lebih lemah dari umbi bawang merah (Lampiran 2).

Hasil pemeriksaan secara mikroskopik yang dilakukan terhadap serbuk simplisia kulit bawang merah yaitu terlihat serabut skelerenkim, parenkim dengan sel berisi tetesan minyak, kristal kalsium oksalat bentuk prisma dan trakea dengan penebalan tangga (Lampiran 5). Hasil karakterisasi serbuk simplisia kulit bawang merah dapat dilihat pada Tabel 4.1.dan Lampiran 6.

Tabel 4.1 Hasil karakterisasi serbuk simplisia dan EEKBM

No Karakteristik serbuk simplisia Kadar (%)

Simplisia Ekstrak

1 Kadar air 4,00 1,67

2 Kadar sari larut dalam air 6,63 - 3 Kadar sari larut dalam etanol 12,80 -

4 Kadar abu total 12,66 3,47

44

Hasil karakterisasi serbuk simplisia memenuhi syarat berdasarkan persyaratan pada Materia Medika Indonesia (MMI) edisi VI yang menyantumkan kadar air tidak lebih dari 10%, sedangkan kadar air simplisia yang diperoleh adalah 4,00% dan kadar air ekstrak 1,67%. Pemeriksaan kadar air penting untuk mengetahui kandungan air dalam simplisia, khususnya yang mudah mengabsopsi air dan membusuk akibat kadar air yang tinggi. Kadar air yang tinggi akan meningkatkan pertumbuhan bakteri, dan jamur (WHO, 1992).

Penetapan kadar sari larut air dan kadar sari larut etanol untuk mengetahui banyaknya sari larut dalam pelarut air dan etanol. Senyawa yang dapat larut dalam air adalah glikosida, gula, gom, protein, enzim, zat warna, dan asam organik. Kadar sari larut air simplisia diperoleh 6,63%. Kadar sari larut etanol simplisia yang diperoleh 12,80%. Penetapan kadar sari dilakukan untuk mengetahui kandungan senyawa kimia yang larut dalam air maupun dalam etanol. Senyawa yang dapat larut dalam etanol adalah glikosida, antrakinon, steroida, flavonoida, klorofil, dan dalam jumlah sedikit yaitu lemak dan saponin (Depkes, RI.,1979).

Penetapan kadar abu total untuk mengetahui jumlah keseluruhan material setelah pembakaran, terdiri dari abu fisiologis yang berasal dari tumbuhan itu sendiri dan abu non-fisiologis yang berasal dari luar (pasir dan tanah) yang menempel di permukaan tumbuhan. Penetapan kadar abu tidak larut dalam asam bertujuan mengukur kandungan silika. Kadar abu total simplisia adalah 12,66% dan kadar abu tidak larut asam simplisia adalah 3,25% , sedangkan kadar abu total ekstrak adalah 3,47% dan kadar abu tidak larut asam ekstrak adalah 0,24%. Hasil penyarian 500 gram serbuk simplisia kulit bawang merah dengan pelarut etanol 96% diperoleh ekstrak kental 74,02 gram (rendemen 14,80%).

4.1.2 Skrining fitokimia serbuk simplisia dan ekstrak

Penentuan golongan senyawa kimia simplisia dan EEKBM dilakukan untuk mendapatkan informasi golongan senyawa metabolit sekunder yang terdapat di dalamnya. Adapun pemeriksaan yang dilakukan terhadap simplisia dan ekstrak adalah pemeriksaan golongan senyawa alkaloid, flavonoid, tanin, saponin, glikosida dan steroid/triterpenoid. Hasil skrining fitokimia serbuk simplisia dan EEKBM dapat dilihat pada Tabel 4.2.

Tabel 4.2 Hasil skrining fitokimia serbuk simplisia dan EEKBM

Tabel tersebut menunjukkan bahwa simplisia dan EEKBM memiliki kandungan senyawa kimia yang sama yaitu flavonoid, tanin, saponin dan steroid/triterpenoid. Ini disebabkan oleh sifat etanol yang memiliki gugus hidroksil polar dan gugus alkil yang bersifat nonpolar (Wilbraham dan Matta,1992). Selain itu, pelarut etanol sangat efektif untuk mengikat senyawa-senyawaseperti fixed oils, lemak, lilin, alkaloid, flavon, polifenol, tanin, saponin, aglikon dan glikosida (Filho, 2006).

No Pemeriksaan Serbuk simplisia Ekstrak

1 Alkaloida - -

2 Flavonoida + +

3 Saponin + +

4 Tanin + +

5 Glikosida + +

46

4.2 Hasil uji aktivitas hepatoproktektor 4.2.1 Hasil pengukuran ALT dan AST

Pengukuran ALT dan AST dilakukan pada hari ke-15, 24 jam setelah pemberian parasetamol. Hasil pengukuran dapat dilihat secara rinci pada Tabel 4.3.

Tabel 4.3 ALT dan AST mencit dengan perbedaan perlakuan di setiap kelompok

(Mean ± SE) hasil analisis secara statistik SPSS metode One Way

ANOVA

Ket : a data berbeda signifikan (p < 0,05) terhadap kelompok tanpa perlakuan.

b

data berbeda signifikan (p < 0,05) terhadap kelompok kontrol negatif (Na CMC 0,5%)

Tabel menunjukkan kelompok kontrol negatif dengan ALT 1369,87 IU/L dan AST 2086,35 IU/L. berbeda signifikan dengan kelompok tanpa perlakuan (p < 0,05) dengan ALT 139,77 IU/L dan AST 210,85 IU/L. Kelompok kontrol positif dengan ALT 193,77 IU/L dan AST 354,22 IU/L tidak berbeda signifikan (p > 0,05) dengan kelompok taanpa perlakuan. Kelompok EEKBM 300 mg/kg bb dengan nilai ALT 755,17 IU/L dan nilai AST 1051,00 IU dan kelompok EKKBM 450 mg/kg bb dengan ALT 528,00 IU/L dan AST 803,40 IU/L berbeda signifikan dengan kelompok tanpa perlakuan dan kontrol negatif. Kelompok EEKBM 600 mg/kg bb dengan nilai ALT 313,70 IU/L dan AST 472,95 IU/L

Kelompok ALT (IU/L) AST (IU/L)

Tanpa perlakuan 139,77 ± 17,15 210,85 ± 14,98 Na- CMC 0,5% 1369,87 ± 101,20a 2086,35 ± 177,36a Rutin 20 mg/kg bb + parasetamol 193,77 ± 9,08b 354,22 ± 17,28b EEKBM 300 mg/kg bb +

parasetamol 755,17 ± 15,25

ab

1051,00 ± 23,57ab EEKBM 450 mg/kg bb +

parasetamol 528,00 ± 6,07

ab

803,40 ± 19,96ab EEKBM 600 mg/kg bb +

parasetamol 313,70 ± 9,13

b

472,95 ± 9,82b

tidak berbeda signifikan dengan kelompok tanpa perlakuan. Grafik hasil pengukuran ALT dan AST dapat dilihat di Gambar 4.1 dan Gambar 4.2.

Gambar 4.1 Grafik ALT mencit jantan yang diukur setelah pemberian

parasetamol 1g/kg bb pada hari ke-14. Data berupa mean ± SE (n=4). Kelompok normal tidak diberi perlakuan.

Gambar 4.2 Grafik ALT AST mencit jantan yang diukur setelah pemberian

parasetamol 1g/kg bb pada hari ke-14. Data berupa mean ± SE (n=4). Kelompok normal tidak diberi perlakuan.

139,77 ± 17,15

1369,87 ± 101,20

193,77 ± 9,08

755,17 ± 15,25

528,00 ± 6,07

313,70 ± 9,13

0 200 400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000

Normal Kontrol (-) Na CMC 0,5% Kontrol (+) (rutin 20 mg/kg bb) EEKBM 300 mg/kg bb EEKBM 450 mg/kg bb EEKBM 600 mg/kg bb

A

L

T

210,85 ± 14,98

2086,35 ± 177,36

354,22 ± 17,28

1051,00 ± 23,57

803,40 ± 19,96

472,95 ± 9,82

0 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500

Normal Kontrol (-) Na CMC 0,5% Kontrol (+) rutin (20 mg/kg bb) EEKBM 300 mg/kg bb EEKBM 450 mg/kg bb EEKBM 600 mg/kg bb

A

S

T

48

Meskipun nilai ALT dan AST EEKBM 300 mg/kg bb dan EEKBM 450 mg/kg bb berbeda signifikan terhadap kontrol negatif, keduanya juga berbeda secara signifikan terhadap kontrol positif (rutin), sehingga dapat disimpulkan bahwa EEKBM 300 mg/kg bb dan EEKBM 450 mg/kg bb mampu menghambat kenaikan nilai ALT dan AST akibat induksi parasetamol, namun efeknya belum sebanding dengan kelompok kontrol positif (rutin 20 mg/kg bb). Hal ini mungkin dipengaruhi perbedaan komposisi kuersetin, flavonoid yang diyakini memiliki aktivitas hepatoprotektif, tergantung pada bagian dari bawang merah. Kuersetin berada dalam bentuk glukosida (kuesetin 3,4-glukosida, kuersetin-4’-glukosida dan kuersetin-3’-glukosida) dengan total 53,5% di lapisan umbi, sedangkan di kulit terluar kuersetin dalam bentuk aglikon sebanyak 53,2% (Wiczkowski, et al., 2003). Meskipun aglikon kuersetin yang mempunyai efek antioksidan namun lebih sulit diserap karena sifatnya yang lebih lipofilik sehingga sulit mencapai lapisan dinding usus halus, selain juga karena aglikon tidak stabil pada pH dan temperatur usus halus. Ikatan gula dengan aglikon membantu meningkatkan absorpsi di usus halus, karena gula yang terikat secara aktif dihidrolisis oleh β– glukosidase di brush border usus halus yang mempunyai afinitas yang tinggi terhadap glukosida (Graefe, et al., 2001).

Kelompok EEKBM 600 mg/kg bb tidak berbeda signifikan dengan kelompok tanpa perlakuan. Hal ini menunjukkan EEKBM 600 mg/kg bb mempunyai efek menghambat peningkatan ALT dan AST yang sebanding dengan kontrol positif (rutin 20 mg/kg bb). Secara keseluruhan dapat dilihat adanya penghambatan peningkatan ALT dan AST hingga nilai menuju normal seiring

peningkatan dosis EEKBM, sehingga menjadi petunjuk adanya hubungan peningkatan dosis dengan kemampuan penghambatan.

Nilai AST dan ALT merupakan biomarker yang sangat sensitif sehingga bisa digunakan dalam penilaian hati atau liver test (LT). Apabila membran plasma hepatosit rusak, enzim yang normalnya berada di sitosol keluar menuju aliran darah. Nilai AST yang lebih tinggi dibandingkan ALT mengindikasikan bahwa kerusakan sudah mencapai mitokondria karena AST berada di sitoplasma dan juga mitokondria. Pemeriksaan AST dan ALT biasanya dilakukan untuk menilai tipe dan luas kerusakan sel. Peningkatan yang tinggi (>20 kali lipat hingga mencapai >1000 IU/L) menandakan hepatitis virus berat, nekrosis yang diinduksi obat dan toksin lain serta syok sirkular (Iyanda and Adeniyi, 2011; Thapa and Walia, 2007).

4.2.2 Gambaran Kerusakan Organ Hepar 4.2.2.1 Gambaran makroskopik organ hati

Pengamatan makroskopik organ hati dilakukan dilakukan pada hari ke-15, 24 jam setelah pemberian parasetamol. Mencit yang masih hidup dikorbankan dengan cara dislokasi leher kemudian dibedah untuk diambil hatinya. Hasil pengamatan mikroskopik dapat dilihat di Gambar 3.3

Gambar 4.3 Pemeriksaan makroskopik organ hati mencit jantan yang diambil

dari mencit setelah didislokasi pada hari ke-15. Keterangan: P1 = tanpa perlakuan; P2 = kontrol negatif (Na CMC 0,5%); P3 = kontrol positif (rutin 20 mg/kg bb); P4,P5,P6 = EEKBM dosis 300, 450, dan 600 mg/kg bb.

50

Hasil menunjukkan adanya perbedaan warna yang cukup jelas pada kontrol negatif yaitu organ berwarna coklat muda atau cenderung kuning pucat jika dibandingkan dengan kelompok lainnya, namun tekstur organ dari setiap kelompok perlakuan semuanya tidak terdapat perbedaan yakni memiliki tekstur yang licin.

4.2.2.2 Gambaran mikroskopik organ hati

Pembuatan preparat histologi organ hati dilakukan setelah pengamatan makroskopik. Proses pembuatan preparat memakan waktu 7 hari, kemudian pengamatan mikroskopik dilakukan untuk menentukan derajat kerusakan sel-sel hepar akibat pemberian parasetamol dan efek hepatoprotektor EEKBM. Berdasarkan pengamatan histopatologi ini dapat diamati kerusakan organ pada tingkat yang tidak terlihat melalui pengamatan makroskopik.

Gambar 4.4Histopatologi jaringan hati mencit perbesaran 10 x 10. Keterangan:

P1 = tanpa perlakuan; P2 = kontrol negatif (Na CMC 0,5%); P3 = kontrol positif (rutin 20 mg/kg bb); P4,P5,P6 = EEKBM dosis 300, 450, dan 600 mg/kg bb. Tampak perdarahan yang meluas pada kelompok kontrol negatif, kemudian berkurang pada kelompok EEKBM 300 mg/kg bb dan 450 mg/kg bb dan akhirnya tidak tampak sama sekali pada kelompok EEKBM 600 mg/kg bb.

P1 P2

P3 P4

52 VS

P1 P2

P3 P4

P5 P6

Gambar 4.5Histopatologi jaringan hati mencit jantan perbesaran 10 x 40. Cedera

hati akibat induksi parasetamol ditandai dengan pendarahan (lingkaran), degenerasi hidropik (panah hitam) yang bersifat reversibel dan nekrosis yang bersifat ireversibel dengan ciri inti mengalami piknosis (panah biru), karyolisis (panah hijau) dan karyoreksis (panah merah).Keterangan: P1 = tanpa perlakuan; P2 = kontrol negatif (Na CMC 0,5%); P3 = kontrol positif (rutin 20 mg/kg bb); P4,P5,P6 = EEKBM dosis 300, 450, dan 600 mg/kg bb; VS = vena sentral; VP = vena porta.

VS VS

VS

VS

VP

Nekrosis adalah tipe kematian sel yang berkaitan dengan hilangnya integritas membran dan bocornya komponen sel yang berujung pada disolusi sel, menghasilkan proses degradasi sel yang mati oleh enzim. Komponen sel yang bocor akan memicu reaksi lokal yaitu inflamasi yang berusaha mengeliminasi sel yang mati dan memulai program regenerasi sel. Nekrosis adalah tipe cedera yang bersifat ireversibel, ditandai dengan vakuolasi, pembengkakan sel, degradasi inti dan pelepasan secara masif isi dari sel yang berada dalam area toksisitas yang luas (Jaeschke, 2013).

Secara histopatologi, cedera hati akibat paparan parasetamol dosis toksik dapat ditandai dengan pendarahan yang luas, kongesti vena sentral yang disertai dengan rusaknya endothelium, degenerasi hidropik, nekrosis perivenular, steatosis mikrovesikular dan perubahan inti (Shahid dan Subhan, 2014). Kongesti pada jaringan parenkim hati mencit bisa terjadi sebelum atau sesudah nekrosis. Studi morfologi oleh Walker, dkk. menunjukkan kongesti berasal dari akumulasi sel darah merah ke dalam vakuola endositik dan rongga Disse karena sel endotel sinusoid membengkak dan perfusinya menurun (Hinson, et al., 2010). Degenerasi hidropik atau swelling merupakan tahap awal terjadinya nekrosis yang ditandai dengan hepatosit yang membengkak, di mana terdapat vakuola berbentuk bundar dan berwarna pucat yang disebabkan lumpuhnya aktivitas pompa ion di plasma membran sehingga tidak mempu mempertahankan keseimbangan ion dan cairan (Kumar, et al., 2013). Dilatasi RE merupakan konsekuensi dari meningkatnya aktivitas CYP P450 yang juga menghasilkan spesies oksigen reaktif (ROS) yang nantinya mempengaruhi permeabilitas membran plasma dan menyebabkan

54

metabolisme lemak akibat hepatosit yang rusak, dengan ciri pernumpukan lemak dengan ukuran yang kecil, bulat, dan jernih di sitoplasma (Featherstone, 2008). Baik degenerasi hidropik maupun steatosis merupakan perubahan morfologi yang bersifat nonletal dan reversibel, namun dapat berubah menjadi ireversibel apabila disfungsi mitokondria tidak dapat dikoreksi dan gangguan fungsi membran terjadi. Nekrosis perivenular adalah bentuk kematian sel yang terjadi di sekeliling vena, baik vena sentral maupun vena porta. Hal ini dapat terjadi jika dosis obat yang menginduksi nekrosis cukup tinggi, seperti pada penelitian ini di mana dosis parasetamol yang diberikan sebesar 1 g/kg bb. Pemilihan dosis pemberian parasetamol 1 g/kg bb untuk mencit didasarkan pada penelitian oleh Jaeschke, et al., yang menyimpulkan dosis ≥ 200 mg untuk mencit yang dipuasakan dan ≥ 400 mg untuk mencit yang tidak dipuasakan mampu menginduksi toksisitas hati yang signifikan. Konversi dosis menunjukkan dosis 1 g/kg bb untuk mencit dengan bb 20 g setara dengan 7,758 g untuk manusia dengan berat 70 kg. Hal ini sesuai dengan data klinis di Amerika Serikat di mana dosis tunggal ≥ 7,5 -10 g untuk orang dewasa menyebabkan hepatotoksitas dan harus segera dievaluasi dan diberikan intervensi medis (Bunchorntavakul and Reddy, 2013). Perubahan inti merupakan hasil akhir dari kerusakan sel, yaitu pemecahan DNA dan kromatin yang ditandai inti sel menjadi samar (karyolisis), mengecil dan berwarna kehitaman (piknotik), kemudian pecah (karyoreksis) (Kumar, et al., 2013).

Berdasarkan Gambar 4.4 dan 4.5, gambaran histopatologi EEKBM 300 mg/kg bb dan EEKBM 450 mg/kg bb masih menunjukkan ciri nekrosis jika dibandingkan dengan kontrol negatif, walaupun begitu peningkatan dosis ekstrak nyatanya menunjukkan perbedaan. Gambaran histopatologi EEKBM 300 mg/kg

bb menunjukkan pendarahan yang cukup luas yang berawal dari vena sentral kemudian melebar secara radial. Perbesaran 40 x 10 memperlihatkan ekstravasasi eritrosit di sepanjang sinusoid. Steatosis (fatty change) dan degenerasi hidropik juga tersebar di jaringan parenkim hati. Pada gambaran histopatologi EEKBM 450 mg/kg bb area sentrilobular dan periportal menunjukkan penurunan luas pendarahan dan degenerasi hidropik. Gambaran histopatologi EEKBM 600 mg/kg bb menunjukkan perbaikan yang signifikan, ditandai dengan degenerasi hidropik yang cukup luas dan vena sentral yang normal dan tidak dijumpai pendarahan.. Gambaran yang bersifat reversibel ini menunjukkan bahwa EEKBM 600 mg/kg bb mampu menurunkan stres oksidatif sehingga tidak sampai menimbulkan nekrosis perivenular seperti pada kontrol negatif. Evaluasi kerusakan jaringan hati dari setiap kelompok perlakuan dirangkum dalam Tabel 4.4.

Tabel 4.4 Evaluasi histopatologi hati mencit akibat induksi parasetamol pada

tiap kelompok perlakuan

Kelompok Degenerasi Hidropik Nekrosis Pendarahan

P1 - - -

P2 +++ +++ +++

P3 + + -

P4 ++ ++ +++

P5 + ++ ++

P6 +++ + -

Tingkat keparahan kerusakan hati dievaluasi berdasarkan skor berikut: (-) = normal; (+) = ringan; (++) = sedang; (+++) = berat. Keterangan: P1 = tanpa perlakuan; P2 = kontrol negatif (Na CMC 0,5%); P3 = kontrol positif (rutin 20 mg/kg bb); P4,5,6 = EEKBM dosis 300, 450, dan 600 mg/kg bb.

Terdapat hipotesis bahwa stres oksidatif atau keadaan di mana ROS (reactive oxygen species) berlebih dianggap lebih tepat sebagai konsekuensi dibandingkan penyebab kerusakan sel, namun begitu produksinya terjadi segera

56

setelah deplesi glutation (GSH) dan menjadi titik awal proses kematian sel dalam beberapa jam (Jaeschke and Bajt, 2005). Terlebih lagi, toksisitas berkembang hanya setelah onset stres oksidatif tercapai dan mitokondria mengalami disfungsi, sehingga dengan mencegah fenomena ini akan melindungi sel dari kematian karena induksi parasetamol. Pengikatan NAPQI-protein di mitokondria sel dianggap sebagai pemicu meningkatnya stres oksidatif. Umumnya ROS yang dihasilkan dalam mekanisme toksisitas ini adalah superoksida (O2−), yang berdismutasi dengan katalisator superoxide dismutase (SOD) menjadi hidrogen peroksida (H2O2) yang berubah menjadi HO- melalui reaksi Fenton. Superoksida

juga bereaksi dengan nitrit oksida (NO-) membentuk peroksinitrit yang selanjutnya menitrasi protein menjadi nitrotirosin dan melangsungkan rangkaian tahap kematian sel (Jaeschke et al., 2012). Selain hepatosit, sel non-parenkim seperti sel Kupffer dan sel endotel sinusoid juga terlibat dalam produksi ROS dan RNS (Christ dan Bruckne, 2012).

Studi oleh Wiczkowski, et al., menunjukkan bahwa kandungan kuersetin dalam kulit bawang merah berkisar antara 25-35 mg/g, sedangkan dalam lapisan umbinya 4-7 mg/g. Melimpahnya bentuk aglikon di kulit bawang merah berhubungan dengan fungsinya sebagai proteksi terhadap sinar UV B matahari (Wiczkowski et al, 2003). Durgo, et al., dalam penelitiannya menunjukkan kemampuan utama kuersetin sebagai antioksidan melalui pengikatan radikal bebas O2- dan H2O2 yang ditandai penurunan kadar malondialdehid (MDA) dalam darah

dan urin. Kadar MDA adalah hasil dari peroksidasi lipid yang diperantarai O2- dan H2O2. Selain itu kuersetin dapat meningkatkan kadar GSH dalam sel CK2 dan sel

HEp2. Aktivitas GSH (glutation) dalam keadaan normal akan mendetoksifikasi

NAPQI melalui 3 cara: (i) konjugasi yang dikatalisis GST (glutation-S-transferase), (ii) reaksi kimia dengan NAPQI untuk membentuk konjugat, dan (iii) donasi proton atau hidrogen ke NAPQI atau agen radikal yang bersifat elektrofilik (Durgo, et al., 2007). Menurut Jaeschke dan Bajt, pengikatan NAPQI ke protein mitokondria berkorelasi dengan potensinya sebagai penyebab kerusakan sel namun dibutuhkan beberapa peran lain yang dapat meningkatkan toksisitas agar dapat menyebabkan kematian sel. Hal tersebut juga didukung oleh data banyaknya intervensi farmakologi yang dapat melindungi seperti aktivitas antioksidan dan pencegahan terhadap kerusakan mitokondria, namun tidak mempengaruhi pembentukan NAPQI dan pengikatannya dengan protein.Oleh karena itu, intervensi terhadap ikatan NAPQI -protein lewat inhibisi metabolisme parasetamol maupun pengikatan NAPQI akan meningkatkan protektivitas terhadap kerusakan sel yang diinduksi parasetamol (Jaeschke dan Bajt, 2005).

58

BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan

Berdasarkan hasil penelitian yang dilakukan dapat disimpulkan bahwa: a. EEKBM menunjukkan aktivitas sebagai hepatoprotektor.

b. EEKBM dosis 300, 450 dan 600 mg/kg bb dapat menghambat peningkatan aktivitas ALT dan AST. EEKBM dosis 300 mg/kg bb dengan ALT 755,17 IU/L dan AST 1051,00 IU/L, EEKBM dosis 450 mg/kg bb bb dengan ALT 528,00 IU/L dan AST 803,00 IU/L, dan EEKBM dosis 600 mg/kg bb dengan ALT 313,70 IU/L dan AST 472,95 IU/L menunjukkan perbedaan signifikan (p < 0,05) terhadap kelompok kontrol negatif dengan ALT 1369,87 IU/L dan AST 2086,35 IU/L .

c. pemberian EKKBM dosis 300, 450 dan 600 mg/kg bb menunjukkan adanya penurunan kerusakan jaringan hati pada pemeriksaan histopatologi.

5.2 Saran

Berdasarkan hasil penelitian terbukti bahwa EEKBM secara preventif memiliki aktivitas sebagai hepatoprotektor, sehingga disarankan kepada peneliti selanjutnya untuk meneliti efek hepatoprotektif EEKBM secara kuratif atau setelah diinduksi parasetamol.

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA 2.1 Uraian Tumbuhan

2.1.1 Sistematika tumbuhan

Di dalam dunia tumbuhan, tanaman bawang merah diklasifikasikan sebagai berikut :

Kerajaan : Plantae

Divisi : Spermatophyta Kelas : Monocotyledoneae Bangsa : Liliales

Suku : Liliaceae Marga : Allium

Jenis : Allium cepa L. (Rahayu dan Berlian,1999).

2.1.2 Nama daerah

Nama daerah dari tumbuhan bawang merah : Bawang merah (Aceh dan Palembang); pia (Batak); bawang sirah atau dasun merah (Minangkabau), barambang sirah atau dasun merah (Minangkabau); bawang suluh (Lampung); bawang beureum (Sunda); brambang atau brambang abang (Jawa Tengah dan Jawa Timur); bhabang mera (Madura); jasum bang atau jasum merah (BaIi); bawangi (gorontalo); lasuna eja (Makassar), lasuna cela (Bugis); laisuna mpilas (Roti); kalpeo miha (Timor); bawa

(Halmahera); bawa rohika (Ternate); bawa kahori (Tidore) (Rukmana, 1994).

2.1.3 Sejarah, habitat dan penyebaran

Tanaman bawang merah diduga berasal dari Asia. Sebagian literatur menyebutkan bahwa tanaman ini dari Asia tengah (Palestina dan India), sebagian juga memperkirakan asalnya dari Asia Tenggara dan Mediteranian. Literatur lain

8

menyebutkan bawang merah berasal dari Asia Barat yang berkembang ke Mesir dan Turki. Bangsa Mesir mengenal bawang merah sejak 3200-3700 SM. Di Yunani dan Israel, bawang merah dibudidayakan sejak 1500 SM. Eropa Barat, Timur dan Spanyol mengenal bawang merah sejak abad kedelapan, lalu menyebar ke Amerika. Penyebaran bawang merah telah meluas hampir ke setiap negara. Eropa Barat, Eropa Timur, Spanyol, Amerika Serikat, Mesir dan Turki merupakan negara penghasil bawang mereah terpenting di dunia. Di Indonesia, sentra budidaya bawang merah diusahakan di hampir seluruh provinsi di Indonesia kecuali Riau, DKI Jakarta, Kalimntan Barat dan Kalimantan Tengah (Rukmana, 1994). Daerah Samosir menjadi sentra budidaya bawang merah di Sumatera Utara, (Rahayu dan Berlian,1999).

.Bawang merah termasuk tumbuhan semusim yang tumbuh dengan baik di daerah beriklim kering yang cerah dengan udara panas, namun harus disertai pengairan yang baik dengan ketinggian tanah 0-800 m di atas permukaan laut dan

suhu antara 25-32 0C. Tanah yang gembur dan subur serta banyak mengandung

humus sangat baik dengan pH antara 6,0-6,8 (sedikit agak asam-normal) cocok untuk pertumbuhan bawang merah, sedangkan di tanah yang becek menyebabkan pertumbuhan bawang merah menjadi kerdil dan umbinya mudah busuk. Pada pH kurang dari 5,5 tanaman akan keracunan alumunium sehingga tanaman menjadi kerdil, sebaliknya pada pH di atas 6,5 Mangan tidak dapat diserap akibatnya umbinya menjadi kecil-kecil (Rukmana, 1994; Wibowo, 2008).

2.1.4 Morfologi tumbuhan

Bawang merah (Allium cepa L.) merupakan terna (tanaman yang berbatang lunak karena tidak membentuk kayu) rendah yang tumbuh tegak dengan tinggi mencapai 15-50 cm, berakar serabut dengan sistem perakaran dangkal dan tidak tahan kekeringan. Batang sejati (discus) bentuknya seperti cakram, tipis dan pendek.

Di bagian atas discus terbentuk batang semu yang tersusun dari pelepah-pelepah daun. Batang semu yang berada dalam tanah akan berubah bentuk dan fungsinya menjadi umbi lapis (bulbus). Beberapa helai kelopak daun terluar (2-3 helai) tipis dan mengering tetapi cukup liat, membungkus lapisan-lapisan kelopak daun di dalamnya sehingga membentuk umbi yang kemudian berisi cadangan makanan bagi tunas yang akan menjdi tanaman baru. Pada pangkal umbi tumbuh akar-akar serabut. Di bagian atas umbi terdapat mata tunas yang disebut tunas lateral dan dapat tumbuh menjadi tanaman baru. Daun berbentuk pipa, yakni bulat kecil memanjang antara 50-70 cm, berlubang, bagian ujungnya meruncing, berwarna hijau muda sampai hijau tua dan letak daun melekat pada tangkai yang ukurannya relatif pendek. Bunga akan muncul dari tunas utama (tunas apikal) di bagian tengah umbi, dengan panjang 30-90 cm dan terdapat 50-200 kuntum yang tersusun melingkar seperti payung. Biji mempunyai bentuk agak pipih,sewaktu masih muda berwarna bening atau putih, tetapi setelah tua menjadi hitam. Umbi lapis bawang merah sangat bervariasi, bentuknya ada yang bulat, bundar sampai pipi, sedangkan ukuran umbi meliputi besar, sedang, dan kecil. Warna kulit umbi merah muda sampai merah tua (Rukmana, 1994; Rahayu dan Berlian,1999; Wibowo, 2008).

2.1.5 Khasiat

Secara tradisional bawang merah dapat bermanfaat untuk pengobatan beberapa penyakit, seperti disentri, jantung koroner, influenza, tekanan darah tinggi, sembelit, luka, bisul pada kulit, jamur pada vagina (trichomoniasis), demam, masuk angin, impotensi dan cacar air. Selain itu bawang merah dapat berkhasiat menurunkan lemak darah, tekanan darah, mencegah pembekuan darah, menyembuhkan asma, melawan sel tumor, menurunkan kadar gula darah (Smith, 2002).

10 2.2 Parasetamol

2.2.1 Uraian Kimia

Parasetamol mempunyai nama IUPAC 4’-hidroksiasetanilida dengan rumus struktur C8H9NO2. Pemeriannya berupa serbuk hablur, putih tidak berbau, dan

memiliki rasa sedikit pahit, larut dalam air mendidih dan dalam natrium hidroksida 1N, serta mudah larut dalam etanol (Depkes, RI., 2014). Parasetamol merupakan metabolit aktif fenasetin yang memiliki efek antipiretik yang ditemukan di Jerman dan telah lama digunakan sejak tahun 1893 (Wilmana, 2013; Katzung, 2012). Efek antipiretik ditimbulkan oleh gugus aminobenzen Obat ini merupakan inhibitor COX-1 dan COX-2 di jaringan perifer dengan efek antiinflamasi yang tidak signifikan. Nyeri akut dan demam efektif terobati dengan dosis 325-500 mg empat kali sehari (Wilmana, 2013).

2.2.2 Farmakokinetik

Absorpsi parasetamol bergantung pada kecepatan pengosongan lambung, namun umumnya diabsorpsi cepat dan sempurna. Obat ini tersebar ke seluruh cairan tubuh dan sekitar 25% dari yang diabsorpsi terikat dengan protein plasma. (Wilmana dan Gan, 2013). Konsentrasi puncak diperoleh 30-60 menit setelah pemberian. Sejumlah parasetamol dimetabolisme oleh enzim hati untuk diubah menjadi parasetamol sulfat dan glukoronida yang secara farmakologi inaktif, kurang dari 5% dieksresikan dalam bentuk tidak berubah. Metabolit yang sedikit namun reaktif (NAPQI) bersifat penting sebab merupakan toksik terhadap hati dan ginjal. Waktu paruh parasetamol adalah 2-3 jam dan tidak dipengaruhi fungsi ginjal. Dosis toksik dan gangguan hati dapat memperpanjang waktu paruh (Furst, et al., 2012).

2.2.3 Farmakodinamik

Efek analgesik parasetamol yaitu menghilangkan atau mengurangi nyeri ringan sampai sedang seperti sakit kepala, myalgia, nyeri setelah melahirkan di mana pemberian aspirin tidak ditoleransi pasien dengan riwayat alergi, tukak lambung, hemophilia dan bronkospasma dan juga diberikan kepada pasien (Wilmana dan Gan, 2013; Furst, et al., 2012). Di Indonesia, penggunaan parasetamol sebagai analgesik dan antipiretik berkembang luas. Nyeri akut dan demam dapt diobati dengan dosis pemberian 325-500 mg empat kali sehari (direkomendasikan tidak melebihi 4 g) atau dosisnya diturunkan jika pemberian untuk anak-anak (Furst, et al., 2012). Jika dosis terapi tidak memberi manfaat, biasanya dosis lebih besar tidak menolong. Penggunaannya sebagai antiinflamasi, misalnya untuk mengobati arthritis rheumatoid bersifat inadekuat karena merupakan penghambat biosisntesis prostaglandin yang lemah. Karena hampir tidak mengiritasi lambung, parasetamol sering dikombinasi dengan AINS untuk efek analgesik (Wilmana dan Gan, 2013).

2.3 Kuersetin

Kuersetin merupakan flavonol yang tedapat dalam buah dan sayur yang memberikan efek bermanfaat bagi tubuh, dengan efek antioksidannya yang paling potensial di antara berbagai senyawa polifenol. Kuersetin terbukti memiliki efek antiinflamasi, antivirus, antibakteri dan antikarsinogenik. Dalam makanan, kuersetin lebih banyak berada dalam bentuk terikat dengan gula, asam fenolat, alkohol dan lainnya. Turunan kuersetin biasanya akan dihidrolisis di saluran cerna

12

untuk selanjutnya diabsorbsi dan dimetabolisme sebagai aglikon (Materska, 2008).

Gambar 2.1 Struktur Kuersetin (Domitrović, et al., 2012)

Kuersetin aglikon memiliki struktur lipofilik, namun demikian turunan kuersetin dapat bersifat lipofilik maupun hidrofilik tergantung pada subtituen yang terikat. Pada umumnya, turunan flavonoid dengan O-metil, C-metil dan turunan prenil bersifat lipofilik. Glikosilasi paling tidak di satu gugus hidroksil akan meningkatkan sifat hidrofiliknya (Materska, 2008).

Aktivitas antioksidan senyawa fenol salah satunya kuersetin dihubungkan dengan kemampuan mentransfer satu atom H atau sebuah elektron, sama halnya dengan pembentukan kompleks (chelation) dengan ion logam dan penghambatan aktivitas enzim oksidase. Selain itu, aktivitas antioksidan juga disertai aktivitas antivirus dan antibakteri. Aktivitas antioksidan ditandai dengan adanya gugus hidroksil bebas dan posisinya yang menguntungkan. Reaksi kuersetin dengan radikal bebas DPPH menunjukkan aktivitas antiradikalnya yang tinggi disebabkan adanya gugus 1,2-dihidroksibenzena (katekol) di cincin B. Apabila bereaksi dengan DPPH, kuersetin mendonorkan 2 atom H dan berubah menjadi intermediet kuinon. Gugus 4-oxo yang berkonjugasi dengan 2,3- alkena di cincin C dan gugus

3.5.1 Pereaksi Mayer ... 29

3.5.2 Pereaksi Dragendorff ... 29

3.5.3 Pereaksi Bouchardat ... 30

3.5.4 Pereaksi asam klorida 2 N ... 30

3.5.6 Pereaksi Molish ... 30

3.5.5 Pereaksi Liebermann-Burchard ... 30

3.5.6 Pereaksi Molish ... 30

3.5.7 Larutan air kloroform ... 30

3.5.8 Larutan kloral hidrat ... 30

3.5.9 Pereaksi timbal (II) asetat 0,4 N ... 30

3.6 Pemeriksaan Karakteristik Simplisia ... 31

3.6.1 Pemeriksaan makroskopik ... 31

3.6.2 Pemeriksaan mikroskopik ... 31

3.6.3 Penetapan kadar air ... 31

3.6.4 Penetapan kadar sari larut air ... 32

3.6.5 Penetapan kadar sari larut etanol ... 32

3.6.6 Penetapan kadar abu total ... 32

3.6.7 Penetapan kadar abu tidak larut asam ... 33

3.7 Skrining Fitokimia ... 33

3.7.1 Pemeriksaan alkaloida ... 33

3.7.2 Pemeriksaan flavonoida ... 34

3.7.3 Pemeriksaan saponin ... 34

3.7.4 Pemeriksaan glikosida ... 35

3.7.6 Penetapan steroida/triterpenoida ... 35

3.8 Pembuatan Ekstrak Etanol Kulit Bawang Merah ... 36

3.9 Pemeriksaan Karakterisasi Ekstrak ... 36

3.10 Skrining Fitokimia Ekstrak ... 36

3.11 Uji Aktivitas Hepatoprotektor ... 37

3.11.1 Pembuatan suspensi Na CMC 0,5% ... 37

3.11.2 Pembuatan suspensi EEKBM ... 37

3.11.3 Pembuatan suspensi parasetamol ... 37

3.11.4 Pembuatan suspensi rutin ... 37

3.11.5 Pembuatan larutan buffer formalin 10% ... 38

3.11.6 Pengujian ke hewan uji ... 38

3.11.7 Pengukuran parameter biokimia ALT dan AST ... 39

3.11.8 Pemeriksaan kerusakan organ hati mencit ... 40

3.11.8.1 Pemeriksaan makroskopik ... 40

3.11.8.2Pembuatan preparat histologi organ hati (tissue processing) dan pemeriksaan mikroskopik ... 40

3.11.9 Analisis data ... 42

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ... 43

4.1 Karakterisasi Simplisia dan Ekstrak Kulit Bawang Merah ... 43

4.1.1Pemeriksaan makroskopik dan karakteristik simplisia dan ekstrak ... 43

4.1.2 Skrining fitokimia serbuk simplisia dan ekstrak ... 45

4.2 Hasil Uji Aktivitas Hepatoprotektor ... 46

4.2.1 Hasil pengukuran ALT dan AST ... 46

4.2.2.1 Gambaran makroskopik organ hati ... 49

4.2.2.2 Gambaran mikroskopik organ hati ... 50

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ... 58

5.1 Kesimpulan ... 58

5.2 Saran ... 58

DAFTAR PUSTAKA ... 59

DAFTAR TABEL

Tabel Halaman

4.1 Hasil karakterisasi serbuk simplisia dan EEKBM ... 42 4.2 Hasil skrining fitokimia serbuk simplisia dan EEKBM ... 44 4.3 ALT dan AST mencit dengan perbedaan perlakuan di setiap kelompok (Mean ± SE) hasil analisis secara statistik SPSS metode

One Way ANOVA ... 45 4.4 Evaluasi histopatologi hati mencit akibat induksi parasetamol pada tiap kelompok perlakuan ... 54

DAFTAR GAMBAR

Gambar Halaman

1.1 Kerangka pikir penelitian ... 6

2.1 Struktur Kuersetin ... 12

2.2 Skema jalur metabolisme parasetamol ... 20

4.1 Grafik ALT mencit jantan ... 26

4.2 Grafik AST mencit jantan ... 26

4.3 Pemeriksaan makroskopik organ hati mencit jantan ... 29

4.4 Histopatologi jaringan hati mencit perbesaran 10 x 10 ... 50

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran Halaman

1 Hasil identifikasi sampel penelitian ... 62

2 Gambar simplisia kulit bawang merah ... 63

3 Gambar serbuk simplisia kulit bawang merah ... 64

4 Bagan alur penelitian ... 65

5Gambar mikroskopik serbuk simplisia kulit bawang merah pada perbesaran 10 x 40 ... 67

6 Perhitungan karakterisasi simplisia kulit bawang merah dan EEKBM 68

7 Rekomendasi persetujuan etik penelitian kesehatan ... 73

8 Gambar mencit jantan dan proses pengambilan darahdarijantung dan organ hati mencit jantan ... 74

9 Volume maksimum sesuai jalur pemberian dan konversi dosis ... 75

10 Perhitungan dosis ... 76

11 Hasil pemeriksaan ALT dan AST ... 78

12 Data analisis ALT secara statistik SPSS One WayANOVA ... 79